Сотовый Сжатие как Robust, микрофлюидных внутриклеточного Delivery Platform

Summary

Быстрое механическая деформация клеток стала перспективный, векторные без метода внутриклеточной доставки макромолекул и наноматериалов. Этот протокол содержит подробные шаги, как использовать систему для широкого спектра приложений.

Abstract

Быстрое механическая деформация клеток стала перспективный, векторные без метода внутриклеточной доставки макромолекул и наноматериалов. Эта технология потенциал показано в решении ранее сложных приложений; включая, доставка в первичных иммунных клеток, перепрограммирования клеток, углеродной нанотрубки, и квантовой поставки точка. Этот вектор свободной Микрожидкостных платформа опирается на механическое разрушение клеточной мембраны, чтобы облегчить доставку цитозольного материала мишени. Здесь мы описываем подробную метод использования для этих микрофлюидных устройств, включая, сборки устройства, клеточного препарата, и работы системы. Этот подход доставка требует краткого оптимизацию типа устройства и условий работы для ранее несообщаемого приложений. Приведенные инструкции распространены на большинстве типов клеток и материалов поставки так как эта система не требует специальных буферов или шаги химическая модификация / сопряжения. Эта работа также обеспечитьсек рекомендации о том, как улучшить производительность устройства и без проблем снимать потенциальные проблемы, связанные к засорению, низкой эффективности доставки и жизнеспособности клеток.

Introduction

Доставка макромолекул в цитоплазме клеток является важным шагом в лечебных и исследовательских приложений. Наночастиц опосредованной доставки, например, показал потенциал в генной терапии ^1,2, в то время как доставка белок является перспективным средством влияя на клеточную функцию как клинические, так и лабораторные ^{3 4} настройки. Другие материалы, такие как низкомолекулярных препаратов, квантовых точек, или наночастиц золота, представляют интерес в приложениях, начиная от лечения рака ^5,6 к внутриклеточной маркировки ^7,8, и одной молекулы отслеживания ^9.

Клеточной мембраны в значите....

Protocol

1. Хранение

1. Храните водохранилищ, держатели, уплотнительные кольца и микрожидкостных устройств в 70% этаноле. Используйте контейнер (например, банку или мензурки), который имеет крышку для предотвращения испарения и загрязнения частицами пыли или за пределами. Размещать устройства в одном контейнере (1), резервуары и уплотнительные кольца во втором контейнере (2), и держатели в третьем (3).

Примечание: Использование 70% этанола для хранения является поддержание стерильности. Если только компоненты решения являются этанол и вода (т.е. без денатурирующие агенты), все компоненты системы должны быть полность....

Results

Рисунок 1 содержит описательную схему микрожидкостных системы доставки. Фигуры 2А-В иллюстрируют типичные результаты лечения HeLa клетки различных конструкций устройств в присутствии флуоресцентно конъюгированного 3 кДа декстрана ^20. Если процедура выполняется правильно, производительность системы будет чувствителен к типу устройств и рабочей скорости. Таким образом, следует оптимизировать эти условия для данного приложения перед переходом к более сложных экспериментов. В диа.......

Discussion

Некоторые аспекты описанной экспериментальной процедурой (т.е. отличной от микросхем и рабочей скорости факторы), возможно, должны быть оптимизированы в зависимости от типа клеток и доставки материала система применяется. В последующем обсуждении рассматриваются некоторые из наиболее распространенных факторов, чтобы рассмотреть при разработке экспериментов.

Для улучшения доставки сигнала для флуоресцентной меченых соединений, необходимо обратиться источники фоновой флуоресценции. По.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Держатель устройства и Пластиковый резервуар	SQZ Biotechnologies	Holder
LSRFortessa Analyzer	Becton Dickinson	N/A	Проточная цитометрическая машина, используемая в Koch Institute Core
Facilities Микрофлюидное устройство	SQZ Biotechnologies	Cell Squeeze
O-Rings	McMaster	9452K311
Система давления для работы аппарата	SQZ Biotechnologies	Система
Пинцет
Ультразвуковая ванна