Методическая статья

Выращивание нервные стволовые клетки из обычных и нетрадиционных областях мозга взрослых грызунов

11.9K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/50880

⸱

18 ноября 2013 г.

 , 
1Department of Medicine, University of Dresden, 2Center for Regerative Therapies Dresden

В этой статье

Краткое содержание

Нервные стволовые клетки, полученные от взрослого мозга увеличиваются используются в приложениях, начиная от фундаментальных исследований развития нервной системы к изучению потенциальных клинического применения в регенеративной медицине. Это делает строгий контроль в изоляции и культивирования условиях используются для выращивания этих клеток критические звучать экспериментальные результаты.

Аннотация

Последние работы показывает, что центральная нервная система (ЦНС) регенерация и туморогенез включает популяции стволовых клеток (SCS) резидентов в взрослом мозге. Однако механизмы эти обычно покоящиеся клетки используют для обеспечения надлежащего функционирования нейронных сетей, а также их роль в восстановлении от травмы и смягчения нейродегенеративных процессов мало понятны. Эти клетки находятся в регионах называемые "ниши", которые обеспечивают поддержание производства среды с участием модулирующие сигналы от обоих сосудистой и иммунной систем. Изоляция, техническое обслуживание, и дифференциация ЦНС СК при определенных условиях культивирования, которые исключают неизвестные факторы, делает их доступными для лечения фармакологическими или генетических средств, обеспечивая тем самым понимание их поведения в естественных условиях. Здесь мы предлагаем подробную информацию о методах генерации культуры ЦНС СК из различных регионов мозга взрослого человека и подходов для оценки их дifferentiation потенциал в нейроны, астроциты и олигодендроциты в пробирке. Эта методика дает гомогенную популяцию клеток как монослойной культуре, которые могут быть визуализированы изучать индивидуальный СКС и их потомство. Кроме того, он может быть применен в различных животных моделях и клинических образцах, используемого ранее для прогнозирования регенеративные реакции в поврежденной взрослой нервной системы.

Введение

Центральная догма нейробиологии, заложены фундаментальные наблюдений цитоархитектуры мозга, сделанного Рамон Ю. Cajal более века назад, постановил, что нейрогенез вряд после подростковый учитывая сложность нейронных сетей, находящихся в ЦНС 1. Несмотря на работу Альтмана в 1960, и позже Каплан, демонстрируя, что 3 Н-тимидина можно найти в зрелые нейроны, указывающих, что на самом деле были генерируется нейроны в различных областях мозга взрослого человека, догма продолжали удерживать 2, 3. Доказательства продолжали расти с исследованиями Ноттебом, описывающие сезонные изменения числа нейронов, присутствующих в певчих птиц мозг 4. Он не был до 1999 года, когда Гулд и др.. Опубликованная работа по генерации нейронов в гиппокампе увеличивается с выполнением ассоциативных учебных задач у крыс, а также наблюдениям Kornack и Rakić демонстратин продолжал нейрогенез во взрослом макаки, ​​что понятие менее жесткой, более пластиковой мозга, был признан 5, 6.

Поиск сотового источника для этих De Novo, генерируемых нейронами привести к открытию дискретного населения стволовых клеток (ПК), которые находятся в областях мозга, называют ниши 7. Субвентрикулярной зоне и суб гранулированный зона гиппокампа считаются двумя основными нейрогенные регионы 8,9. Клетки, выделенные из этих мест отобразить классический характеристику эмбриональным, полученных СК, самообновление и дифференцировку потенциал. В случае нервных стволовых клеток (НСК), они могут быть дифференцированы в нейроны, астроциты и олигодендроциты,. Кроме того, эти СК пятно положительным для плода маркеров, таких как NSC промежуточного нестина белка нить 10. Более поздние работы подчеркивается, что СК не могут быть ограничены эти тWO областей, и на самом деле локализованы по всему мозгу, как в значительной степени покоя популяции клеток плотно связанных с сосудистой 11.

