Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

25.6K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/50522

⸱

17 июля 2013 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Orthopaedic Surgery and Traumatology, Ghent University Hospital, 2Department of Radiation Oncology and Experimental Cancer Research, Ghent University, 3Department of Virology, Parasitology, and Immunology, Ghent University, 4Pathlicon

В этой статье

Краткое содержание

В ово Хориоаллантоисную мембраны (CAM) прививается со свежими саркомы полученных опухолевых тканей, их одноклеточных суспензий, и постоянные и переходные флуоресцентно меченых линий установлено саркома. Модель используется для изучения трансплантат (жизнеспособность, Ki67 индекс пролиферации, некроза, инфильтрация) и хост (инфильтрация фибробластов, сосудистый врастание) поведение.

Аннотация

Саркома очень редкая болезнь, которая неоднородна по своей природе, все тормозящие развитие новых методов лечения. У пациентов с саркомой являются идеальными кандидатами для персонализированной медицины после стратификации, объясняя текущую заинтересованность в развитии воспроизводимым и недорогие модели ксенотрансплантации для этого заболевания. Мембрана хорионалантоисной является естественным иммунодефицитных хозяина способны поддерживать привитых тканей и клеток без видоспецифической ограничений. Кроме того, он легко доступен, манипулировать и визуализируют с помощью оптических и флуоресценции стереомикроскопия. Гистологии в дальнейшем позволяет детальный анализ гетеротипические клеточных взаимодействий.

Этот протокол подробно описывает в ово прививки хориоаллантоисную мембраны со свежими саркомы полученных опухолевых тканей, их одноклеточных суспензий, и постоянные и переходные флуоресцентно меченых создана саркомы клеточных линий (Saos-2 и SW1353). Крыса куриных выживанияES являются до 75%. Модель используется для изучения трансплантат (жизнеспособность, Ki67 индекс пролиферации, некроза, инфильтрация) и хост (инфильтрация фибробластов, сосудистый врастание) поведение. Для локализованных прививки одноклеточных суспензий, ECM гель обеспечивает значительные преимущества по сравнению с инертными материалами сдерживания. Ki67 индекс пролиферации связано с расстоянием клеток от поверхности САМ и длительность применения на САМ, последнее определение временных рамок для того терапевтических продуктов.

Введение

Саркома редкая опухоль соединительной ткани с высокой смертностью из-за терапии 1,2 сопротивление. Прогресс в выживаемости пациентов затрудняется их низкой ежегодной заболеваемости, их широкое разнообразие, а также тот факт, что клетки саркомы, как сообщается, трудно культуры в пробирке 3,4.

Использование культивируемых клеток на доклинической оценки терапии показали, что новый, по-видимому активных молекул в пробирке не всегда отражают результаты в клинических условиях. Кроме того, геном аберраций, выявленных массивов экспрессии генов не всегда коррелирует с опухолью характеристик поведения в отдельных пациента 5-7. Для того, чтобы попытаться решить эти проблемы, персонализированная медицина значение приобретает, которое отражается в увеличении поиск ксенотрансплантатом 8-12 моделей.

В анализе естественных условиях имеет то преимущество, отражающие сложное взаимодействие между сANCER клетками и окружающей средой ткани хозяина в солидных опухолях, необходимые для распространения рака и вторжения 13. В настоящее время изучаются использование Хорье-аллантоисных Мембрана анализа (CAM-анализ), как воспроизводимые модели ксенотрансплантата саркомы 14,15. Этот тест широко используется для изучения опухолевого ангиогенеза 16,17. В литературе, однако, мы нашли различные протоколы для этого анализа, в то время как другие исследования наблюдалось заметное различие в росте или ангиогенез в соответствии с различными протоколами 18,19.

