Методическая статья

Методы модуляции и анализа NF-kB-зависимой нейрогенез

DOI:

10.3791/50870

⸱

13 февраля 2014 г.

 ,  ,  ,  ,  , 
1Cell Biology, University of Bielefeld, 2Molecular Neurobiology, University of Bielefeld

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Методы манипуляции и анализа NF-kB-зависимой взрослых гиппокампа нейрогенеза описаны. Подробный протокол представлен на зубчатой ​​извилине зависит от поведения теста (называется пространственной структуры разделения-Barnes лабиринт) для исследования когнитивного тестирования на мышах. Эта техника также должна помочь разрешить исследования в других экспериментальных установок.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Гиппокамп играет ключевую роль в формировании и консолидации эпизодических воспоминаний, и в пространственной ориентации. Исторически сложилось, что взрослый гиппокамп был просмотрен как очень статического анатомической области мозга млекопитающих. Тем не менее, последние данные показали, что зубчатая извилина гиппокампа является областью огромной пластичности у взрослых, с участием не только модификации существующих нейронных цепей, но и нейрогенез. Эта пластичность регулируется сложных транскрипционных сетей, в которых фактор транскрипции NF-kB играет важную роль. Для изучения и манипулировать нейрогенез, трансгенного модель мыши для переднего мозга конкретных нейронов ингибирования NF-kB деятельности могут быть использованы.

В этом исследовании, способы описаны для анализа NF-kB-зависимой нейрогенеза, в том числе его структурных аспектов, нейронов апоптоза и пролиферации предшественников и познавательного значения, whicч была специально установлена ​​с помощью зубчатой ​​извилине (DG)-зависимого теста поведенческой, пространственная модель сепарации-Барнс лабиринт (SPS-БМ). Протокол SPS-БМ может быть просто адаптированы для использования с другими трансгенных животных моделях, предназначенных для оценки влияния определенных генов на взрослого гиппокампа нейрогенеза. Кроме того, SPS-BM могут быть использованы в других экспериментальных условиях, направленных на изучение и манипулирования DG-зависимую обучения, например, с использованием фармакологических агентов.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Онтологически, гиппокамп является одним из старейших анатомических структур мозга известных. Он отвечает за различные сложных задач, таких как ключевых функций в регулировании долговременной памяти, пространственной ориентации, а также формирования и консолидации соответствующей памяти. Анатомически, гиппокампа состоит из пирамидальных слоев клеток (слой pyramidale), включая Корню Ammonis (СА1, СА2, СА3 и CA4) регионов и зубчатой ​​извилине (извилина Dentatus), который содержит гранулы клетки и несколько нейронных клеток-предшественников в пределах своей субгранулярной зоне . ЗК проецировать к области СА3 через так называемые моховых волокон (аксоно....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Заявление Этика

Это исследование было проведено в строгом соответствии с нормативно-правовыми актами правительства животного и аккуратно обращайтесь комитета, LANUV государственной Северный Рейн-Вестфалия, (Дюссельдорф, Германия). Все эксперименты на животных были утверждены LANUV, Дюссельдорф, номер лицензии 8.87-51.04.20.09.317 (LANUV, NRW). Все усилия были предприняты, чтобы минимизировать стресс и количество животных, необходимых для исследования.

1. Уход животных и жилищного

  1. Все животные, используемые в протоколах, описанных здесь, должны находиться под конкретного патогена условиях, как определен....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Скрещивание из IκB / - и TTA трансгенных линий мышей приводит к условной ингибирования NF-kB активности в гиппокампе.