Наблюдения, которые СК будут мобилизованы в ответ на повреждение предполагает возможность быть в состоянии использовать эти клетки для восстановительных целей, чтобы помочь в восстановлении от нейродегенеративных расстройств и инсульта 12, 13. Это мало чем отличается от той роли, которую мезенхимальные стволовые клетки (МСК), играть в исцелении соединительной ткани, которые находятся как периваскулярных клеток, которые имеют потенциал, чтобы стать остеобласты, хондроциты, и жировые клетки 14. Тем не менее, NSCs не могут быть собраны таким же образом, как МСК из костного мозга путем рутинного аспирации и градиент плотности методами центрифугирования, а затем использованы в аутологичных клеток на основе терапии. Как следствие, другие источники клеток, таких как использование фетальных НСК или нейрональных предшественников, полученных из набryonic стволовые клетки были широко изучены при болезни животных и моделей травмы с разной степенью успеха 15. Индуцированные технологии плюрипотентных стволовых клеток, использующие соматические источники клеток Предлагаю другую потенциальную возможность для получения терапевтически полезных клеточной терапии для широкого спектра приложений, преодолевая ограниченную доступность и этические проблемы, касающиеся использования эмбриональных клеток и тканей плода 16. Однако клинический перевод этих результатов оказалась трудной задачей, как показано в борьбе лечения различных неврологических заболеваний с SC-основе терапевтических подходов 17,18, а также извилистый путь к нормативной оформления. В качестве альтернативного подхода, внедрение конкретных фармакологического лечения может модулировать номера НСК и содействия восстановлению в моделях болезни Паркинсона и инсульта 19. Какой бы ни была стратегия может быть, понимание того, как эффективно манипулировать эти клеткитребуется доступную систему в пробирке.

Культуры НСК может быть выполнена либо в виде совокупности культур, также известный как нейросферы, или в виде монослоя 8,20. Оба метода широко используются, что позволяет для создания определенных условиях культивирования, т.е. использования эпидермального фактора роста (EGF) или основной фактор роста фибробластов (BFGF) в качестве источника митоген, которые предоставляют для расширения мультипотентными прекурсоров. В то время как нейросфера культуры могут быть лучше подходит для изучения клональную возможность распространения изолированной типа клеток, система, как было показано производить смешанную популяцию клеток в процессе расширения 21. Кроме того, закрытая структура нейросферы делает фармакологическая манипуляция клеток непрактично, а интерпретация влияния этих факторов может иметь может быть посрамлены из-за микросреды, созданной в самой нейросфера. Однослойные культуры, с другой стороны, может бытьзанятых в высокой пропускной экранах небольших библиотек молекул, что является мощным инструментом для изучения механизмов передачи сигналов, которые регулируют рост SC и дифференцировку и открывает возможность открыть для себя новые соединения, которые специально направлены эту популяцию клеток.

Как следствие, способность генерировать воспроизводимо культур взрослых НСК из различных регионов интереса в головном мозге может быть использован в широком спектре применений исследования, начиная от исследований в развитии центральной нервной системы (ЦНС), чтобы исследовать новые подходы регенеративной медицины . Протокол, представленные здесь показано, как препарировать и оценить дифференциацию потенциал ЦНС СК, выделенных из мозга взрослых грызунов.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Работа придерживается Декларации Helsinski и животных Заявление ARVO. Животные были использованы для сбора ткани и наблюдались все соответствующие методы в соответствии с инструкциями на объекте животных в Университете Дрездена. Животные были обработаны и размещены в соответствии с немецкими Федерального руководства по использованию и уходу за лабораторными животными, и исследование было одобрено Landesdirektion Дрездене. Пожалуйста, проконсультируйтесь с ветеринарным политики вашей организации (IACUC или другой платы) в отношении соответствующей методологии эвтаназии.

Удельный акции и рабочих концентрации реагентов можно найти в реагент таблицах, сопровождающих этот протокол.

1. Культура Блюдо Подготовка

  1. Пальто блюда с достаточным объемом 75 мкг / мл поли-L-орнитин (т.е. 2 мл / лунку 6-луночный планшет) в течение ночи в инкубаторе для клеточных культур за 2 дня до запланированной даты вскрытия.
  2. Аспирируйте поли-L-орнитин на следующий день и мыть каждую лунку 2x 3 мл PBS в течение 5 мин.
  3. Удаление последней промывки, а затем добавить фибронектин (разбавленного 1:250, 4 мкг / мл в PBS) к пластине и поместить посуду в инкубаторе на ночь.
  4. Аспирируйте фибронектин в день вскрытия и мыть посуду 2x с PBS. Вернуться тарелки, все еще содержащие окончательный PBS мыть в инкубатор, пока диссоциированный ткань не готов к культивирования. В то время, удалить PBS до посева ткани.
  5. Храните пластины, покрытые поли-L-ornithinein инкубатор на срок до 3 недель. Пластины, покрытые фибронектином можно хранить в течение до 1 недели. Фибронектин покрытие может быть сделано в качестве лишь 2 часа если срочно. Фибронектин восприимчив к денатурации; не агитирую решение или пусть блюда высохнуть.

