Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Послушный млекопитающих инфекции сотовый с Протозойные грунтовка бактерии

10.3K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/50300

⸱

2 апреля 2013 г.

 ,  ,  , 
1Department of Molecular Microbiology & Immunology, Oregon Health & Science University

В этой статье

Краткое содержание

Этот метод предоставляет метод для сбора, нормализации и количественного роста внутриклеточных бактериальных патогенов, которые предварительно выращивают в естественных клеток-хозяев простейших до инфекциями клеток млекопитающих. Этот метод может быть модифицирован, чтобы приспособить широкий спектр клеток-хозяев для грунтования этапе, а также типы клетки-мишени.

Аннотация

Многие внутриклеточные бактериальные патогены использовать пресноводных простейших как естественный резервуар для распространения в окружающей среде. Legionella легионелл, возбудителя легионеллеза пневмонией, получает преимущество над патогенными в пробирке культурных бактерий при первом собирают из простейших клеток до заражения млекопитающих макрофагов. Это говорит о том, что важным фактором вирулентности не может быть надлежащим образом выраженного в пробирке. Мы разработали послушный системы для грунтования L. легионелл через свой ​​естественный хозяин простейших Acanthamoeba castellanii до млекопитающих инфекции клетки. Вклад любого фактора вирулентности могут быть рассмотрены путем сравнения внутриклеточного роста мутантного штамма дикого типа бактерий, простейших после грунтования. GFP-экспрессирующих дикого типа и мутанта L. легионелл штаммы используются для заражения простейшими монослоев в грунт шагом и позволило достичь поздних стадиях внутриклеточного роста. Флуоресцентные бактерий, затем собирают из этих инфицированных клеток и нормированы спектрофотометрии для получения сопоставимого количества бактерий для последующей инфекции в млекопитающих макрофагов. Для количественного определения, живые бактерии контролируются после заражения с помощью флуоресцентной микроскопии, проточной цитометрии, и колонии покрытия. Этот метод выдвигает на первый план и зависит от вклада клетки-хозяина экспрессии генов путем имитации окружающей среды, которые будут встречаться в естественный путь приобретения. Этот подход может быть изменена, чтобы приспособить любую бактерию, которая использует промежуточного хозяина, как средство для получения патогенных преимущество.

Введение

Многие патогенные бактерии приспособились обобщенных стратегий для использования клеток-хозяев для выживания и репликации внутриклеточных отсеке. Во многих случаях, патогенетические механизмы аналогичны между простейшими и многоклеточными клеток. Однако, эти два микросреды очень разные и могут привести к дифференциальной экспрессии факторов вирулентности 1-4. Болезнь легионеров бактерия Legionella легионелл является повсеместно, связанных с пресноводной среде по всему миру 5. Важно отметить, что L. легионелл выращивают в простейших клеток до заражения человеческих моноцитов получить патогенных преимущество, предполагая, что глобальные профили экспрессии генов бактерии выхода клетки простейших отличаются, чем в пробирке выращивают 6-8 организма. В природе, пресноводных амеб обеспечивают богатые питательными веществами пределы для быстрого усиления вторжения бактерий. Человека приобретении L. pneumophила наиболее часто связывают с вдыханием загрязненного капель воды, которые содержат бактерии. Вполне вероятно, что эти капли гавани простейших клеточно-ассоциированных бактерий, простейших, где клетки более устойчивы к обычной воды практик 9,10. Инфекция легких альвеолярные макрофаги доходы таким образом, практически идентична внутриклеточной жизненный цикл бактерий в простейших клеток-хозяев 11-13.

Для того чтобы выжить и размножаться в клетках эукариот, L. легионелл использует специализированный тип секреции IVb система называется Dot / ICM, чтобы доставить почти 300 «эффекторные» белков в цитоплазме клетки-хозяина 14-16. Эти эффекторные белки коллективно работать, чтобы разрушить клеточные процессы в целях получения разрешительной репликации отсек для бактерий 17,18. Удаления в любом из 26 генов, которые составляют Dot / ICM транспортера приводит к дефектных штаммов для внутриклеточных мультiplication 19-23. Исторически сложилось, что удаление отдельных эффекторных генов, кодирующих редко в результате ослабленного штамма для внутриклеточного роста. Это явление было приписано несколько гипотез, в том числе избыточных функций и паралогичных копии эффекторов.

