Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Flybar: Администрирование Алкоголь в мух

10.5K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/50442

⸱

18 мая 2014 г.

 ,  ,  , 
1Department of Biological Science, Florida State University, 2Department of Biology and Biochemistry, Biology of Behavior Institute, University of Houston

В этой статье

Краткое содержание

Drosophila стала значительным модельной системы для рассечения клеточные и молекулярные основы поведенческих ответов на алкоголь. Здесь мы приводим протокол для сбора данных чувствительности алкоголя в циркадных контексте, который может быть с легкостью применить для других экспериментов и хорошо подходит для студентов исследований.

Аннотация

Плодовые мушки (дрозофилы) являемся известной модели как для исследования алкоголя и циркадных биологии. Недавно мы показали, что циркадные часы модулирует чувствительность алкоголя, но не формирование толерантности. Здесь мы описываем наш протокол подробно. Алкоголь вводят мух с использованием Flybar. В этой конфигурации, насыщенных паров алкоголя смешивается с увлажненным воздухом в заданных пропорциях, и вводили мух в одновременно четырех трубок. Мухи выращивают в стандартных условиях с целью минимизации Разница между повторами. Трехдневные старые мухи разных генотипов или лечения используются для экспериментов, предпочтительно путем сопоставления мух двух различных временных точках (например, КТ 5 и СТ 17) принятие возможно прямое сравнение. В ходе эксперимента мухи подвергаются в течение 1 часа в заранее определенном проценте парами спирта и количества мух, которые демонстрируют утрата установочного рефлекса (Lorr) или седAtion подсчитываются каждые 5 минут. Эти данные могут быть проанализированы с использованием трех различных статистических подходов. Во-первых, определить время, при которой 50% от мух потеряли свою рефлекса и использовать анализ дисперсии (ANOVA) для определения того, существуют ли значительные различия между моментами времени. Вторая заключается в определении процентных мух, которые показывают Lorr после определенного количества минут, а затем на основе анализа ANOVA. Последний метод является анализ временных рядов весь помощью многомерного статистического анализа. Протокол также может быть использован для не-циркадных экспериментов или сравнений между генотипами.

Введение

Дрозофилы продемонстрировать двухфазные поведенческие реакции на алкоголь 1, аналогичные реакции человека на этот препарат 2,3. После первого воздействия низких концентраций алкоголя, мухи обладают повышенной двигательной активности, заменены отсутствия координации движений, потеря постурального контроля и восстанавливающих рефлексов (утрата установочного рефлекса: Lorr) и седации (полное отсутствие двигательной активности в ответ на механическое раздражение) как воздействие алкоголя прогрессирует 4-9. Эндогенный циркадные часы является сильным модулятор чувствительности алкоголя и токсичности как это наблюдается у мышей 10,11, крыс 12, и человека 13. Последние достижения в области исследований Drosophila показали циркадные часы модулирует острый чувствительность алкоголя, но не алкоголя терпимости 1. Мощные генетические подходы, доступные в дрозофилы через мутантных исследований и трансгенных манипуляций пространственныхи выражение временная ген обеспечить систему, которая позволяет быстро достичь успехов в выявлять основополагающие клеточные и молекулярные механизмы для сложных форм поведения. Использование Drosophila в качестве инструмента следственной позволило по существу успехи в понимании нейробиологии спирта, которые могут быть быстро переведены в млекопитающих 14-16. Для того чтобы облегчить понимание молекулярных механизмов, посредством которых циркадные часы модулирует чувствительность алкоголя и равномерно измерить поведенческие реакции через циркадных моменты времени, протокол администрирования алкоголя, подходящий для использования в условиях слабого освещения красный свет не требуется. Для дрозофилы, алкоголь можно вводить через пищевых добавок для хронического воздействия или надежно через администрирование алкоголь в виде пара для остром воздействии. Здесь мы описываем протокол администрирования алкоголь подходящий для оценки циркадного модуляции Потеря-рефлекса (Lorr) 1, а такжеседативный.