В этой статье мы исследуем влияние изменения условий CAM-анализа на поведение клеток опухоли использованием трансплантаты, полученные из опухоли одноклеточных суспензий и сложившейся культуры клеток саркомы.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

См. рисунок 1 для обзора

Опухоль материала

1. Получение и подготовка образцов опухолей

Для использования материала пациента, утверждение этического комитета необходимо, и осознанное согласие должно быть получено от пациента.

  1. Урожай репрезентативном материале (минимум 1 см 3) во время вмешательства, либо биопсии или резекции саркомы. Надлежащее место биопсии определяется с помощью динамической контрастности МРТ.
  2. Поместите материал непосредственно в стерильную пробирку, содержащую DMEM дополнена 1000 U пенициллина и 1 мг / мл стрептомицина.
  3. Транспорт флакона немедленно (30 - 90 мин) в лабораторию.

Все Следующие процедуры выполняются под ламинарного потока.

  1. Залить содержимое флакона в стерильную чашку Петри.
  2. Поместите образца опухоли на мелкие части максимально 1 м.м 3 с использованием стерильным скальпелем. Удалить все кальцинированные частей, поскольку они имеют тенденцию ухудшать дальнейшей обработки ткани.
  3. Случайно занять 10 опухоли трансплантатов для применения на CAM.

2. Подготовка из опухоли одноклеточных суспензий

Приблизительная продолжительность: 3 часа

  1. Взвесить оставшиеся ткани образца.
  2. Поместите 2 - 4 г ткани в диссоциатора трубки, более чем одна трубка может потребоваться переваривать все оставшиеся ткани опухоли.
  3. Для переваривания 2 - 4 г ткани, добавляют 2,5 мл коллагеназы два решения (500 Ед / мл RPMI 1640) и 2,5 мл ДНКазы раствор (22 KU / мл RPMI 1640).
  4. Обработайте ткань в соответствии с протоколом h_tumor диссоциаторе. Это включает в себя два цикла инкубации при 37 ° C в CO 2-инкубаторе при трубки осторожно встряхивали в течение 30 мин.
  5. Фильтр оставшейся суспензии через 150 мкм ячейки фильтра.
  6. Центрифуга лизата на 1000 оборотов в минуту в течение 5 мильN.
  7. Удалить супернатант.
  8. Ресуспендируют осадок в 10 мл буфера для лизиса эритроцитов (УЛК), позволяющие 10 мин инкубации с регулярными подвески.

Примечание: буфера для лизиса эритроцитов изготавливают следующим образом: Добавить 0,037 г ЭДТК, 0,99 г K 2 HPO 4, 8,29 г NH 4 Cl до 1000 мл вода, использовать 10 N NaOH для доведения рН до 7,3, фильтр под давлением через 0,22 мкм процедить. Хранить при температуре 4 ° C.

  1. Добавить 25 мл культуральной среды (DMEM с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки, 100 ед / мл пенициллина и 100 мкг / мл стрептомицина), чтобы остановить реакцию.
  2. Центрифуга суспензии при 1000 оборотах в минуту в течение 5 мин. Цвет гранул должен быть белым теперь.
  3. Удалить супернатант.
  4. Добавляют 5 мл среды к осадку. Суспензию фильтруют через сито ячейка 70 мкм.
  5. Подсчет количества живых клеток / мл с помощью автоматического счетчика клеток.

3. CANCER клеточных линий

SAOS2 остеосаркома клетки (АТСС номер: HTB-85) с улучшенными зеленый флуоресцентный белок подвергали электропорации по peGFP-C1 вектора с использованием клеточной линии Nucleofector Kit V в соответствии с протоколом производителя. Чтобы установить стабильные клеточные линии, трансфицированные клетки отбирали в G418 (1 мг / мл) в течение 4 недель в соответствии с ранее установленным протоколом 20. Кроме того сортировки была выполнена с активацией флуоресценции сортировки клеток (FACS) в соответствии с инструкциями производителя.

