Анализ жирных кислот содержание и состав микроводорослей

Краткое содержание

Способ определения содержания жирных кислот и состава микроводорослей на основе механического разрушения клеток, на основе экстракции липидов растворителем, переэтерификации и количественного и идентификации жирных кислот с использованием газовой хроматографии описано. Tripentadecanoin внутренний стандарт используется для компенсации возможных потерь при добыче и неполной переэтерификации.

Аннотация

Способ для определения содержания и состава общего количества жирных кислот, присутствующих в микроводорослей описывается. Жирные кислоты являются основным компонентом микроводорослей биомассы. Эти жирные кислоты могут присутствовать в различных ацил-липидной классов. Особенно жирные кислоты, присутствующие в триацилглицерина (TAG) имеют коммерческий интерес, потому что они могут быть использованы для производства транспортного топлива, сыпучих химических веществ, биологически активные добавки (ω-3 жирных кислот), а также продовольственных товаров. Чтобы разрабатывать коммерческие приложения, надежные аналитические методы для количественного определения содержания кислоты жирного и состава необходимы. Микроводорослей одиночные клетки, окруженные жесткой клеточной стенки. Метод анализа жирных кислот должно обеспечить нарушение достаточное клеток, чтобы освободить все ацильные липиды и процедуры экстракции используется должны быть в состоянии извлечь все классы ацил липидные.

С метод, представленный здесь все жирные кислоты, присутствующие в микроводорослей можно точно и воспроизводимо тождающиеся и количественно, используя небольшое количество образца (5 мг) независимо от их длины цепи, степени ненасыщенности или класса липидов они являются частью.

Этот метод не дает информации о относительного обилия различных классов липидов, но может быть продлен, чтобы отделить классы липидов друг от друга.

Метод основан на последовательности механическое разрушение клеток, экстракции липидов на основе растворителя, переэтерификацией жирных кислот в метиловых эфиров жирных кислот (Fames), а также количества и идентификации МЭЖК с использованием газовой хроматографии (GC-FID). TAG внутренний стандарт (tripentadecanoin) добавляется до аналитической процедуры для коррекции потерь при добыче и неполной переэтерификации.

Введение

Жирные кислоты являются одним из основных компонентов микроводорослей биомассы и обычно составляют от 5-50% клеточной сухого веса ^1-3. Они в основном присутствуют в виде глицеролипидов. Эти глицеролипиды, в свою очередь состоят в основном из фосфолипидов, гликолипидов и триглицеридов (TAG). Особенно жирные кислоты, присутствующие в TAG имеют коммерческий интерес, потому что они могут быть использованы в качестве ресурса для производства транспортного топлива, сыпучих химических веществ, биологически активные добавки (ω-3 жирных кислот), а также продовольственных товаров ^3-6. Микроводорослей может расти в морской воде на основе выращивания СМИ, м....

Протокол

1. Подготовка образцов

Есть два альтернативных протоколов для пробоподготовки включены как шаги 1.1 и 1.2. Оба метода одинаково хорошо подходят и дают близкие результаты, но если ограниченное количество объема культуры водорослей имеется, метод 1.1 рекомендуется.

Примечание: В любом протокола, подготовить две дополнительные шарик било труб по всей протокола но без добавления к ним водоросли, которые будут использоваться в качестве бланка. Таким образом, пики в GC хроматограмме в результате экстракции компонентов из материалов, используемых могут быть идентифицированы и количественно.

1....

Результаты

Типичная хроматограмма, который получен с помощью этого процесса показана на рисунке 1. FAMEs разделены по размеру и степени насыщения на колонку для ГХ и используемого протокола. Более короткие длины цепи жирных кислот и более насыщенные жирные кислоты (меньше двойных связей) имеют более короткие времена удерживания. Используется колонка GC и протокол не намерены отделить изомеры жирных кислот (то же длины цепи и степени насыщения, но разных положениях двойных связей), но это может быть достигнуто с по.......

Обсуждение

Описанный способ может быть использован, чтобы определить содержание а также состав общего количества жирных кислот, присутствующих в микроводорослей биомассы. Жирные кислоты, полученные из всех классов липидов, включая хранение (TAG), а также мембранные липиды (фосфолипиды и гликолипиды), обнаружены. Все длины цепи жирной кислоты и степени насыщения, которые присутствуют в микроводорослей могут быть обнаружены и отличаются. Метод основан на механическое разрушение клеток, экстракции липидов на основе растворителя, пере.......

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
трипентадеканоин (C15:0 TAG)	Sigma Aldrich	T4257	CAS Номер 7370-46-9
TAG или FAME стандарты всех жирных кислот, ожидаемые в образце	Sigma Aldrich
TAG или FAME стандарты всех жирных кислот, ожидаемые в образце	Lipidox
TAG или FAME стандарты всех жирных кислот, ожидаемые в образце	Larodan
Beadbeater	Bertin Technologies	Precellys 24
бисерные трубки	MP Biomedicals	Лизирующая матрица E 116914500
GC-FID	Hewlett-Packer	HP6871
GC колонка	Supelco	Nukol 25357
Пипетка положительного вытеснения 100-1000μ l	Mettler Toledo	MR-1000
Наконечники для дозаторов прямого действия C-1000	Mettler Toledo	C-1000
Pipetvuller, Pi-Pump 2 мл	VWR	612-1925
стеклянные трубки	VWR	SCERE5100160011G1
TUBE 16 X 100 ММ БОРОСИЛИКАТ 5,1 1 * 1.000	VWR	SCERE5100160011G1
Завинчивающиеся крышки	с тефлоновым покрытиемVWR	SCERKSSR15415BY10
STUART SCIENTIFIC SB2 пробирка вращатель	VWR	445-2101
Испаритель/концентратор с подогревом	Cole-Parmer	YO-28690-25