2. Вскрытие / Покрытие

  1. Этот протокол применяется к использованию 3 взрослых крыс (3-6 месяцев от роду).
  2. Чилл мозг секционирования блок на льду до эвтаназии крысу.
  3. Поместите 15 мл трубки сокола, который содержит 5 мл N2 среде с добавлением BFGF на льду.
  4. Усыпить крыс в соответствии с ветеринарной политики вашей организации.
  5. Удалить мозг от черепа, делая разрез вниз по средней линии головы. Используйте пинцет, чтобы отделить от кости, позволяющий для мозга должны быть тщательно извлечены.
  6. Поместите мозг в блюдо 10 см Петри, содержащую лед холодной PBS. Это будет удалить остатки волос и крови. (Рис. 1А)
  7. Поместите мозг в охлажденной секционирования блока. (Рис. 1В)
  8. Вставьте один новый чистый лезвие в блок как изображено на рисунке 1С.
  9. Вставьте вторую чистым лезвие 3 мм каудально к первым, как показано на рисунке 1D.
  10. Осторожно поднимите лезвия из блока, взяв с собой секции по интересам.
  11. Float Комиссию по ценным бумагамния от лезвия, погружая его в PBS. (Рис. 1E)
  12. Урожай ткани из области интересов (в данном примере мы использовали передняя спайка, (передняя) ACA, Фигурное 1f), используя # 5 щипцы и собирать в 15 мл коническую трубку с 1 мл N2 среду, содержащую BFGF.
  13. Перемещение трубки в клетки ламинарный поток капот культуры, продолжая оставшуюся часть протокола в стерильных условиях.
  14. Механически отделить ткань с помощью пипетки на 1 мл, прикрепленный к P1000 пипетки. Пипеток вверх и вниз несколько раз (приблизительно 20x со скоростью 1 пипетирования цикл в секунду) при нажатии на открытие наконечника пипетки на дно конической трубе (рисунки 1G 1-3). Остановить растирание, когда решение станет однородной.
  15. Разрешить решение сидеть в течение 2 мин, чтобы позволить любому больше недиссоциированном ткань оседают на дно. (Рис. 1G 4)
  16. Соберите однороднаяEOUs супернатант и поместить в коническую пробирку, содержащую 8,5 мл N2 массовой информации, плюс 20 нг / мл оФРФ, 500 нг / мл Dll4, 500 нг / мл ANG2 и 200 nMJAK ингибиторы.
  17. Пластинчатый их в три лунки 6-луночного планшета с использованием 3 мл разбавленного раствора клеток / лунку.
  18. Место пластины в увлажненном инкубаторе клетки при 37 ° С, 5% СО 2, 5% O 2.

3. Ежедневный уход

  1. Замените носитель на чашек для культивирования с N2 среде, содержащей BFGF, ANG2, Dll4 и JAK ингибитора 24 ч после посева.
  2. Добавить болюс BFGF, Dll4, Ang2 и ЯК ингибитора на следующий день.
  3. Продолжайте этот переменный процесс смены носителя и дополнений факторов в общей сложности 10-14 дней.

4. Индукции дифференцировки

  1. Вывод BFGF, Dll4, ANG2 и JAK ингибитор, содержащий среду и заменить его N2 среды, не содержит никаких дополнительных факторов.
  2. Изменение среды каждый второй день.
  3. Fix клетки через 10 дней и выполнять иммуноцитохимии.