Чтобы исследовать экспрессию IκBα-AA1-трансгена в двойной трансгенной мыши (фиг.1А), мозги были изолированы, cryosectioned и окрашивали с использованием антитела против GFP (зеленый флуоресцентный белок). Конфокальной лазерной сканирующей микроскопии показало высокую экспрессию трансгена в СА1 и СА3 регионах и в ГД (фиг.1В). .......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Взрослый нейрогенез, а также возможность его манипуляции через ингибирование NF-kB в нейронах, и его последующего возобновления через доксициклин, предлагает увлекательные систему для расследования новорожденных нейронов в головном мозге взрослых, а также в нейронной де-и повторного поколения . Красота этой системы является то, что NF-kB сигнальный путь торможения в нейронах приводит не только к изменениям в гибели нейронов, пролиферации предшественников и миграции, и серьезными структурными и анатомических изменений, н.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы заявляют, что они не имеют никакого конфликта интересов.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мы благодарим Ангела Kralemann-Келера за отличную техническую поддержку. Экспериментальная работа описано здесь проводили в нашей лаборатории и была поддержана грантами немецкого исследовательского совета (DFG) в СК и ВК и гранта немецкого Министерства науки и образования (BMBF) в БК.

....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Moria MC17 Перфорированная ложка FST10370-18Удаление мозга
Препарирующий микроскопCarl ZeissStemi SV8Удаление мозга
Хирургические ножницы FST14084-08Удаление головного мозга
Хирургические ножницы FST14381-43удаление мозга
Дюмон #5 щипцыFST11254-20удаление мозга
SuperFrost СлайдыКарл Рот1879слайды для иммуногистохимии
ПараформальдегидSigma-AldrichP6148фиксирующий
TissueTek ОКТ-соединениеSakura Finetek1004200018встраивание в мозг
Нормальная козья сывороткаJackson Immunolabs005-000-001блокирование в ИГХ
Нормальная сыворотка кроликаJackson Immunolabs011-000-001блокирование в ИГХ
Нормальная ослиная сывороткаJackson Immunolabs017-000-001блокирование в ИГХ
анти-Нейрофиламент-М антителаИсследования развития Hybridoma Bank2H3IHC, разведение 1:200
анти-Даблкортин  антителоsc-8066Santa CruzIHC, разведение 1:800
антитело против GFPAbcamab290IHC, разведение 1:2,000
антитело против BrdUOBT0030GAccurate ChemicalsIHC, разведение 1:2,000 
Фтор-Нефрит CFJ-CHistoChemОпределение гибели нейрональных клеток
БетадинМундифармаD08AG02дезинфицирующее средство
КриомикротомLeicaCM1900препарат для срезов мозга
Гепарина и натрия сольСигма-ОлдричH3393перфузия
Круглая пластина из твердого пластика (диаметр 120 см)Сделанов лабораторииПластина для СПС-БМ, диаметр 120 см
Буратон быстрое дезинфицирующее средство Schü lke Mayr113 911дезинфицирующее
средство Система видеослежения TSE VideoMot 2 с программным комплексом VideoMot2TSE Systems302050-SW-KITслежение и анализ SPS-BM
Triton X-100 Sigma AldrichT8787пермеабилизация/IHC
CryotomeReichert Jung/LeicaFrigomobil 1206препарат из 40 & микро; m срезы мозга
Mowiol 4-88Carl RothArt.-Nr. 0713встраивание слайдов
SYTOX greenInvitrogenS7020Ядерное окрашивание
пищевых гранул (Kellog's Froot Loops)Kellog'sSPS-BM
Prism, версия 3.0Graph Pad Software, Сан-Диего, СШАСтатистическая оценка программного обеспечения SPS-BM
Zen 2008 или Zen 2011Программное обеспечение Carl Zeiss(конфокальный микроскоп)
D.P.XSigma-Aldrich317616монтажная среда для окрашивания фторнефритовым C

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Gutierrez, H., Davies, A. M. Regulation of neural process growth, elaboration and structural plasticity by NF-kappaB. Trends Neurosci. 34, 316-325 (2011).
  2. Imielski, Y., et al. Regrowing the adult brai....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

NF kappa BAdult NeurogenesisSpatial Pattern SeparationBarnes MazeConfocal MicroscopyHistological AnalysisTransgenic MiceDentate GyrusBehavioral TestingImmunofluorescence Staining

Похожие статьи