Дитранол в качестве матрицы для матрицы лазерной десорбцией / ионизацией изображений на преобразования Фурье ионного циклотронного резонанса Масс-спектрометр

Summary

Дитранол (DT; 1,8-дигидрокси-9 ,10-dihydroanthracen-9-он) Ранее сообщалось, как MALDI матрицы для тканевой визуализации малых молекул; протоколы для использования DT для MALDI изображений эндогенных липидов на Поверхность срезов ткани по положительных ионов MALDI-MS на сверхвысокого разрешения квадрупольного FTICR инструмента приведены здесь.

Abstract

Масс-спектрометрия томография (MSI) определяет пространственной локализации и распределения, соединений на поверхности раздела тканей, в основном, с помощью MALDI (матрица с лазерной десорбцией / ионизацией) на основе аналитических методов. Новые матрицы для низкомолекулярных MSI, которые могут улучшить анализ низкомолекулярных (MW) соединений, необходимы. Эти матрицы должны обеспечивать расширение сигналы анализируемого при снижении MALDI фоновые сигналы. Кроме того, использование инструментов сверхвысокого разрешения, таких как преобразования Фурье ионный циклотронного резонанса (FTICR) масс-спектрометры, имеет возможность разрешить анализируемого сигналы от матрицы сигналов, и это может частично преодолеть много проблем, связанных с фоном происходящих из MALDI матрица. Снижение интенсивности метастабильных матричных кластеров FTICR MS может также помочь преодолеть некоторые из помех, связанных с матричными пиков на других инструментах. С высоким разрешениеминструменты, такие как масс-спектрометров FTICR выгодны, поскольку они могут распределительные модели многих соединений одновременно, обеспечивая при этом уверенность в химических идентификаций. Дитранол (DT; 1,8-дигидрокси-9 ,10-dihydroanthracen-9-он) Ранее сообщалось, как MALDI матрицы для визуализации тканей. В этой работе, это протокол для использования DT для MALDI изображений эндогенных липидов с поверхности секций млекопитающих ткани, по положительных ионов MALDI-MS, на гибридном квадруполе сверхвысокого разрешения была предоставлена ​​FTICR инструмент.

Introduction

Масс-спектрометрия томография (MSI) представляет собой аналитический метод определения пространственной локализации и распределения, соединений на поверхности раздела тканей ^1,2. Матрица лазерной десорбцией / ионизацией (MALDI) MSI для анализа пептидов и белков была использована уже более десяти лет и были значительные улучшения в методах подготовки образца, чувствительность обнаружения, пространственным разрешением, воспроизводимости и обработки данных ^3,4. Объединив информацию из гистологически окрашенных срезов и MSI экспериментов, патологоанатомы могут соотнести распределения конкретных соединений с патофизиологически интересных особенностей....

Protocol

1. Ткань Секционирование

1. Флеш-заморозить выпуск образцов, После уборки урожая, с использованием жидкого азота, грузить их на сухом льду (если требуется доставка), а не хранить их при -80 ° С до ткани срезов. (Если коммерческие образцы используются, убедитесь, что образцы, приготовленные таким образом).
2. Вырезать органы до приемлемого размера, чтобы соответствовать MALDI цель. Аккуратный от любых нежелательных частей органа. Для этого исследования, описанного здесь, телячьей линзы декапсулируется с использованием ранее описанной процедуры ³⁵ до тканей срезов.
3. Удалить целые органы от -80 ° C морозильник и исправить их на криоген....

Results

Образцы тканей, которые секционные и установлены оттепель на ИТО, покрытых стеклах должны быть неповрежденными, без видимого разрыва. Для многих тканях, прямой ткани оттепель монтажа на Ито покрытием стекло является приемлемым. Для некоторых конкретных тканей, таких как бычий линзы, обширные разрывы ткани часто видно, когда прямое оттепель монтажа используется (рис. 1а). Предварительное покрытие из предметное стекло ITO с этанолом или муравьиной кислоты (рис. 1b) помогает поддерживать ц.......

Discussion

Наиболее важными факторами для успешной MALDI MSI являются: 1) подготовка тканей; 2) выбор матрицы; 3) матричное применение; и 4) интерпретация и анализ данных. Когда образец и матрица подготовлены надлежащим образом, сбор данных МС автоматизируется. Анализ данных такого рода экспериментов достаточно трудоемкий.

Надлежащая подготовка тканей имеет решающее значение для успешных экспериментов MALDI MSI. Источник ткани и способ обработки могут оказать большое влияние на окончательный анализ. Обра.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Печень крысы	Pel-Freez Biologicals	56023-2
Хрусталик крупного рогатого скота	Pel-Freez Biologicals	57114-2	Образец следует декапсулировать29 перед применением
Dithranol (DT)	Sigma-Aldrich	10608	MALDI Matrix
α-Циано-4-гидрокси-коричная кислота (CHCA)	Sigma-Aldrich	70990	MALDI Matrix
2,5-дигидроксибензойная кислота (DHB)	Sigma-Aldrich	85707	MALDI Matrix
Резерпин	Sigma-Aldrich	83580
Терфенадин	Sigma-Aldrich	T9652
Муравьиная кислота	Sigma-Aldrich	14265
Формиат аммония	Sigma-Aldrich	14266
Гидроксид аммония	Sigma-Aldrich
Трифторуксусная кислота (ТЖК)	Сигма-Олдрич	302031
вода	Сигма-Олдрич	39253
Метанол	Сигма-Олдрич	34860
Ацетонитрил	Сигма-Олдрич	34967
Этилацетат	Сигма-Олдрич	34972
Изопропанол	Sigma-Aldrich	34965
Хлороформ	Sigma-Aldrich	366927
Ацетон	Sigma-Aldrich	34850
Этанол	Коммерческие спирты		95%
ES Смесь для тюнинга	Agilent Technologies	G2431A
Стекло с покрытием ITO Hudson	Surface Technology	PSI1207000	Убедитесь, что образцы размещены на электропроводящей стороне
Wite-Out Shake-N-Squeeze Correction Pen	Bic	WOSQP11
Распылитель аэрографа	Iwata	Eclipse HP-CS
ImagePrep	Bruker	249500-LS
MALDI адаптер	Bruker	235380