Клетки SW1353 хондросаркомой линии клеток (АТСС номер: HTB-94), либо свежеприготовленным опухоли одноклеточных суспензий помечены использованием красного флуоресцентного липофильные мембраны пятно.

  1. Удалить клеток от культуральной колбе в классическом способом с использованием трипсина (0,5% вес / объем) этилендиаминтетрауксусной кислоты (EDTA, 0,2% вес / объем) раствора.
  2. Центрифуга клеточной суспензии в течение 5 мин при 1000 оборотах в минуту.
  3. Снимите supernatant.
  4. Добавить 1 мл бессывороточной среды и 5 мкл DiI (Vybrant Красный) / 10 6 клеток.
  5. Оберните флакона в алюминиевую фольгу и положить его в CO 2 инкубаторе в течение 10 мин при 37 ° С.
  6. Центрифуга снова в течение 5 мин при 1000 оборотах в минуту и ​​удалить супернатант.

Хориоаллантоисную анализа мембраны

1. Инкубация яиц

  1. Оплодотворенные яйца из местных коммерческих инкубатора гарантирует 95% оплодотворения яиц требуется.
  2. Оплодотворенные яйца можно хранить при комнатной температуре до 10 дней.

Примечание: перед началом инкубации, грязи, перья и экскременты тщательно удалены из скорлупы механически путем протирки сухой с бумажными полотенцами, которые имеют грубую а не мягкую структуру поверхности. Очистка яйца с 70% денатурированный этанол или любой другой реагент очистки значительно снижает выживаемость эмбрионов кур.

  1. Положите яйца в incubАТОР, с одной стороны, маркировка верхней поверхности. День, в который яйца помещаются в инкубатор назначенный день 0 эмбрионального развития.
  2. Установка температуры инкубации при температуре 37,8 ° С и влажности 47%. Убедитесь, что опция автоматического вращения выключен.

2. Открывающиеся части яйца

Продолжительность: ± 60 мин для 25 яиц

На 3-й день развития, яйца открыт под ламинарный воздушный поток. Открытие яйца на дальнейшее развитие результатов этапа к повреждению CAM, как мембрана имеет тенденцию прилипать к оболочке. Инфракрасная лампа используется для держать яйца теплой во время процедуры. Для улучшения бесплодие, мы рекомендуем использовать перчатки руки.

  1. Положите яйцо в Eggcup, с отмеченными стороной вверх.
  2. Нижний уровень CAM путем удаления двух мл белка через 18 G иглу на конце яйца. Если игла тупая после перфорации несколькояичная скорлупа, замените иглу. Если нет, слишком много сил должно быть оказано, что приводит к повреждению яичный желток или разрушения оболочки. Иногда игла заблокирован chalazae, один из 2 ленту по спирали приостановлении желток в белке. Эту проблему можно решить, осторожно нажимая на поршень вниз, пока блок не будет устранена. Если яичный желток всасывается в шприц, замены иглы, а также шприца. Иногда эмбрион умирает после этого события. Если недостаточное количество белка удаляется, CAM будет повреждена, когда оболочка удалена.
  3. Применение полупроницаемой клейкой пленки в отмеченных верхней стороне корпуса для того, чтобы предотвратить разбрызгивание частицы оболочки на САМ во время резки окна.
  4. Сделать впускных отверстий с небольшим шило на поверхности яйца.
  5. Вырезать окно 1 см 2 в корпусе, с использованием пары стерильных острыми хирургическими ножницами.
  6. Пульсирующее сердце эмбриона и прилегающих сосудов может наблюдаться при йэлектронной поверхность яичным желтком. Снимите неоплодотворенных яиц или мертвых эмбрионов. Прерванный аспект кровеносных сосудов характеризует мертвых эмбрионов.
  7. Закройте окно с полупроницаемую клейкая пленка. Это не обязательно, чтобы покрыть места прокола, если цистерна не дал трещину во время введения иглы.

3. Прививка процедуры

Продолжительность: ± 1 час на клеточной линии

На куриного эмбрионального развития 9-й день, яйца засевают под ламинарный воздушный поток.

