Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Капиллярная сила Литография для сердечной тканевой инженерии

11.9K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/50039

⸱

10 июня 2014 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Bioengineering, University of Washington, 2Department of Pathology, University of Washington

В этой статье

Краткое содержание

В этом протоколе мы демонстрируем изготовление биомиметических субстратов культуры сердечных клеток, изготовленных из двух различных полимерных материалов, с использованием капиллярной силовой литографии. Описанные методы обеспечивают масштабируемую, экономически эффективную технику для проектирования структуры и функции макроскопических тканей сердца для применения in vitro и in vivo.

Аннотация

Сердечно-сосудистые заболевания остаются основной причиной смертности во всем мире 1. Сердечная тканевой инженерии является многообещающим для доставки новаторских медицинских открытий с целями развития функциональных тканей для регенерации сердца, а также в пробирке скрининга. Тем не менее, возможность создания весьма четких моделей ткани сердца оказалось трудно. Внеклеточный матрикс сердца (ECM) представляет собой сложную структуру, состоящую из двух биохимических и биомеханических сигналов, начиная от микро-к нанометровом масштабе 2. Часовой условия механической нагрузки и клеточной ECM взаимодействия недавно был признан жизненно важных компонентов в тканевой инженерии 3-5 сердечной.

Большая часть сердечной ECM состоит из выровненных волокон коллагена с нано-диаметров, что значительно влияет архитектуру ткани и электромеханической связи 2. К сожалению, несколько методов ВГАэ смогли имитировать организацию ECM волокон до нанометровом масштабе. Последние достижения в области методов нанофабрикации, однако, позволили проектирование и изготовление масштабируемых лесов, которые имитируют в естественных условиях структурных и подложки жесткости репликами ЕСМ в центре 6-9.

Здесь мы представляем развитие двух воспроизводимым, экономически эффективной, и масштабируемые процессы Nanopatterning для функционального выравнивания сердечных клеток с использованием биосовместимого полимера поли (лактид-гликолида) (PLGA) 8 и полиуретана (PU) на основе полимера. Эти анизотропно nanofabricated субстраты (ANFS) имитировать основной ECM хорошо организованных, выстроенных тканей и может быть использован для исследования роли nanotopography на морфологию и функцию 10-14 клеток.

Использование наноструктурированных (НП) мастер кремния в качестве шаблона, полиуретан-акриловой кислоты (PUA) форма сфабрикованы. Это PUA плесень затем используется для годовыхttern гидрогель PU или PLGA через УФ-помощь или растворителя-опосредованной капиллярной силы литографии (CFL), соответственно 15,16. Вкратце, PU или PLGA форполимер является падение обойтись на покровным стеклом и форма PUA помещают сверху. Для УФ-помощь CFL, ПУ затем подвергают воздействию УФ-излучения (λ = 250-400 нм) для лечения. Для растворителя-опосредованной CFL, PLGA тиснением с использованием тепла (120 ° C) и давлении (100 кПа). После отверждения, форма PUA отслаивается, оставляя позади ANFS для культивирования клеток. Первичные клетки, такие как новорожденных крыс желудочковых миоцитов, а также плюрипотентных клеток кардиомиоцитов, полученных стволовых человека, может поддерживаться на ANFS 2.

Введение

Сердечно-сосудистые заболевания являются ведущей причиной заболеваемости и смертности в мире и представить весомый социально-экономическое бремя на уже напряженным глобальной системы здравоохранения 1,17. Сердечная тканевая инженерия имеет два различных целей: (1) регенерировать поврежденную миокарда после ишемической болезни или кардиомиопатии или (2) для создания высокой точностью модель сердца для экстракорпорального скрининга лекарственных средств или моделирования заболевания.

