Фибриновые матрицы, содержащие факторы роста были использованы, чтобы сохранить привитые нервные стволовые клетки в участках полной перерезки спинного мозга. Привитые клетки полностью заполнил полость поражения и дифференцировались в нескольких нейронных типов клеток, в том числе нейроны, которые простирались аксоны в принимающей спинного мозга на большие расстояния.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Продвижение выживания и дифференцировка нервных стволовых клеток с фибрином и фактор роста Коктейли после Тяжелая травмы спинного мозга
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Нервные стволовые клетки (НСК) могут самообновлению и дифференцировке в нейроны и клетки глии. Пересаживают НСК может заменить потерянные нейронов и глии после травмы спинного мозга (SCI), и могут образовывать функциональные реле повторного подключения сегментов спинного мозга выше и ниже поражения. Предыдущие исследования прививки нервные стволовые клетки были ограничены неполного выживание трансплантата внутри спинного мозга полость поражения. Кроме того, отслеживание выживание трансплантата клеток, дифференциации и расширения процесса не были оптимизированы. Наконец, в предыдущих исследованиях, культивированные NSCs крысы, как правило, сообщалось дифференцироваться в глии, когда прививают на поврежденный спинной мозг, а не нейронов, если судьба не был доведен до определенного типа клеток. Для решения этих проблем, мы разработали новые методы для улучшения выживаемости, интеграции и дифференциации НСК к сайтам даже тяжелой ТСМ. NSCs были недавно выделены из эмбрионального день 14 спинного мозга (E14) от стабильной трансгенных крыс Fischer 344 линии, экспрессирующей зеленый этлюминесцентных белок (GFP) и были встроены в фибринового матрикса, содержащего факторы роста; эта формулировка направлена сохранить трансплантированных клеток в полости поражения и поддерживать жизнеспособность клеток. НСК в коктейле фибрина / фактора роста были имплантированы две недели после грудной уровень-3 (Т3) полных спинного transections мозга, что позволяет избежать пиковых периодов воспаления. Полученные трансплантаты полностью заполнена полость поражения и дифференцировались в обоих нейронов, которые расширенных аксоны в принимающей спинного мозга над удивительно большие расстояния, и глии. Прививки из культивированных человеческих НСК выражающих GFP привели к аналогичным результатам. Таким образом, методы определены для улучшения нейронной прививки стволовых клеток, выживание и анализ естественных условиях выводов в.
Введение
Травма спинного мозга (ТСМ), часто повреждает не только в белом веществе участки, которые несут сигналы от головного мозга, но и центральный серого вещества, в результате чего сегментарную потерю интернейронов и мотонейронов. Следствием ТСМ является потеря как и моторной функции ниже поражения. К сожалению, взрослый центральной нервной системы (ЦНС) не спонтанно регенерировать, в результате постоянных функционального дефицита 1. Таким образом, реконструкция ранения взрослого спинного мозга и улучшению моторных, сенсорных и вегетативных функций является важной задачей исследования SCI. Нервные стволовые клетки (НСК), прямо изолированы от эмбриона или взрослого ЦНС, убедительные кандидаты клетки, чтобы заменить потерянные нейронов и глии. Более того, эти клетки имеют потенциал, чтобы сформировать новые функциональные реле для восстановления аксонов проводимость через поражение сайте 2,3.
