Методическая статья

Transsynaptic Трассировка из периферийных цели с Pseudorabies Касперского Вслед за холерного токсина и Биотинилированный декстран Амины Двухместный маркировки

DOI:

10.3791/50672

⸱

14 сентября 2015 г.

 ,  , 
1Department of Neurobiology, Duke University Medical Center, 2Howard Hughes Medical Institute

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Транссинаптическая трассировка стала мощным инструментом для анализа центральных эфферентов, регулирующих периферические мишени через мультисинаптические цепи. Здесь мы представляем протокол, который использует транссинаптический вирус псевдобешенства для идентификации и локализации функциональной цепи мозга, а затем классические методы трассировки тракта для проверки конкретных связей в цепи между идентифицированными группами нейронов.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Transsynaptic трассировка стать мощным инструментом используются для анализа центральные эфференты, которые регулируют периферийные цели через несколько синаптических схем. Этот подход был наиболее широко применяемым в мозге путем использования свиной патогенных псевдобешенства (PRV) 1. ПРВ не заразить человекообразных обезьян, включая людей, поэтому он наиболее часто используется в исследованиях на мелких млекопитающих, особенно грызунов. Штамм псевдобешенства PRV152 выражает повышенную зеленый флуоресцентный белок (EGFP), репортер ген и только пересекает функциональные синапсы ретроградно через иерархической последовательности синаптических связей вдали от инфекции сайте 2,3. Другие штаммы PRV имеют различные свойства и микробиологические могут перевозиться в обоих направлениях (ПРВ-Беккер и ПРВ-Каплана) 4,5. Этот протокол будет заниматься исключительно PRV152. Предоставляя вирус на периферийном участке, такие как мышцы, можно ограничить проникновение вируса в Тон мозг через определенный набор нейронов. Полученную модель сигнала EGFP по всему мозгу затем разрешает нейроны, которые подключены к первоначально инфицированных клеток. Как распределенный характер transsynaptic трассировки с вирусом ложного бешенства делает интерпретации конкретных соединений в пределах определенного сети трудно, мы представляем чувствительный и надежный метод, использующий биотинилированных декстран амины (BDA) и холерный токсин субъединицы б (CTB) для подтверждения связи между клетками определенных с помощью PRV152. Иммунохимическое обнаружение АРП и CTB с пероксидазой и DAB (3, 3'-диаминобензидина) был выбран потому, что они эффективны при выявлении клеточных процессов, включая дистальных дендритов 6-11.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Transsynaptic трассировка стать мощным инструментом используются для анализа центральные эфференты, которые регулируют периферийные цели через несколько синаптических схем. Этот подход был наиболее широко используются в мозге грызунов с использованием вируса свиного патогена псевдобешенства (PRV), особенно ослабленный штамм ПРВ-Барта, впервые описанного в 1961 году 12. Здесь мы приводим протокол для идентификации двигателя корковое представительство конкретных мышц или группы мышц с использованием вирусного рекомбинантные псевдобешенства штамма (PRV152), выражающая усиливается зеленый флуоресцентный белок (EGFP) гена-репортера 2. Описанный метод использует поведение нейротропных вирусов, которые производят потомство, что инфекционный кросс синапсы инфицировать другие нейроны в функциональной схеме 3,4,13. PRV152, что изогенная с ПРВ-Барта, только пересекает синапсов ретроградно через иерархической последовательности синаптических связей от инфекции сайте <3,5/ SUP>. По строго контролировать периферийную сайт инфекции можно ограничить проникновение вируса в мозг через определенное подмножество моторных нейронов. Поскольку вирус инфицирует последовательно соединенных цепей нейронов, в результате структура сигнала EGFP по всему мозгу будет решить сеть нейронов, которые соединены с первоначально инфицированных клеток.