Мухи, увлекаются 12 часов: 12 циклов час LD при постоянной температуре, а затем переведен в контролируемой светового режима в течение 2-5 дней в зависимости от экспериментальной вопрос. Мухи подвергаются паров этанола в устройстве, известном как Flybar. В этом устройстве контролируемые количества воздуха пропускается через воду и спирт; пары затем смешивают и направляют в флаконе жилья мухи. Каждый 5 мин мух забил на номер, который не удается отобразить восстанавливающее рефлексы или стали отключке. Lorr проценты для каждой временной точки рассчитаны и сопоставлены среди циркадных моменты времени или между штаммами мух. Простота и надежность доставки алкоголя с помощью доставки Flybar алкоголя в сочетании с поведенческими возможностями подведения итогов обеспечивает значительное преимущество для циркадных экспериментов, проведенных в условиях низкой освещенности.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

1. Ассамблея Flybar

Обоснование и обзор: Система предназначена для управления контролируемых процент паров алкоголя в мух. Примечание: На рисунке 1 представлен схематический обзор Flybar настройки, как описано ниже в три этапа (монтаж воздушного потока, настройка спирта и бутылки с водой, и монтаж флаконов наблюдения). Короче говоря, устойчивый поток воздуха разделяется на две фракции, которые пропускают через спирта и воды, соответственно, смешанных и вводимых 4 флаконов наблюдения.

  1. Ассамблея Airflow
    1. Подключите короткий кусок гибкой трубки силиконовой к либо здание воздух или аквариум аэратор для создания постоянного потока воздуха и раскол с помощью у-разъем. Подключение первое отделение на регулятор расхода воздуха, который регулирует общее количество воздуха через систему (обычно 1000 мл / мин в течение 4 ампулы наблюдений).
    2. Вставьте быстрый разъем в второй трубкитак что воздушный поток может быть прерван в начале эксперимента, не влияя на калиброванный поток воздуха. Добавить у-разъем и подключить каждый ветвления трубку к регулятору воздушного потока.
    3. Подключите трубку к регуляторам потока воздуха, а затем соединить два потока воздуха метров.
  2. Настройка из спирта и воды Бутылки
    1. Добавить гибкий шланг к выходу из воздушного потока метров и вставьте тонкий стеклянную трубку (разделы 1 мл стеклянных пипеток) с 90 ° изгибом в конце каждого отрезка трубы. Это будет служить воздушного потока на входе в воду и бутылок алкоголя.
    2. Поместите резиновые пробки с 2 отверстиями через них в бутылками с спирта и воды. Держите обе бутылки при постоянной температуре 2 ° C выше, чем температура окружающего воздуха с помощью водяной бани. В наших экспериментах на окружающую номер поддерживается на уровне 25 ° С, в то время как вода ванны при температуре 27 ° С.
    3. Вставьте прямой стеклянной пипетки для аИК впускной через резиновую пробку и расширить в жидкость до примерно 1 см от дна бутылки.
    4. Вставка раздел локоть стеклянной пипетки в остальные отверстия в резиновой пробкой до конца стакана не находится на одном уровне с нижней пробкой внутри бутылки. Вставьте этот выход воздуха в другой длины трубы.
    5. Воссоединиться воздушные потоки с помощью у-разъем и использовать другой длины силиконовой трубки, чтобы направить поток воздуха через пустой колбе перемешивания или бутылку с гнутых стеклянной пипетки, вставленных через двумя отверстиями резиновой пробкой. Используйте другой длины силиконовой трубки для выпускного смешанной воздушный поток.
  3. Ассамблея по наблюдению флакон
    1. Разделение выпускной воздушный поток выходящего из смесительной колбу 2-3X, чтобы получить 4 или 8 меньшие потоки воздуха таким образом, что несколько флаконов наблюдений могут быть использованы в каждом эксперименте. Подключите гибкий силиконовый шланги к флаконах наблюдения.
    2. Настройте observatiна флаконах с использованием пустые флаконы герметично закрывают резиновой пробкой, содержащей два отверстия, через которые стеклянные трубки обеспечивают вход и выход для паров спирта.
    3. Накройте конец первого стеклянной трубки с сеткой и держать сетки на месте с помощью небольшой кусочек гибкой пластиковой трубки. Вставка эту трубку через первое отверстие, пока она не простирается примерно половину длины флакона. При необходимости используйте тефлоновую ленту для получения плотного прилегания.
    4. Вставьте второй стеклянную трубку и с конца, покрытой сеткой, пока она не находится на одном уровне с внутреннего края резиновой пробкой.
    5. Поместите пробирки горизонтально на белом листе бумаги, чтобы максимизировать контраст с мухами в условиях плохого красный свет.
    6. Смешайте Соответствующие фракции из воздушного потока пропускают через спирта и воздушный поток пропускается через воду. Монитор давления воздуха непрерывно и вносить коррективы по мере необходимости для поддержания желаемого перемешивание воздушных потоков.
      Примечание: непрерывной работыиз нескольких анализов Fly Bar параллельно или даже одном анализе в маленькой комнате может привести к заметному накопления паров алкоголя. Чтобы избежать постоянного выпуск алкоголя паров, которые потенциально могут повлиять на исследователя в закрытом помещении, соответствующая система должна быть введена в действие, адекватно удаляет алкоголя паров, образующихся во время эксперимента. Для удаления паров алкоголя, подключить 6-12 дюймовый кусок трубы на второй стеклянной трубки, выступающей из каждого флакона, расслоение их и направить в воронку-вакуумной системы. Исследователи должны также гарантировать, что экспериментальная комната тестирования достаточной вентиляцией.