Сердце представляет собой сложный орган, который должен работать постоянно поставлять кровь к телу. Плотно упакованные ламинарные структуры кардиомиоцитов и поддерживающих тканей расположены в спиральных узоров всей сердечной стенки 18,19. Сердце также электромеханическим в сочетании 20 в высоко скоординированным образом, чтобы эффективно при извлечении крови в организме 21. Несколько крупных препятствия остаются нерешенными, однако, прежде чем сложный дизайн природы можно надежно воспроизводятся в пробирке.Во-первых, хотя надежные методы кардиомиоцитов дифференциации продолжают разрабатываться 22, HPSC-КМ-прежнему демонстрируют довольно незрелых фенотипы. Их электромеханические свойства и морфология наиболее близко соответствуют уровни плода 23. Во-вторых, когда, содержащихся в традиционных условиях культивирования, как стволовых клеток, полученных и первичные кардиомиоциты не в состоянии собрать в родные, ткани-подобных структур. Напротив, клетки становятся ориентированы случайным образом и не проявляют полосчатой ​​форме стержня внешний вид взрослого миокарда 24.

Внеклеточного матрикса (ECM) среда, с которой взаимодействуют клетки играет важную роль во многих клеточных процессах 11,13,25. ЕСМ состоит из сложных, четко определенных молекулярных и топографических сигналы, которые значительно влияют на структуру и функцию клеток 6,26. В самом центре, сотовой выравнивание внимательно следит за основной нанометровом масштабе ECM волокна 2. Воздействие этих nanotopographческих сигналы на клетки и функции ткани, однако, далеко не полностью изучены. Предварительные исследования клеток-биоматериал взаимодействия нанометрового масштаба, указывают на потенциальную важность и влияние субмикронных топографических киев для ячейки сигнализации 27, адгезии 28-30, рост 31 и дифференциации 32,33. Тем не менее, в связи с трудностью в разработке воспроизводимые и масштабируемые nanofabricated субстраты, такие исследования не могли воспроизвести несколько масштабных клеточные эффекты в комплекса в естественных условиях окружающей среды ECM. В этом протоколе, простой и экономически эффективный метод нанофабрикации производить клеточных культур строительные леса, имитирующие родной выравнивание сердечной ECM волокна описывается, что позволяет для широкого круга новых исследований кардиомиоцитов биоматериал взаимодействий. Понимание того, как кардиомиоциты взаимодействовать с наноразмерными ECM среды может позволить для способности контролировать клеточный поведение более точно имитировать родной ткани функцийТион. Кроме того, клеточные монослои являются упрощенная экспериментальная система по сравнению с 3D структур, но все еще ​​демонстрируют сложную многоклеточных поведение для проницательных исследований и функциональной скрининга 2,34-36. Наконец, такие каркасы могут быть использованы для улучшения клеточной функции трансплантата при имплантации в сердце для восстановительных целей 37.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все процедуры проводили при комнатной температуре (~ 23 ° C), если не указано иное.

1. Изготовление Силиконовой Master

  1. Чистый кремниевой пластины со 100% этанола или ксилол и сушат в O 2 / N 2 газа.
  2. Наведите кремниевую пластину в спин-машины для нанесения покрытий на скоростях вращения 2000-4000 оборотов в минуту для получения пленки толщиной 0,3-0,5 мкм.
  3. Шаблон фоторезиста фильм с правильными размерами с помощью системы фотолитографии
  4. Полностью погрузить узорчатые фоторезиста покрытием кремниевых пластин в соответствующем объеме фоторезиста развития решения.
  5. Промыть разработанные фоторезиста покрытием кремниевых пластин с деионизированной водой.
  6. Для формирования массивов субмикронных масштабах хребтов с рядом вертикальных боковых стенок, глубокой реактивного ионного травления подвергается кремния с использованием системы травления.
  7. Удалите остатки фоторезиста, поместив кремниевой пластины в системе Ашер плазмы.
  8. Разрежьте кремний жAfers с алмазным наконечником резака в соответствующего размера кремниевых мастеров для последующего реплики формования.

2. Изготовление PUA Mold из Силиконовой Master

Примечание: объем должен быть добавлен к мастер кремния для наноматериалов будет варьироваться в зависимости от региона мастера наноструктурированных быть воспроизведены а также от вязкости раствора полиуретана акрилата (PUA).

