Мы представляем В естественных условиях Анализ для проверки проницаемость кровеносных сосудов. Этот анализ основан на внутривенное введение красителя и последующей визуализацией его диффузии в интерстициального пространства.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Этот метод основан на внутривенном введении Evans Blue мышей в качестве модели испытаний на животных. Эванс синий краситель, который связывается альбумином. В физиологических условиях эндотелий является непроницаемой для альбумина, так Эванса синего связанного альбумина остается ограниченным в кровеносных сосудах. В патологических условиях, которые способствуют повышение сосудистой проницаемости эндотелиальных клеток частично теряют свои тесные контакты и эндотелий становится проницаемой для небольших белков, таких как альбумин. Это условие позволяет экстравазации Evans Blue в тканях. Здоровый эндотелий предотвращает кровоизлияние красителя в соседние ткани васкуляризированной. Органы с повышенной проницаемостью покажет значительно увеличилось синюю окраску по сравнению с органов с интактным эндотелием. Уровень проницаемости сосудов можно оценить по простой визуализации или количественного измерения красителя включены на миллиграмм ткани контроля в сравнении с экспериментальными животными / ткань. Два Пауrful аспекты этого анализа являются его простота и количественных характеристик. Evans Blue красителей могут быть извлечены из тканей путем инкубации определенное количество ткани в формамида. Evans Blue максимум поглощения находится при 620 нм и поглощения минимум при 740 нм. С помощью стандартной кривой для Evans Blue, измерения оптической плотности могут быть преобразованы в миллиграммах красителя захватили на миллиграмм ткани. Статистический анализ должен быть использован для оценки существенных различий в проницаемости сосудов.
Введение
Формирование и поддержание избирательный проницаемые барьеры, необходимые для нормального развития органов и производительностью 1,2. Эндотелиальные клетки линии просвета кровеносных сосудов и образуют полупроницаемый барьер, который играет важную роль в избирательный перевозок между кровью и интерстициальным пространством всех органов. Адекватный барьер проницаемости поддерживается благодаря тесной клетки к клетке соединений, которые строго контролируются факторы роста, цитокины и другие связанные со стрессом молекулы 3. Нарушение эндотелиального барьера клетки может привести к увеличению проницаемости сосудистой и утечки. Эти эффекты проявляют....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
1. Внутривенное введение Evans Blue в мышь латеральную хвостовую вену
- Подготовка 0,5% стерильный раствор голубого Эванса в PBS. При необходимости фильтр-стерилизовать раствором для удаления любых твердых частиц, которые не растворяются.
- Аспирируйте 200 мкл Evans Blue раствор в шприц. Избегайте пузырьков воздуха, которые могли бы бежал в шприц.
- Место мышей, 8-12 недель в удерживающего устройства так, чтобы животное не является свободно мобильный, но ее хвост может быть обработано.
- Поместите устройство мыши сдержанность на бок, так латеральную хвостовую вену хорошо видно и вверх.
- Держи хвост с не доминирующей руки межд....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Мы использовали в анализе проницаемость естественных для проверки судна утечки на мышах 8-12 недель. Этот тест полезен при сравнении относительной проницаемости сосудов между животными разных генетических фоне или в один штамм мышей, подвергавшихся лечения, которые влияют на сосудистую систему. Наши результаты показывают, что штамм генетически модифицированных мышей, которые мы создали в нашей лаборатории имеет более проницаемыми эндотелия по сравнению с мышами дикого типа. Эти изменения очевидны на ма.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Проницаемости сосудов является важным маркером для крови статуса судна. Повышенная проницаемость сосудов, как было показано присутствовать в нескольких системных заболеваний, включая диабет, гипертонию и аутоиммунных заболеваний 6,7,8. Повышенная проницаемость сосудов была показана при посредничестве напряжения сдвига, факторы роста, как фактор роста эндотелия сосудов и фактора роста фибробластов, воспалительных медиаторов, как серотонин, гистамин и брадикинин 9. Экстравазация воды и небольших моле.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы не имеют никакого конфликта или конкурирующих финансовых интересов.
Благодарности
Эта работа была поддержана грантом Национального института здоровья, R01CA142928.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| РЕАГЕНТОВ | |||
| Evans Blue | SIGMA | E2129 | |
| Формамида | INVITROGEN | 15515-026 | |
| PBS | 0,2 М фосфат 1,5 М NaCl рН 7,4 | ||
| ОБОРУДОВАНИЕ | |||
| СПЕКТРОФОТОМЕТР | EPPENDORF | 952000006 | |
| Устройства мыши УДЕРЖИВАЮЩИХ | Harvard Apparatus | 340012 | |
| ШПРИЦ | BD | 309659 | |
| ИГЛЫ | BD | 305106 | Датчик иглы зависит от размера животного. |
| BALANCE | Denver Instrument | TP-64 |
Ссылки
- Beck, K. F., et al. Inducible NO synthase: role in cellular signaling. J. Exp. Biol. 202, 645-653 (1999).
- Bertglia, S., Giusti, A. Role of nitric oxide in capillary perfusion and oxygen delivery regulation during systemic hypoxia. <....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
Больше статей
Метод с использованием красителя Эванс Блютест на проницаемость сосудовэкстракция красителя Эванс Блюизмерение содержания красителя в тканяхспектрофотометрия с использованием красителя Эванс Блюинъекция в хвостовую вену мышианализ эндотелиальной проницаемостистандартная кривая для красителя Эванс Блюколичественное измерение красителя
