Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Визуализация InlC секрецию по расследованию сотовой инфекции по бактериальным патогеном

9.4K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/51043

⸱

19 сентября 2013 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Unité des Interactions Bactéries Cellules, Pasteur Institute, 2INSERM U604, 3Institut National de la Recherche Agronomique (INRA), USC2020, 4Institute of Biochemistry, ETH Zürich, 5Focal Area Infection Biology, Biozentrum, University of Basel

В этой статье

Уведомление об исправлении

Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice

Краткое содержание

Листерий является грамположительных бактериальных патогенов часто используется в качестве основного модель для изучения внутриклеточного паразитизма. Визуализация поздно Л. моноцитогенес инфекции этапы в контексте малых вмешательства РНК экранов позволяет глобального исследования клеточных путей, необходимых для бактериальной инфекции клеток-хозяев целевых.

Аннотация

Бактериальные внутриклеточные патогены можно рассматривать как молекулярных инструментов рассекать клеточные сигнальные каскады из-за их способности изысканно манипулировать и подорвать функции клеток, которые необходимы для заражения принимающих тканях-мишенях. Среди этих бактериальных патогенов, листерий является положительным микроорганизм грамм, который был использован в качестве парадигмы для внутриклеточного паразитизма в характеристике клеточного иммунного ответа, и которая сыграла инструментальные роли в открытии молекулярных путей, контролирующих динамику торговли людьми цитоскелета и мембраны. В этой статье мы опишем надежную микроскопическое анализа для обнаружения конце сотовой инфекции этапах L. моноцитогенес на основе флуоресцентного мечения InlC, секретируемого бактериального белка, который накапливается в цитоплазме инфицированных клеток; этот анализ может быть соединен с автоматизированным высокой пропускной малых интерферирующих РНК экранов, чтобы в угольacterize клеточные сигнальные пути, участвующие в до-или понижающей регуляции инфекции.

Введение

Грамположительные бактерии листерий является пищевого происхождения возбудитель что поражает клетки-хозяева, нарушает его интернализации вакуоль и реплицируется в цитоплазме клетки-хозяева 1. L. моноцитогенес легкость манипуляции в лаборатории контексте (быстрый рост, низкой токсичностью для здоровых людей), связанных с сохранением бактериальных вирулентности черт, наблюдаемых в клеточных и животных моделях (гемолитическая активность, лейкоцитоз) позволил его первоначальное использование в 1960-х в качестве основного модели изучение внутриклеточной паразитизма и для создания теоретических основ клеточного иммунитета против инфекции 2. В конце 1980-х и начале 1990-х годов, рассечение бактериальной внутриклеточной цикла 3, а также молекулярной характеристике наиболее важных бактериальной факторов вирулентности 4-7 благоприятствовали использованию L. моноцитогенес как ключевой молекулярной инструмент для манипуляций и шпилькиу функций клеток-хозяев. Наличие авирулентного (Л. innocua) и сильнодействующие (L. моноцитогенес) видов в роду Listeria проложили путь для сравнительной геномной исследований 8, что, вместе с недавним созданием полного L. моноцитогенес транскриптома 9, увеличились наше понимание эволюции L. моноцитогенес как человека возбудителя и в качестве модельной системы для инфекции изучает 10.

L. моноцитогенес вызывает ее интернационализации в клетки-хозяева при взаимодействии бактериальных поверхностных белков INLA и InlB с их хозяин клеточных рецепторов E-кадгерина и встретился соответственно 11-12. Первоначальные кандидатов на основе исследования привели к идентификации α / β катенины-актина ссылку в качестве важного компонента INLA-путей инвазии 13 и части фосфоинозитидного 3-киназы (PI 3-К) в качестве важнейшего эффектора InlB- зависит вторжение Cascaде 14-15. Протеомные и функционально-основанные анализы впоследствии позволило идентификация новых цитоскелета элементов 16 и липидных вторичных мессенджеров 17, необходимых для вторжения клетки-хозяина. Транскрипции исследования 18 и масс-спектрометрии на основе количественная протеомика 19 недавно пролить новый свет относительно активации принимающих сигнальных каскадов и репрессий иммунных реакций во время L. моноцитогенес инфекции. Системная биология подходы на основе инактивации больших наборов генов (kinomes, полных геномов) по малых интерферирующих РНК (миРНК) молчание недавно открыли новые возможности для анализа глобальной хозяина сигнальных каскадов в контексте специфических клеточных функций, в том числе фагоцитоза и патоген интернализация 20. Генома экраны миРНК были ранее выполнены, чтобы исследовать клеточные каскады, необходимые для заражения L. моноцитогенес в фагоцитарной дрозофилы S2 клетки 21-22, но этот тип анализа не была выполнена в не-фагоцитов, которые представляют важные цели для инфекции в естественных условиях.