На сегодняшний день не было подробное выяснение анатомических, electrophysiological и поведенческие эффекты нейронов формирования реле по трансплантированных НСК после тяжелой ТСМ. Есть несколько причин для этого: во-первых, пересаженные НСК или ЦНС плода ткани выжить плохо, когда привитые в крупные поражения полости. Предыдущие исследования показывают, существенные потери в начале клеток, в результате чего большая пустая кистозные поражения полостей 4,5. В некоторых исследованиях привитые клетки впоследствии разделить и заполнить полость поражения 4,5, но это может произойти с задержкой от нескольких дней до недель, и последующее заполнение поражение сайт не может быть полным или последовательным. Во-вторых, эффективная система отслеживания, которая обеспечивает надежные данные о клеточном выживания, дифференциации / созревания, и результат развития трансплантированных НСК недоставало. Большинство ранних исследований использованы антеградно и ретроградной маркировки проследить аксональные проекции из трансплантации 2,3. Однако, эти методы лишь частично и часто неясно, меченные аксонов проекции, вытекающие из трансплантированных клеток, а также методы трассирующие являются субъективнот к артефактам, вызванных утечкой красителя за имплантированных клеток. Другие группы использовали специфические нейронные маркеры человека маркировать аксональные прогнозы после трансплантации фетальных НСК человека в травму грызунов спинного мозга 5,6. Тем не менее, в этих исследованиях, ксенотрансплантаты не последовательно хорошо выживают. Недавно вирусный доставка гена GFP репортера была использована для обозначения культивированных НСК 7,8. Тем не менее, выражение GFP был часто непоследовательны и может быть вниз регулируется 7. В последнее время использование трансгенных мышей или крыс-доноров, стабильно экспрессирующих репортерный ген GFP, или человеческий плацентарный щелочную фосфатазу, значительно улучшилось отслеживание трансплантированных нервных стволовых клеток / клеток-предшественников в естественных 9,11. В-третьих, некоторые исследования показывают, что в пробирке культивированный НСК крысы, полученные либо из эмбриона или взрослого ЦНС исключительно дифференцироваться в глиальные линий при трансплантации в среде с нетронутыми или ранены взрослого спинного корг 7,12,13, несмотря на то, что эти нервные стволовые клетки способны дифференцироваться в обоих нейронов и глии в пробирке, указывая, что местные условия окружающей среды могут диктовать судьбу стволовых клеток. Кроме того, культивируемые NSCs, особенно те, которые получены из взрослой ЦНС, могут иметь внутренним свойством defaulty дифференцироваться в глиальные линий в естественных условиях 13.
Из-за ограничений, описанных выше, наша группа недавно разработала новый протокол для улучшения эмбриональных отслеживание НСК, выживание, и дифференциация / созревание в тяжелые ранения взрослого спинного мозга. Вкратце, мы начали со стабильным трансгенных Фишер 344 крысы ИНБРЕДНЫЕ линии, выражающей ген-репортер GFP, которая поддерживает выражение GFP после трансплантации в естественных условиях 14. Далее, мы использовали Свежевыделенные НСК из эмбриональных день 14 Fischer 344 спинной мозг, этап развития, который сохраняет потенциал для создания как нейроны и глиальные клетки. Наконец, мы встроилинедавно диссоциированные НСК в фибрин матрицы, содержащей факторов роста 15-17 сохранить клетки и равномерно распределить их в большой полости поражения, с целью поддержать выживание трансплантата клеток, дифференцирование и интегрирование. Прививки были помещены в местах T3 полной перерезки, через две недели после травмы спинного мозга. Эти привитые клетки последовательно заполняется полные перерезки сайтов и дифференцировались в обильных нейронов, которые простирались большое количество аксонов в принимающей спинного мозга на большие расстояния 18. Аналогичные результаты были получены с использованием культивированных трансплантатов стволовых нервных клеток человека к иммуно-дефицитных крыс 18.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Все протоколы животных утверждаются VA-Сан-Диего Уходу за животными и использованию комитета (IACUC). NIH руководящие принципы для лабораторного ухода за животными и безопасности строго соблюдаются. Животные имеют свободный доступ к пище и воде в течение всего исследования и адекватное лечение для минимизации боли и дискомфорта.
1. Подготовка фибрина компонентов, содержащих фактор роста Коктейли
- Растворите 25 мг крысы фибриногена в 0,5 мл PBS, чтобы получить 50 мг / мл исходного раствора 2х (см. таблицу материалов). Фибриноген трудно растворим и должны быть помещены в 37 ° C инкубаторе или водяной бане и встряхивали каждые 5-10 мин в течение 1-2 часов.