2. Подготовка экспериментальных животных

Обоснование и обзор: Правильное культуры и жилья мух уменьшит изменчивость в данных. Это достигается за счет стандартизации и минимизации стресса, испытываемого мух. По этой причине, не анестезия (СО 2 или альтернативы) не используется Duriнг любой из следующих шагов протокола. Кроме того, мухи должны быть соответствующей возрастной через экспериментов и временных точках, чтобы минимизировать изменчивость как стандарт для других поведенческих анализов в том числе обучения и памяти экспериментов 17.

Различные света: темные условия могут быть использованы для исследования функции циркадных часов в поведенческой реакции на этанол. Чтобы определить, суточный ритм существует, эксперименты могут быть выполнены под определенным LD цикла для измерения производительности на конкретном Zeitgeber Таймс (ZT). ZT 0 представляет рассвет и определяется как время огней на под циклов LD, а ZT 12 это время свет выключен с 12:12 час LD цикла. При постоянных условиях, Суточный время (КТ) измеряет время для животного в отсутствие экологических сигналов, т.е. в режиме свободной генерации времени, и связана с предыдущего цикла LD увлечения. В дикого типа Drosophila, КТ отражает предыдущий ZT в течение первых нескольких днейс в постоянных условиях, что и в режиме свободной генерации циркадного периода и ритмов являются ~ 24 часа в сутки. Для измерения циркадного модуляции и устранить острые световые эффекты на поведение, мухи увлекаются в свет: темные циклы, а затем переведен в постоянных условиях недостаточной освещенности (DD) до экспериментов. Суточный эксперименты проводятся на второй день DD для измерения производительности на конкретном циркадного Таймс (КТ).

У дрозофилы, непрерывный свет (LL) условия приводят к циркадного дисфункции с влажными или отменили молекулярных колебаний основных циркадных генов и нарушению поведенческих циркадных ритмов, о чем свидетельствует аритмии двигательной активности 18-21 и аритмии кратковременной памяти 17. Протокол оптимизирован для циркадных исследований и может быть упрощена для других экспериментов. Все циркадные эксперименты проводятся с использованием тусклый красный свет (окружающий накладные красный свет <1 лк на рабочей поверхности стола, небольшие красные огни, используемый в 12 сантиметрах от труб~ 1 люкс свет).