5. Иммуноцитохимическая Обнаружение

  1. Аспирируйте среду и исправить культуру, живущую клеток с 2 мл 4% параформальдегида в течение 20 мин.
  2. Вымойте 2x 3 мл PBS в течение 5 мин каждый.
  3. Аспирируйте PBS, а затем проницаемыми и блокировать клетки путем добавления 2 мл PBS, содержащего 5% нормальной сыворотки осла (NDS) и 0,1% Triton X-100 в течение 20 мин.
  4. Подготовьте смесь первичного антитела в PBS, содержащий 5% NDS. Анти-нестин антитела могут быть использованы для идентификации СКС, в то время как TUJ1 (класс III β-тубулина), GFAP и CNPase антитела могут быть использованы вместе для тройного окрашивания маркеров дифференцировки.
  5. Аспирируйте блокирующий раствор и добавить 1,5 мл смеси первичного антитела в каждую лунку. Инкубируют при комнатной температуре в течение 90 мин.
  6. Извлеките первичных антител и мыть 2 раза 3 мл PBS, и 1x 3 мл PBS, содержащего 5% NDS в течение 5 мин каждый.
  7. Подгое вторичные антитела в PBS, содержащем 5% NDS.
  8. Аспирируйте последней промывки и добавить 1,5 мл раствора вторичного антитела в каждую лунку. Инкубируют в темноте в течение 40 мин при комнатной температуре.
  9. Удаление раствора вторичного антитела и добавляют 2 мл свежеприготовленного DAPI пятна (500 нг / мл в PBS). Инкубировать в течение 3 мин.
  10. Аспирируйте раствор DAPI затем промыть 3 раза 3 мл PBS в течение 5 мин каждый. Клетки теперь могут быть визуализированы с помощью флуоресцентного микроскопа.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Выявление область интереса, из которого собрать нервные стволовые клетки является важным первым шагом, и будет определять количество времени, которое требуется, чтобы получить сливающийся тарелку клеток. Например, SVZ является классическим нейрогенный площадь и, следовательно, имеет более высокую относительную долю нервных стволовых клеток. Однако метод, представленный здесь может быть использован с другими областями не часто распознаются как надежные нейрогенный потенциал в зрелом возрасте. Для целей настоящего протоко...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Многие шаги, важных для успешного изоляции, расширения и дифференциации нервных стволовых клеток из мозга взрослого человека являются общими общего с стандартными методами культивирования тканей. Цель иметь в виду, является то, что НСК, выделенные из мозга взрослого человека должны поддерживать как многие из их естественных условиях характеристик в, как это возможно (рис. 2J). Часто баланс между необходимой осторожностью и соответствующей скорости должен быть поражен. Уход с выделением...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Нам нечего раскрывать.

Благодарности

Эта работа финансировалась (частично) Гельмгольца Альянс ICEMED - визуализации и отверждения окружающей среды метаболических заболеваний в рамках инициативы и сети Фонда имени Гельмгольца, грантом Else Kroener-Fresenius Foundation, и гранта от Deutsche Forschungsgemeinschaft ( SFB 655: Клетки в тканях).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
6-луночные чашки для культивирования тканейBD Biosciences353934
поли-L-орнитинаSigma-AldrichP-3655 <>5 мг/мл стокового раствора, приготовленного в воде двойной дистилляции (Стабильно в течение нескольких месяцев при -20°; В). <>Рабочая концентрация 0,5 мг/мл в воде (Стабильная в течение 1 месяца при 4°; C).