- Растворить 100 крыс тромбин ООН в 2 мл 10 мМ CaCl 2 стерильный с получением 50 U / мл исходного раствора 2х.
- Растворить факторы роста в PBS в следующих концентрациях, чтобы получить 100 мкл исходного раствора: 1 мг / мл: BDNF; NT-3 (высокая концентрация акции как интратекальной вливания в естественных условиях 19); 200 мкг / мл: GDNF; IGF; оФРФ; EGF; PDGF; кФРФ; ФРГ (около 1000 х выше, чем используется для клеточной культуре).
- Растворите 25 мг MDL28170 (калпаина ингибитор) в 1,3 мл ДМСО с получением 50 мМ ДМСО маточного раствора, а затем разбавить 50x в ФБР, чтобы получить 1 мМ маточного раствора.
- Смешайте 100 мкл каждого компонента фактора роста и 100 мкл MDL28170 (1 мМ исходный раствор) для производства 1000 мкл фактор роста коктейль решение (рис. 1).
- Смешайте 500 мкл 2x фибриноген маточного раствора с 500 мкл фактора роста коктейлем, чтобы получить 25 мг / мл фибриногена рабочий раствор, содержащий факторы роста и аликвоту в 10 мкл или 20 для хранения при -70 ° С Раствор стабилен в течение 12 месяцев при температуре -70 ° С.
- Аналогично, смешать 500 мкл тромбина 2x маточного раствора с 500 мкл коктейля фактора роста для получения 25 рабочего раствора Ед / мл тромбина, содержащий факторы роста и аликвоты в аналогичных объемах 10 или 20 мкл для хранения ат -70 ° C до 12 месяцев.
- В день прививки, место фибриногена и тромбина-содержащих фактор роста коктейли на льду до смешивали с клетками.
2. Т3 спинного мозга Перерезка
- Обезболить взрослых женщин Фишер 344 крыс или бестимусных голых крыс с помощью приемлемых методов. Субъекты глубоко под наркозом, когда реагирование на хвост и лапы крайнем случае полностью отсутствуют. Примечание: Обычно мы используем 150-200 г крыс Фишера или 180-220 г. бестимусных крыс, а также анестезии коктейль (2 мл / кг) кетамина (25 мг / мл), ксилазина (1,3 мг / мл) и ацепромазина (0,25 мг / мл).
- Применить глазную мазь, чтобы предотвратить сухость и повреждение глаз в то время как животные находятся под наркозом.
- Бритье верхний грудной области и протереть кожу Бетадин.
- Разрежьте кожу и мышцы с помощью # 15 лезвие, подвергать T3 позвонка с помощью хирургического втягивающим, а также выполнять ламинэктомии на T3 позвонка выставить T3 / 4 спинной мозг с помощью Rongeur.
- Сделайте долготапродольной срединный разрез в твердой мозговой оболочки около 2 мм длиной, используя # 11 лезвие.
- Наведите иридэктомия ножницы под твердой мозговой оболочки, чтобы сократить правую боковую весь спинной мозг. Сделайте еще один порез на той же стороне 1,5 мм больше cadually.
- Аспирируйте ткани спинного мозга между двумя срезанных сегментов с тупым 23 G иглы, подключенного к умеренной вакууме интенсивности. Используйте визуальный контроль, чтобы обеспечить полное рассечение снизу и с боков. Это позволит завершить боковую гемисекции.
- Чтобы продлить поражение в перерезки спинного полной ширины мозга, поместите зеркало разрезы в левый hemicord. Попытка покинуть твердую мозговую оболочку нетронутыми, кроме первого разреза, чтобы сохранить твердую трансплантат / фибрина матрицу, в месте повреждения при прививке через две недели.
- Шовный мышцы, применять порошок антибиотика и главный продукт кожи.
- Введите лактат (3 мл) Рингера, Bannamine (2,5-5 мг / кг) и ампициллин (80-100 мг / кг) (см. таблицу материалов) сразу же после операции и Майntain крысы в теплом инкубаторе до терморегуляции не будет восстановлена.