Некоторые факторы вирулентности, только выраженная в контексте клетки-хозяина связанного внутриклеточного роста 24. Мы рационализировать, что если тот или иной эффекторных только выражается в контексте инфекции простейших, то вклад эффекторных не может быть по сравнению с штамма дикого типа, когда оба культивировали в пробирке. L. легионелл переходы от репликативной к пропускающий фазе, поскольку это входит стационарная фаза в культуре 25. Фенотип фазы переключения представляет истощение питательных веществ, возникших в ходе внутриклеточного роста и является примером по сборке жгутиков для подвижности 26. Поскольку L. легионелл более инваSIVE и опасной, когда собирают из простейших клеток, мы стремились разработать тест, который более точно представляют патогенные состояния бактерию, когда он встречается множество макрофагов.

С этой целью мы разработали универсальный тест грунтовки простейших, которые могут вместить любой подходящей принимающей как для первого (заливка ячейки) и второй (клетки-мишени) инфекции этапе. Инфекционный процесс является послушным за счет использования бактерий, стабильно экспрессирующих зеленый флуоресцентный белок (GFP). Инфекции модели для простейших Acanthamoeba castellanii следует методология широко используется в области 27. Для грунтования шаг, Л. легионелл штаммы выращиваются в пробирке в стационарной фазы в жидкую среду, чтобы произвести как 'пропускающего »бактерии (рис. 1А). Бактерии следующий использовали для инфицирования монослоев A. castellanii в течение 18 часов для достижения поздней стадии внутриклеточного жизненного цикла. Большие вакуоли содержатния бактерий могут быть визуализированы в этот момент времени с помощью флуоресцентной микроскопии (рис. 1А). Протозойные Затем клетки лизируются и бактерии извлекают из лизатов измеряется выбросов при 512 нм с использованием флуоресценции ридере. Флуоресценции коррелирует с оптической плотности для расчета кратности-оф-инфекции (MOI) для заражения клетки-мишени (рис. 1, * Корреляция кривой). После вторжения (T 0) и 18 ч после вторжения (T 18), клетки-мишени количественно для флуоресценции, представляющих внутриклеточных бактерий. Флуоресценции можно контролировать с помощью микроскопии и проточной цитометрии и жизнеспособных микроорганизмов может быть измерена через колонию покрытия. Грунтовка анализ всегда сопровождается инфекции дикого типа L. легионелл и деформации дефекты Dot / ICM Тип IV секреторной системы (Δ DotA) (рис. 1А). Это важно обеспечивает внутренний контроль за прямое сравнение между дикого типаой любом изогенных мутантные штаммы, используемые в процессе заражения. Включение авирулентным Δ DotA напряжение во время заливки этапа устанавливает порог для наблюдения ослабленный рост фенотипы, связанные с изогенных мутантные штаммы, которые культивируются в лабораторных условиях.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

1. Подготовка Legionella культуры легионелл для инфекций Грунтовка этап

  1. Преобразование всех L. легионелл штаммы, используемые в анализе плазмидой pAM239, кодирующий изопропилового β-D-1-тиогалактопиранозид (IPTG) индуцибельной зеленого флуоресцентного белка (GFP) 28. Подряд бактериальных штаммов на железо и цистеина дополнен N-(2-ацетамидо)-2-аминоэтансульфоновая кислота (ACES) буфером угля дрожжевой экстракт агар (CYEA), содержащий 6,25 мкг / мл хлорамфеникола (CM) (для плазмиды обслуживания) и инкубировать в течение 72 ч при 37 ° C.
  2. Передача посевной бактериального штамма в дополнено ACES буфер бульон дрожжевого экстракта (Ай) с 6,25 мкг / мл CM и 1 мМ IPTG и культивировать в стационарную фазу (O / N) на орбитальном шейкере при 37 ° C.
  3. Подтвердите GFP выражение в культурах в пробирке с помощью флуоресцентной микроскопии. Передача 10 мкл культуры на предметное стекло под крышкойскольжения и изображения, используя 60X объектив с возбуждением GFP / выбросов куба (AMG EVOS П).
  4. Развести в 100 мкл каждого из них в культуре пробирке до 1:10 с использованием стерильной H 2 O. Сделать пустым, используя 100 мкл AYE средствах массовой информации с 1 мМ IPTG и 6,25 мкг / мл см и воды. Возьмите OD600 измерений разведения с использованием спектрофотометра (Bio-Rad Смарт-Spec Plus). Рассчитать объем необходимых для заражения также в МВД = 20 для каждой культуры в пробирке: V = [(амебы посева) х МВД России] / [OD 600 х (коэффициент разбавления) х (постоянное)] = [(1 х 10 6 ) х (20)] / [OD 600 х (10) х (1 х 10 6)] = 2/OD 600. Концентрация бактерий определяется как OD 600 = 1,0 = 1 × 10 9 КОЕ / мл.