Дополнительным преимуществом использования вируса нейронной трассировки является усиление репортерного белка (EGFP в данном случае) в инфицированных клетках. Это усиление сигнала обеспечивает уровень чувствительности, что позволяет выявлять даже редкие прогнозов. Например, разреженный проекция из вибрисс моторной коре на лицевых мотонейронов, контролирующих усы было обнаружено у крыс с использованием вирусно выраженную зеленый флуоресцентный белок 14; Предыдущие исследования не смогли найти эту проекцию с использованием классических индикаторов без амплификации гена-репортера 11,15. К сожалениюМногие вирусные векторы трассировки, как тот, используемый в указанной работе, не пересекают синапсы, тем самым ограничивая их использование для отслеживания нескольких синаптические цепи.

Представляя различные преимущества для идентификации сети клеток, участвующих в моторном цепи, распределенный характер transsynaptic трассировки ПРВ-152 делает интерпретации конкретных соединений в цепи сложной. Таким образом, мы представляем простой метод для проверки конкретных соединений в пределах, определенных схем с использованием PRV-152 двойной маркировки с помощью биотинилированных декстран амины (BDA) и холерный токсин субъединицы б (CTB). Комбинированное использование BDA и СТВ хорошо создана подход для отслеживания соединений между конкретными множествами нейронов 6-8,11. При использовании вместе, эти два трейсеры могут быть визуализированы в том же разделе, используя два-DAB цвета (3, 3'-диаминобензидина) процедуры 16. Высокая молекулярная масса BDA (BDA10kDa) был выбран для этого протокола, потому что это уields подробную маркировку нейронных процессов 6,7,9. Дополнительные преимущества BDA10kDa включают в себя следующее: это преимущественно транспортируется в направлении антероградной 6-8; он может быть доставлен по ионтофоретическое или инъекции давления 6-8; он может быть визуализированы с помощью простого авидин биотинилированный-HRP (АВС) Процедура 17; и могут быть отображены с помощью световой микроскопии или 6,7,18 электронов. Иммунохимическое обнаружение CTB с пероксидазой и DAB был выбран для ретроградной маркировки мотонейронов, поскольку он эффективен при выявлении клеточных процессов, включая дистальных дендритов 10,19. Мы недавно использовали этот подход для идентификации вокальный двигательный путь у мышей и выявить редкие соединения из первичной моторной коры к гортани двигательных нейронов, которые ранее предполагалось, будет отсутствовать 20.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ПРИМЕЧАНИЕ: Все процедуры на животных были рассмотрены и одобрены Комитетом по Уходу за животными и использования Duke University по.

1. Сохранение Pseudorabies Вирус

  1. Мы получим живой вирус (PRV152) из лаборатории доктора Линн Энквист в Принстонском университете в титре 1 х 10 9 БОЕ / м. Протокол для создания вируса была опубликована 2.
  2. Алиготе вирус в 20 мкл на пробирку внутри BSL-2 биобезопасности кабинета и хранить при температуре -80 ° С при соответствующих условиях биобезопасности.
  3. Оттепель аликвоту PRV непосредственно перед инъекционных наркотиков.

2. Хирургическая подготовка для инъекций в мышцы

  1. Вызвать общий наркоз путем внутримышечной инъекции кетамина (ксилазина-100 мг / кг кетамина, 10 мг / кг ксилазина) и поддерживать соответствующий анестетик плоскости с помощью изофлуораном.
  2. Защита роговицы с Офтальмология мази.
  3. Подготовьте тон хирургическая сайт в соответствии с асептической техники путем обрезки волос и дезинфекции хирургического сайт с чередующимися скрабы из Бетадин и 70% спирта (минимум 3 циклов). Будьте уверены, чтобы использовать стерильные шторы, чтобы покрыть хирургические области. Убедитесь, что придерживаться стерильных методов во всех процедурах.
  4. Сделайте разрез кожи и раскрыть мышцы интерес. Например, чтобы получить доступ к cricothyroid гортани мышцы надо сначала удалить облегающего часть грудино-подъязычная мышца.
  5. Печать любых перерезают мышцы с клеем VetBond ткани.

