Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Время изображений в заданный промежуток первичной предраковых эпителиальные клетки молочной железы, полученных из генно-инженерных мышей модели рака молочной железы

11.6K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/50198

⸱

8 февраля 2013 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Oncology, Georgetown University, 2Lombardi Comprehensive Cancer Center, Georgetown University, 3Stem Cell Dynamics, Helmholtz Zentrum München - German Research Center for Environmental Health, 4Department of Medicine, Georgetown University, 5Department of Nanobiomedical Science and WCU Research Center of Nanobiomedical Science, Dankook University

В этой статье

Краткое содержание

Время изображений в заданный промежуток используется для оценки поведения первичной предраковых молочной эпителиальных клеток, полученных из генетически модифицированных мышей моделей риска рака молочной железы, чтобы определить, есть ли корреляция между конкретных поведенческих параметров и различных генетических поражений.

Аннотация

Время изображений в заданный промежуток может быть использован для сравнения поведения культурного первичной предраковых эпителиальные клетки молочной железы, полученных из различных генно-инженерных мышей модели рака молочной железы. Например, время между клеточных делений (ячейка жизни), апоптозе числа клеток, эволюцию морфологических изменений, и механизм образования колоний может быть определена количественно и по сравнению с клетками, несущими специфических генетических поражений. Первичный молочной эпителиальных клеточных культур создаются из молочных желез без ощутимой опухоли. Железы тщательно резекции с четким разделением от соседних мышц, лимфатических узлах удаляют, и одно-клеточные суспензии обогащенных молочных эпителиальные клетки порождаются измельчения ткани молочных желез следует ферментативного разложения и фильтрации. Single-клеточной суспензии высевали и помещаются непосредственно под микроскопом в камере инкубатора для живых клеток изображений. Шестнадцать 650 мкм х 700 мкм поля в конфигурации 4x4 друг от WELL из 6-луночный планшет загружаются через каждые 15 мин в течение 5 дней. Покадровый изображения рассматриваются непосредственно измерить сотовой поведения, которое может включать в себя механизм и частоты образования клеток колонии в течение первых 24 ч посеве клеток (агрегации по сравнению с клеточной пролиферации), частота апоптоза, и постепенно морфологических изменений. Single-клетки слежения используется для создания клеточной судьбы карт для измерения индивидуальной жизни клетки и исследование моделей клеточного деления. Количественные данные статистически проанализированы на предмет существенных различий в поведении связаны с определенными генетическими повреждениями.

Введение

Генно-инженерные модели мыши являются инструментами, изучить и понять, как различные генетические повреждения вклад в риск развития рака молочной железы. Например, генетически модифицированных мышах показали, что сочетание трех факторов: потеря полнометражный рака молочной железы 1, раннее начало (BRCA1) ген в эпителиальные клетки молочной железы, опухоли белка р53 (ТР53) зародышевой линии гаплонедостаточность и молочной эпителиальных целевые клетки до регулируемого альфа-рецептора эстрогена (ERA) выражение результатов в развитии рака молочной железы в 100% BRCA1 floxed (F) 11/f11/Mouse молочной Вирус опухоли (MMTV) -Cre/p53 + / -/tetracycline-operator ( тет-ор) -ER/MMTV-reverse тетрациклин трансактиватор (rtTA мышей в возрасте 12 месяцев по сравнению с более низких процентах сообщили в BRCA1 f11/f11/MMTV-Cre/p53 + / - мышей без эпоху чрезмерной экспрессии (~ 50 - 60%) и BRCA1 f11/f11/MMTV-Cre мышей без гена ТР53 haploinsufтивность (<5%) 1.

Динамические покадровой визуализации поведения предраковых первичной эпителиальные клетки молочной железы показывает различия в поведении клетки, которые не так легко оценены в статических срезов. Изменения в пролиферации и дифференцировки наблюдается в первичных клеток молочной железы из человеческих носителей мутации BRCA1. 2 Создание одноклеточных суспензий первичных эпителиальные клетки молочной железы из нормальных и генетически модифицированных мышей формируются путем ферментативного диссоциации удаленной ткани молочной железы. 3 замедленной просмотре изображений для оценки механизма и сроков появления клетки колонии и заболеваемости морфологические изменения в клетках, в том числе эпителиальных мезенхимальных перехода (EMT) и апоптоза. Генерация карт судьбы клеток, количественное промежуток времени между клеточных делений (ячейка жизни), и определение моделей клеточного деления облегчена за счет использования одноклеточных слежения. TimmОтслеживание Tool 'ы (ТТТ) является общедоступной программного обеспечения, используемого для создания одной ячейки карты судьбы. Его полезность для выяснения механизмов клеточной судьбе было установлено 4,5 изучение нормальных гемопоэтических стволовых клеток, развитие 6-9 и генерации нейронов 10.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