2. Грунтовка стадии инфекции, используя Acanthamoeba castellanii

  1. Поддерживать и развивать амеб в ATCC 712 PYG среду в 175 см 2 колбы при комнатной температуре.
  2. Заменить СМИ в амеб культурывания 24 часа до начала бактериальная жидкость культур. В тот же день жидких бактериальных культур начался сбор и подсчет клеток на световом микроскопе с помощью гемоцитометра.
  3. Развести амеб свежей средой до конечной концентрации 1 х 10 6 клеток / мл. Семенной 12-а культура клеток пластин с 1 мл аликвоты из амеб помощью пипетки повтор и инкубировать при комнатной температуре O / N.
  4. После инкубации промыть лунки 12-луночных культуре клеток пластины 3 раза с 1 мл стерильной PBS с использованием 10 мл серологической пипетки и эксплуатации помощью пипетки.
  5. После стремление PBS, добавить 1 мл инфекции СМИ (ATCC 712 PYG СМИ минус глюкоза, пептон и дрожжевой экстракт) с 1 мМ IPTG и 6,25 мкг / мл см в каждую лунку. Инкубируйте пластины при комнатной температуре в течение 1 часа.
  6. Infect скважин на MOI = 20. Центрифуга пластины при 400 мкг в течение 5 мин (Eppendorf 5810R) и плавать в 37 ° С водяной бане в течение 5 мин. Передача пластины на 37 ° C, 5% CO 2 инкубаторе в течение 18 часов.
  7. Подтвердите инфекции использованием изображений живых клеток на флуоресцентного микроскопа до проведения лизиса клеток и урожай бактерий.

3. Посев ТНР-1 клеток для целевой инфекции клеточной стадии

  1. (Начало этому процессу 24 часа до создания жидких бактериальных культур). Развивайте ТНР-1 клеток в 75 см 2 колбы с культурой почти до слияния в RPMI 1640, содержащей 10% инактивированной эмбриональной телячьей сыворотки (FBS).
  2. Граф суспензии клеток с помощью гемоцитометра, развести ТНР-1 клеток в RPMI 1640, с 10% FBS и 100 нг / мл форболового-12-миристат-13-ацетат (PMA) в концентрации 1 х 10 6 клеток / мл , и пластина в 1 мл аликвоты по 12-луночных культуре клеток. Инкубируйте пластины в течение 48 ч при температуре 37 ° C, 5% CO 2.

4. Обработка Бактерии для целевой инфекции клеточной стадии после заражения этап Грунтовка

  1. Аспирируйте средств массовой информации из загрунтовать амеб.
  2. Lysemoebae использованием 500 мкл ледяной, стерильные ультра-фильтром (UF) H 2 O и инкубировать при комнатной температуре в течение 10 мин.
  3. Бассейн лизатов в соответствии с типом напрягаться и принимать E 512 нм измерений для каждого из объединенных лизатов использованием флуоресцентного планшет-ридера (Molecular Devices Spectramax Близнецы EM).
  4. Рассчитать OD 600 измерений для объединения лизатов: calcOD 600 = 0,0008 (E 512 - лизат фоне) + 0,0019. Эта формула была ранее определена путем построения графика прямое сравнение обеих OD 600 и E 512 нм измерений разведения L. легионелл дикого типа выражения GFP из стационарной фазы в пробирке культуру (рис. 1 *). Лизатов неинфицированных амебы, с учетом тех же экспериментальных условиях, зараженных амеб, которые используются в качестве пустого и при условии коррекции значения (например, лизат фоне), которая была включена в уравнение. Объем необходимых тO заразить а в МВД = 20 рассчитывается для каждого лизата бассейна: V = [(THP-1 посева) х МВД России] / [calcOD 600 х (постоянное)] = [(1 х 10 6) х (20)] / [calcOD 600 х (1 х 10 6)] = 20 / calcOD 600.
  5. Вымойте ТНР-1 клеток 3x с PBS и добавляют 1 мл свежей RPMI 1640 (10% FBS) в каждую лунку. Инкубируйте ТНР-1 клеток в течение 1 часа при 37 ° C, 5% CO 2.
  6. Infect ТНР-1 клеток при расчетной МВД использованием объединенных лизатов. Разрешить множество скважин оставаться неинфицированных, выступающей в качестве отрицательного контроля для проточной цитометрии. Обработка грунтовки этап должен быть завершен менее чем за 30 мин. Лизатов хранятся на лед, чтобы ограничить любые изменения в экспрессии генов бактериальной перед инфекцией.
  7. Центрифуга пластины, плавать поднять температуру, и инкубировать как в заливной этапе.
  8. Через час после инфекции, удалить СМИ, стремление и мыть скважин 3x с PBS для удаления внеклеточных бактерий.
  9. Добавить 1 мл частотыШ. RPMI 1640 (10% FBS) в скважинах и вернуть пластину в инкубатор. Время сразу после замены носителя служит нулевой момент времени (T 0). Инкубируйте ТНР-1 клеток в течение 14-16 ч при 37 ° C, 5% CO 2.