Мы оптимизировали протокол для микроскопического выявления поздних стадиях инфекции L. моноцитогенес, который подходит для высокой пропускной миРНК исследований бактериальной вступления в эпителиальных клетках. Наш анализ использует высоко инвазивной L. моноцитогенес штамм, который представляет точечную мутацию в PrfA, основным регулятором транскрипции Л. моноцитогенес факторов вирулентности 6: эта мутация (названный PrfA *) оказывает PrfA постоянно активный 23 и приводит к повышенной экспрессии вторжения белков INLA и InlB, поэтому в пользу бактериальной запись в противном случае плохо инфицированных не-фагоцитов. Наша считывания для инфекции основано на обнаружении цитозольной накопления секретируемого белка бактериальной InlC: эта молекулаплейотропным эффектор, который выражается преимущественно внутри-цитоплазматической L. моноцитогенес 9 и которые не только участвует в бактериальной клетке клетки к распространяться 24, но которые также модулирует иммунного ответа 25. Флуоресцентный маркировка секреции InlC по внутриклеточных бактерий позволяет не только четко различать зараженными от неинфицированных клеток, но также представляет собой конечной точки считывания, который можно использовать в последующем рассекать инфекции в его различных этапов: вход, вакуолярной бежать, цитозольного бактериальной распространение и распространение от клетки к клетке. Этот протокол на основе микроскопии может быть соединен с экранами миРНК поэтому для изучения клеточных путей, участвующих в инфекции клеток-хозяев Л. моноцитогенес.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

1. Подготовка Cellular и бактериальных культур, трансфекции Инструменты и первичных антител

  1. Подготовьте свежий агар пластины для обособления отдельных L. моноцитогенес колоний от бактериальной глицерина складе (50% glycerol/50% насыщенных бактериальной жидкости ночной культуры) хранится при -80 ° С
    1. Использование алюминиевого стойку (хранится при -80 ° С) для транспортировки замороженной бактериальной глицерин материал, подряд бактерии на Brain Heart Infusion (BHI) агар пластины.
    2. Инкубировать при 37 ° С в течение 48 часов (или до тех пор, отдельные колонии бактерий не может быть выделен).
    3. Держите этот рабочий тарелку после при 4 ° С в течение максимального времени от 1 месяца (он будет использоваться, чтобы отобрать жидких культур).
    4. В нашем протоколе, мы используем L. моноцитогенес серотипа 1/2А EGDe.PrfA * напряжение, но, как показано на рисунке 1, в L. моноцитогенес серотип 4б P14.PrfA * штамм дает аналогичные результаты.
  2. ОнLa ATCC CCL2 клетки выращивают в Дульбекко модификации Дульбекко (DMEM), дополненной 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS) в отсутствие антибиотиков.
  3. Независимые бассейны яичницы (контроль) и анти-Met миРНК загружаются в черных микроскопии клеточных культур пластин 384-а.
    1. Развести 160 пмоль миРНК в 500 мкл РНКазы свободной воды и добавить 5 мкл этого раствора на лунку (конечная концентрация: 1,6 мкмоль).
    2. Держите эту пластину при -20 ° С в течение не более 1 года.
  4. Поликлональные антитела кролика против бактериального белка InlC были получены путем иммунизации с помощью рекомбинантного белка GST-InlC, как описано выше 25.

