Астроциты были признаны универсальными клетки, участвующие в фундаментальных биологических процессов, которые необходимы для нормального развития и функционирования мозга и центральной нервной системы ремонта. Здесь мы представляем быстрой процедуры получения чистых культур астроцитов мышь, чтобы изучать биологию этого важнейшего класса центральной нервной системы.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Выделение и культуры мышь кортикальной астроциты
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Астроциты являются обильные типа клеток в мозге млекопитающих, однако еще многое предстоит узнать о их молекулярных и функциональных характеристик. Экстракорпоральное астроцитов системы культуры клеток могут быть использованы для изучения биологических функций этих клеток глии в деталях. Это видео показывает, как протокол для получения чистого астроцитов путем выделения и культуры смешанных корковых клеток мыши щенков. Метод основан на отсутствии жизнеспособных нейронов и разделение астроцитов, олигодендроцитов и микроглии, три основных глиальных популяций клеток центральной нервной системы, в культуре. Представитель изображений в первые дни культуры демонстрируют наличие смешанной популяции клеток и указать временной точке, когда астроциты стать вырожденной и должны быть отделены от микроглии и олигодендроцитов. Кроме того, мы демонстрируем чистоту и астроцитов морфологии культурного астроциты использованием иммуноцитохимических для окрашивания хорошо организованной иВновь описанный астроцитов маркеров. Эта культура система может быть легко использован для получения чистого астроциты мыши и астроцитов-кондиционированной среды для изучения различных аспектов астроцитов биологии.
Введение
Астроциты являются очень обильные типа клеток в центральной нервной системе (ЦНС). Отношение астроцитов в нейроны составляет 1:3 в коре головного мозга мышей и крыс, тогда как в 1,4 астроциты на нейрон в коре человека 1. Интерес к функции астроцитов, резко возросло в последние годы. Ключевая функция астроцитов является их роль в обеспечении структурной и метаболической поддержки нейронов 2,3. Недавно обнаруженные роли астроцитов охватывает широкий спектр функций. Они включают в себя руководящие миграции развивающиеся аксоны и некоторых нейробластов в процессе разработки 4-6, функции в синаптической передачи, синапса сила и обработки и....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
1. Изоляция и покрытия смешанных корковых клеток
Смешанная корковая изолятор для астроцитов культуры могут быть выполнены с использованием P1 до P4 мышь щенков. Для того чтобы добиться надлежащего астроцитов плотности необходимо использовать 4 мышью щенка коры в колбе T75 культуре ткани. Таким образом, объемы в следующих протоколов рассчитаны на клеточный препарат с использованием 4 щенков мыши.
- Перед началом процедуры вскрытия, prewarm 30 мл астроцитов медиакультуры (DMEM, высокий уровень глюкозы + 10% инактивированной эмбриональной телячьей сыворотки + 1% пенициллина / стрептомицина, см. таблицу) до 37 ° C. Пальто один T75 ко....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
После выделения полного мозга мыши (рис. 1А), мозжечка и обонятельные луковицы должны быть удалены (рис. 1б). Коры очистить от кожуры стебля мозга мыши (рис. 1С) и мозговых оболочек отдельных коры (рис. 1D) тщательно удалены (рис. 1E). Мозговых оболочек очевидным менингеальные системе артерий и неполные результаты удаления загрязнений в конечной астроцитов культуры менингеальные клеток и фибробластов.
После .......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Методом, описанным здесь, основаны на астроциты подготовки культуру от грызунов новорожденных мозг, первоначально описанный Маккарти и де-Vellis в 1980 27. Модифицированный метод выделения и культуры корковых астроциты от послеродовой P1 до P4 мозга мыши, представленные здесь, быстро, дает чистую первичную астроциты и высокую воспроизводимость. Этот метод может быть легко перенесена, чтобы изолировать астроциты от других видов, таких как крысы или свиньи и из других областей мозга, таких как спинной мозг. В т.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Нет конфликта интересов объявлены.
Благодарности
Поддерживается Fazit Foundation Graduate Fellowship СС, Федерального министерства образования и научных исследований (BMBF 01 ЭО 0803) в КБ и Европейской комиссией FP7 Грант PIRG08-GA-2010-276989, Neurex и Немецкого научно-исследовательского гранта Фонда Ща 1442 / 3-1 в CS авторы не имеют противоречивые финансовые интересы.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Имя рабочего раствора | Компания | Номер в каталоге | Конечная концентрация |
| Astrocyte медиакультуры | |||
| DMEM, высокий уровень глюкозы | Life Technologies | 31966-021 | |
| FBS, инактивированной | Life Technologies | 10082-147 | Конечная концентрация: 10% |
| Пенициллина-стрептомицина | Life Technologies | 15140-122 | Конечная концентрация: 1% |
| Решение для мозга копать тканиestion | |||
| HBSS | Life Technologies | 14170-088 | |
| 2,5% трипсина | Life Technologies | 15090-046 | Конечная концентрация: 0,25% |
| Другой | |||
| 70% (объем / объем) этанола | Рот | 9065,2 | |
| Поли-D-лизин | Millipore | -003-E | 50 мкг / мл |
| Воды | PAA | S15-012 | класс клеточных культур |
| PBS | PAA | H15-002 | класс клеточных культур |
| Попробуйте 0,05%psin-EDTA | Life Technologies | 25300-062 | |
| 0,45 мкм стерильный фильтр | Портняжная мышца | 16555 | |
| 3,5 см чашки Петри | BD Falcon | 353001 | |
| 15 мл трубки сокола | BD Falcon | 352096 | |
| 50 мл трубки сокола | BD Falcon | 352070 | |
| 75 см 2 колбы культуры ткани | BD Falcon | 353136 | |
| Щипцы, тонкие | Дюмон | 2-1032, 2-1033 | # 3с, № 5 |
| Щипцы, телевизор с плоским наконечником | KLS Martin | 12-120-11 | |
| 13 см хирургические ножницы | Aesculap | До н.э.-140-R | |
| Стереомикроскоп | Leica | MZ7.5 | |
| Стереомикроскоп + камера | Leica | MZ16F; DFC320 | |
| Микроскоп + камера | Zeiss, Canon | Primo Vert; PowerShot A650 IS | |
| Центрифугировать | Eppendorf | 5805000.017 | Centrifuge5804R |
| Орбитальный Шейкер | Thermo Scientific | Шке 4450-1ce | MaxQ 4450 |
| Водяная баня | Julabo | SW20; 37 ° C |
Ссылки
- Nedergaard, M., Ransom, B., Goldman, S. A. New roles for astrocytes: redefining the functional architecture of the brain. Trends Neurosci. 26, 523-530 (2003).
- Belanger, M., Allaman, I., Magistretti, P. J. Brain energy metabolism: focus on astrocyte-neuron metabol....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