5. Экспериментальный анализ

5,1 изображений живых клеток

Изображение инфицированных скважин с помощью флуоресцентного микроскопа (AMG EVOS Флорида) на 10х или 20х увеличении (рис. 1А-D). Изображения можно сравнить качественно или количественно определить уровни инфекции в обоих стадии грунтовки и целевых инфекций клеточной стадии.

5,2 проточной цитометрии

  1. Выбросы пиков различных инфекций можно сравнить с помощью проточной цитометрии (BD FACS Calibur). Trypsinize инфицированных ТНР-1 клеток и аккуратно промойте их из скважины путем смешивания в PBS с помощью пипетки.
  2. Бассейн клеток штамма типа в 15 мл Сокол труб и гранул при 1800 мкг в течение 2мин в центрифуге столешницы.
  3. Приостановить гранул в 1 мл PBS и передать пробирки на 1,5 мл микроцентрифуге.
  4. Центрифуга суспензий при 1800 х г (Eppendorf 5424) и вновь приостановить гранул в 1 мл PBS. Если в результате суспензии очень мутная (OD 600 ≥ 1,0) они должны быть разведены в дополнительных PBS (1:3), чтобы предотвратить засорение линии в проточной цитометрии.
  5. Использование стерильной фильтрации PBS для уравновешивания проточной цитометрии и для промывания между образцом инъекции. Постройте вперед / стороны разброс неинфицированных клеток-мишеней до введения целевых образцы клеток инфекции.
  6. Соберите 20000 Всего событий, для каждого условия использования 488 нм лазерного возбуждения и канала FL1.
  7. Ворота после захвата клеточных популяций, чтобы исключить неинфицированных клеток и земельный участок интенсивности флуоресценции в гистограмме (FlowJo) (рис. 1E).

5,3 КОЕ покрытием

  1. Изучить эффективность выводаF инфекции КОЕ покрытием из клетки, собранные для проточной цитометрии. Подготовка серийные разведения образцов в ультра-фильтром H 2 O в 10 -1, 10 -2 и 10 -3.
  2. Пластина 20 мкл каждого разведения на 1/3 от пластины CYEA с 6,25 мкг / мл CM.
  3. Инкубируйте пластины при температуре 37 ° C в течение 72 часов.
  4. Подсчет колоний помощью зубочистки и клеточной счетчика.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Типичный результат для всего процесса инфекция указаны на рисунке 1. Жить флуоресценции клеток микрофотографии изображающие монослоев A.castellanii инфицированных дикого типа L. легионелл в грунт этап показан на рисунке 1а. Успешная мера грунтовки шаг привел бы к населению около 90% клеток-хозяев, содержащих большие вакуоли заполнены GFP меченых бактерий в этой МВД. В 18 часа после заражения, большинство A. castellanii клетки достигли максимального бактериальн...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Бактериальная экспрессия гена жестко контролируется посредством сочетания жизнь цикла и ответ на сигналы в окружающей микросреде. Вакуолярной патогенов, таких как L. легионелл ответить на множество клетки-хозяина полученные сигналы, когда разобщенным в фагосомы. В коллективном результате истощения питательных в клетку-хозяина, бактерия компенсирует выразив факторов, необходимых для успешного распространения в последующем клетки-хозяина 25. L. легионелл адаптированы к эффективной паразитируют...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.