  1. Задние мухи при 25 ° С под 12:12 ч света: темные условия увлечения (LD).
  2. Сбор недавно eclosed мух в конце летнее-период на 1 день и хранить их в течение 24 часов в условиях LD в проведении флаконов, содержащих небольшое количество высокой агар пищи концентрации минимизации продовольственной липкости. Примечание: Для обеспечения здоровых, нормально развитые мухи собираются использовать только мух, собранных в течение первых дней после вылупления начинается в бутылке культуры.
  3. Сбор партий примерно 30 (25-35) летит с помощью аспиратора в день 2 к концу светового периода и переход к свежей холдинговых флаконах.
  4. Используйте сильный источник света, чтобы направить мух в дальний конец флакона. В пределах этого диапазона, точное количество мух в каждом флаконе не является критическим как поведенческие наблюдения приведены в процентах с общим числом подсчитанных мух в конце каждого эксперимента.
  5. Поддерживать мух в условиях DD при 25 ° С FOг два дня.
  6. В день эксперимента разместить все мух, размещенных в различных условиях или других, чем экспериментальный комнате поведение в комнате в течение не менее 1 часа до начала эксперимента инкубаторов. Акклиматизация снижает изменчивость в связи с изменением температуры или влажности.
  7. Провести наблюдения в шести точках раз в день (CT 1, 5, 9, 13, 17 и 21), чтобы проверить для циркадного модуляции поведения.
  8. Сравните различные моменты времени в пределах одного набора поведенческих экспериментов по повышению надежности опытно-конструкторских и минимизации изменчивости, специфичных для одного эксперимента. Например, наблюдения КТ 1 и КТ 13 можно получить одновременно, если две инкубаторы с противоположных светло-темных графиков используются для захвата.
    Примечание: Описанная выше процедура описывает получение экспериментальных животных для анализов, проведенных в циркадных условии постоянной темноте. Различные света: темные условия могут быть использованы для исследования работы часов,в поведенческих реакций на алкоголь. Чтобы определить, суточный ритм существует эксперименты могут быть выполнены под цикла LD для измерения производительности на конкретном Zeitgeber Таймс (ZT). Кроме того, протокол может быть использован с мухами, поднятых в условиях постоянных легких для тестирования эксперименты циркадного дисфункции. Для альтернативных протоколов, которые проверяют мух, размещенные в легких условиях, поведенческие анализы еще должны быть выполнены в условиях низкой освещенности. Мухи должны быть переданы в темноте в течение 1 ч до эксперимента, чтобы минимизировать вариабельность поведения из-за острых воздействия света на поведение.

3. Поведенческие Наблюдения

Обоснование и обзор: Следующий протокол администрация алкоголь оптимизирован для наблюдений при слабом состоянии красный свет. Две поведенческие меры Lorr и седации представляют две различные точки летучей опьянения. Lorr представляет собой позднюю точку опьянения, включающий потерю Oе двигатель и постуральный контроль, в то время как седации мер очень поздно конечная точка опьянения. Генотип или циркадный модуляции может повлиять на эти две меры разному; следовательно, один, возможно, пожелают рассмотреть и другое. Короче говоря, мухи загружаются в ампулах, количество мух отображения Lorr или седации забил каждые 5 мин при воздействии паров алкоголя, и общее количество мух подсчитанных в конце эксперимента.