  1. Чистый кремний мастер поверхность с 100%-ном этаноле или ксилол и сушат в O 2 / N 2 газа.
  2. Поместите сторону кремния мастер шаблон в чашке Петри.
  3. Для мастера кремния с 2 см х 2 см рисунок поверхности, пипетки 40 мкл PUA к поверхности картины.
  4. Поместите лист 4 см х 4 см прозрачный полиэфир (PET) пленки на распределяемого PUA.
  5. Нажмите на ПЭТ листа и распространять PUA под листа через шаблон лица с помощью валика или квартиру краями поверхность (например, карты), так что весьрисунок покрывается форполимере PUA.
  6. Наведите мастер кремния, форполимера, и ПЭТ примерно на 10 см ниже 20 Вт (115 В) УФ-излучения (λ = 365 нм) в течение 50 сек. Чтобы быть эффективным, длина волны УФ-излучения может быть где-то между 310-400 нм. Интенсивность света составляет 10-15 мВт / см 2 на поверхности подложки.
  7. После отверждения, удалить пленки РЕТ медленно щипцами. PUA должен приложить к ПЭТ-пленки с отрицательным кремниевой мастерской nanopattern.
  8. Лечение PUA / ПЭТ nanopatterns в УФ, по крайней мере 12 часов перед использованием. Передержка не является проблемой.
  9. Для очистки кремния мастеров, поместите еще один фильм ПЭТ сверху мастера без добавления PUA и подвергать УФ-излучения (λ = 365 нм) в течение 50 сек и удалить ПЭТ-пленки. Это удалит любые непрореагировавшие мономеры.
  10. Промыть мастер кремния со 100% этанола или ксилол и сушат в O 2 / N 2 газа.

3а. Nanopatterning полиуретанового полимера

  1. Подготовка 25 мм Диаметр круглых стеклянных слайдов путем размещения в камере обработки озоном в течение 10 мин.
  2. Наведите стеклянные слайды озона обращению на небольшой PDMS блока для легкой обработки.
  3. Нанесите тонкий слой поверхности адгезии с кистью на стеклах. Воздух сухой предметные стекла в течение 30 мин.
  4. Поместите предметное стекло на листке бумаги для принтера.
  5. Оставьте обойтись 10 мкл полиуретана (PU) предварительно полимер (NOA 76) в центре стекло. Убедитесь в отсутствии пузырьков присутствуют после того.
  6. Место PUA формы, рисунок лицевой стороной вниз, на предметное стекло. Дисперсные ПУ равномерно по всей поверхности стекло прокаткой ролик резиновый цилиндр вдоль кристаллизатора PUA. Бумага для принтера будет поглощать переполнение полимера.
  7. Вт УФ лампа. Время полимеризации из ПУ зависит от мощности источника УФ-излучения.
  8. Удалите образец от ультрафиолетового источника света и тщательно очистить PUA плесени ПУ покрытием стекло. Полимеризация ПУ считается сomplete когда форма пилинг PUA чисто от образца и предметное стекло ПУ имеет радужный вид.
  9. Поместите готовые образцы в эксикаторе для хранения до тех пор, как месяц.