Оценка раковых клеток распространяется по всей CAM требует локализации клеток в ограниченной поверхности в процессе модифицирования. Матригель является внеклеточным матриксом (ECM) гель с Engelbreth-Холма-рой мышиной саркомы часто используется в экспериментальных условиях культивирования клеток. Это жидкость при охлаждении, но будет проходить термически активированного полимеризации при доведен до 20 - 40 ° C, образуя устойчивый гель. Во времяЭксперименты, Матригель хранится в коробке, содержащей таяния льда.

Примечание: Мы настаиваем на том, чтобы не использовать перфорированные покровные. Мы наблюдали прикрепления и роста трансплантированных клеток рака на пластиковый диск таким образом смещение потенциала роста клеток на самой мембраны.

  1. Ресуспендируют осадок клеток в охлажденный гель ECM при концентрации 10 6 клеток/100 мкл гель ECM. Имейте это решение на тающем льду.
  2. Акцизной части полупроницаемую мембрану с парой стерильные хирургические под ламинарным потоком воздуха. Если клей пленка удаляется полностью, это приведет к большей доли эмбриональной смерти из-за загрязнения.
  3. Прикоснитесь к CAM прямо под окна оболочки слегка стерильной стеклянной палочкой, чтобы удалить слой эпителиальных клеток. Прикосновение к CAM стерильную стеклянную палочку, оказывается, менее травматично, чем с помощью скальпеля № 11, которая требует больше удобство и опыта. Мелкие кровоизлияния могут произойти.
  4. dding опухоли материала.
  5. Для опухолевых трансплантатов: осторожно нижнюю часть ткани на САМ с парой стерильным пинцетом, не сжимая его.
  6. Для процедуры гель ECM: Добавить 4x 25 мкл клеточной-ECM суспензия геля на CAM, в верхней части друг с другом, позволяя гель ECM для полимеризации между приложениями. Таким образом, прилипшие налета содержащие раковые клетки создан.
  7. Закройте окно оболочки снова полупроницаемую клейкая пленка.

4. Изображениями и уборки CAM

Продолжительность: 2 часа на 25 яиц

На куриного эмбрионального развития 16-й день САМ собирают. Работая под ламинарным потоком воздуха не требуется.

  1. Увеличить окна с парой хирургическими ножницами. Убедитесь в том, чтобы не порезать слишком низко, иначе CAM будет повреждена, в результате чего кровотечение из поврежденных кровеносных.
  2. Добавить 300 - 500 мкл PBS D с помощью пипетки на секту CAMион содержащий привитый материал. Если ни флуоресцентных зондов не используются, буферном растворе формальдегида могут быть использованы как это делает мембраны жесткой, что облегчает резку мембраны.
  3. Сделайте фотографию CAM в яйце через стерео флуоресцентный микроскоп, оснащенный цифровой камерой цвета, используя как GFP или DSR фильтр, а фильтр. Для опухолевых трансплантатов, все фотографии сделаны без фильтров. Освещение сверху светодиод настоятельно рекомендуется во время фотографирования (рис. 2).
  4. Запись опухолевых клеток миграции меченых клеток. Границы опухоли могут быть нерегулярными и изношен. Переменная клетки могут присутствовать вблизи границы опухоли. В некоторых образцах, рядами опухолевых клеток может наблюдаться (рис. 3).
  5. Cut мембраны с парой стерильными ножницами на границе лежащей против оболочки.
  6. Поместите собраны CAM в стерильную чашку Петри с PBS, D или буфер дляформальдегид.
  7. Сделать фотографией и верхнюю сторону и нижнюю сторону CAM, так и без фильтра.
  8. Поместите мембраны в маркированный контейнер с буферном растворе формальдегида в течение по крайней мере 72 часов.
  9. Вставить камеры в парафин и подготовить их для гистологического исследования. Позаботьтесь, чтобы вырезать трансплантаты опухоли в центре узелков, убедившись, что поверхность разреза параллельна нижней части кассеты. Если нет, то взаимодействие между CAM и опухоль трансплантат не будут видны. То же самое относится и к стратегии бляшек ECM гель: поверхности, обращенной к режущим лезвием должна быть перпендикулярна бляшки.