- Опорожнить мочевой пузырь и не вводить раствор Рингера и ампициллин два раза в день в течение двух недель до установления рефлекторной опорожнения мочевого пузыря (рис. 1b).
3. Подготовка Свежеиспеченные диссоциированных эмбриональный день 14 спинного мозга нервные стволовые клетки
- Получить ИНБРЕДНЫЕ трансгенных GFP F344 крыс (F344-TG (UBC-EGFP) F455Rrrc) от Rat ресурс и научно-исследовательский центр, Университет Миссури.
- Введите 40 мкг дез-Gly 10, [D-Ala 6]-Leuteinizing гормон высвобождающий гормон этиламид (LHRH), разведенного в PBS при концентрации 200 мкг / мл внутрибрюшинно (IP) в зрелом самок крыс (8 недель и старше) после 2 -3 ч света индукции для синхронизации отбора эмбрионов.
- Mate со зрелой GFP гомозиготной или гетерозиготной мужской крысы в течение ночи 4 дня после инъекции.
- Сбор эмбрионов в дни 13,5-14,5 postcoitus(Шт) в холодном буфере HBSS, изучить выражение GFP рамках проекта "NightSea" фонарик и фильтров стекол (BLS1 - BlueStar фонарик и модель VG1 барьер фильтр) или флуоресцентным микроскопом.
- Проанализируйте спинной мозг из асептических от каждого GFP-положительных плода и удалить вышележащие мозговые оболочки и прикрепленный спинальных ганглиев с иридэктомия ножницами и ювелиров щипцами.
- Соберите расчлененные спинного мозга в 2 мл холодного буфера HBSS в 15 мл cornical трубки и держать на льду.
- Следуйте ссылка # 20 для диссоциации расчлененный спинного мозга:
- Вкратце, добавляют 2 мл 0,25% трипсина-ЭДТА в пробирку, содержащую рассеченные спинного мозга (несколько шнуры могут быть переварены вместе, один шнур может генерировать достаточное количество клеток для трансплантата одного субъекта) и переварить при 37 ° С в течение 10-12 мин.
- Остановить реакцию трипсина путем добавления 10 мл DMEM, содержащей 10% FBS в пробирку центрифуги и тканей при 2500 оборотов в минуту в течение 2 мин.
- Ресуспендируют ткани в 2 мл Neurobasal среднего сотрудничестваntaining 2% B27, и растирают ткани спинного мозга с помощью постепенно меньшие огневой полировкой Пастера пипец.
- Центрифуга клетки при 2500 оборотов в минуту в течение 2 мин, ресуспендируют в 2 мл Neurobasal среде, содержащей B27 и фильтрующих ячеек с мобильного сетчатый фильтр 40 мкм.
- Граф клеток с помощью гемоцитометра и разделить клетки одинаково в две пробирки Эппендорфа.
- Центрифуга клетки и полностью удалить надосадочную жидкость (1-2 мин необходимо вывести все супернатанта с низким вакуумной наконечника), так коктейли фактор роста не будет разбавлен оставшейся надосадочной жидкости после клетки ресуспендируют.
- Ресуспендируют каждую половину клеток в фибриногена или рабочего раствора тромбина, содержащего факторы роста, соответственно, при концентрации 250000 клеток / мкл (осадок клеток отсчетов около ⅓ конечного объема) и разместить их на лед предварительного трансплантации (рис. 1А). Следует отметить, что фибриноген может спонтанно гель при смешивании с клеткойс до объединения с тромбина на поражение / трансплантата сайта; чтобы избежать преждевременного гелеобразования, смешать клетки в фибриногена непосредственно перед клеток прививки в естественных условиях.
4. Трансплантация
- Reexpose пораженное T3 / 4 спинной мозг через две недели после перерезки спинного мозга.
- 5 мкл фибриногена-клеток и 5 мкл тромбина-клетки могут быть непосредственно введен в девяти точках месте повреждения через герметичный рубцовой ткани и интактной твердой мозговой оболочки без повторного открытия месте повреждения.