3b. Nanopatterning поли (лактид-со-гликолида) Гидрогель

  1. Создание неструктурированного PDMS формы энергично смешивания силикона базу эластомера и силиконового эластомера отвердитель в соотношении 10:01.
  2. Налейте смешанные PDMS предшественник решение в чашку Петри таким образом, что предшественник PDMS достигает 5 мм до края тарелки (т.е. так, что PDMS имеет толщину 5 мм).
  3. Поместите чашку Петри и PDMS предшественника в эксикаторе в течение 1 часа до дегазации.
  4. Перемещение чашку Петри и PDMS предшественника в духовке 65 ° C в течение не менее 2 часов, чтобы вылечить.
  5. После PDMS лечится, используйте бритву, чтобы сократить плоские PDMS на 3 см х 3 см квадратных секций. Это будут плоские PDMS формы, используемые позднее в процессе структуризации.
  6. Чистый диаметр 25 мм круговой стеклянные слайды по плочка одним ударом в изопропиловом спирте в течение 30 мин на водяной обработки ультразвуком.
  7. Химчистку стеклянные пластинки под O 2 / N 2 газа.
  8. Падение 100 мкл раствора PLGA (15% вес / объем PLGA в хлороформе) на предметное стекло.
  9. Поместите плоскую форму PDMS поверх обойтись PLGA абсорбировать растворитель и получить плоскую поверхность PLGA. Слегка давление (~ 10 кПа), поместив 200 г веса на вершине PDMS течение 5 мин.
  10. Медленно удаляйте плоский PDMS формы и поместите покровного стекла на разогретую тарелку (120 ° C) в течение 5 мин для удаления остатков растворителя и увеличить адгезию между PLGA и покровного стекла.
  11. Поместите форму NP PUA сверху плоской PLGA и применить постоянное давление (~ 100 кПа) и высокую температуру (120 ° C), поместив вес на 1 кг на верхней части формы PUA в то время как на нагревательной пластине в течение 15 мин.
  12. Извлеките вес от PLGA крышки слайда и позволить субстраты остыть до комнатной температуры. Не снимайте PUA плесень пока субстраты не былоохлаждается.
  13. После того, как субстраты имеют достаточно охлажден, тщательно очистить от плесени НП PUA, раскрывая субстрат НП PLGA. Н.П. ПМГК субстрат должен иметь радужный вид.
  14. Поместите готовые образцы в эксикаторе для хранения до тех пор, как месяц.

4. Посев сотовый и культура

ПРИМЕЧАНИЕ: Этот протокол описывает культуру новорожденных крыс желудочковой миоцитов (NRVMs) и H7 клеток, полученных кардиомиоцитов человеческих эмбриональных стволовых (чЭСК-CMS), но и других источников клеток могут быть использованы.

  1. Прикрепите покровные ANFS (PU или PLGA) в 35 мм культуры ткани полистирола блюдо. Внесите 20 мкл Норланд оптического клея (NOA83H) на дно тарелки и осторожно положите покровное ANFS в верхней части НОА. Разрешить клей, чтобы распространиться и охватить всю нижнюю покровное. Лечение NOA, подвергая блюдо УФ в течение 10 мин.
  2. Стерилизация ANFS промывкой 2 мл 70% водного раствора этанола в течение 5 мин, дважды. Удалить еthanol стремлением. Разрешить ANFS полностью высохнуть на воздухе в течение ~ 1 часа под лампой УФ стерилизации (λ = 200-290 нм) в биологической безопасности кабинета.
  3. Клеточной адгезии усиливается покрытия ANFS в фибронектина в одночасье. Развести фибронектин в дистиллированной водой до 5 мкг / мл. Внесите 2 мл фибронектина решения в блюдо. Место в инкубаторе при температуре 37 ° С и 5% СО 2 в течение ночи (по крайней мере 6 ч).
  4. Получить NRVMs, чЭСК-CMS, или другие сердечные клетки, представляющие интерес в соответствии с предыдущими протоколами 22.
  5. Образец клеток Центрифуга при 1000 оборотов в минуту в течение 3 минут для осаждения клеток.
  6. Осторожно удалите супернатант аспирацией. Убедитесь в том, чтобы не потревожить осадок.
  7. Ресуспендируют клеток в соответствующей культуральной среде до концентрации 4,6 × 10 6 клеток / мл.
  8. Тщательно пипетки 200 мкл клеточной суспензии на стерилизованных ANFS. Убедитесь в том, суспензию клеток остается на покровное.
  9. Поместите клетки в инкубаторе при 37 ° С и 5%CO 2 в течение 4 часов, чтобы позволить клеткам прикрепляться к ANFS.
  10. Добавить 2 мл теплой культуральной среде блюдо и заменить клетки в инкубаторе при тех же условиях.
  11. После 24 часов, не извлекайте носитель и мыть с 2 мл DPBS дважды, чтобы удалить избыток клеток.
  12. Добавить 2 мл теплой культуральной среде блюдо и заменить клетки в инкубаторе при тех же условиях. Культуры клеток до слияния. Замените СМИ через день.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Рисунок 1 схематически обзор производственного процесса для двух методов изготовления. Из-за дифракции света, вызванного наноразмерных топографии, Nanopatterning должно привести к радужной поверхности до ANFS. Рисунок 2 изображает эту радужную поверхность на хорошо узорной 25 мм NP-PU покровного (рис. 2а) с длиной волны 800 нм выступом и пазом ширина (фиг. 2В). Радужный появление ANFS будет незначительно отличаться в зависимости от ширины выступом и паз...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Функционально зрелые сердечные ткани не хватает для как в естественных условиях и в приложениях пробирке тканевой инженерии сердечной. Методы Nanofabrication CFL, описанные здесь, надежные методы для достижения сотовой выравнивание и влиять функцию макроскопического тканей из-за масштабируемости системы. Большие площади могут быть легко рисунком и используются для культивирования клеток. Макроскопическая сотовой выравнивание имеет важное значение в тканевой инженерии сердечной того, чтобы созд...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