1. Общая схема

  1. Создание первичных культур предраковых эпителиальные клетки молочной железы из молочных желез генной инженерии и управления мышей дикого типа.
  2. Захват живых клеток изображения каждые 15 минут, используя Volocity получения изображений программное обеспечение (версия 5.3.1, PerkinElmer, Waltham, MA) на срок до 5 дней.
  3. Просмотр покадровой изображений непосредственно для оценки сроков и механизма формирования эпителиальной клетки колонии, частота апоптоза, и постепенно морфологических изменений.
  4. Преобразование Volocity генерируется. TIFF стеков. JPG файлы с помощью MetaMorph автоматизация микроскопии и анализа изображений программное обеспечение (Molecular Devices, ООО Саннивейл, Калифорния) и переименования цифровых файлов изображений (Переименовать 2.1.6, http://www.softpedia.com/get / System / File-менеджмент /-Rename.shtml ), чтобы включить совместимость с инструмент отслеживания программного обеспечения Тимм (в ТТТ,tz-muenchen.de/en/isf/hematopoiesis/software-download/index.html "целевых =" _blank "> http://www.helmholtz-muenchen.de/en/isf/hematopoiesis/software-download/index. HTML).
  5. Использование TTT, создавать ячейки судьба карты для определения времени между клеточных делений (ячейка жизни) и модели клеточного деления (симметричный по сравнению с асимметричной).
  6. Анализ количественных данных из шагов 3 и 5 выше, чтобы определить, существуют ли статистически значимые различия между разными генетически модифицированных мышей моделей и / или дикого типа управления.

