Судьба отдельных эмбриональные клетки может быть под влиянием унаследованного молекул и / или сигналов от соседних клеток. Используя судьба карты расщепления зародыше Xenopus, одной бластомеры могут быть определены для культуры в изоляции для оценки вклада наследственных молекул по сравнению с межклеточных взаимодействий.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Бластомеров эксплантов для тестирования для сотовых приверженности судьбы во время эмбрионального развития
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Судьба карт, построенных по линии отслеживания всех клеток эмбриона, выявить, какие ткани происходят от каждой клетки эмбриона. Хотя судьба карт очень полезны для выявления предвестников органа и для выяснения развитии путь, по которому потомки клеток заполнения этого органа в нормальном эмбрионе, они не иллюстрируют полное развитие потенциала клеток-предшественников или определить механизмы, с помощью которых его судьба определяется. Для проверки ячейки обязательства судьбы, сравнить нормального репертуара клетки потомков в интактных эмбрионов (судьба карте) с теми, выраженное после экспериментальных манипуляций. Это судьба ячейки фиксированной (совершенные) независимо от окружающей среды сотовый, или это зависит от внешних факторов, предоставленных его соседей? Используя подробные карты судьбы эмбрионов Xenopus, мы расскажем, как выявление, изоляция и культуре одного прекурсоров стадии дробления, называют BlastoМерес. Такой подход позволяет оценить, являются ли эти ранние клетки полны решимости судьбы они приобретают в их обычной среде в неповрежденной эмбриона, требующих взаимодействия с соседними клетками, или можно влиять, чтобы выразить альтернативные судьбы при соприкосновении с другими типами сигналов.
Введение
Xenopus Хепориз эмбрионов были использованы широко определить механизмы, с помощью которых эмбриональные клетки приобретают их конкретными судьбами, потому что их яйца являются достаточно большими, чтобы позволить микрохирургического подхода. Кроме того, они развиваются внешне без необходимости использования пищевых добавок в культуральной среде, потому что каждая клетка содержит богатый внутриклеточного питания тромбоцитов желток, которые обеспечивают внутренний запас энергии. Важным преимуществом для изучения механизмов, посредством которых клетки судьбу определяют это полный набор карт судьбы бластомеров на стадии дробления (от 2 - до 32-клеточной стадии)....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
1. Подготовка инструментов, культура, СМИ и посуда
- Резкость четыре щипцы использованием глинозема абразивной пленкой. Делайте это под рассекает микроскопом, чтобы контролировать размер чаевых. Одна пара щипцов служит в качестве резервного в случае, если наконечник поврежден во время процедуры. Автоклав все четыре щипцы и хранить в стерильный контейнер.
- Сделать 500 мл каждая из 0,1 X 1,0 X и культуральной среде (либо Марка изменения Ringers [MMR] или изменения Барта Saline [MBS]; рецептов в 15) и фильтр стерилизуют. Мы регулярно использовать MBS (1X = 88 мм NaCl, 1 мМ KCl, 0,7 мМ CaCl 2, 1 мМ MgSO 4, 5 мМ HEPES [рН....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Способность этого анализа, чтобы точно оценить потенциал развития клетки опирается на рассекающих из правильных бластомеров основан на судьбе 1 карт, 2, 3, 4, 5, 6. Поэтому, очень важно выбрать эмбрионов с правильной картины пигментации на 2-клеточной стадии, как показано на рисунке 1, что впоследствии соответствующие закономерности расщепления, как показано на рисунке 2. Если наблюдается отсортированы эмбрионов, как они достигают необходимой стадии расщепления и выделяет эмб.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Наиболее важных шагов для успешного культивирования отдельных бластомеров являются: 1) правильность определения бластомеров интересов; 2) поддержание стерильной, здоровой культуры, 3) рассекает клеток при правильной частью клеточного цикла и 4) разработку необходимых руководства ловкости, чтобы предотвратить повреждения во время рассечения и передать культуру.
Для управления конкретными бластомеров, важно быть в состоянии идентифицировать кардинальных осей. У эмбрионов Xenopus, спин.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Нет конфликта интересов объявлены.
Благодарности
Авторы хотели бы выразить признательность GWU Харлан стипендий для поддержки Paaqua Грант и GWU Лютер Райс стипендий для поддержки Мона Herold. Эта работа была выполнена при поддержке Национального научного фонда грант MCB-1121711.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Название реагента | Компания | Номер в каталоге | Комментарии (по желанию) |
| Alumina абразивных фильм | Томас Научные | # 6775E-38 | Курс (12 мкм), на капитальный ремонт советы щипцы |
| Alumina абразивных фильм | Томас Научные | # 6775E-46 | Средний (3 мкм), для тонкой заточки наконечников щипцов |
| Alumina абразивных фильм | Томас Научные | # 6775E-54 | Изобразительное (0,3 мкм), для полировки наконечников щипцов |
| Пинцет: Дюмон, Dumoxel Biologie № 5 | Средства изобразительных наук | # 11252-30 | Они имеют тонкую советов, которые не требуют заточки, когда впервые купил. Коррозионной устойчивостью, чтобы они моглив автоклаве. |
| Гентамицин решения | Сигма | G1397 | Добавить в среде на тот же день, как использование |
Ссылки
- Dale, L., Slack, J. M. Fate map of the 32-cell stage of Xenopus laevis. Development. 100, 279-295 (1987).
- Masho, R., Kubota, H. Y. Developmental fates of blastomeres of the eight-cell stage Xenopus embryo. Dev. Growth, Diff. 30, 347-359 (1988).
- Moody, ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