D. H. Kim благодарит факультет биоинженерии Вашингтонского университета за новый фонд стартапов факультета. D. H. Kim также получает поддержку премии Perkins Coie Award for Discovery, премии Фонда Уоллеса Х. Култера за партнерство в области трансляционных исследований, Фонда открытий в области наук о жизни штата Вашингтон и гранта Американской кардиологической ассоциации на развитие ученых (13SDG14560076). J. Macadangdang и A. Jiao благодарят за поддержку биоинженерию NIH Грант на обучение сердечно-сосудистой системе. Дополнительную поддержку этой работе оказывает грант Национальных институтов здравоохранения (NIH) R01HL111197 М. Ренье.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
ФибронектинBD Biosciences354008
NOA 76Norland Products, Inc.7606B
Промотор поверхностной адгезии (стеклянная грунтовка)Minuta Tech
PUAMinuta TechMINS-311RM
Мягкий резиновый роликSpeedball
Силиконовые пластиныNOVA Электронные материалыFA01-9900
ФоторезистШиплиSPRT510
Проявитель фоторезистаShipleyMF320
Система электронно-лучевой литографииJEOLJBX-9300FS
Система травленияСистемы поверхностных технологийNP10 8UJ
Система плазменного асшераBMR Technology Co.DSF-200
Система отверждения озономMinuta TechMT-UV-O- 08
Система термоядерного отвержденияMinutaTech MT-UV-A 11
NOA 83HNorland Products, Inc.8301
Прядильная машина для нанесения покрытийLaurel TechnologyWS-400-6NPP
Skyrol PET FilmSKC Co., Ltd.23038-59-9
25 мм Стеклянные слайдыCorning2948
Sylgard 184 Набор силиконовых эластомеровDow Corning6/5/2553
Поли(D,L-лактид-ко-гликолид)Sigma-AldrichP2191-1G
ХлороформSigma-Aldrich372978-1L
500 г ВесGlobal InsustrialT9FB503120
Изопропиловый спиртEMD MilliporePX1835-2
Нагревательная пластинаCorningPC-420D
SonicatorBranson B2510MTH

