$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
* Все материалы вместе с соответствующими производителей и / или поставщиков перечислены ниже протокол.
1. Собрание имплантатов
- Приготовить смесь из тепловым отверждением волоконно-оптических эпоксидных добавлением 100 мг отвердителя на 1 г смолы.
- Отмерьте и отрежьте примерно 35 мм, 125 мкм волоконно-оптический с 100 мкм ядро, забив его с клин наконечник писец карбида. Установите писец перпендикулярно волоконно-оптические и счет в одном, однонаправленное движение. Резка волокна полностью повредить сердцевины волокна.
- Вставьте LC керамической кабельным наконечником, с 127 мкм родила в вице-выпуклой стороной направлен вниз.
- Вставьте волоконно-оптический в наконечник. Волоконно-оптических должна скользить в плавно и незначительно выступают за выпуклым конце наконечника (рис. 1а).
- Нанесите одну каплю тепла отверждаемые волоконно-оптической эпоксидной плоским концом и тепловой энергии, тепловые пушки, пока эпоксидная становится черным. Эпоксидной должнызаполнить наконечником, как она нагревается и до лечения. Эпоксидной должны вылечить в течение ~ 1 мин постоянного применения тепла.
- Очистите от любых эпоксидных по бокам втулки, так как она будет препятствовать взаимодействие с муфтой.
- Польский выпуклые конце наконечника помощью LC волоконно-оптических дисков полировка (FOPD) на оксид алюминия полировки листов на полировальных (рис. 1б). Сделайте круговые вращения модели и отполировать на четыре класса в следующем порядке: 5, 3, 1 0,3 мкм зернистость.
- Вырезать волоконно-оптической на плоский конец в соответствующую длину так, что он нацелен на область интереса. Длина может быть определена с помощью стереотаксической атласе.
- Проверьте имплантата, подключив его к лазерным через соединитель шнура, описанных ниже. Полированный конце имплантат вставляется в рукав муфтой и должны сделать прямой контакт с противоположной наконечником. Имплантат должен быть в состоянии поддерживать 10 мВт светового потока, измеренного на кончике йволоконно электронной имплантата. Плохо имплантат будет иметь слабую координационным центром вблизи вершины волоконно-оптические.
- Хранить готовую имплантатов (рис. 1в) в пену до использования.
2. Собрание Волоконно-оптический кабель Coupler
- Приготовить смесь из тепловым отверждением волоконно-оптических эпоксидных как указано выше.
- Отмерьте и отрежьте необходимую длину 220 мкм волоконно-оптический с 200 мкм ядро, забив его с клин наконечник писец карбида. Длина волокна должна позволить мыши, чтобы свободно передвигаться по корпусу, но не позволяет мыши, чтобы жевать через волокна.
- Вставьте волоконно-оптический в длину развилки трубы чуть больше, чем волоконно-оптической длины. Трубки должны иметь внутренний диаметр немного больше, чем волоконно-оптические.
- Strip ~ 25 мм на одном конце волоконно-оптических и вставить его в металле конце многомодовое MM FC наконечника Ассамблеи с 230 мкм отверстие до упора. Волоконно-оптических должны придерживаться через ferruле конца (рис. 2а).
- Закрепить связи с цианакрилатного (супер клей) на металл конца. Накройте связи с разъема загрузки и полировать наконечником с ФК FOPD. Сделайте круговые вращения и шаблоны для ногтей на четыре класса в следующем порядке: 5, 3, 1, 0,3 мкм зернистость (рис. 2б).
- Зачистите и вставить другой конец волоконно-оптический LC в керамический наконечник (230 мкм ID отверстие) с выпуклой конце дистальной. Нанесите каплю эпоксидной плоским концом и тепла до выздоровления.
- Польский выпуклые конце наконечника помощью FC FOPD на алюминиевых листов оксида полировка, как описано выше.
- Вставьте рукава LC наконечник над выпуклым конца наконечника до середины рукава.
- Место термоусадочные трубки на трубку развилки и втулки и тепла для обеспечения безопасности и защиты соединения (рис. 2).
- Проверка муфты, подключив его к лазерным источником и измерения света OUTPут через муфту с помощью спектрофотометра. Потери света между выходом лазера и измеряли выход ответвителя не должен превышать 30%.
3. Хирургическая имплантация
* Это советы только процедура. Инструменты стерильные перчатки, но не нужно быть связано с постоянным манипуляции между инструментами и оборудованием.
- Anesthetize мыши с внутрибрюшинного введения кетамина / Ксилазин смесь 100 и 10 мг / кг соответственно использованием 30-иглу.
- Бритье головы с ножницами. Протрите кожу головы с 70% изопропиловый спирт следует протирать Betasept (4% раствор хлоргексидина раствора) в течение двух минут, повторяя один раз.
- Поместите мышь в sterotaxic буровой установки и обеспечить головы, гарантируя, что череп уровне. Применение глазной мази для глаз, чтобы предотвратить сухость и послеоперационные боли. Поддержание анестезии с использованием volatized изофлурана (1-3% разбавляют с кислородом в зависимости от физиологического состояния муSE, которая должна быть под постоянным контролем ответ на хвост щепотку).
- Сделайте надрез по средней линии головы, обнажив череп от глаз орбит лямбда. Отодвиньте соединительной ткани по мере необходимости.
- Используйте Серафин зажимы сдержать кожи и поддерживать доступ к черепу (рис. 3а).
- Etch в шахматном порядке по всей поверхности черепа с зубной выбор. Вымойте мусора от стерильным физиологическим раствором. Высохнуть.