2. Генерация первичной молочной эпителиальных клеточных культур

  1. Подготовить всю СМИ для изоляции одного эпителиальные клетки молочной железы после изменения инструкции завода-изготовителя (EpiCult-B Мышь среднего Kit, StemCell Technologies, Ванкувер, Британская Колумбия). Комбинат 450 мл Epi-Культ-B среду, 50 мл Epi-Культ B распространения дополнения, 5% эмбриональной телячьей сыворотки (FBS), 50 мкг / мл пенициллина / стрептомицина (PenStrер) и 10 нг / мл эпидермального фактора роста (EGF).
  2. Подготовка Диссоциация СМИ путем объединения 1 часть 10x коллагеназы / гиалуронидазы смеси с 9 частями полной среде с 2,1.
  3. Усыпить мышью и немедленно приступить к аутопсии. Место мыши на спине на платформе вскрытия пенополистирола и закрепите все четыре конечности так вентральной кожа становится упругой. Насыщение вентральной кожи и волос, в том числе вышележащих конечностей, с 70% этанола. Expose # 2/3 (грудной) и № 4/5 (паховые) молочных желез, сделав срединный разрез через кожу (не входят в брюшину), который продолжается в Y-разрез через кожу медиальной каждой передней конечности и перевернутый Y разрез через кожу медиальной каждой задней конечности.
  4. Используя тупой диссекции, отделить кожу от underlyingperitoneum, потяните на себя обе стороны кожи, пока он не тугой, и закрепить ее на платформу пенополистирола вскрытия использованием штифтов. С внешней стороны, использовать тупой диссекции с разумным использованием Диссеие ножницы, чтобы изолировать нетронутыми паховой и / или грудные молочные железы от подлежащей соединительной ткани и мышц. Разместить не более двух молочных желез в 10 см стерильную чашку Петри и перейти к ткани капот культуры.
  5. В тканях капот культуре, изучить железы для грудные лимфатические узлы, которые определены как небольших, хорошо ограниченные узелки с желтоватым цветом. Удалить лимфатические узлы от окружающих железы с использованием стерильных скальпеля и пинцета. Пропустить через мясорубку ткани молочных желез в ~ 1 мм 3 кубика с помощью двух стерильных скальпелей, по одной в каждой руке.
  6. Место фарш ткань молочной железы в 5 мл Диссоциация СМИ, перемешать, осторожно пипеткой вверх и вниз 2-3 раз, используя 10 мл пипетки, и инкубировать в течение ночи (до ~ 16 часов) при 37 ° C инкубаторе с 5% CO 2 в 50 мл коническую трубку с распущенными крышкой.
  7. На следующее утро, готовить холодные смеси сбалансированный солевой 1 часть Хэнкса решение (HBSS), содержащей 2% FBS и 4 частей буферного раствора хлористого аммония содействовать красной блдревесины лизиса клеток (HFAmCl), а также холодные HBSS с добавлением 2% FBS (HF). Предварительно теплой трипсина-EDTA (0,25%), 5 мг / мл диспазы в сбалансированном солевом растворе Хэнка изменения, 1 мг / мл ДНКазы I, и полная Media.
  8. Удалить коническую трубку с центрифугой ткани молочной железы из инкубатора и аккуратно импульса вихря 2-3 сек в два раза. Центрифуги трубы при 450 х г в течение 5 мин (комнатной температуры или 4 ° C), и отбросить супернатант.
  9. Ресуспендируют осадок как минимум в 10 мл HFAmCl и центрифуге при 450 х г в течение 5 мин (комнатной температуры или 4 ° C) и отбросить супернатант.
  10. Добавьте 3 мл трипсина-EDTA в гранулах и смешать сначала с 5 мл пипетки, а затем с P1000 микропипетки до тягучий (1-3 мин). Добавить 10 мл HF, центрифуги при 450 х г в течение 5 мин (комнатной температуры или 4 ° C) и отбросить супернатант.
  11. Добавить 2 мл 5 мг / мл диспазы и 200 мкл 1 мг / мл ДНКазы I в гранулах и смешать с P1000 микропипетки в течение 1 мин. Образцы должны быть ClOУды, но не тягучий. Если тягучий, добавить 100 мкл ДНКазы I и снова перемешать.
  12. Добавить 10 мл холодной HF, процедить через сито 40 мкм клетки и центрифуги при 450 х г в течение 5 мин (комнатной температуры или 4 ° C) и отбросить супернатант.
  13. Ресуспендируют конечный осадок в полной среде. Количественная оценка общего числа клеток (с использованием гемоцитометр или Coulter Counter). Два молочных желез дают примерно 1 х 10 6 до 1 х 10 7 клеток. Плита первичных эпителиальных клеток в плоскодонные 6-луночный планшет при плотности 1,5 х 10 5 клеток на лунку.

3. Онлайн-клеточной изображений

  1. Сразу после посева клеток, поместить 6-луночный планшет надежно на столике микроскопа в пределах 5% CO 2 / насыщенный humidity/37 ° C температура инкубации камеры. Отрегулируйте конденсатора для Kohler освещение и центр фазе кольца. Для экспериментов, представленных здесь, перевернутые Nikon Eclipse TE300/PerkinElmer вращающийся диск конфокальнойМикроскоп системы в широкопольных фазового контраста режиме с 10-кратным объективом был использован.
  2. Открытое программное обеспечение захвата изображений, создавать и назвать библиотеку для покадровой изображения, и сохранить в папку с достаточным пространством для больших файлов. Эксперименты, представленные здесь использованы Volocity получения изображений программное обеспечение (версия 5.3.1, PerkinElmer, Waltham, MA).
  3. Разрешить пластины, чтобы уравновесить в микроскоп инкубаторе в течение как минимум 15 мин. Опустите линзы, чтобы избежать этапа линзы помех. Под «Сцена» заголовок, выберите пункт "Калибровка этап". Выкупить фокальной плоскости, множество Z = нуль при х, у, г вкладки и Марк точки изображения, выбрав пункт "Добавить точку" в рамках "Стадии" заголовок. Место точках в середине каждой лунки 6-луночный планшет для работы с изображениями, как фаза визуализации отличие может быть искажено рядом с периферии пластиковых колодцев. Организовать пунктов на площади в 4 х 4 поля (650 мкм х 700 мкм полей), каждая с небольшим перекрытием (около 5%). Сохранить выбранные точки в разделе "Stagе ».
  4. В разделе "Этап", выберите "Сделать фокус карты" и следуйте инструкциям, чтобы установить фокус каждой точки. Установить сроки получения изображения, чтобы захватить 4 фотографии в час (каждые 15 мин). Это может быть скорректирована в зависимости от требований конкретного эксперимента. Сохранить фокус карту под "Stage".
  5. Щелкните правой кнопкой мыши на правой стороне панели инструментов "Image Acquisition" и сохраните настройки изображения. Нажмите на кнопку записи, чтобы начать изображений. После 1 часа, проверить фокусировку изображения, чтобы увидеть, если любая корректировка не требуется.
  6. Мониторинг и продолжают изображений живых в течение 5 дней, заканчиваясь, когда клетки становятся вырожденная.