- Используйте 27 г иглы для создания 9 лунок на поверхности рубцовой ткани и неповрежденной твердой мозговой оболочки 1-2 недели после поражения: 3 в центре (один в средней точке и два в боковых и расположенных 0,5 мм друг от друга) и 3 в обоих ростральнее и 3 в хвостовой интерфейса (около 0,5 мм ростральной или хвостовой к центру поражения).
- Тогда придать половину объема раствора фибриногена клеток в трех центральных точках сайте поражения и объемом четверть на 3 точках ростральной интерфейсом и воднымОбъем uarter на 3 точках хвостового интерфейса.
- Затем сразу же придать throbmbin клетки в тех же самых местах. Смесь фибриногена клеток и тромбина клеток внутри очага повреждения сформирует фибрина гель для хранения клеток в месте повреждения и коктейли фактор роста будет поддерживать выживание клеток. Клетки вводят с помощью вытащил стеклянный пипетки, подключенных к PicoSpritzer (Генеральный клапан, Inc.)
- Трансплантации культивированных человеческих NSCs 21 в той же процедуре, описанной выше, и использовать фибрина и фактора роста коктейли, сделанные из человеческих реагентов.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
GFP иммуногистологического маркировка показывает, что привитой крыс NSCs ресуспендировали в забуференном фосфатом физиологическом растворе (PBS) (отсутствует фибринового матрикса и факторов роста) выжили плохо в перерезки сайта Т3, только крепления к краю поражение / хост и оставляя большую часть месте повреждения пустой без привитые клетки (рис. 2а). Выживание НСК улучшена при совместном с привитым только фибрина матриц, но трансплантат не полностью заполнить большое поражения полость (данные не показа...
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Одним из основных препятствий для трансплантации НСК в поврежденный спинной мозг беден выживание в поражения центра. Любые пробелы или полости в месте повреждения может потенциально снизить или ослабить формирование функциональных нейронных реле между супраспинальных аксонов и разделенными сегментов спинного мозга ниже травмы. Кроме того, плохая выживаемость привитых НСК может повлиять на их интеграцию с ткани хозяина, и, следовательно, уменьшить связность привитых нейронов с принимающими нейронов. Потенциальные механиз...
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Нам нечего раскрывать.
Благодарности
Мы благодарим Rat ресурсов и научно-исследовательский центр, Университет Миссури, Колумбия, штат Миссури, для обеспечения GFP крыс; Neuralstem Инк для обеспечения человека нервные стволовые клетки. Эта работа была поддержана Администрацией по делам ветеранов, NIH (NS09881), канадской исследовательской организацией спинного, Крэйг Х. Нильсен Foundation, и Бернард и Энн Spitzer Благотворительный фонд.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Фибриноген (крыса) | Sigma | F6755-25MG | 2 часа при 37 °°; C to dissovle Исходная концентрация: 50 мг/мл Конечная концентрация: 25 мг/мл |
| Тромбин (крыса) | Sigma | T5772-100UN | Dissovle в 10 мМ CaCl2 Стоковая концентрация: 50 U/ml Конечная концентрация: 25 мг/мл |
| bFGF (человек) | Sigma | F0291 (25 μ g) | Концентрация запасов: 200 нг/мкм; l Конечная концентрация: 10 нг/мкм; l |
| EGF (мышь) | Sigma | E1257 (0,1 мг) | Исходная концентрация: 200 нг/&мкм; l Конечная концентрация: 10 нг/мкм; l |