Благодарности

Мы благодарим д-р Крейг Рой и доктор Дарио Zamboni за предоставление шаблона для инфекций, простейших клеток. Мы благодарим доктора Jagdeep Obhrai, доктор Джорджина Парди, доктор Фред Heffron и Тодд Wisner на оборудование и реагенты; доктор Лулу Cambronne для критического обзора рукописи. Проточной цитометрии была выполнена в цитометрии OHSU потока динамические объекта ресурса. Эта работа была частично поддержана грантом из Медицинского научно-исследовательского фонда Орегон и грант NIH R21 AI088275 (EDC).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Reagent
chloramphenicolFisher ScientificBP904-100антибиотик
IPTGFisher ScientificBP1755-10
ACESSigmaA9758-1KGкомпонент среды
ATCC среда: 712 PYGATCCпитательная среда для простейших
1X PBSFisher НаучныйSH30256FSфосфат буферный солевой активированный
угольFisher ScientificC272-212медиакомпонент
дрожжевой экстрактМедиа компонент FisherScientific BP1422-500
медиа компонент пептонBDДиагностика 211677медиа компонент
агарFisher ScientificBP1423-2медиа компонент
L-цистеин, 99%+Acros organics173601000добавка для сред
Нонагидрат нитрата железаFisher ScientificI110-100добавка
Equipment
EVOS flAMGEVOS flфлуоресцентный микроскоп
Smart Spec PlusBio-Rad170-2525спектрофотометр
5810 R центрифугаEppendorf22627023настольная центрифуга
Repeater plusEppendorf22230201повторяющаяся пипетка
SpectraMax Gemini EMMolecular Devicesсчитыватель микропланшетов
Softmax Pro 5.3Molecular Devices0200-310микропланшетный считыватель программного обеспечения
5424 микрофугеEppendorf22620401настольный микроцентрифуга
Быстросъемный пипеточный насос IIНаучное программное обеспечение379111010помощь для пипеток
FACS CaliburBD Bioscienceпроточный цитометр
FlowJo 7.6.1FlowJoлицензияпрограммное обеспечение для проточной цитометрии
15 мл пробиркаBD Falcon352096полипропиленовая коническая пробирка
1,6 мл микрофуге пробиркаNeptune3745.XМикроцентрифужные пробирки
для сред