2. Реверс миРНК трансфекции клеток

  1. 72 часа до заражения довести до комнатной температуры черный 384-луночный микроскопии культуру клеток пластину, содержащую 1,6 пмоль миРНК в 5 мкл РНКазы свободной воды в каждую лунку.
  2. Центрифуга пластину течение 3 мин при 300RCF при комнатной температуре, чтобы сбить миРНК, которые можно было бы храниться в стенах колодцев.
  3. Подготовка температуры в помещении DMEM с добавлением 0,4% липофектамином RNAiMAX.
  4. Добавить 25 мкл трансфекции среде DMEM / RNAiMAX в каждую лунку (не инкубировать трансфекции среду более 20 мин, прежде чем добавить в миРНК).
  5. Перемещение пластину назад и вперед, чтобы смешать с миРНК трансфекции раствором, а затем сохранить пластину в течение 1 часа при комнатной температуре, чтобы позволить миРНК-Липофектамин формировать комплексы.
  6. Вымойте HeLa клетки из сливной-или суб-сливная культивирования клеток колбу раз с 10 мл 37 ° C подогретого PBS.
  7. Снять HeLa клетки путем добавления 1 мл 37 ° C, предварительно нагретую трипсин к клеточной культуры колбу и выдержать в течение от 3 до 5 минут при температуре 37 ° С.
  8. Повторное приостановить клеток в 10 мл 37 ° С предварительно нагретой DMEM с добавлением 16% FBS.
  9. Граф клеток и подготовить клеточную суспензию из 12000 клеток на мл в DMEM, дополненной16% FBS.
  10. Добавить 50 мкл клеточной суспензии в каждую лунку в пластине 384-луночного.
  11. Перемещение пластины быстро туда и обратно, чтобы распределить клетки и пусть клетки располагаются в течение 10 мин при комнатной температуре.
  12. Уплотнение тарелку парафильмом и держать его в течение 72 ч в увлажненной 5% CO 2-атмосфере, содержащей при 37 ° С

3. Сотовый Инфекция и Окрашивание

  1. За день до инфекции, сделайте один колонию L. моноцитогенес от BHI агаром и ресуспендируют его в 5 мл жидкой среды BHI в 15 мл полистирола трубки.
  2. Инкубируют в течение ночи при 37 ° С в shacking устройства для обеспечения роста бактерий.
  3. На следующий день от инфекции, мыть 1 мл ночной L. моноцитогенес культуры путем центрифугирования 2 мин при 10600 RCF на настольной центрифуге.
  4. Жидкость над осадком сливают (который содержит секретируемый Цитотоксин листериолизин O) и повторно приостанавливать осадок в 1 мл PBS (repeaт стадию промывки 3 более раз).
  5. Read бактериальной оптической плотности при 600 нм и оценить количество бактерий (OD = 1 эквивалентно 1E9 бактерий / мл).
  6. Подготовка адекватной L. моноцитогенес разбавление в DMEM, дополненной 1% FBS: с использованием высоко инвазивных штаммов, как EGDe.PrfA *, мы предлагаем использовать 5E4 бактерий в 30 мкл среды на лунку (множественность инфекции оценивается как 25 на 2000 клеток).
  7. Снимите среду для культивирования клеток в каждой лунке (80 мкл) и заменить его добавлением 30 мкл L. моноцитогенес содержащих среду.
  8. Центрифуга пластины при 200 RCF в течение 5 мин при комнатной температуре, чтобы синхронизировать инфекционного процесса.
  9. Инкубировать в течение 1 часа в увлажненной 5% CO 2-атмосфере, содержащей при 37 ° С на предварительно нагретой алюминиевого блока.
  10. Снимите L. моноцитогенес содержащих среду из каждой лунки и добавить 30 мкл предварительно нагретой DMEM с добавлением 10% FBS и40 мкг / мл гентамицина убить внеклеточный L. моноцитогенес.
  11. Выдержите в течение 4 часов в 5% СО 2-атмосфере, содержащей при 37 ° С на предварительно нагретой металлической блока.
  12. Приготовьте раствор PBS с добавлением 8% формальдегида (это решение следует приготовить свежую, так что формальдегид мономеры, а не Параформальдегид полимеров, используются).
  13. Без отбрасывания клеточную культуральную среду, добавляют 30 мкл ФСБ с добавлением 8% формальдегида (конечная концентрация: 4%) и инкубируют в течение 15 мин при комнатной температуре.
  14. Извлеките фиксатор и промыть клетки три раза 80 мкл на лунку PBS (держать клеток в конечном объеме 80 мкл на лунку PBS).
  15. Подготовка 1:250 разбавление анти-кроличьей сывороткой InlC в ФБР с добавкой 0,2% сапонина.
  16. Добавить 10 мкл первичного раствора антител в каждую лунку после удаления PBS и инкубируют в течение 30 мин при комнатной температуре.
  17. Откажитесь от первичнойРаствор антител и мыть четыре раза с 40 мкл на лунку PBS.
  18. Развести вторичного Alexa Fluor 546-сочетании анти-кроличье антитело (1:250) раствор DAPI (1:1,500) и фаллоидином-Dy647 (1:150) в ФБР с добавкой 0,2% сапонина.
  19. Добавить 10 мкл этого раствора вторичного окрашивания в каждую лунку и инкубируют в течение 30 мин при комнатной температуре.
  20. Отменить вторичного красящий раствор и промыть четыре раза с 40 мкл на лунку PBS (оставить конечного объема 40 мкл в каждую лунку и запечатать табличку).
  21. Пластина может быть отображены непосредственно или можно хранить при температуре 4 ° С в защищенном от света месте (покрывают алюминиевой фольгой) для последующего анализа.