5. Гистологическое исследование

Гематоксилин-эозином и Ki-67 иммуногистохимию проводились для дальнейшего уточнения, если это необходимо. Иммуногистохимия проводили на фиксированных формалином парафин срезах тканей 3,5 мкм в толщину, с использованием автоматического слайд ситечко в соответствиис инструкциями производителя. Мышь первичный моноклональные антитела к Ki-67 (клон MIB-1, разбавление 1/100) был использован. Тепло-индуцированный Эпитоп поиск проводился с помощью мобильного кондиционирования 1 и визуализация была достигнута с Универсальный комплект обнаружения DAB, в соответствии с инструкциями производителя. Обезвоживание в срезах тканей проводили с использованием автоматизированной Coverslipper.

Для SAOS2 и SW1353 клеточных линий, количество Ki67-положительных и Ki67-отрицательные клетки nuclei/100 мкм 2 подсчитывали в три зоны: один близко к границе CAM, одна закрыть поверхность и один в центре доска ECM геля. Эту процедуру повторяли 6 раз для каждого Ki-67 окрашенный препарат. Индекс пролиферации определяли для каждого слайда путем деления количества Ki67-позитивных клеток на общее число подсчитанных клеток.

Некроза определяется потерей тонкой дисперсии хроматина в ядре клетки, сопровождается Фадинг различных полей ячейки. Для ксенотрансплантатов, некроз оценивается как полные, частичные (часто на поверхности), или отсутствует. Проникновение опухолевых клеток в CAM определяется наблюдение опухолевых клеток в мезодерме CAM, и оценивается как присутствовать или отсутствовать.

Три пункта забил за хозяином поведение. Фибробластов инфильтрации определяется как удлиненные клетки оставляя CAM и вторжение опухолевых трансплантата / доска, и забил как присутствовать или отсутствовать. Сосудистые врастание может наблюдаться как врастание пролиферирующих цыпленок сосудов, характеризуется наличием ядерных эритроцитов цыпленка.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Оценка CAM

Опухоль трансплантатов стать приверженцем CAM (рис. 2А). Одноклеточных суспензий от пациента материала часто отображают сушеные, слегка приподнятые бляшки (рис. 2D). После удаления CAM, отмечены складок мембраны происходит (рис. 2E и 2F).

Для коммерческих клеточных линий налета становится более непрозрачной во времени, что указывает на пролиферацию клеток. Различные клеточные линии в ECM ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Время посева и сбора урожая

Выбор времени в день прививки проводили с использованием SAOS2 в ECM гель (36 CAM) и варьировались от день эмбрионального развития 5 и 10.

До дня инкубационного 9, кулачок не был последовательно умещаются гель ECM мы применили. В период сбора урожая, опухолевые клетки иногда должны быть извлечены из глубоких CAM, и некоторые образцы ECM гель лежали свободно в белке или на САМ. В те дни, 5 и 6, было трудно, чтобы не подвергать опухолевых к...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы не имеют ничего раскрывать.