3. Введение PRV в мышцы

  1. Загрузите 10 мкл Nanofil систему микрошприца с недавно талой решения PRV, приложите 34 G иглу из нержавеющей стали, и тщательно закрепить его на стереотаксической устройства.
  2. Медленно снимите мертвое пространство и убедитесь, что решение выходит из микрошприца чаевые. Откажитесь жидкости в bioharzard отходов.
  3. Использование стереотаксической micropositioning прибор тщательно поместить кончик микрошприца в мышцу и медленно интерес заполнить мышцы, пока припухлость не видно. Скорость впрыска будет варьироваться в зависимости от размера и объема мышц, который будет введен. Например, пять инъекции 200 нл (1 мкл) общей со скоростью 4 л / сек должны быть сделаны 1 мин друг от друга на том же сайте, чтобы заполнить cricothyroid мышцы. Перемещение шприц к следующему мышцы интерес (боковая cricoarytenoid в данном случае) и повторите процедуру инъекции. Только прокол каждую мышцу раз.
  4. Отвести микрошприца через пять минут.
  5. Печать перерыв в фасции, используя клей VetBond ткани.
  6. После того как все инъекции были завершены, закрыть рану, используя клей VetBond ткани. В зависимости от ваших местных institional принципов использования животных, швов или раны клипов могут быть использованы.
  7. Монитор животное до грудины лежачее положение и обеспечить обезболивание, продукты питания, воду, и уход, как того требует унаши институциональные принципы использования животных.
  8. После экспериментально определенной продолжительности жизни (в данном случае, 90 ч, чтобы этикетка 2 го порядка корковых нейронов), пожертвовать животное от передозировки пентобарбитала и заливать транскардиальную 0,9% растворе с последующим 4% формальдегида в 0,1 М PBS.
  9. Снимите и пост-исправить мозг в 4% формальдегиде в течение 24 часов.
  10. Cryoprotect мозг в фосфатном буфере, содержащем 30% сахарозы, по крайней мере 48 часов.

4. Иммунохимический Обнаружение EGFP

  1. Вырезать разделы на 40 мкм на скользящей микротоме и сохранить плавающие разделов в 0,1 М PBS. Более тонкие участки, например 30 мкм, может быть использован при окраске смонтированные секции.
  2. Quench разделы для 30 мин в 0,3% H 2 O 2 в PBS, защищенных от света.
  3. Блок неспецифических антигенов в секциях в течение 30 мин в PBS, содержащий 0,3% Tween 20 с нормальной козьей сывороткой из набора Vectastain Elite (VE комплект).
  4. Инкубировать заблокирован секции в течение 3,5 ч в кроличьей анти-EGFP (1: 1,000) при комнатной температуре.
  5. Промыть секций три раза в PBS в течение 5 мин, затем инкубируют их в течение 1 часа в козьего антитела против кроличьего вторичного антитела от VE комплект при комнатной температуре.
  6. Приготовьте раствор ABC от VE комплект в соответствии с инструкциями изготовителя.
  7. Промыть секций три раза в PBS в течение 5 мин, затем реакцию их в течение 1 часа в растворе ABC от VE комплект при комнатной температуре.
  8. Промыть секций три раза в фосфатном буфере в течение 10 мин, и разработать в течение 8 мин в фосфатном буфере, рН 7,4, содержащем 0,05% DAB (3, 3'-диаминобензидин) и 0,015% H 2 O 2.
  9. Mount разделы на слайдах SuperFrost Plus и обезвоживает их через градуированной серии алкоголя (70%, 95%, 100% и 100% в течение 5 минут каждый).
  10. Очистите разделы через два ксилола моет (5 мин каждый) и покровное слайды с предметный столик Permount монтажа среды.
  11. Изображение смонтированные разделы на микроскоп. Продукт реакции DAB insidе клетки должны появиться коричневый. Оцифрованные изображения могут быть цвет инвертируется, чтобы выделить мелкие процессы.