ФибронектинR& D Systems1030-FnНе перемешивать стоковый раствор
Фильтрационный аппаратCorning Life Sciences430769
DMEM/F-12Mediatech10-090-CVСмотрите примечание ниже для полного приготовления среды N2
Апо-трансферринSigma-AldrichT-2036
ИнсулинSigma-AldrichI-0516
ПутресцинSigma-AldrichP-57801 М стоковый раствор в ddH2O (Стабильный при 20 &d; С в течение 6 месяцев)
Селенит натрияSigma-AldrichS-5261500 &микро; M стоковый раствор в ddH2O (Стабильно при -20 °°; С в течение 6 месяцев)
ПрогестеронСигма-ОлдричP-8783100 &; М стоковый раствор в этаноле (Стабильно при -20°; C в течение 6 месяцев)
Пенициллин/стрептомицинInvitrogen15140-122
Фосфат Буферизованный Физиологический РастворMediatech21-040-CV
Основной фактор роста фибробластов (bFGF)R& D Systems233-FBРабочая концентрация 20 нг/мл 
Delta4 (Dll4)R& D Systems1389-D4Рабочая концентрация  500 нг/мл
Ангиопоэтин 2 (Ang2)R& D Systems623-ANРабочая концентрация  500 нг/мл
Ингибитор JAKCalbiochem420099Рабочая концентрация 200 нМ 
Бычья сыворотка альбуминSigma-AldrichA-2058
15- и 50 мл Конические пробиркиCorning Life Sciences430053, 430829
Другие необходимые предметы включают: Общие инструменты для препарирования, включая бритвенное лезвие и щипцы, Взрослая крыса (3-6 месяцев; Sprague-Dawley или Long Evans), интоксикационная камера CO2, ламинарный проточный колпак для клеточных культур и инкубатор Incubator (увлажненный, 37° C, 5% CO2, 5% O2). Примечание: Для полного приготовления N2 среды, к одному флакону DMEM/F-12 (500 мл) добавить 0,05 г апотрансферина, 0,0125 г инсулина (свежерастворенного в 1 мл 10 мМ NaOH), 50 мкм; л путресцина, 30 μ л селенита натрия, 100 мкм; л запасов прогестерона и 5 мл раствора пенициллина/стрептомицина. При необходимости отрегулируйте pH до 7,2. Процедить-простерилизовать и хранить при температуре 4°С; C на срок до 3 недель и беречь от света.
Таблица иммунофлуоресцентных реагентов
ПараформальдегидЭлектронная микроскопия Науки15719
Нормальная ослиная сыворотка (NDS)Sigma-AldrichD-9663
Triton X-100Sigma-AldrichT-8787
4,6-диамидино-2-фенилиндол (DAPI)Sigma-AldrichD-84175 мг/мл запасной раствор в метаноле
Таблица первичных антител
NestinChemiconMAB353