Ссылки

  1. Mahan, M. J., Slauch, J. M., Mekalanos, J. J. Selection of bacterial virulence genes that are specifically induced in host tissues. Science. 259, 686-688 (1993).
  2. Mahan, M. J., et al. Antibiotic-based selection for bacterial genes that are specifically induced during infection of a host. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 92, 669-673 (1995).
  3. Rankin, S., Isberg, R. R. Identification of Legionella pneumophila promoters regulated by the macrophage intracellular environment. Infect. Agents Dis. 2, 269-271 (1993).
  4. Rankin, S., Li, Z., Isberg, R. R. Macrophage-induced genes of Legionella pneumophila: protection from reactive intermediates and solute imbalance during intracellular growth. Infect. Immun. 70, 3637-3648 (2002).
  5. Fields, B. S. The molecular ecology of legionellae. Trends Microbiol. 4, 286-290 (1996).
  6. Cirillo, J. D., et al. Intracellular growth in Acanthamoeba castellanii affects monocyte entry mechanisms and enhances virulence of Legionella pneumophila. Infect. Immun. 67, 4427-4434 (1999).
  7. Cirillo, J. D., Falkow, S., Tompkins, L. S. Growth of Legionella pneumophila in Acanthamoeba castellanii enhances invasion. Infect. Immun. 62, 3254-3261 (1994).
  8. Faucher, S. P., Mueller, C. A., Shuman, H. A. Legionella pneumophila Transcriptome during Intracellular Multiplication in Human Macrophages. Front Microbiol. 2, 60(2011).
  9. Kilvington, S., Price, J. Survival of Legionella pneumophila within cysts of Acanthamoeba polyphaga following chlorine exposure. J. Appl. Bacteriol. 68, 519-525 (1990).
  10. King, C. H., Shotts, E. B., Wooley, R. E., Porter, K. G. Survival of coliforms and bacterial pathogens within protozoa during chlorination. Appl. Environ. Microbiol. 54, 3023-3033 (1988).
  11. Horwitz, M. A. Formation of a novel phagosome by the Legionnaires' disease bacterium (Legionella pneumophila) in human monocytes. J. Exp. Med. 158, 1319-1331 (1983).
  12. Horwitz, M. A. Phagocytosis of the Legionnaires' disease bacterium (Legionella pneumophila) occurs by a novel mechanism: engulfment within a pseudopod coil. Cell. 36, 27-33 (1984).
  13. Horwitz, M. A., Silverstein, S. C. Legionnaires' disease bacterium (Legionella pneumophila) multiples intracellularly in human monocytes. J. Clin. Invest. 66, 441-450 (1980).
  14. Burstein, D., et al. Genome-scale identification of Legionella pneumophila effectors using a machine learning approach. PLoS Pathog. 5, e1000508(2009).
  15. Zhu, W., et al. Comprehensive identification of protein substrates of the Dot/Icm type IV transporter of Legionella pneumophila. PLoS One. 6, e17638Forthcoming.
  16. Nagai, H., Kubori, T. Type IVB Secretion Systems of Legionella and Other Gram-Negative Bacteria. Front Microbiol. 2, 136(2011).
  17. Hubber, A., Roy, C. R. Modulation of host cell function by Legionella pneumophila type IV effectors. Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 26, 261-283 (2010).
  18. Shin, S., Roy, C. R. Host cell processes that influence the intracellular survival of Legionella pneumophila. Cell Microbiol. 10, 1209-1220 (2008).
  19. Berger, K. H., Isberg, R. R. Two distinct defects in intracellular growth complemented by a single genetic locus in Legionella pneumophila. Mol. Microbiol. 7, 7-19 (1993).
  20. Marra, A., Blander, S. J., Horwitz, M. A., Shuman, H. A. Identification of a Legionella pneumophila locus required for intracellular multiplication in human macrophages. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89, 9607-9611 (1992).
  21. Segal, G., Purcell, M., Shuman, H. A. Host cell killing and bacterial conjugation require overlapping sets of genes within a 22-kb region of the Legionella pneumophila genome. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 1669-1674 (1998).
  22. Segal, G., Shuman, H. A. Characterization of a new region required for macrophage killing by Legionella pneumophila. Infect Immun. 65, 5057-5066 (1997).
  23. Vogel, J. P., Andrews, H. L., Wong, S. K., Isberg, R. R. Conjugative transfer by the virulence system of Legionella pneumophila. Science. 279, 873-876 (1998).
  24. Haghjoo, E., Galan, J. E. Identification of a transcriptional regulator that controls intracellular gene expression in Salmonella Typhi. Mol. Microbiol. 64, 1549-1561 (2007).
  25. Molofsky, A. B., Swanson, M. S. Differentiate to thrive: lessons from the Legionella pneumophila life cycle. Mol. Microbiol. 53, 29-40 (2004).
  26. Hammer, B. K., Tateda, E. S., Swanson, M. S. A two-component regulator induces the transmission phenotype of stationary-phase Legionella pneumophila. Mol. Microbiol. 44, 107-118 (2002).
  27. Ninio, S., Zuckman-Cholon, D. M., Cambronne, E. D., Roy, C. R. The Legionella IcmS-IcmW protein complex is important for Dot/Icm-mediated protein translocation. Mol. Microbiol. 55, 912-926 (2005).
  28. Neild, A. L., Roy, C. R. Legionella reveal dendritic cell functions that facilitate selection of antigens for MHC class II presentation. Immunity. 18, 813-823 (2003).
  29. Molmeret, M., Horn, M., Wagner, M., Santic, M., Abu Kwaik, Y. Amoebae as training grounds for intracellular bacterial pathogens. Appl. Environ. Microbiol. 71, 10-1128 (2005).
  30. Huws, S. A., Smith, A. W., Enright, M. C., Wood, P. J., Brown, M. R. Amoebae promote persistence of epidemic strains of MRSA. Environ. Microbiol. 8, 1130-1133 (2006).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Legionella pneumophilaпраймирование простейшимиинфицирование клеток млекопитающихфлуоресцентная микроскопияпроточная цитометрияколониеобразующие единицыAcanthamoeba castellaniiэкспрессия GFPанализ факторов вирулентностивнутриклеточный рост
Послушный млекопитающих инфекции сотовый с Протозойные грунтовка бактерии
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.