| BDNF (человек) | Peprotech | 452-02 (1 мг) | Исходная концентрация: 1,000 нг/мкм; l Конечная концентрация: 50 нг/мкм; l |
| NT-3 (человек) | Peprotech | 452-03 (1 мг) | Исходная концентрация: 1,000 нг/мкм; l Конечная концентрация: 50 нг/мкм; l |
| GDNF (крыса) | Sigma | G1401 (10 μ g) | Концентрация запасов: 200 нг/мкм; l Конечная концентрация: 10 нг/мкм; l |
| IGF-1 (мышь) | Sigma | I8779 (50 μ g) | Концентрация запасов: 200 нг/мкм; l Конечная концентрация: 10 нг/мкм; l |
| aFGF (человек) | Sigma | F5542 (25 μ g) | Концентрация запасов: 200 нг/мкм; l Конечная концентрация: 10 нг/мкм; l |
| PDGF-AA (человек) | Sigma | P3076 (10 μ g) | Концентрация запасов: 200 нг/мкм; l Конечная концентрация: 10 нг/мкм; l |
| HGF (человек) | Sigma | H9661 (5 μ g) | Концентрация запасов: 200 нг/мкм; l Конечная концентрация: 10 нг/мкм; l |
| MDL28170 | Sigma | M6690 (25 мг) | Запас в ДМСО<бр/> Концентрация: 1 мм<бр/> Конечная концентрация: 50 мкм; M |
| PBS | Millipore | BSS-1005-B | Исходная концентрация: 1x Конечная концентрация: 1x |
| DMSO Sigma | D2650 | ||
| Кетамин | Путни | 26637-411-01 | 40-80 мг/кг Исходная концентрация: 100 мг/мл Конечная концентрация: 25 мг/мл |
| Ксилазин | Lloyd | 0410, | 2,5-8 мг/мл<бр/> Исходная концентрация: 100 мг/мл<бр/> Конечная концентрация: 5,8 мг/мл |
| Ацепромазин | Батлер | 003845 | 0,5-4 мг/мл<бр/> Стоковая концентрация: 10 мг/мл<бр/> Конечная концентрация: 0,25 мг/мл |
| Хелппетс | BET16OZ | ||
| Рингер | Эбботт | 04860-04-10 | 2-3 мл/индж |
| Банамин | Шеринг-Плуг | 0061-0851-03 | 2,5-5 мг/кг<бр/> Исходная концентрация: 50 мг/мл<бр/> Конечная концентрация: 0,5 мг/мл |
| Ампициллин | Sandoz | 0781-3404-85 | 80-100 мг/кг<бр/>Конечная концентрация: 50 мг/мл |
| LH-RH | Sigma | L4513 | 200 μ г/кг<бр/> Конечная концентрация: 200 г/мкм; г/мл |
| HBSS | Gibco | 14175-096 | |
| Трипсин | Gibco | 25200056 | Концентрация: 0,25 % Конечная концентрация: 0,125 % |
| DMEM | Gibco | 11995073 | |
| FBS | Gibco | 16000044 | Концентрация: 100 % Конечная концентрация: 10 % |
| Нейробазальная среда | Gibco | 21103049 | |
| B27 | Gibco | 17504044 | Концентрация в запасе: 100x Конечная концентрация: 1x |
| Обратите внимание, используйте человеческие реагенты для трансплантатов человеческих НСК |
Ссылки
- Ramon y Cajal, S. In Degeneration and regeneration of the nerve system. , New York: Hafner. (1991).
- Jakeman, L. B., Reier, P. J. Axonal projections between fetal spinal cord transplants and the adult rat spinal cord: a neuroanatomical tracing study of local interactions. J Comp Neurol. 307, 311-334 (1991).
- Bamber, N. I., Li, H., Aebischer, P., Xu, X. M. Fetal spinal cord tissue in mini-guidance channels promotes longitudinal axonal growth after grafting into hemisected adult rat spinal cords. Neural Plast. 6, 103-121 (1999).
- Theele, D. P., Schrimsher, G. W., Reier, P. J. Comparison of the growth and fate of fetal spinal iso- and allografts in the adult rat injured spinal cord. Exp Neurol. 142, 128-143 (1996).
- Giovanini, M. A., Reier, P. J., Eskin, T. A., Wirth, E., Anderson, D. K. Characteristics of human fetal spinal cord grafts in the adult rat spinal cord: influences of lesion and grafting conditions. Exp Neurol. 148, 523-543 (1997).