5. Хирургическая подготовка для инъекций трассеров в мозг регионов обнаружен PRV Tracing

  1. Вызвать общий наркоз путем внутримышечной инъекции кетамина (ксилазина-100 мг / кг кетамина, 10 мг / кг ксилазина) и поддерживать соответствующий анестетик плоскости с помощью изофлуораном.
  2. Защита роговицы с Офтальмология мази.
  3. Закрепите головку в соответствующем стереотаксической рамы.
  4. Подготовка операционного поля в соответствии с асептической техники путем обрезки волос и дезинфекции сайт с чередующимися скрабы из Бетадин и 70% спирта (минимум 3 циклов).
  5. Сделайте надрез кожи головы и убрать кожу над области мозга интерес.
  6. Выполните небольшой трепанацию черепа в соответствующих стереотаксических координат. Например, координаты для laryngeally подключенного моторной коры, идентифицированной ПРВ трассировки вп взрослой мыши являются 1,2 мм боковые и 0,2 мм ростральнее брегмы.

6. Введение Биотинилированные декстран аминов в мозге

  1. Подготовьте 7,5% биотинилированных декстран амины (BDA) путем растворения 25 мг BDA (10000 МВт) в 333 мкл стерильного физиологического раствора.
  2. Загрузите систему микропипетки Nanoject II с достаточной решение BDA для запланированных инъекций.
  3. Медленно снимите мертвое пространство и убедитесь, что решение выхода микропипетки наконечник.
  4. Использование стереотаксической микропозиционированное устройство осторожно опустите кончик микропипетки в области мозга интерес и медленно вдохнуть BDA. Регулировка скорости впрыска в зависимости от размера области, чтобы быть помечены. Например, 12 инъекций 4,6 нл должно быть Сделано четырех разных местах 0,2 мм друг от друга (ростро-каудальном направлении) для покрытия laryngeally подключенного двигателя кору у взрослых мышей. Конечный объем впрыска должен быть отрегулирован в соответствии с размером области мозга интерес, Имея в виду, что этикетка может передаваться от стержневой пресс путем диффузии через ткани мозга и вдоль процессов меченных нейронов.
  5. Уплотнение трепанации черепа с помощью стоматологического цемента и закрыть рану головы, используя клей VetBond ткани.
  6. Монитор животное до грудины лежачее положение и обеспечить обезболивание, продукты питания, воду, и уход в соответствии с требованиями вашей организации принципов использования животных.

7. Инъекции токсина холеры субъединицы б в мышцы

  1. Готовят 1% холерный токсин субъединицы B (CTB) растворением 1 мг CTB в 100 мкл стерильного физиологического раствора.
  2. Через шесть дней после инъекции АРП в мозг, выполнить хирургическую Получение, как описано выше для инъекций PRV в мышцы.
  3. Загрузите 10 мкл Nanofil систему микрошприца раствором CTB, приложите 34 G иглу из нержавеющей стали, и тщательно закрепить его на стереотаксической устройства.
  4. Выполните микроинъекции в мышцу (ы), представляющие интерес, как ранее деописано для PRV.
  5. Монитор животное до грудины лежачее положение и обеспечить обезболивание, продукты питания, воду, и уход в соответствии с требованиями вашей организации принципов использования животных.
  6. Через три дня после инъекции CTB, пожертвовать животное от передозировки пентобарбитала и заливать транскардиальную 0,9% растворе с последующим 4% формальдегида в 0,1 М PBS.
  7. Снимите и пост-исправить мозг в 4% формальдегиде в течение 24 часов.
  8. Cryoprotect мозг в фосфатном буфере, содержащем 30% сахарозы, по крайней мере 48 часов.

