Методическая статья

Исследования О внесении изменений гиппокампа Функция Circuit после легкой черепно-мозговой травмой

15K просмотров

DOI:

10.3791/4411

19 ноября 2012 г.

В этой статье

Краткое содержание

Многогранный подход к изучению функциональных изменений в гиппокампе схемы объясняется. Электрофизиологические методы описаны наряду с травмой протокол, поведенческие тестирование и региональных метод рассечения. Сочетание этих методов могут быть применены аналогично для других регионов мозга и научные вопросы.

Аннотация

Черепно-мозговой травмы (ЧМТ) страдают более 1,7 миллионов человек в Соединенных Штатах каждый год и даже легкой ЧМТ может привести к стойким неврологическим нарушениями 1. Два распространенных и отключение симптомы, наблюдаемые у TBI оставшихся в живых, нарушения памяти и снижение судорожного порога, как полагают, быть опосредованы TBI-индуцированной дисфункции гиппокампа 2,3. Для того, чтобы продемонстрировать, как измененная функция гиппокампа цепи отрицательно сказывается на поведении после ЧМТ у мышей, мы используем боковые травмы перкуссия жидкостью, обычно используются модели животных TBI, которая воссоздает многие черты человека TBI, включая потерю нейронов клетки, глиоза и ионной возмущения 4 - 6.

Здесь мы показываем, комбинаторный метод исследования TBI-индуцированной дисфункции гиппокампа. Наш подход включает в себя несколько бывших естественных физиологических методов совместно с поведением животных и биохимический анализ, с целью анализапост-ЧМТ изменения в гиппокампе. Начнем с экспериментальной парадигмы травмы наряду с поведенческого анализа для оценки когнитивных инвалидности после ЧМТ. Далее, есть три отдельных бывших естественных методов записи: внеклеточный потенциал поля записи, визуализировал цельноклеточной патч-зажима, и напряжение чувствительных записи красителя. Наконец, мы демонстрируем метод рассечения региональном субрегионов гиппокампа, которая может быть полезна для детального анализа нейрохимические и метаболические изменения пост-ЧМТ.

Эти методы были использованы для изучения изменений в гиппокампе схемы после ЧМТ и прощупать противоположных изменений в сетевую функцию схемы, которые происходят в зубчатой ​​извилине и субрегионов CA1 гиппокампа (см. Рисунок 1). Способность анализировать пост-ЧМТ изменений в каждом субрегионе имеет важное значение для понимания основных механизмов, способствующих TBI-индуцированной поведенческих и когнитивных гeficits.

Многогранной системой, изложенные здесь, позволяет следователям пройти мимо характеристика феноменологии индуцированных болезненного состояния (в данном случае ЧМТ) и определить механизмы, ответственные за наблюдаемые патологии, связанной с ЧМТ.

Протокол

1. Боковая травма ударных Fluid

  1. Анестезию мыши с использованием смеси кетамина и ксилазина внутрибрюшинно. Затем подготовить голове мыши для разреза использованием йода скраб.
  2. Выполните удаление фрагментов костей черепа над правой теменной области с использованием 3 мм (наружный диаметр) трепаном.
  3. Безопасность Luer-Loc иглы (внутренний диаметр 3 мм) по сравнению с использованием cyanoarylate удаление фрагментов костей черепа и зубного акрила.
  4. 24 часов спустя, анестезию мыши, используя изофлурана при вдыхании.
  5. Как только восстанавливается нормальное дыхание, но прежде, чем мышь становится чувствительной к стимуляции, ....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Каждый метод изложенных выше вносит свой вклад в более глубокое понимание основной причиной, приводящей к наблюдаемым поведенческим дефицитом. Сочетание уникальных информацию, полученную от каждого метода мы можем исследовать биологические механизмы, с большей точностью.

Измерение fEPSPs полезна для количественной оценки чистого синаптической эффективности больших, территориально определенных регионах нейронов. Она также может предоставить информацию о потенциале группы клеток к синаптическо.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Нет конфликта интересов объявлены.

Благодарности

Авторы хотели бы поблагодарить Эллиот Буржуазные за техническую помощь. Эта работа финансировалась Национальным институтом здоровья гранты R01HD059288 и R01NS069629.

....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Наименование оборудования Компания Номер в каталоге Комментарии (по желанию)
Axopatch 200B Усилитель Molecular Devices Axopatch 200B Patch-зажим установка
Digidata 1322A дигитайзер Molecular Devices Patch-зажим установка
MP-225 микроманипулятора Sutter MP-225 Patch-зажим установка
DMLFSA микроскопом Leica Patch-зажим установка
Multiclamp 700B Усилитель Molecular Devices MULTICLAMP 700B Многоцелевой (поле)установка
Digidata 1440 дигитайзер Molecular Devices Multipurpos (поле) установка
MPC-200 микроманипулятора Sutter MPC-200 Многоцелевой (поле) установка
BX51WI микроскопом Олимп BX51WI Многоцелевой (поле) установка
Axoclamp 900A Усилитель Molecular Devices Axoclamp 900A VSD установки
Digidata 1322 дигитайзер Molecular Devices VSD установки
Редшерт CCD-камера СМК Редшерт NCS01 VSD установки
VT 1200S Vibratome Leica 14048142066
P-30 электрод съемник Sutter P-30 / P
полный ингибитор протеазы Roche 11697498001

Ссылки

  1. Faul, M., Xu, L., Wald, M. M., Coronado, V. G. Traumatic Brain Injury in the United States: Emergency Department Visits Hospitalizations and Deaths 2002-2006. Centers for Disease Control and Prevention, National Center for Injury Prevention and Control. , (2010).
  2. McAllister, T. W.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Fluid Percussion InjuryContextual Fear ConditioningExtracellular RecordingWhole cell Patch ClampVoltage Sensitive DyeHippocampal Slice PreparationSynaptic Transmission AnalysisSubregion Dissection

Похожие статьи