4. Приобретение изображений и анализ

  1. Получение изображений в трех различных каналов (350 нм, 546 нм и 647 нм) с использованием 10X цели, установленный на автоматизированном микроскопа (предпочтительно приобретать 9 изображений на лунку).
  2. Сигнал InlC можно измерить, используя изображениеАнализ программного обеспечения, как CellProfiler, что позволяет автоматизированное сегментацию ядер и клеточных тел, используя DAPI и окрашивание фаллоидином соответственно.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Люминесцентная маркировка цитоплазматической InlC обеспечивает надежную отсчет для инфекции клеток путем L. моноцитогенес, как показано на рисунке 1: центральная ячейка в микрофотографии сильно инфицированы штаммом P14.PrfA * 23, как это можно наблюдать в контраст изображения фазы (стрелки, рис. 1А), и это подтверждается сигнала DAPI где отдельные бактерии могут быть четко отделены (рис. 1b). InlC окрашивание (накладываются на окрашивание DAPI в фиг....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Некоторые параметры имеют решающее значение для успеха нашего протокола InlC обнаружения, в том числе с использованием здоровых клеточных линий, отображающих достаточно большое цитоплазму, чтобы позволить однозначную обнаружение сигнала InlC. В анализе мы представляем в этой статье мы предлагаем использование HeLa CCL2 клеток, которые являются особенно хорошо подходит для нашего анализа в связи с расширением их цитозольным пространства; другие клоны HeLa, такие как HeLa киотских клеток дисплей меньшего цитоплазму, но мо...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Нам нечего раскрывать.

Благодарности

Исследования в П. Cossart лаборатории поддерживается Институтом Пастера, Национальным институтом де-ла-Здоровье и де ла Recherche Medicale, Национальным институтом де-ла-Recherche агрономических, ERC Advanced Грант (233348), Национальное агентство по де-ла-Recherche (грант MIE- SignRupVac), Луи-Jeantet фонд и Фонд Ле Рош Les Mousquetaires. АК является получателем стипендии от Пастер-Париж университет международных докторской программы / Institut Карно болезней Infectieuses. Мы благодарим Джейсон Мерсер для оптимизации протокола сотовой трансфекции.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Bacto Brain Heart InfusionBD237500Для жидкого препарата BHI
Bacto AgarBD214010Добавка к жидкому BHI для BHI агаровые пластины
Тепло-инактивированная фетальная бычья сывороткаBiowest51830-500
DMEM Invitrogen61965-026
Липофектамин RNAiMaxInvitrogen13778-100
ГентамицинSigmaG1397-10ML
Формальдегид (16%)EMS15710Готовьте свежий перед каждым экспериментом
Anti-Rabbit Alexa Fluor 546InvitrogenA-11035
DAPIInvitrogenD-1306
Фаллоидин Dy647Dyomics647-33
siRNA ScrambleDharmaconD-001810-10
миРНК MetDharmaconL-003156-00-0005
Black 384-луночная микроскопическая клеточная культуральная пластинаCorning3985
AxioObserver Z1 микроскопZeiss431007 9901
sCMOS камераAndorNeo
программное обеспечение для анализаMolecular Devices4000
Программное обеспечение для анализа CellProfilerОбщедоступное программное обеспечение Института Броуда доступно по адресу http://www.cellprofiler.org/