Благодарности

Клетки из клеточной линии SW1353 хондросаркомой были любезно предоставлены проф PCW Hogendoorn и профессор доктор Дж. Бови Лейденского университета, Нидерланды. Мы благодарим J. Mestach и Г. Wagemans за отличную техническую помощь и Г. Де Брюйне для профессионального рисунок обзор нашего протокола.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Набор нуклеофекторов клеточной линии VAmaxaVCA-1003
коллагеназа 2 раствор (500 Ед/мл RPMI 1640)Sigma AldrichC6885
DMEMInvitrogen41965-039
DMSOSigmaD8418
раствор DnaseSigma AldrichDN25
G418Invitrogen11811031
MatrigelSigma-AldrichE1270
мышиное первичное моноклональное антитело Ki67Dako DenmarkMIB-1
параформальдегидFlukaD76240
PBSInvitrogen20012019
PBSDInvitrogen14040083
вектор peGFP-C1 Clontech632470
Пенициллин/стрептомицинInvitrogen15140163
RPMIInvitrogen22409-015
Раствор трипсина-ЭДТАInvitrogen25300054
Vybrant Cell-labeling DiILifetechnologies22885
Автоматизированный счетчик клеток CountessInvitrogenC10227
цифровая цветная камераLeicaDFC 340 FX
Цифровой инкубатор для яицAuto Elex CoR-COM 50
FACSBD BiosciencesFACSAriaIII
Gentlemacs C-tubeMiltenyi Biotech130-093-237
Gentlemacs DissociatorMiltenyi Biotech130-093-235
Gentlemacs Dissociator Руководство пользователя содержащий h_tumor протоколMiltenyi Biotech
[header]
полупроницаемая клейкая пленка (Suprasorb F)Lohmann& Rauscher20468
стереофлуоресцентный микроскопLeicaM205 FA Tissue-Tek
Film автоматизированный покровный тапельSakura6400
ultraView Универсальный набор для обнаружения DABVentana Medical Systems Inc760-500
Ventana Автоматизированный краситель предметного стеклаVentana Medical SystemsBenchmark XT

