Методика пересадки "Экстремальный Передней домен" лицевой ткани между Xenopus Laevis эмбрионы была разработана. Ткань может быть перемещен из одного гена фоне выражения в другую, что позволяет изучение местных требований к черепно-лицевого развития и для взаимодействия между регионами лица сигнализации.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Трансплантация лица в
* These authors contributed equally
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Черепно-лицевые врожденные дефекты встречаются в 1 из каждых 700 родившихся живыми, но этиология редко известны в связи с ограниченным пониманием черепно-лицевого развития. Чтобы определить, где сигнальные пути и тканей действовать во паттерна развивающихся лице, методика "пересадка лица" была разработана в зародышах лягушки Xenopus Laevis. Область предполагаемого лицевой ткани («Экстрим Передняя Domain" (ЕАД)) удаляется из донорской эмбриона на стадии хвостовой почки, и пересадить к хост эмбриона одной сцене, из которого эквивалентна область была удалена. Это может быть использовано, чтобы генерировать химерный лицо, где хозяин или донор ткани имеет потерю или усиление функции в гене, и / или включает метку линии. После заживления, исход развития контролируется, и указывает роли сигнального пути в донора или окружающих тканях хозяина. Xenopus является ценным образцом для развития лица, так как регион лица большой и легкоccessible для микроманипуляций. Многие эмбрионы могут быть проанализированы, в течение короткого периода времени, так как развитие происходит быстро. В ходе проверки этой лягушки актуальны для развития человека, так как черепно-лицевые процессы появляются сохраняется между Xenopus и млекопитающих.
Введение
Чтобы понять механизмы, лежащие черепно-лицевые врожденные дефекты 1-2, важные ткани и их сигнальные взносов в течение черепно-лицевого развития должны быть определены. В лягушка Xenopus Laevis, части лица, в том числе полости рта и ноздрей форме от "Extreme Передняя Domain" (EAD), где эктодерма и энтодерма непосредственно примыкающего 3-4. EAD также действует как центр сигнализации влиять окружающие ткани, в том числе черепа нервного гребня, который образует челюсти и другие области лица 5. Чтобы идентифицировать гены, которые способствуют функции EAD, методика «пересадка лица" был разработан, где ткань пересаживается от дон....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
1. Подготовка Реагенты
- 10x MBS: Подготовка 1 л 10x Modified Соленая Барта (MBS) решение 17. См. Таблицу 1, Реагенты, ингредиентов и инструкциями. Используйте дистиллированную воду для всех решений. Смешайте в стакане, используя мешалку, до полного растворения. Все растворы должны быть сделаны при комнатной температуре.
- 1x MBS: Развести 100 мл 10x MBS решения в 900 мл дистиллированной воды, чтобы сделать 1 л 1x MBS. Добавить 0,7 мл 1 М раствора CaCl 2.
- 0.1x MBS: Разбавьте 1x MBS по подготовке 1 л 0.5x MBS решения и 2 л 0,1 × MBS решения. К 1 л раствора 0,1 × MBS, добавляют 1 мл 10 мг / мл гентамицин....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Пересаживают ткань должна быть полностью вставлена в принимающей головы после трансплантации, как показано на рисунке 3А, и есть стеклянная мост надлежащим размещены на лице эмбриона, как показано на рисунке 2bc. Пересадить донорскую ткань должна быть правильно рассчитана на принимающей открытия, для трансплантации, чтобы быть успешным. EAD ткани не должны выступать из головки, в любом случае, как показано на фиг.3В и 3С. Кроме того, пересадка лица не.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Критические шаги и ограничения: Процедура трансплантации лица ЕАД время и работать интенсивно. Это требует практики, устойчивые руки, и ловкость, чтобы усовершенствовать. Протокол пересадка лица зависит от способности исследователя эффективного удаления и пересадки тканей. Если взять слишком долго, чтобы вставить пересадку в лицо хозяина, хозяин лицо начнет сжиматься и исцелять. Пинцет может быть использован для деликатно расширить область лица. Однако, если значительная рана сокращение произошло, пересадка будет.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы не имеют ничего раскрывать.
Благодарности
Мы благодарим Radek Šindelka за помощь и Cas Bresilla для оказания помощи с лягушкой хозяйства и подготовки эмбриона. Эта работа финансировалась NIH через грант R01DE021109 к HLS Лаура Jacox финансировалось Гершель Смит стипендий в Гарвардском университете и F30 индивидуальный стипендии, F30DE022989-01 через NIDCR.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Дозатор | Пастер VWR | 14672-400 | Известковое стекло |
| Размер 5 3/4 в | хлопчатобумажной | ||
| градуированной трансферной пипетке | VWR | 16001-180 | одноразовый |
| #5/45 щипцы | Fine Science Tools от Dupont medical | 11251-35 | Угловые 45° |
| Щипцы стандартного образца | Fine Science Tools | 11000-20 | Прямые; зубчатый наконечник; |
| капиллярная трубка из нержавеющей стали (для игл) | FHC | 30-30-1 | Borosil 1,0 мм OD x 0,5 мм ID/ |
| Fiber Cover slip | VWR | 48393 252 | 24 x 60 мм микрозащитное стекло; |
| Ficoll 400 | Sigma-Aldrich | F9378 | |
| Съемник игл | Sutter Instrument Co | Needle Puller: снято с производства Нить: FB300B | Наиболее похожим, доступным в настоящее время иглосъемником является P-97. Для филаментов используйте квадратные коробчатые филаменты Sutter 3,00 мм шириной 3,0 мм. |
| Модель P-80 | Flaming / Brown micropipette puller | ||
| Стереомикроскоп | Zeiss | ||
| Стереомикроскоп Освещение от Fostec | Fostec | Используйте световой короб с 2 волоконно-оптическими рукавами. | |
| Никелированный держатель штифта | Fine Science Tools | 26018-17 | Диаметр отверстия губки: 0-1 мм |
| Moria Никелированный держатель штифта | Fine Science Tools | 26016-12 | Диаметр отверстия губки: 0-1 мм |
| Вольфрамовые иглы | Fine Science Tools | 10130-05 | 0,125 мм Диаметр стержня |
| Van Aken Plastalina | Blick | #33268-2981 | |
| Пластилин для лепки - белый, красный или желтый | |||
| mMessage mMashine SP6 или T7 Kit | Ambion | AM1340 |
Ссылки
- Gorlin, R. J., Cohen, M., Levin, L. Syndromes of the head and neck. , Oxford University Press. UK. (1990).
- Trainor, P. Craniofacial birth defects: The role of neural crest cells in the etiology and pathogenesis of Treacher Collins syndrome and the potenti....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