  1. Перед началом эксперимента, запустить воздух через систему (воздух пропускается через воду и бутылок алкоголя) в течение не менее 10 мин и использовать это время для калибровки расхода воздуха.
  2. Отключите быстрое освобождение, чтобы остановить поток воздуха. Загрузите мух в пузырьках, и подключите воздушный поток и начать таймеры. Примечание: Если не реагировать мухи или мертвые мухи оставляют в холдинговых флаконах, это может свидетельствовать о стрессовых условиях. В общем, эти условия могут быть облегчены путем помещения меньше мух в проведении флаконах или уменьшения липкости пищи с использованием небольшоелы высокая концентрация агара во время приготовления пищи. Для получения оптимальных поведенческих анализов и минимальной изменчивости между экспериментов, мухи должны быть здоровыми до экспериментов.
  3. Для точного отсчета времени, использовать один таймер для отслеживания общего времени воздействия алкоголя и использовать второй счетчик обратного таймер, чтобы отметить каждые 5 мин.
  4. Поместите лист белой бумаги под флаконы для увеличения контрастности и летать видимость, особенно в условиях плохого красный свет.
  5. Проверьте расход воздуха регулярно во время эксперимента, чтобы поддерживать постоянный уровень. Как правило, один раз воздушные потоки стабилизировались, они остаются стабильными в течение продолжительности эксперимента.
  6. Подсчитайте количество мух, которые потеряли свои рефлекса раз в 5 мин в течение 1 часа. Поскольку чувствительность спирт варьируется между генотипами и генетических фонов, может быть желательно выполнить более частые оценки или провести эксперимент в течение более длительного периода времени.
  7. Поднимите флакон slightlу от поверхности, и направлять свет от красного света фонарика к работе за флакона. Держите ручные красные фонарики на расстоянии не менее 12 дюймов до экспериментальной флакон для поддержания уровня освещенности не более 1 люкса для всех экспериментов в условиях плохого красный свет.
  8. Измерьте уровень освещенности, используя экспонометр установить стандарты для всех экспериментов.
  9. Определить количество мух, которые потеряли свои рефлекса, применяя твердую кран во флакон и посчитайте, сколько мух не могут наделить себя в течение примерно 4 сек. Мухи, которые отображают Lorr еще может перемещать свои ноги и крылья, но не может превратить себя в вертикальном положении.
  10. В конце сессии, подсчитать общее количество мух в каждом флаконе.
    Примечание: Иногда, один муха может быть зажат между пробкой и стороны при погрузке улетает в экспериментальных флаконов. Как это делается в темноте, он не может быть легко заметил поэтому необходимо подсчитать общее онемениеэ мух в конце эксперимента, чтобы правильно рассчитать проценты.

Кроме того, эта процедура также может быть использован для измерения торможение мух, который представляет собой различные поведенческие конечную точку. В то время как в отключке мухи потеряли свою правую рефлекс, седативный требуется большее воздействие алкоголя. Поведенчески, седативный эффект может характеризоваться полным отсутствием видимой двигательной активности с мухами оставаясь неподвижным во флаконе следующее аа фирмы крана на флаконе. Для седации, подсчитать количество мух, которые остаются неподвижными с не нога не размахивая следующую поставку твердой крана флакона. Кроме того, флакон может быть развернута из стороны в сторону, чтобы определить, является ли отдельные мухи-прежнему сохраняют свою захвата рефлекс.

4. Анализ данных

  1. Определить процент Lorr в каждый момент времени на основании оцененной общего количества мух в каждом флаконе.
  2. Оценить различия между циркадных моменты времени или штаммов по calculatiнг 50% Lorr для каждого образца, который находится в пределах линейной части кривой сигмовидной (см. рисунок 2 ниже).
  3. Альтернативные статистика:
    1. Если сравнение между генотипами планируется, желательно проанализировать весь ход времени с помощью повторных измерений ANOVAand чтобы определить диапазон временных точках, что различия существенны с пост-специальных тестов (рис. 3). Для этих испытаний, мы предпочитаем использовать значение 0,001. Это позволяет различия в отдельных выдержек быть оценены, а также различий между генотипами в наклона кривой.
    2. Различия в чувствительности может быть определена для конкретного времени выдержки спирта для конкретной реакции, таких как седативный эффект от линейной части графика (фиг. 4).
    3. Различия между штаммами или точек циркадный времени можно оценить, используя стандартные F-статистики и пост-специальные тесты.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Суточный Модуляция алкоголя Чувствительность помощью 50% Lorr в качестве маркера.