4. Прямые Просмотр покадровой изображения для оценки времени и механизм формирования начальных Эпителиальные колонии клеток, апоптоз заболеваемости, и этапы морфологических изменений

  1. Прямой просмотр покадровой изображения можно выполнять с помощью любого совместимого программного обеспечения просмотра видео (например, HTTP:/ / Www.real.com/ RealPlayer или других бесплатных или коммерчески доступного программного обеспечения). Изображения можно просматривать в формате. TIFF на этом шаге или после преобразования. JPG файлы (см. шаг 5).
  2. Чтобы определить механизм формирования начальной колонии, начните с одного изображения стек, представляющих одну изображений сайта на тарелку. В начальных кадрах, клетки будут плавающими. Следите серийный изображения, чтобы определить, когда первый эпителиальных клеток прилипает к пластине. На данном этапе, эпителиальные клетки могут быть выявлены и дифференцированы от фибробластов их более кубических морфологии. Следуйте этим одним эпителиальных клеток через последовательные изображения и следить за его судьбой в течение последующих 24 часов. Запишите, если она становится окружении дополнительных эпителиальные клетки или претерпевает деление клеток или апоптоз. Если окруженный эпителиальных клеток, механизм образования колоний могут быть определены непосредственно при просмотре, если окружающие клетки получают из плавающих клеток, которые затем объединяют с начальной приверженцем клетки (ы) илиот деления начальной приверженцем клетки. Запишите число колоний формируется путем объединения ячейки по сравнению с делением клетки в течение первых 24 часов.
  3. Для определения числа первоначально прикрепленных клеток, которые подвергаются апоптозу в течение определенного периода времени, выполните последовательные образы для появления классические черты апоптоза развивается в ячейке, которая была приверженцем ( http://www.alsa.org/research/about -als-research/cell-death-and-apoptosis.html ), а число апоптоза клеток, выявленных в ходе всего срока изображений или в конкретные сроки записаны.
  4. Со временем, эпителиальных клеток в культуре изменять их морфологии от начальной форму шестигранника на более удлиненный внешний вид в соответствии с EMT. Следите серийный изображения, чтобы определить день / час после посева, когда это произойдет.

5. Модификация файла изображения

  1. Через Volocity программное обеспечение, экспортировать файлы изображений TIFF стеки. Здесь MetaMorph автоматизация микроскопии и программного обеспечения для анализа изображений (Molecular Devices, ООО Саннивейл, Калифорния) был использован для открытия файлов TIFF стек, и они затем были сохранены в MetaMorph как сингл. JPG изображений.
  2. Переименование изображений папок и файлов в соответствии с требованиями для отслеживания программного инструмента Timm в Используйте бесплатную программу, как переименование 2.1.6 ( http://www.softpedia.com/get/System/File-Management/THE-Rename.shtml ) для переименования файлов в группах. Создайте папку, содержащую все папки и файлы эксперимента и введите имя папки (например, EXPERIMENTNAME).
  3. Создайте папку для каждой точки / положение, в котором культура образа. Имя папки: EXPERIMENTNAME_pPOSITIONNUMBER. Номер позиции должны иметь 3 цифры. Пример: 072511RN_p001. Поместите все файлы изображений, что отдельные позиции в папке.
  4. Добавить момента времени (по 5 цифр) и номер канала (так как есть только один яркий канал поля, используйте "0") в конце каждого имени файла в следующем формате:
    EXPERIMENTNAME_pPOSITIONNUMBER_tTIMEPOINT_wCHANNELNUMBER.jpgExample: 072511RN_p001_t00001_w0.jpg
  5. Создайте файл журнала для каждой позиции по первой загрузке бесплатных программ TTTlogfileconverter от TTT сайта. Начало TTTlogfileconverter программы и выберите папку эксперимента. Входное изображение интервал (в секундах). Для снимка каждые 15 минут, введите 900 сек. Затем нажмите зеленую скрытые файлы журналов кнопку.