Ссылки

  1. Lozano, R., et al. Global and regional mortality from 235 causes of death for 20 age groups in 1990 and 2010: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2010. The Lancet. 380, 2095-2128 (2012).
  2. Kim, D. -H., et al. Nanoscale cues regulate the structure and function of macroscopic cardiac tissue constructs. Proceedings of the National Academy of Sciences. 107, 565-570 (2010).
  3. Tulloch, N. L., et al. Growth of Engineered Human Myocardium With Mechanical Loading and Vascular Coculture. Circulation Research. 109, 47-59 (2011).
  4. Bursac, N., Parker, K., Irvanian, S., Tung, L. Cardiomyocyte Cultures With Controlled Macroscopic Anisotropy: A Model for Functional Electrophysiological Studies of Cardiac Muscle. Circulation Research. 91, (2002).
  5. Fink, C., et al. Chronic stretch of engineered heart tissue induces hypertrophy and functional improvement. The FASEB Journal. 14, 669-679 (2000).
  6. Stevens, M. M. Exploring and Engineering the Cell Surface Interface. Science. 310, (2005).
  7. Mark, K., Park, J., Bauer, S., Schmuki, P. Nanoscale engineering of biomimetic surfaces: cues from the extracellular matrix. Cell Tissue Res. 339, 131-153 (2009).
  8. Lü, J. -M., Wang, X., Marin-Muller, C., Wang, H., Lin, P. H., Yao, Q., Chen, C. Current advances in research and clinical applications of PLGA-based nanotechnology. Expert. Rev. Mol. Diagn. 9, 325-341 (2009).
  9. Kim, H. N., et al. Patterning Methods for Polymers in Cell and Tissue Engineering. Ann Biomed Eng. 40, 1339-1355 (2012).
  10. Kim, D. -H., Provenzano, P. P., Smith, C. L., Levchenko, A. Matrix nanotopography as a regulator of cell function. The Journal of Cell Biology. 197, 351-360 (2012).
  11. Park, J., Kim, H. -N., Kim, D. -H., Levchenko, A., Kahp-Yang, S. Quantitative Analysis of the Combined Effect of Substrate Rigidity and Topographic Guidance on Cell Morphology. IEEE Trans.on Nanobioscience. 11, 28-36 (2012).
  12. Kim, D. -H., Lee, H., Lee, Y. K., Nam, J. -M., Levchenko, A. Biomimetic Nanopatterns as Enabling Tools for Analysis and Control of Live Cells. Adv. Mater. 22, 4551-4566 (2010).
  13. Kim, D. -H., Wong, P. K., Park, J., Levchenko, A., Sun, Y. Microengineered Platforms for Cell Mechanobiology. Annu. Rev. Biomed. Eng. 11, 203-233 (2009).
  14. Kim, D. -H., et al. Nanopatterned cardiac cell patches promote stem cell niche formation and myocardial regeneration. Integr Biol. 4, 1019 (2012).
  15. Kim, P., et al. Fabrication of nanostructures of polyethylene glycol for applications to protein adsorption and cell adhesion. Nanotechnology. 16, 2420-2426 (2005).
  16. Hwang, S. Y., et al. Adhesion Assays of Endothelial Cells on Nanopatterned Surfaces within a Microfluidic Channel. Anal. Chem. 82, 3016-3022 (2010).
  17. Heidenreich, P. A., et al. Forecasting the Future of Cardiovascular Disease in the United States: A Policy Statement From the American Heart Association. Circulation. 123, 933-944 (2011).
  18. Legrice, I. J., et al. Laminar structure of the heart: ventricular myocyte arrangement and connective tissue architecture in the dog. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 269, 1-12 (2002).
  19. Sosnovik, D. E., Wang, R., Dai, G., Reese, T. G., Wedeen, V. J. Diffusion MR tractography of the heart. J Cardiovasc Magn Reson. 11, 47 (2009).
  20. Bers, D. M. Calcium Fluxes Involved in Control of Cardiac Myocyte Contraction. Circulation Research. 87, 275-281 (2000).
  21. Mohrman, D. E., Heller, L. J. Cardiovascular Physiology. , McGraw Hill Medical. (2010).