Представитель пример, показывающий, циркадный модуляции чувствительности алкоголя в течение дня представлена ​​на рисунке 2. Lorr измеряли в шести точках времени во время 2-й день DD в кантоне-S и 50% Lorr определяли для каждой временной точке. Анализ показал значительное влияние времени суток (ANOVA: F 5,45 = 7,39, р <0,001, N = 6-10 за время точка). ЛСД крите...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Расходы, связанные с злоупотреблением алкоголем и алкоголизма для общества огромен, как с точки зрения человека 29 и экономических издержек 30,31. Дрозофилы как модель предлагает быстрый и универсальную систему для быстрого изучения поведенческих реакций большого количества людей, и как таковой широко используется как для алкоголя 5,7,32-34 и циркадных исследований 35-37.

Здесь мы описали простой протокол для регулируемого введения паров а...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы заявляют, что они не имеют конкурирующие финансовые интересы.

Благодарности

Финансирование для этого исследования была предоставлена ​​Программы в неврологии премии от штата Флорида Университетского колледжа медицины и поддержке Департамента биологических наук в странах бывшего Советского Союза. Дополнительное финансирование было предоставлено за счет гранта-в-помощь от фонда исследований напитка алкоголя производителя.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Алкоголь 190 proofРазличные
аэраторыМестный зоомагазинМы используем Whisper 60
Силиконовая трубка 1/8"ВВР408060-0030
120° Y-образный соединительVWR82017-256
Быстроразъемные соединенияVWR46600-048
Пластиковые трубчатые зажимыИзделия Bell-art132250000Либо это, либо следующий
Миниатюрный регулятор воздухаMcMaster-Carr8727K11Либо этот, либо предыдущий
Миниатюрный монтажный кронштейн регулятора воздухаMcMaster-Carr9891K66
Расходомер Gilmont типоразмера 12VWR29895-242
Инструментзажимов McMaster-Carr1722A43Для удержания расходомеров
VWR89092-722
Резиновая пробка с двумя отверстиямиVWR59585-186Подходит для флаконов
5 мм Стеклянные трубки Pyrex TrikineticsPGT5x65Лучше всего подходит для предыдущей пробки
Тефлоновая лентаХозяйственный магазинДля достижения плотного прилегания в пробках при необходимости
Резиновая пробка с двумя отверстиямиVWR59582-122Подходит для наших бутылок
Одноразовые стеклянные трубкиVWR53283-768Нарезать по длине и согнуть путем нагревания
Очень тонкая нейлоновая сеткаVWRРазличные
15-ваттные лампочкиХозяйственный магазинВерхний красный свет
Фотографические красные безопасные светофильтрыВерхний красный свет
Мини фонари с красными фильтрамиMag-light