6. Генерация сотовых Карты судьбы отдельных клеток Использование TTT

  1. Cмии папку под названием TTTexport и подпапку TTTfiles, где все ячейки данных отслеживания будут сохранены после ТТТ инструкции программного обеспечения
  2. Начало TTT программу, выберите пользователя инициалы, и нажмите "Продолжить".
  3. Нажмите кнопку «Установить NAS", выберите пользователя, созданного "TTTexport" папки и нажмите кнопку ОК. В браузере выберите эксперимент папку, выберите позицию папку, а затем нажмите кнопку "Загрузить позицию" кнопку.
  4. Установить глазные фактор "10x". Загрузите количества изображений требуется (загрузка всех изображений рекомендуется в первый раз).
  5. В ячейке окна редактора, выберите "Новая колония" в меню Файл. В фильме окне нажмите кнопку "Track ячейки" или F2, чтобы начать отслеживать клетки.
  6. Определить ячейки в MОви окна и использование мыши, чтобы поместить курсор на ячейку. Круг с номером ячейки должны появиться после F2 была нажата. Используйте клавишу "0" на цифровой клавиатуре на клавиатуре, чтобы отслеживать размещение ячейки и перехода к следующему изображению. Переместив курсор следить за размещение каждой ячейки через каждый кадр. Чтобы удалить дорожку и вернуться к предыдущему изображению нажмите кнопку "Del" на цифровой клавиатуре. Чтобы двигаться вперед кадры без отслеживания ячейки нажмите кнопку "3" и двигаться в обратном направлении без отслеживания нажмите "1" на цифровой клавиатуре.
  7. Чтобы отметить деление клеток нажмите кнопку "Отдел" кнопку в окне фильма. Чтобы отметить гибель клеток нажмите кнопку "Сотовый смерти" кнопку в окне фильма. После того, как разделение произошло, дочерние клетки могут быть отслежены в том же карту судьбу клетки щелкнув правой кнопкой мыши на окружности символ назначенный дочерняя клетка в окне редактора ячеек, чтобы начать режим слежения автоматически.
  8. Нажмите клавишу F10, чтобы сохранить дерево. Каждое дерево будет сохранить в назначенный выходной разаER (TTTExport). Чтобы начать новую карту судьбу клетки, выбрать пункт "Новая колония" в разделе "Файл", затем "Open" меню в окне редактора Cell.
  9. Сведите данные ячейки жизни после сбора из "Cell данных" на вкладке в окне редактора Cell.

7. Статистический анализ

  1. Используйте либо Стьюдента-тест (при сравнении двух генотипов) или ANOVA (если сравнение> двух генотипов), чтобы определить, есть ли различия в параметрические данные, такие как номера начальной колонии клетки, клетки жизни или часов до появления EMT между различными генотипами являются статистически значительна. Апоптоза частоты можно сравнить, как / общее количество покрытием клеток с использованием Стьюдента испытания или ANOVA или Манна-Уитни и Крускала-Уоллиса, когда, полученных в виде процента от прилипших клеток.
  2. Выполните власти испытания с использованием данных анализа первых экспериментов, чтобы определить, сколько экспериментальной повторяет необходимости выполняется и карты судьбы клеток, полученные от каждого из одинаковых для адекватной сТАТИСТИЧЕСКИЕ энергии с использованием доступных бесплатных (например, http://statpages.org/ ). В экспериментах, представленных здесь, культуры клеток, полученные из трех мышей в генотипе было достаточно, чтобы определить, были ли статистически значимые различия в клеточной формирование колоний и клеточной жизни, когда определенные генетические изменения были сделаны.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Эпителиальные клетки фибробластов и можно отличить по морфологии клеток. Эпителиальные клетки имеют форму шестигранника (рис. 1А-B) и формы клеточных колоний (рис. 1А). Фибробласты, типа стромальных клеток, имеют удлиненную морфологию (рис. 1С).