8. Выявление BDA и CTB в те же разделы

  1. Вырезать разделы на 40 мкм на микротоме и сохранить плавающие разделов в 0,1 М PBS.
  2. Quench разделы для 30 мин в 0,3% H 2 O 2 в PBS, защищенных от света.
  3. Приготовьте раствор ABC от VE комплект в соответствии с инструкциями изготовителя.
  4. Промыть секций три раза в PBS в течение 5 мин, затем реакцию их в течение 1 часа в растворе ABC при комнатной температуре.
  5. Промыть секций три раза в фосфатном буфере в течение 10 мин, и разработать в течение 8 мин в фосфатном буфере, рН 7,4, содержащем 0,05% DAB (3, 3'-диаминобензидина), 0,015% H 2 O 2, и 0,05% хлорида никеля. Продукт реакции DAB внутри клеток должно появиться черный.
  6. Блок секции течение 30 мин в PBS, содержащем 0,3% Твин-20 с нормальной кроличьей сывороткой из набора Vectastain Elite.
  7. Инкубировать заблокирован секции в течение 2 ч в козьего антитела против CTB (1: 10000) при комнатной температуре.
  8. Промыть секций три раза в PBS в течение 5 мин, затем инкубируют их в течение 1 часа в кроличьей анти-козьего антитела из вторичного В.Е. комплект при комнатной температуре.
  9. Приготовьте раствор ABC от VE комплект в соответствии с инструкциями изготовителя.
  10. Промыть секций три раза в PBS в течение 5 мин, затем реакцию их в течение 30 мин в растворе ABC при комнатной температуре.
  11. Промыть секций три раза в фосфатном буфере в течение 10 мин, и разработать до 8 мин в фосфатном буфере, рН 7,4, содержащем 0,05% DAB (3, 3"-diaminobenzidine) и 0,015% Н 2 О 2. Продукт реакции DAB внутри клеток должно появиться коричневый.
  12. Mount разделы на слайдах SuperFrost Plus и обезвоживает их через градуированной серии алкоголя (70%, 95%, 100% и 100% в течение 5 минут каждый).
  13. Очистите разделы через два ксилола моет (5 мин каждый) и покровное слайды с предметный столик Permount монтажа среды.
  14. Изображение смонтированные разделы на микроскоп.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Окрашивание для EGFP должны начать показывать слабый сигнал в первичных двигательных нейронов примерно 72 ч после введения PRV152 в мышцы. Репликация и transsynaptic транспорт вируса titer- и зависит от времени 4. Около 90 ч после инъекции, окрашивание EGFP покажет четкого сигнала в клетках, зараженных порядка 2-го. Более длительные сроки выживаемости покажет 3-го и более высоких порядков, но клетки выживаемости ограничены летальности PRV приблизительно в 5 дней после прививки.