  22. Burridge, P. W., Keller, G., Gold, J. D., Wu, J. C. Production of De Novo Cardiomyocytes: Human Pluripotent Stem Cell Differentiation and Direct Reprogramming. Stem Cell. 10, 16-28 (2012).
  23. Zhang, J., et al. Functional Cardiomyocytes Derived From Human Induced Pluripotent Stem Cells. Circulation Research. 104, (2009).
  24. Qian, J. -Y., Guo, L. Altered cytosolic Ca2+ dynamics in cultured Guinea pig cardiomyocytes as an in vitro model to identify potential cardiotoxicants. Toxicology in Vitro. 24, 960-972 (2010).
  25. You, M. -H., et al. Synergistically Enhanced Osteogenic Differentiation of Human Mesenchymal Stem Cells by Culture on Nanostructured Surfaces with Induction Media. Biomacromolecules. 11, 1856-1862 (2010).
  26. Kim, H. N., et al. Nanotopography-guided tissue engineering and regenerative medicine. Advanced Drug Delivery Reviews. 65, 536-558 (2013).
  27. Mannix, R. J., et al. Nanomagnetic actuation of receptor-mediated signal transduction. Nature Nanotech. 3, 36-40 (2007).
  28. Karuri, N. W., et al. Biological length scale topography enhances cell-substratum adhesion of human corneal epithelial cells. J Cell Sci. 117, 3153-3164 (2007).
  29. Cavalcanti-Adam, E. A., et al. Cell Spreading and Focal Adhesion Dynamics Are Regulated by Spacing of Integrin Ligands. Biophysical Journal. 92, 2964-2974 (2007).
  30. Koo, L. Y., Irvine, D. J., Mayes, A. M., Lauffenburger, D. A., Griffith, L. G. Co-regulation of cell adhesion by nanoscale RGD organization and mechanical stimulus. J Cell Sci. 115, 1-11 (2002).
  31. Yim, E. K. F., et al. Nanopattern-induced changes in morphology and motility of smooth muscle cells. Biomaterials. 26, 5405-5413 (2008).
  32. Dalby, M. J., et al. The control of human mesenchymal cell differentiation using nanoscale symmetry and disorder. Nat Mater. 6, 997-1003 (2007).
  33. Park, J., Bauer, S., Mark, von der K., Schmuki, P. Nanosize and Vitality: TiO 2Nanotube Diameter Directs Cell Fate. Nano Lett. 7, 1686-1691 (2007).
  34. Entcheva, E., Bien, H. Macroscopic optical mapping of excitation in cardiac cell networks with ultra-high spatiotemporal resolution. Progress in Biophysics and Molecular Biology. 92, 232-257 (2006).
  35. Tung, L., Zhang, Y. Optical imaging of arrhythmias in tissue culture. Journal of Electrocardiology. 39, (2006).
  36. Himel, H. D., Bub, G., Lakireddy, P., El-Sherif, N. Optical imaging of arrhythmias in the cardiomyocyte monolayer. Heart Rhythm. 9, 2077-2082 (2012).
  37. Kim, J., Hayward, R. C. Mimicking dynamic in vivo environments with stimuli-responsive materials for cell culture. Trends in Biotechnology. 30, 426-439 (2012).
  38. Henderson, D. J., Anderson, R. H. The Development and Structure of the Ventricles in the Human Heart. Pediatr Cardiol. 30, 588-596 (2009).
  39. Badie, N., Bursac, N. Novel Micropatterned Cardiac Cell Cultures with Realistic Ventricular Microstructure. Biophysj. 96, 3873-3885 (2009).
  40. Badrossamay, M. R., McIlwee, H. A., Goss, J. A., Parker, K. K. Nanofiber Assembly by Rotary Jet-Spinning. Nano Lett. 10, 2257-2261 (2010).
  41. Rao, C., et al. The effect of microgrooved culture substrates on calcium cycling of cardiac myocytes derived from human induced pluripotent stem cells. Biomaterials. 34, 2399-2411 (2013).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Больше статей

Наноструктурированные подложкиполимер ПЛГАполиуретановый шаблонCFL с УФ-активациейCFL с использованием растворителявыравнивание кардиомиоцитовимитация внеклеточного матриксамикроскопия в светлом поле
Капиллярная сила Литография для сердечной тканевой инженерии
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.