Ссылки

  1. Linde, K., Lyons, L. C. Circadian modulation of acute alcohol sensitivity but not acute tolerance in Drosophila. Chronobiol. Int. 28, 397-406 (2011).
  2. Kaun, K. R., Azanchi, R., Maung, Z., Hirsh, J., Heberlein, U. A Drosophila model for alcohol reward. Nat Neurosci. 14, 612-619 (2011).
  3. Shohat-Ophir, G., Kaun, K. R., Azanchi, R., Mohammed, H., Heberlein, U. Sexual deprivation increases ethanol intake in Drosophila. Science. 335, 1351-1355 (2012).
  4. Bellen, H. J. The fruit fly: A model organism to study the genetics of alcohol abuse and addiction. Cell. 93, 909-912 (1998).
  5. Guarnieri, D. J., Heberlein, U. Drosophila melanogaster, a genetic model system for alcohol research. International Review of Neurobiology. 54, 203-232 (2003).
  6. Scholz, H. Intoxicated fly brains: Neurons mediating ethanol-induced behaviors. J. Neurogenet. 23, 111-119 (2009).
  7. Wolf, F. W., Rodan, A. R., Tsai, L. T. Y., Heberlein, U. High-resolution analysis of ethanol-induced locomotor stimulation in Drosophila. J. Neurosci. 22, 11035-11044 (2002).
  8. Schumann, G., Spanagel, R., Mann, K. Candidate genes for alcohol dependence: Animal studies. Alcoholism: Clinical and Experimental Research. 27, 880-888 (2003).
  9. Singh, C. M., Heberlein, U. Genetic control of acute ethanol-induced behaviors in Drosophila. Alcohol Clin Exp Res. 24, 1127-1136 (2000).
  10. Perreau-Lenz, S., Zghoul, T., de Fonseca, F. R., Spanagel, R., Bilbao, A. Circadian regulation of central ethanol sensitivity by the mPer2 gene. Addiction Biology. 14, 253-259 (2009).
  11. Brager, A. J., Prosser, R. A., Glass, J. D. Circadian and acamprosate modulation of elevated ethanol drinking in mPer2 clock gene mutant mice. Chronobiol. Int. 28, 664-672 (2011).
  12. Sinclair, J. D., Geller, I. Ethanol consumption by rats under different lighting conditions. Science. 175, 1143-1144 (1972).
  13. Danel, T., Jeanson, R., Touitou, Y. Temporal pattern in consumption of the first drink of the day in alcohol-dependent persons. Chronobiol. Int. 20, 1093-1102 (2003).
  14. Kapfhamer, D., et al. Taok2 controls behavioral response to ethanol in mice. Genes, brain, and behavior. 12 (1), 87-97 (2012).
  15. Lasek, A. W., et al. An evolutionary conserved role for anaplastic lymphoma kinase in behavioral responses to ethanol. PLoS One. 6, 226-236 (2011).
  16. Lasek, A. W., Giorgetti, F., Berger, K. H., Tayor, S., Heberlein, U. Lmo genes regulate behavioral responses to ethanol in Drosophila melanogaster and the mouse. Alcohol Clin Exp Res. 35, 1600-1606 (2011).
  17. Lyons, L. C., Roman, G. Circadian modulation of short-term memory in Drosophila. Learning & Memory. 16, 19-27 (2009).
  18. Hamblen-Coyle, M. J., Wheeler, D. A., Rutila, J. E., Rosbash, M., Hall, J. C. Behavior of period-altered circadian-rhythm mutants of Drosophila in ligh-dark cycles (Diptera Drosophilidae). J. Insect Behav. 5, 417-446 (1992).
  19. Konopka, R. J., Pittendrigh, C., Orr, D. Reciprocal behavior associated with altered homeostasis and photosensitivity of Drosophila clock mutants. J. Neurogenet. 6, 1-10 (1989).
  20. Power, J. M., Ringo, J. M., Dowse, H. B. The effects of period mutations and light on the activity rhythms of Drosophila melanogaster. Journal of Biological Rhythms. 10, 267-280 (1995).
  21. Yoshii, T., et al. Temperature cycles drive Drosophila circadian oscillation in constant light that otherwise induces behavioural arrhythmicity. Eur. J. Neurosci. 22, 1176-1184 (2005).
  22. Berger, K. H., Heberlein, U., Moore, M. S. Rapid and chronic: two distinct forms of ethanol tolerance in Drosophila. Alcohol Clin Exp Res. 28, 1469-1480 (2004).
  23. Scholz, H., Ramond, J., Singh, C. M., Heberlein, U. Functional ethanol tolerance in Drosophila. Neuron. 28, 261-271 (2000).