Ссылки

  1. Mankin, H. J., Hornicek, F. I., Rosenberg, A. E., Harmon, D. C., Gebhardt, M. C. Survival data for 648 patients with osteosarcoma treated at one institution. Clinical Orthopaedics and Related Research. 429, 286-291 (2004).
  2. Hoffmann, J., Schmidt-Peter, P., et al. Anticancer drug sensitivity and expression of multidrug resistance markers in early passage human sarcomas. Clinical Cancer Research. 5, 2198-2204 (1999).
  3. Greenlee, R. T., Hill-Harmon, M. B., Murray, T., Thun, M. Cancer statistics, 2001. CA A Cancer Journal for Clinicians. 51, 15-36 (2001).
  4. Gil-Benso, R., Lopez-Gines, C., et al. Establishment and characterisation of a continuous human chondrosarcoma cell line, ch-2879: Comparative histologic and genetic studies with its tumor of origin. Laboratory Investigations. 83, 877-887 (2003).
  5. Taylor, B. S., Barretina, J., et al. Advances in sarcoma genomics and new therpeutic targets. Nature Reviews Cancer. 11, 541-557 (2011).
  6. Skubitz, K. M., D'Adamo, D. R. Sarcoma. Mayo Clinic Proceedings. 82, 1409-1432 (2007).
  7. Nielsen, T. O., West, R. B. Translating gene expression into clinical cara: sarcomas as a paradigm. Journal of Clinical Oncology. 28, 1796-1805 (2010).
  8. Vaira, V., Fedele, G., Pyne, S. Preclinical model of organotypic culture for pharmacodynamic profiling of human tumors. Proceedings of the National Academy of Science USA. 107, 8352-8356 (2010).
  9. DeRose, Y. S., Wang, G., et al. Tumor grafts derived from women with breast cancer authentically reflect tumor pathology, growth, metastasis and disease outcomes. Nature Medicine. 17, 1514-1520 (2011).
  10. Tentler, J. J., Tan, A. C., et al. Patient-derived tumour xenografts as models for oncology drug development. Nature Reviews Clinical Oncology. 9, 338-350 (2012).
  11. Bertotti, A., Migliardi, G., et al. A molecularly annotated platform of patient-derived xenografts ("xenopatients") identifies HER2 as an effective therapeutic target in cetuximab-resistant colorectal cancer. Cancer Discovery. 1, 508-523 (2011).
  12. Decaudin, D. Primary human tumor xenografted models ('tumorgrafts') for good management of patients with cancer. Anticancer Drugs. 22, 827-841 (2011).
  13. Hanahan, D., Weinberg, R. A. Hallmarks of cancer: The next generation. Cell. 144, 646-674 (2011).
  14. Sys, G., Van Bockstal, M., et al. Tumor grafts derived from sarcoma patients tumor morphology, viability, and invasion potential and indicate disease outcomes in the chick chorioallantoic membrane model. Cancer Letters. 326, 69-78 (2012).
  15. Armstrong, P. B., Quigley, J. P., Sidebottom, E. Transepithelial invasion and intramesenchymal infiltration of the chick embryo chorioallantois by tumor cell lines. Cancer Research. 42, 1826-1837 (1982).
  16. Deryugina, E., Quigly, J. Chick embryo chorioallantoic membrane model systems to study and visualize human tumor cell metastasis. Histochemistry and Cell Biology. 130, 1119-1130 (2008).
  17. Knighton, D., Ausprunk, D., Tapper, D., Folkman, J. Avascular and vascular phases of tumor growth in the chick embryo. British Journal of Cancer. 35, 347-356 (1977).
  18. Dohle, D. S., Pasa, S. D., Gustmann, S., Laub, M., Wissler, J. H., Jennissen, H. P., Dünker, N. Chick ex ovo culture and ex ovo CAM assay: how it really works. J. Vis. Exp. (33), e1620(2009).
  19. Balke, M., Neumann, A., et al. Morphologic characterization of osteosarcoma growth on the chick chorioallantoic membrane. BMC Research Notes. 3, 58(2010).
  20. Hendrix, A., Maynard, D., et al. Effect of the secretory small GTPase Rab27B on breast cancer growth, invasion, and metastasis. Journal of the National Cancer Institute. 102, 866-880 (2010).
  21. Ausprunk, D., Knighton, D., Folkman, J. Vascularization of normal and neoplastic tissues grafted to the chick chorioallantois: role of host and preexisting graft vessels. American Journal of Pathology. 79, 597-618 (1975).
  22. Lokman, N. A., Elder, A. S. F., Riciardelli, C., Oehler, M. K. Chick Chorioallantoic membrane (CAM) Assay as an in vivo model to study the effect of newly identified molecules on ovarian cancer invasion and metastasis. International Journal of Molecular Sciences. 13, 9959-9970 (2012).
  23. Vargas, A., Zeisser-Labouèbe, M., Lange, N., Gurny, R., Delie, F. The chick embryo and its chorioallantoic membrane (CAM) for the in vivo evaluation of drug delivery systems. Advanced Drug Delivery Reviews. 59, 1162-1176 (2007).
  24. Hagedorn, M., Javerzat, S., et al. Accessing key steps of human tumor progression in vivo by using an avian embryo model. Proceedings of the National Academy of Sciences U.S.A. 102, 1643-1648 (2005).
  25. De Wever, O., Hendrix, A., et al. Modeling and quantification of cancer cell invasion through collagen type I matrices. International Journal of Developmental Biology. 54, 887-896 (2010).
  26. Albini, A., Benelli, R. The chemoinvasion assay: A method to assess tumor and endothelial cell invasion and its modulation. Nature Protocols. 2, 504-511 (2007).
  27. Hanahan, D., Coussens, L. Accessories to the crime: functions of cells recruited to the tumor microenvironment. Cancer Cell. 21, 309-322 (2012).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Больше статей

Хориоаллантоисная оболочка куриного зародышамодель ксенотрансплантации саркомыподготовка тканей опухолинанесение геля из внеклеточного матриксафлуоресцентная стереомикроскопиягистологическая оценкаиндекс пролиферации Ki67анализ сосудистой реакциивзаимодействия между реципиентом и трансплантатом
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.