Фактор разведения: 1:400

Виды: Мышь IgG1

Hes3Santa Cruzsc-25393

Фактор разведения: 1:100

Виды: Кролик IgG

Sox2R& D SystemsMAB2018

Коэффициент разведения: 1:100

Виды: мышь IgG2a

CNPaseChemiconMAB326

Фактор разведения: 1:200

Виды: мышь IgG1

β-tubulin III (TUJ1)R& D SystemsMAB1195

фактор разведения: 1:500

Виды: Мышь IgG2a

глиальный фибриллярный кислый белок (GFAP)Dako North AmericaZ0334

фактор разбавления 1:500

Вид: Rabbit

Таблица вторичных антител
Alexa    568InvitrogenA-21124

Фактор разведения: 1:200

Виды: Goat anti Mouse IgG1

Alexa 488InvitrogenA-21131

Фактор разведения: 1:200

Виды: Goat anti Mouse IgG2a

Cy5Jackson ImmunoResearch59883

Фактор разведения: 1:200

Вид: Коза против кролика

Ссылки

  1. Cajal, R. Y. Comparative Study of Sensory Areas of the Human Cortex. , Harvard University. (1899).
  2. Altman, J., Das, G. D. Autoradiographic and histological evidence of postnatal hippocampal neurogenesis in rats. J. Comp. Neurol. 124, 319-335 (1965).
  3. Kaplan, M. S., Hinds, J. W. Neurogenesis in the adult rat: electron microscopic analysis of light radioautographs. Science. 197, 1092-1094 (1977).
  4. Nottebohm, F. Neuronal replacement in adulthood. Ann. N.Y. Acad. Sci. 457, 143-161 (1985).
  5. Gould, E., Reeves, A. J., Graziano, M. S., Gross, C. G. Neurogenesis in the neocortex of adult primates. Science. 286, 548-552 (1999).
  6. Kornack, D. R., Rakic, P. Continuation of neurogenesis in the hippocampus of the adult macaque monkey. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 96, 5768-5773 (1999).
  7. Alvarez-Buylla, A., Kohwi, M., Nguyen, T. M., Merkle, F. T. The heterogeneity of adult neural stem cells and the emerging complexity of their niche. Cold Spring Harb. Symp. Quant. Biol. 73, 357-365 (2008).
  8. Reynolds, B. A., Weiss, S. Generation of neurons and astrocytes from isolated cells of the adult mammalian central nervous system. Science. 255, 1707-1710 (1992).
  9. Luskin, M. B. Restricted proliferation and migration of postnatally generated neurons derived from the forebrain subventricular zone. Neuron. 11, 173-189 (1993).
  10. Lendahl, U., Zimmerman, L. B., McKay, R. D. CNS stem cells express a new class of intermediate filament protein. Cell. 60, 585-595 (1990).
  11. Androutsellis-Theotokis, A., et al. Targeting neural precursors in the adult brain rescues injured dopamine neurons. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 106, 13570-13575 (2009).
  12. Jin, K., et al. Neurogenesis in dentate subgranular zone and rostral subventricular zone after focal cerebral ischemia in the rat. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 98, 4710-4715 (2001).
  13. Zhang, R. L., Zhang, Z. G., Chopp, M. Ischemic stroke and neurogenesis in the subventricular zone. Neuropharmacology. 55, 345-352 (2008).
  14. Caplan, A. I. Why are MSCs therapeutic? New data: new insight. J. Pathol. 217, 318-324 (2009).
  15. Goldman, S. Stem and progenitor cell-based therapy of the human central nervous system. Nat. Biotechnol. 23, 862-871 (2005).
  16. Sun, N., Longaker, M. T., Wu, J. C. Human iPS cell-based therapy: considerations before clinical applications. Cell Cycle. 9, 880-885 (2010).
  17. Amariglio, N., et al. Donor-derived brain tumor following neural stem cell transplantation in an ataxia telangiectasia patient. PLoS Med. 6, e1000029(2009).
  18. Lindvall, O., Bjorklund, A. Cell therapeutics in Parkinson's disease. Neurotherapeutics. 8, 539-548 (2011).
  19. Kittappa, R., Bornstein, S. R., Androutsellis-Theotokis, A. The Role of eNSCs in Neurodegenerative Disease. Mo.l Neurobiol. , (2012).
  20. Cattaneo, E., McKay, R. Identifying and manipulating neuronal stem cells. Trends Neurosci. 14, 338-340 (1991).
  21. Jensen, J. B., Parmar, M. Strengths and limitations of the neurosphere culture system. Mol. Neurobiol. 34, 153-161 (2006).
  22. Duarte, A., et al. Dosage-sensitive requirement for mouse Dll4 in artery development. Genes Dev. 18, 2474-2478 (2004).
  23. Maisonpierre, P. C., et al. Angiopoietin-2, a natural antagonist for Tie2 that disrupts in vivo angiogenesis. Science. 277, 55-60 (1997).
  24. Androutsellis-Theotokis, A., et al. Notch signalling regulates stem cell numbers in vitro and in vivo. Nature. 442, 823-826 (2006).
  25. Alderson, R. F., Alterman, A. L., Barde, Y. A., Lindsay, R. M. Brain-derived neurotrophic factor increases survival and differentiated functions of rat septal cholinergic neurons in culture. Neuron. 5, 297-306 (1990).
  26. Johe, K. K., Hazel, T. G., Muller, T., Dugich-Djordjevic, M. M., McKay, R. D. Single factors direct the differentiation of stem cells from the fetal and adult central nervous system. Genes Dev. 10, 3129-3140 (1996).
  27. Ourednik, J., Ourednik, V., Lynch, W. P., Schachner, M., Snyder, E. Y. Neural stem cells display an inherent mechanism for rescuing dysfunctional neurons. Nat. Biotechnol. 20, 1103-1110 (2002).
  28. Ryu, J. K., Cho, T., Wang, Y. T., McLarnon, J. G. Neural progenitor cells attenuate inflammatory reactivity and neuronal loss in an animal model of inflamed AD brain. J. Neuroinflammation. 6, 39(2009).
  29. Androutsellis-Theotokis, A., et al. Angiogenic factors stimulate growth of adult neural stem cells. PLoS One. 5, e9414(2010).
  30. Park, D. M., et al. Hes3 regulates cell number in cultures from glioblastoma multiforme with stem cell characteristics. Sci. Rep. 3, 1095-1010 (2013).
  31. Poser, S. W., et al. Ch. 5. Cancer Stem Cells - The Cutting. Shostak, S. , InTech. Europe, Rijeka, Croatia. 89-110 (2011).
  32. Androutsellis-Theotokis, A., Rueger, M. A., Mkhikian, H., Korb, E., McKay, R. D. Signaling pathways controlling neural stem cells slow progressive brain disease. Cold Spring Harb. Symp. Quant. Biol. 73, 403-410 (2008).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

LFGF

Похожие статьи