- Wictorin, K., Björklund, A. Axon outgrowth from grafts of human embryonic spinal cord in the lesioned adult rat spinal cord. Neuroreport. 3, 1045-1048 (1992).
- Vroemen, M., Aigner, L., Winkler, J., Weidner, N. Adult neural progenitor cell grafts survive after acute spinal cord injury and integrate along axonal pathways. Eur J Neurosci. 18, 743-751 (2003).
- Blits, B., et al. Lentiviral vector-mediated transduction of neural progenitor cells before implantation into injured spinal cord and brain to detect their migration, deliver neurotrophic factors and repair tissue. Restor Neurol Neurosci. 23, 313-324 (2005).
- Lepore, A. C., Fischer, I. Lineage-restricted neural precursors survive, migrate, and differentiate following transplantation into the injured adult spinal cord. Exp Neurol. 194, 230-242 (2005).
- Gaillard, A., et al. Reestablishment of damaged adult motor pathways by grafted embryonic cortical neurons. Nat Neurosci. 10, 1294-1299 (2007).
- Remy, S., et al. New lines of GFP transgenic rats relevant for regenerative medicine and gene therapy. Transgenic Res. 19, 745-763 (2010).
- Cao, Q. L., et al. Pluripotent stem cells engrafted into the normal or lesioned adult rat spinal cord are restricted to a glial lineage. Exp Neurol. 167, 48-58 (2001).
- Mothe, A. J., Kulbatski, I., Parr, A., Mohareb, M., Tator, C. H. Adult spinal cord stem/progenitor cells transplanted as neurospheres preferentially differentiate into oligodendrocytes in the adult rat spinal cord. Cell Transplant. 17, 735-751 (2008).
- Bryda, E. C., Pearson, M., Agca, Y., Bauer, B. A. Method for detection and identification of multiple chromosomal integration sites in transgenic animals created with lentivirus. Biotechniques. 41, 715-719 (2006).
- Willerth, S. M., Faxel, T. E., Gottlieb, D. I., Sakiyama-Elbert, S. E. The effects of soluble growth factors on embryonic stem cell differentiation inside of fibrin scaffolds. Stem Cells. 25, 2235-2244 (2007).
- Grumbles, R. M., Sesodia, S., Wood, P. M., Thomas, C. K. Neurotrophic factors improve motoneuron survival and function of muscle reinnervated by embryonic neurons. J Neuropathol Exp Neurol. 68, 736-746 (2009).
- Kadoya, K., et al. Combined intrinsic and extrinsic neuronal mechanisms facilitate bridging axonal regeneration one year after spinal cord injury. Neuron. 64, 165-172 (2009).
- Lu, P., et al. Long-distance growth and connectivity of neural stem cells after severe spinal cord injury. Cell. 150, 1264-1273 (2012).
- Coumans, J. V., et al. Axonal regeneration and functional recovery after complete spinal cord transection in rats by delayed treatment with transplants and neurotrophins. J Neurosci. 21 (23), 9334-9344 (2001).
- Harris, J., Lee, H., Tu, C. T., Cribbs, D., Cotman, C., Jeon, N. L. Preparing e18 cortical rat neurons for compartmentalization in a microfluidic device. J Vis Exp. (305), (2007).
- Yan, J., et al. Extensive neuronal differentiation of human neural stem cell grafts in adult rat spinal cord. PLoS Med. 4 (2), e39(2007).
- Popovich, P. G. Building bridges for spinal cord repair. Cell. 150 (6), 1105-1106 (2012).
- Catelas, I. Fibrin. Comprehensive Biomaterials. 2, 303-328 (2011).
- Petter-Puchner, A. H., et al. The long-term neurocompatibility of human fibrin sealant and equine collagen as biomatrices in experimental spinal cord injury. Exp Toxicol Pathol. 58, 237-245 (2007).
- Gage, F. H. Mammalian neural stem cells. Science. 287, 1433-1438 (2000).
- Deister, C., Schmidt, C. E. Optimizing neurotrophic factor combinations for neurite outgrowth. Journal of Neural Engineering. 3, 172-179 (2006).
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