Ссылки

  1. Pizarro-Cerdá, J., Kühbacher, A., Cossart, P. Entry of Listeria monocytogenes in mammalian epithelial cells: an updated view. Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine. 2, 1-17 (2012).
  2. Mackaness, G. B. Cellular resistance to infection. Journal of Experimental Medicine. 116, 381-406 (1962).
  3. Tilney, L. G., Portnoy, D. A. Actin filaments and the growth, movement, and spread of the intracellular bacterial parasite, Listeria monocytogenes. Journal of Cell Biology. 109, 1597-1608 (1989).
  4. Mengaud, J., Chenevert, J., Geoffroy, C., Gaillard, J. L., Cossart, P. Identification of the structural gene encoding the SH-activated hemolysin of Listeria monocytogenes: listeriolysin O is homologous to streptolysin O and pneumolysin. Infection and Immunity. 55, 3225-3227 (1987).
  5. Gaillard, J. L., Berche, P., Frehel, C., Gouin, E., Cossart, P. Entry of L. monocytogenes into cells is mediated by internalin, a repeat protein reminiscent of surface antigens from gram-positive cocci. Cell. 65, 1127-1141 (1991).
  6. Mengaud, J., Dramsi, S., Gouin, E., Vazquez-Boland, J. A., Milon, G., Cossart, P. Pleiotropic control of Listeria monocytogenes virulence factors by a gene that is autoregulated. Molecular Microbiology. 5, 2273-2283 (1991).
  7. Kocks, C., Gouin, E., Tabouret, M., Berche, P., Ohayon, H., Cossart, P. L. monocytogenes-induced actin assembly requires the actA gene product, a surface protein. Cell. 68, 521-52 (1992).
  8. Glaser, P., et al. Comparative genomics of Listeria species. Science. 294, 849-852 (2001).
  9. Toledo-Arana, A., et al. The Listeria transcriptional landscape: from saprophytism to virulence. Nature. 459, 950-956 (2009).
  10. Cossart, P. Illuminating the landscape of host-pathogen interactions with the bacterium Listeria monocytogenes. Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 108, 19484-19491 (1073).
  11. Mengaud, J., Ohayon, H., Gounon, P., Mege, R. -M., Cossart, P. E-cadherin is the receptor for internalin, a surface protein required for entry of L. monocytogenes into epithelial cells. Cell. 84, 923-932 (1996).
  12. Shen, Y., Naujokas, M., Park, M., Ireton, K. InIB-dependent internalization of Listeria is mediated by the Met receptor tyrosine kinase. Cell. 103, 501-510 (2000).
  13. Lecuit, M., Hurme, R., Pizarro-Cerda, J., Ohayon, H., Geiger, B., Cossart, P. A role for alpha-and beta-catenins in bacterial uptake. Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 97, 10008-10013 (2000).
  14. Ireton, K., et al. A role for phosphoinositide 3-kinase in bacterial invasion. Science. 274, 780-782 (1996).
  15. Ireton, K., Payrastre, B., Cossart, P. The Listeria monocytogenes protein InlB is an agonist of mammalian phosphoinositide 3-kinase. Journal of Biological Chemistry. 274, 17025-17032 (1999).
  16. Pizarro-Cerdá, J., Jonquières, R., Gouin, E., Vandekerckhove, J., Garin, J., Cossart, P. Distinct protein patterns associated with Listeria monocytogenes InlA- or InlB phagosomes. Cellular Microbiology. 4, 101-115 (2002).
  17. Pizarro-Cerdá, J., Payrastre, B., Wang, Y. -J., Veiga, E., Yin, H. L., Cossart, P. Type II phosphatidylinositol 4-kinases promote Listeria monocytogenes entry into target cells. Cellular Microbiology. 9, 2381-2390 (2007).
  18. Hamon, M. A., et al. Histone modifications induced by a family of bacterial toxins. Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 104, 17555-17559 (2007).
  19. Ribet, D., et al. Listeria monocytogenes impairs SUMOylation for efficient infection. Nature. 464, 1192-1195 (2010).
  20. Rämet, M., Manfruelli, P., Pearson, A., Mathey-Prevot, B., Ezekowitz, R. A. Functional genomic analysis of phagocytosis and identification of a Drosophila receptor for E. coli. Nature. 416, 644-648 (2002).
  21. Agaisse, H., Burrack, L. S., Philips, J. A., Rubin, E. J., Perrimon, N., Higgins, D. E. Genome-wide RNAi screen for host factors required for intracellular bacterial infection. Science. 309, 1248-1251 (2005).
  22. Cheng, L. W., Viala, J. P., Stuurman, N., Wiedemann, U., Vale, R. D., Portnoy, D. A. Use of RNA interference in Drosophila S2 cells to identify host pathways controlling compartmentalization of an intracellular pathogen. Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 102, 13646-13651 (2005).
  23. Ripio, M. T., Domínguez-Bernal, G., Lara, M., Suárez, M., Vazquez-Boland, J. A. A Gly145Ser substitution in the transcriptional activator PrfA causes constitutive overexpression of virulence factors in Listeria monocytogenes. Journal of Bacteriology. 179, 1533-1540 (1997).
  24. Rajabian, T., et al. The bacterial virulence factor InlC perturbs apical cell junctions and promotes cell-to-cell spread of Listeria. Nature Cell Biology. 11, 1212-1218 (2009).
  25. Gouin, E., et al. The Listeria monocytogenes InlC protein interferes with innate immune responses by targeting the IκB kinase subinit IKKα. Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 107, 17333-17338 (2010).
  26. Pizarro-Cerdá, J., Lecuit, M., Cossart, P. Measuring and analysing invasion of mammalian cells by bacterial pathogens: the Listeria monocytogenes system. Methods in Molecular Microbiology. 31, 161-177 (2002).
  27. Snijder, B., Sacher, R., Rämö, P., Damm, E. M., Liberali, P., Pelkmans, L. Population context determines cell-to-cell variability in endocytosis and virus infection. Nature. 461, 520-523 (2009).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Исправление