  24. Kong, E. C., et al. Ethanol-regulated genes that contribute to ethanol sensitivity and rapid tolerance in Drosophila. Alcohol Clin Exp Res. 34, 302-316 (2010).
  25. Borycz, J., Borycz, J., Kubow, A., Lloyd, V., Meinertzhagen, I. Drosophila ABC transporter mutants white, brown and scarlet have altered contents and distribution of biogenic amines in the brain. J. Exp. Biol. 211, 3454-3466 (2008).
  26. Sitaraman, D., et al. Serotonin is necessary for place memory in Drosophila. Proceedings of the National Academy of Sciences. 105, 5579-5584 (2008).
  27. Bainton, R. J., et al. Dopamine modulates acute responses to cocaine, nicotine and ethanol in Drosophila. Current Biology. 10, 187-194 (2000).
  28. Kong, E. C., et al. A pair of dopamine neurons target the D1-like dopamine receptor DopR in the central complex to promote ethanol-stimulated locomotion in Drosophila. Plos One. 5, (2010).
  29. Xu, J., Kochanek, K. D., Murphy, S. L., Tejada-Vera, B. Deaths: Final data for 2007. , U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention: National Center for Health Statistics. (2010).
  30. The National Center on Addiction and Substance Abuse. Shoveling up II: The impact of substance abuse on federal, state and local budgets. , Columbia University. (2009).
  31. NIAAA, Estimated economic costs of alcohol abuse in the United States. , Available from: www.medtext.com/hdcn.htm (1992).
  32. Devineni, A. V., Heberlein, U. Preferential ethanol consumption in Drosophila models features of addiction. Current Biology. 19, 2126-2132 (2009).
  33. Devineni, A. V., Heberlein, U. Addiction-like behavior in Drosophila. Communicative & Integrative Biology. 3, 357-359 (2010).
  34. Rodan, A. R., Rothenfluh, A. The genetics of behavioral alcohol responses in Drosophila. International Review of Neurobiology. 91, 25-51 (2010).
  35. Boothroyd, C. E., Young, M. W. Molecular and Biophysical Mechanisms of Arousal, Alertness, and Attention. Annals of the New York Academy of Sciences. Pfaff, D. W., Kieffer, B. 1129, Blackwell Publishing. 350-357 (2008).
  36. Nitabach, M. N., Taghert, P. H. Organization of the Drosophila circadian control circuit. Current Biology. 18, 84-93 (2008).
  37. Sheeba, V. The Drosophila melanogaster circadian pacemaker circuit. J. Genet. 87, 485-493 (2008).
  38. Cohan, F. M., Graf, J. -D. Latitudinal cline in Drosophila melanogaster for knockdown resistance to ethanol fumes and for rates of response to selection for further resistance. Evolution. , 278-293 (1985).
  39. Moore, M. S., et al. Ethanol intoxication in Drosophila: Genetic and pharmacological evidence for regulation by the cAMP signaling pathway. Cell. 93, 997-1007 (1998).
  40. Berger, K. H., et al. Ethanol sensitivity and tolerance in long-term memory mutants of Drosophila melanogaster. Alcohol Clin Exp Res. 32, 895-908 (2008).
  41. Pohl, J. B., et al. Circadian Genes Differentially Affect Tolerance to Ethanol. in Drosophila. Alcoholism: Clinical and Experimental Research. , (2013).
  42. Bhandari, P., Kendler, K. S., Bettinger, J. C., Davies, A. G., Grotewiel, M. An assay for evoked locomotor behavior in Drosophila reveals a role for integrins in ethanol sensitivity and rapid ethanol tolerance. Alcoholism: Clinical and Experimental Research. 33, 1794-1805 (2009).
  43. Rothenfluh, A., et al. Distinct behavioral responses to ethanol are regulated by alternate RhoGAP18B isoforms. Cell. 127, (1016).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Drosophila melanogasterFlyBar
Flybar: Администрирование Алкоголь в мух
Свяжитесь с нами
Рекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

Авторские права © 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.