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Есть ряд вопросов, которые должны быть приняты во внимание при планировании эксперимента, используя PRV152 4,21. Самое главное, вирус смертелен псевдобешенства. Как упоминалось ранее, приматы, включая человека, не восприимчивы к инфекции, но соответствующий необходимо проявлять осторожность, чтобы защитить других животных. Взрослые, как правило, выживают мышей от пяти до семи дней после прививки с ослабленного штамма PRV152. Таким образом, PRV152 не подходит для экспериментов, которые требуют времени выживани...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Конфликт интересов не декларируется.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мы благодарим доктора Тосио Terashima Кобе университета, Япония, для обучения технику гортани хирургии, доктор Линн и Энквист из Принстонского университета для подачи PRV-Барта. Исследование было поддержано НИЗ пионером награждения DP1 OD000448 Эриха Д. Джарвис и премии NSF Высшее исследований стипендий в Густаво Арриага. Фигуры из соответствующим зачисленных предыдущей работе используются под PLoS ONE открытого доступа Creative Commons лицензии (CC-BY), в соответствии с редакционной политики журнала.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Название реагента/материалаНомер вкаталогеКомментарии
Система микроинъекции NanoFilWorld Precision InstrumentsIO-Kit34 G опция
Стереотаксическая рамаDavid Kopf InstrumentsModel 900
Nanoject II Авто-нанолитровый инжектор DrummondScientific Company3-000-204
Скользящий микротомLeicaSM2010 R
[header]
VetBond 3M1469SB
Изофторан (форан)Baxter 
Бетадин Тампон СтикCardinal Health2130-01200 штук
Permount Монтаж СреднийFisher ScientificSP15-500
SuperFrost Plus слайдыFisherScientific 12-550-15
Биотинилированные декстрановые аминыInvitrogenD-195610 000 МВт
Вирус псевдобешенстваЛаборатория д-ра Линн Энквист (Принстонский университет)PRV152Титр >1 x 107
Антихолерный токсин B субъединица (козы)Список биологических лабораторий703
Список субъединиц холерового токсина BБиологические лаборатории103B
Anti-eGFPOpen BiosystemsABS4528
3,3'-диаминобензидинаSigma-AldrichD5905Таблетки 10 мг
ЭтанолSigma-AldrichE7023200 proof
ФормальдегидSigma-AldrichF8775Разбавленный до 4%
Перекись водородаSigma-AldrichH341030%
Кетамин HCl & Ксилазин гидрохлоридSigma-AldrichK413880 мг/мл и 6 мг/мл
Хлорид никеляSigma-Aldrich339350
Фосфатный буферSigma-AldrichP36191,0 M; pH 7,4
Фосфатный буферный физиологический растворSigma-AldrichP549310x; pH 7,4
Пентобарбитал натрияSigma-AldrichP3761доза
50 мг/млСахарозаСигма-ОлдричS9378
Подросток 20Сигма-ОлдричP1379
КсилолыСигма-Олдрич534056гистологического класса
VECTASTAIN Elite ABC KitVector LaboratoriesPK-6101 (кролик); PK-6105 (козья)
Optixcare офтальмологическая мазьVet Depot1017992
1001936060