- Применение перекиси водорода (3%) к воздействию черепа с помощью ватного тампона на ~ 2-3 сек для создания микропор. Промойте несколько раз и тщательно высушите. Кроме того, якоря могут быть ввинчен в черепе, как описано в Спарте и соавт. (2012).
- Опять же, травления в шахматном порядке по всему черепу с зубной выбор и смыть остатки с физиологическим раствором. Высохнуть.
- С помощью вращающегося инструмента, сделать небольшое отверстие заусенцев трепанация черепа (<1 мм в диаметре) стерильным сверлом(Автоклавного) над областью интересов, определяется стереотаксического атласа калиброванный брегмы и лямбда. Будьте осторожны, чтобы не сломать или повредить оболочку любой ткани. Смойте остатки и тщательно высушите.
- Вставьте волоконно-оптический наконечник (имплантата) в держатель зонда и подключить к стереотаксической руку.
- Установите имплантат на место прямо над областью интересов помощью стереотаксической руки (рис. 3б). Если вставки оптического волокна в ткани головного мозга, волокна должны быть продвигались медленно со скоростью ~ 2 мм / мин. Наконечник должен опираться на оставшихся черепа.
- Приготовить смесь из стоматологического цемента. Смесь должна быть достаточно низкой вязкостью легко применять на черепе. Смесь можно будет использовать в течение 2-4 мин.
- С помощью стерильной зубочистки, нанесите тонкий, ровный слой зубной цемент через череп и на нижнюю часть имплантата. Базовый слой зубной цемент должен охватывать больше площадь поверхности на черепе, каквозможно. Не позволяйте стоматологического цемента вступают в контакт с кожей мыши. Это приведет к увеличению трудности в наложении швов, а также раздражение мыши. Если стоматологического цемента приходят в соприкосновение с кожей, дайте ему высохнуть частично так, что весь слой цемента может быть снята перед установкой.
- Позвольте ему полностью высохнуть.
- Применить даже слоев зубным цементом, чтобы сформировать небольшой курган над черепом и вокруг имплантата, позволяя каждому слою высохнуть (рис. 3в). Оставьте ~ 3-5 мм выпуклой конце наконечник чистой цемента, чтобы обеспечить гладкое, беспрепятственное подключение.
- Шва кожи головы над насыпью зубной цемент и вокруг имплантата с использованием стерильных, одноразовых плетеные шелковые нити (6-0) с C22 иглы. Удалить через 7 дней. Дополнительно: Использование Бонд Vet для дополнительных обязательных после наложения швов. Обязательно используйте минимальное Бонд Vet. Превышение может привести к серьезным повреждениям кожи из-за расчесывания.
- Immediatelу после операции, мышь должна быть подкожно с Ketprophen (5 мг / кг) для уменьшения послеоперационных болей. Это должно быть повторено 24 час позже. Применить актуальные анальгетики (Bupivicaine) и антибиотики (Neosporin) в зашивали кожу и вокруг основания имплантата.
- Наведите в клетке за отопление одеяло для восстановления после анестезии. Наведите в стерильной, послеоперационные клетке восстановления. Восстановление клетке не должно содержать никаких постельных принадлежностей в целях поддержания температуры и избежать удушья. Мышь может быть возвращен в оригинальной клетки или новые клетки один раз проснулся.
Правильный монтаж волоконно-оптических имплантатов и муфты результатов в минимальные потери фотонов между источником света и в конце волоконно-оптической в области интереса. Хорошо полированная волоконной оптики должны пропускать свет в мундире, концентрические окружности (рис. 2, г). При тщательном имплантации и наложения швов, имплантат не вызывает видимого раздражениямышь и может оставаться на месте в течение длительных исследований (рис. 3,> 1 месяца, неопубликованные наблюдения) без существенного ухудшения состояния волоконно-оптических или количество света, пропускаемого. Неправильное имплантации или наложение швов может вызвать раздражение и может привести к царапинам мыши через кожу головы, обнажая зубной цемент, или поломка втулки с зубным цементом из-за постоянных манипуляций. Схема собрана система может быть показано на рисунке 4.
Рисунок 1. Собрания имплантируемых волоконной оптики. (А) волоконно-оптических вставляется в наконечник, незначительно выступающие за пределы выпуклого конце указанном стрелкой. (Б) выпукла конце наконечника полируется использованием FOPD на постепенное тонкие сорта полировки листов. (С) готовой имплантируемых выбирают волокнаIC. Нажмите, чтобы увеличить показатель .
Рисунок 2. Собрания волоконно-оптический соединитель используется для троса волоконно-оптический поворотный шарнир к имплантата. () Волоконно-оптические прилипание через наконечник сборки. (Б) наконечник стороне сборки вставляют в FOPD и полированной использовании постепенно тонкой полировки сортов бумаги. (С) наконечник гильза устанавливается на наконечник и закрепить термоусадочной трубки. (Г) закончил волоконно-оптические муфты должны производить концентрических свет с минимальными потерями фотонов.
Рисунок 3. Хирургическая имплантация волоконной оптики. (А) всю поверхность craniuм подвергается и соединительной ткани очищается. (Б) волоконно-оптических имплантатов удерживается на месте с стереотаксической руку. (С) Стоматологическая цемента применяется крепления волоконно-оптических имплантата черепа. (D)> 1 месяца после имплантации, кожа зажила вокруг имплантата, и нет никаких признаков раздражения.
Рисунок 4. Принципиальная схема функциональной системы