Здесь мы опишем эффективным методом исследования динамики апоптоза клетки оформление В естественных условиях. Этот метод использует жить Drosophila Эмбрионов в качестве мощного модель для мониторинга фагоцитоз апоптотических клеток с использованием специфических маркировки апоптотических клеток и фагоцитов.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Живая съемка апоптоза клеток во время акции
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Надлежащего устранения нежелательных или аберрантных клеток путем апоптоза и последующего фагоцитоза (апоптоза оформления ячейки) имеет решающее значение для нормального развития во всех многоклеточных организмов. Апоптотическая оформления ячейки весьма динамичный процесс тесно связан с гибелью клеток; unengulfed апоптоза клеток почти не видели в естественных условиях при нормальных условиях. Для того чтобы понять различные этапы оформления апоптоза клеток и сравнить "профессионального" фагоциты - макрофаги и дендритные клетки на "непрофессиональной" - ткани-резидент соседние клетки, в естественных условиях живого изображения процесса является чрезвычайно ценным. Здесь мы опишем протокол для изучения апоптоза оформления ячейки в живых эмбрионов дрозофилы. Чтобы проследить динамику различных этапов фагоцитоза мы используем для специфических маркеров апоптоза клеток и фагоцитов. Кроме того, мы можем контролировать два фагоцитов систем параллельно: "профессиональных" макрофагах и "полу-Professional 'глии в развитие центральной нервной системы (ЦНС). Метод, описанный здесь использует эмбриона дрозофилы как отличную модель для исследования реальных время апоптоза оформление клетки.
Введение
Надлежащего устранения нежелательных или аберрантных клеток путем апоптоза и последующего фагоцитоза имеет решающее значение для эмбрионального развития, а также для тканевого гомеостаза у взрослых. Фагоцитоз апоптоза клеток или апоптоз оформления ячейки весьма динамичный процесс, который продолжается в четыре этапа: (1) набор фагоцитов апоптоза клетки ("находят меня '), (2) признания ячейки в качестве мишени для фагоцитоза ( 'есть-меня') и (3) охвате, а затем (4) фагосома созревания и деградации апоптоза частиц 1-5. Есть два типа фагоцитов: «профессиональный» макрофагов и незрелых дендритных клеток, и "непро....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Чтобы проследить динамику апоптоза оформление клетки в естественных условиях две популяции клеток должны быть помечены: фагоциты и апоптоза клеток.
Чтобы отметить фагоцитарной клеточных популяций мы используем линии Drosophila содержащие симу-cytGFP маркер, который называет исключительно фагоциты в зародыше: макрофаги, глии и эктодермы 8. Можно использовать различные маркеры для фагоцитов, включая строки, содержащие форменные элементы крови конкретного Gal4 драйвера (CRQ-Gal4) или глии конкретных Gal4 драйвера (РЕПО-Gal4) и генетически закодированы под люминесцентные репортер управле....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Представитель кадров из видеозаписи, в котором апоптотических клеток помечены аннексина V и глии, эктодермы и макрофагов помечены симу-cytGFP показаны на рисунке 2. Каждый кадр является проекцией 3 ломтика 2 мкм каждый.
Эмбриона 15 ступени правильно расположен показывающие эмбриональных ЦНС в середине с хорошо помечены глии (г). Макрофагов (м), которые являются в основном за пределами ЦНС, показать сильные цитоплазматической экспрессии GFP. Эктодермальная клетки т.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Апоптоза зазор клетка является критическим последней стадии апоптоза, который равен высокой динамичностью. Поэтому реальные исследования времени процесса имеют первостепенное значение. Здесь мы опишем протокол, который позволяет контролировать оформление апоптоза клетки в живых развивающихся эмбрионах дрозофилы. В этой процедуре, две популяции клеток должны быть помечены с использованием специфических маркеров: апоптотических клеток и фагоцитов. Симу-cytGFP репортер предназначен для мониторинга фагоцит.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.
Благодарности
Эта работа была поддержана Марии Кюри реинтеграции Грант (IRG249084). Мы благодарим всех членов Kurant лаборатории.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Reagent | |||
| Annexin V | Молекулярные зонды | A35108 | |
| PhiPhiLux G2D2 | OncoImmunin | A304R2G-5 | |
| LysoTracker | Молекулярные зонды | L-7528 | |
| Галокарбоновое масло 700 | Sigma | H8898 | |
| < прочный>Материал | |||
| капиллярный трубка | FHC | 30-30-0 | |
| Сетчатый фильтр | SPL | 93100 | |
| Кисть |
Ссылки
- Kinchen, J. M. A model to die for: signaling to apoptotic cell removal in worm, fly and mouse. Apoptosis. 15, 998-1006 (2010).
- Kinchen, J. M., Ravichandran, K. S. Phagosome maturation: going through the acid test. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 9, 78....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