Formal Correction: Erratum: Imaging InlC Secretion to Investigate Cellular Infection by the Bacterial Pathogen Listeria monocytogenes
Posted by JoVE Editors on 6/25/2014. Citeable Link.

A correction was made to Imaging InlC Secretion to Investigate Cellular Infection by the Bacterial Pathogen Listeria monocytogenes. Three authors were omitted from the article at the time of publication. The acknowledgments section was also updated. The author list has been updated from:

Andreas Kühbacher1,2,3, Edith Gouin1,2,3, Pascale Cossart1,2,3, Javier Pizarro-Cerdá1,2,3
1Unité des Interactions Bactéries Cellules, Pasteur Institute, 2INSERM U604, 3Institut National de la Recherche Agronomique (INRA), USC2020

to

Andreas Kühbacher1,2,3, Edith Gouin1,2,3, Jason Mercer4, Mario Emmenlauer5, Christoph Dehio5, Pascale Cossart1,2,3, Javier Pizarro-Cerdá1,2,3
1Unité des Interactions Bactéries Cellules, Pasteur Institute,2INSERM U604, 3Institut National de la Recherche Agronomique (INRA), USC2020, 4Institute of Biochemistry, ETH Zürich 5Focal Area Infection Biology, Biozentrum, University of Basel

The acknowledgments where update from:

Research in P. Cossart laboratory is supported by the Pasteur Institute, the Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale, the Institut National de la Recherche Agronomique, ERC Advanced Grant (233348), the Agence Nationale de la Recherche (Grant MIE-SignRupVac), the Louis-Jeantet Foundation and the Fondation Le Roch Les Mousquetaires. A.K. is a recipient of a scholarship from the Pasteur-Paris University International Doctoral Program/Institut Carnot Maladies Infectieuses. We thank Jason Mercer for optimizing the cellular transfection protocol.

to

Research in P. Cossart laboratory is supported by the Pasteur Institute, the Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale, the Institut National de la Recherche Agronomique, ERC Advanced Grant (233348), the Agence Nationale de la Recherche (Grant MIE-SignRupVac), the Louis-Jeantet Foundation and the Fondation Le Roch Les Mousquetaires. A.K. is a recipient of a scholarship from the Pasteur-Paris University International Doctoral Program/Institut Carnot Maladies Infectieuses. We acknowledge support by grant 51RT 0_126008 for the Research and Technology Development (RTD) project InfectX in the frame of SystemsX.ch, the Swiss Initiative for Systems Biology (to C.D.).

Теги

Иммунофлуоресцентный анализскрининг с использованием малых интерферирующих РНКинвазия в клетку-хозяинадинамика цитоскелетаавтоматизированная микроскопияиндекс инфекциимечение бактериальных белков
Визуализация InlC секрецию по расследованию сотовой инфекции по бактериальным патогеном
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.