Клетки округлые и плавает в начале изображения (рис. 2A-D). После прикрепления к пластине они стали плоскими и продемонстрировал кубический тип внешности (рис. 2E, H).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Критические шаги

Важно, чтобы молочные железы собирают из мышей того же возраста, для контроля за возрастной изменчивости молочной эпителиальных поведение клетки. При посеве клеток, такое же количество клеток должны быть покрыты в каждую лунку для каждого эксперимента. Клетки должны быть относительно редкими, когда посеве культур, так что не стал сливной слишком быстро, что позволяет следовать нескольким отдельным клеткам через последовательные образы. Важно, чтобы пластина быть доведены в инку...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.

Благодарности

Авторы хотели бы поблагодарить Bofan Wu и христианской Raithel для оказания технической помощи и Майкл Rieger для его введения в живой клетке изображений. Поддерживается NCI, NIH RO1CA112176 (СУП), NCI, NIH. R01CA89041-10S1 (СУП), Deutscher Akademischer Austaush Dienst эВ A/09/72227 Ref. 316 (REN), Министерства обороны W81XWH-11-1-0074 (REN), WCU (World Class Университет) программы через Национальный научный фонд Корея финансируется Министерством Образования, Науки и Технологии (R31-10069) (PAF ), NIH IG20 RR025828-01 (грызунов барьер фонда оборудования), и NIH NCI 5P30CA051008 (микроскопии и обработки изображений животных и общих ресурсов).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Название реагента Компания Номер в каталоге Комментарии
EpiCult-B Базальная Мышь среднего StemCell технологий 05610
EpiCult-B распространения добавки мышь StemCell технологий 05612
рекомбинантного человеческого эпидермального фактора роста (rhEGF) StemCell технологий 02633
Коллагеназы / Гиалуронидаза StemCell технологий 07912
Одноразовые Scapels Перо 2975 # 10
Сбалансированный солевой Хэнкса решение StemCell технологий 37150
mmonium хлорид StemCell технологий 07800
Tryspin-EDTA StemCell технологий 07901
Диспазы StemCell технологий 07913
ДНКазы I StemCell технологий 07900
40 мкм фильтр клетке StemCell технологий 27305
FBS StemCell технологий 06100
PenStrep Gibco 15140

Ссылки

  1. Jones, L. P., et al. Activation of estrogen signaling pathways collaborates with loss of Brca1 to promote development of ERalpha-negative and ERalpha-positive mammary preneoplasia and cancer. Oncogene. 27, 794-802 (2008).
  2. Burga, L. N., et al. Altered proliferation and differentiation properties of primary mammary epithelial cells from BRCA1 mutation carriers. Cancer Res. 69, 1273-1278 (2009).
  3. Li, M., Wagner, K., Furth, P. A. Preparation of primary mammary epithelial cells and transfection by viral and nonviral methods. Methods in Mammary Gland Biology and Breast Cancer. Ip, M., Asch, B. , Kluwer Academic, Plenum Press. (2000).
  4. Schroeder, T. Imaging stem-cell-driven regeneration in mammals. Nature. 453, 345-351 (2008).
  5. Schroeder, T. Long-term single-cell imaging of mammalian stem cells. Nature Methods. 8, S30-S35 (2011).
  6. Eilken, H. M., Nishikawa, S. -I., Schroeder, T. Continuous single-cell imaging of blood generation from haemogenic endothelium. Nature. 457, 896-900 (2009).
  7. Kokkaliaris, K. D., Loeffler, D., Schroeder, T. Advances in tracking hematopoiesis at the single-cell level. Current opinion in hematology. , (2012).
  8. Rieger, M. A., Hoppe, P. S., Smejkal, B. M., Eitelhuber, A. C., Schroeder, T. Hematopoietic cytokines can instruct lineage choice. Science. 325, 217-218 (2009).
  9. Rieger, M. A., Schroeder, T. Instruction of lineage choice by hematopoietic cytokines. Cell Cycle. 8, 4019-4020 (2009).
  10. Heinrich, C., et al. Generation of subtype-specific neurons from postnatal astroglia of the mouse cerebral cortex. Nat. Protoc. 6, 214-228 (2011).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Время изображений в заданный промежуток первичной предраковых эпителиальные клетки молочной железы, полученных из генно-инженерных мышей модели рака молочной железы
Свяжитесь с нами
Рекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

Авторские права © 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.