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Card, J. P., Enquist, L. W. Transneuronal circuit analysis with pseudorabies viruses.Multiple values selected. Unit 1.5, John Wiley & Sons Inc. Hoboken, NJ, USA. Multiple values selected 1.51-1.5.28 (2001).
  2. Smith, B. N., Banfield, B. W., et al. Pseudorabies virus expressing enhanced green fluorescent protein: a tool for in vitro electrophysiological analysis of transsynaptically labeled neurons in identified central nervous system circuits. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97 (16), 9264-9269 (2000).
  3. Aston Jones, G., Card, J. P. Use of pseudorabies virus to delineate multisynaptic circuits in brain opportunities and limitations. Journal of Neuroscience Methods. 103 (1), 51-61 (2000).
  4. Pomeranz, L. E., Reynolds, A. E., Hengartner, C. J. Molecular biology of pseudorabies virus impact on neurovirology and veterinary medicine. Microbiology and Molecular Biology Reviews. 69 (3), 462-500 (2005).
  5. Brittle, E. E., Reynolds, A. E., Enquist, L. W. Two modes of pseudorabies virus neuroinvasion and lethality in mice. Journal of Virology. 78 (23), 12951-12963 (2004).
  6. Reiner, A., Veenman, C. L., Medina, L., Jiao, Y. Pathway tracing using biotinylated dextran amines. Journal of neuroscience. 103, 23-37 (2000).
  7. Reiner, A., Honig, M. G. Neuroanatomical tract-tracing 3 (Chapter 10). Dextran Amines Versatile Tools for Anterograde and Retrograde Studies of Nervous System Connectivity. 10, 304-335 (2006).
  8. Veenman, C. L., Reiner, A., Honig, M. G. Biotinylated dextran amine as an anterograde tracer for single and double labeling studies. Journal of Neuroscience Methods. 41 (3), 239-254 (1992).
  9. Rajakumar, N., Elisevich, K., Flumerfelt, B. A. Biotinylated dextran a versatile anterograde and retrograde neuronal tracer. Brain Research. 607 (1-2), 47-53 (1993).
  10. Dederen, P. J. W. C., Gribnau, A. A. M., Curfs, M. H. J. M. Retrograde neuronal tracing with cholera toxin B subunit: comparison of three different visualization methods. Histochemical Journal. 26 (11), 856-862 (1994).
  11. Hattox, A. M., Priest, C. A., Keller, A. Functional circuitry involved in the regulation of whisker movements. The Journal of Comparative Neurology. 442 (3), 266-276 (2002).
  12. Bartha, A. Experimental reduction of virulence of Aujeszkys disease virus. Magy Allatorv Lapja. 16, 42-45 (1961).
  13. Kuypers, H., Ugolini, G. Viruses as transneuronal tracers. Trends in Neurosciences. 13 (2), 71-75 (1990).
  14. Grinevich, V., Brecht, M., Osten, P. Monosynaptic pathway from rat vibrissa motor cortex to facial motor neurons revealed by lentivirus-based axonal tracing. The Journal of Neuroscience. 25 (36), 8250-8258 (2005).
  15. Miyashita, E., Keller, A., Asanuma, H. Input output organization of the rat vibrissal motor cortex. Experimental Brain Research. 99 (2), 223-232 (1994).
  16. Hsu, S. M., Soban, E. Color modification of diaminobenzidine (DAB) precipitation by metallic ions and its application for double immunohistochemistry. Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 30 (10), 1079-1082 (1982).
  17. Hsu, S. M., Raine, L., Fanger, H. Use of avidin biotin-peroxidase complex (ABC) in immunoperoxidase techniques a comparison between ABC and unlabeled antibody (PAP) procedures. Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 29 (4), 577-580 (1981).
  18. Wouterlood, F. G., Jorritsma Byham, B. The anterograde neuroanatomical tracer biotinylated dextran amine comparison with the tracer Phaseolus vulgaris leucoagglutinin in preparations for electron microscopy. Journal of Neuroscience Methods. 48 (1-2), 75-87 (1993).
  19. Altschuler, S. M., Bao, X. M., Miselis, R. R. Dendritic architecture of nucleus ambiguus motoneurons projecting to the upper alimentary tract in the rat. The Journal of Comparative Neurology. 309 (3), 402-414 (1991).
  20. Arriaga, G., Zhou, E. P., Jarvis, E. D. Of mice birds and men the mouse ultrasonic song system has some features similar to humans and songlearning birds. PLoS ONE. 7 (10), e46610(2012).
  21. Card, J. P. Practical considerations for the use of pseudorabies virus in transneuronal studies of neural circuitry. Neuroscience and Biobehavioral Reviews. 22 (6), 685-694 (1998).
  22. Zuckerman, F. A., Zsak, L., Mettenleiter, T. C., Ben Porat, T. Pseudorabies virus glycoprotein gIII is a major target antigen for murine and swine virus-specific cytotoxic T lymphocytes. Journal of Virology. 64 (2), 802-812 (1990).
  23. Card, J. P., Enquist, L. W., Moore, R. Y. Neuroinvasiveness of pseudorabies virus injected intracerebrally is dependent on viral concentration and terminal field density. The Journal of Comparative Neurology. 407 (3), 438-452 (1999).
  24. Pickard, G. E., Smeraski, C. A., et al. Intravitreal injection of the attenuated pseudorabies virus PRV Bartha results in infection of the hamster suprachiasmatic nucleus only by retrograde transsynaptic transport via autonomic circuits. The Journal of Neuroscience. 22 (7), 2701-2710 (2002).
  25. Smith, G. A., Gross, S. P., Enquist, L. W. Herpesviruses use bidirectional fast axonal transport to spread in sensory neurons. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 98 (6), 3466-3470 (2001).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

BDAB

Похожие статьи