Пневмококк является ведущим возбудителем тяжелой внебольничной пневмонии и отвечает за более чем 2 миллиона смертей во всем мире. Влияние бактериальных факторов, вовлеченных в фитнес или вирулентности можно отслеживать в режиме реального времени в острой мыши пневмонии или бактериемия модели с использованием биолюминесцентных бактерии.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
После в режиме реального времени Влияние пневмококковой факторов вирулентности в острой Mouse пневмонии Модель Использование биолюминесцентных бактерии
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Пневмония является одной из основных проблем здравоохранения в развивающихся и промышленно развитых странах и связана со значительным заболеваемости и смертности. Несмотря на успехи в знании этой болезни, наличия отделениях интенсивной терапии (ОИТ), а также использование сильнодействующих противомикробных препаратов и эффективных вакцин, показатели смертности остаются высокими 1. Пневмококк является ведущим возбудителем внебольничной пневмонии (ВП) и одним из наиболее распространенных причин бактериемии у людей. Это возбудитель оснащен арсенал поверхностно-подвергается адгезинов и вирулентности факторов, способствующих пневмонии и инвазивных пневмококковых инфекций (IPD). Оценка роли в естественных бактериальных фитнес или факторов вирулентности имеет первостепенное значение, чтобы разгадать S. пневмонии патогенности механизмов. Мышиные модели пневмонии, бактериемии и менингита используются для определения влияния пневмококковых факторов при разразличных стадиях инфекции. Здесь мы опишем протокол для мониторинга в режиме реального времени пневмококковой распространения у мышей после интраназального или внутрибрюшинными инфекций с биолюминесцентных бактерий. Результаты показывают, умножение и распространение пневмококков в нижних дыхательных путей и крови, что может быть визуально и оценивали с помощью системы визуализации и программное обеспечение прилагаемого анализа.
Введение
Инфекции дыхательных путей, вызванных вирусами или бактериями остаются одним из наиболее распространенных внебольничных или клинических проблем по всему миру, вызывая примерно одну треть всех смертей в мире. Ключевые виды бактерий являются гемофильной и пневмококк 2. Однако эти виды бактерий, как правило, общие компоненты природной флоры дыхательных путей. Таким образом бактериальная каретки также определенного риска развития инвазивного заболевания и в зависимости от иммунного статуса или предрасположенности лиц. Бессимптомно колонизация срабатывает с инвазивными инфекциями. Пневмококк является ведущим возбудителем внебольничной....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Эксперименты инфекции животных, описанные здесь, должны выполняться в строгом соответствии с местными и международными (например, европейского права здравоохранения Федерации лабораторных животных Наука ассоциаций (FELASA)) принципами и правилами по использованию позвоночных животных. Эксперименты должны быть одобрены местным этического совета и институционального комитета по уходу за животными. Все эксперименты с S. пневмонии в лаборатории или инфекций животных проводятся в Кабинете класса II биобезопасности.
1. Подготовка инфекционных складе биолюминесцентных Pneumocococi
- Подготовка запас пневмококковых куль....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Приобретение и поглощение метионина имеет решающее значение для пневмококков для поддержания фитнес в принимающей нише 32,33. Метионин ABC транспортер липопротеинов кодируется в D39 СДПГ _ 0151 генов (TIGR4: sp_0149) и назвал MetQ 32. Пневмококки дальше производить метионин ферменты биосинтеза (D39: Spd_0510 - Spd_0511; TIGR4 Sp_0585 - Sp_0586, Мете и MetF). Отсутствие метионина в химически определенной среде влияет на рост пневмококков и похожи, отсутствие метионина связ.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Все эксперименты, проведенные на животных, должны быть одобрены местными властями и комиссий по этике. В естественных условиях в инфекции экспериментов бактериальная нагрузка в различных принимающих нишах зараженных животных должно быть определено в различные моменты времени после инфицирования. В этих условиях эксперимента животные должны быть принесены в жертву до выделения бактерий из крови, носоглотки, bronchoalvelar промывания или органов, таких как легкие, селезенка, и мозг. Чтобы рассчитать количес.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы не имеют ничего раскрывать.
Благодарности
Исследования в лаборатории при поддержке грантов от Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG HA 3125/3-2, DFG HA 3125/4-2) и Федеральным министерством образования и научных исследований (BMBF) Медицинская инфекции геномики (ФКЗ 0315828A) в SH.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Бульон Тодда Хьюитта | Carl Roth, Карлсруэ, Германия | X936.1 | |
| Дрожжевой экстракт | Carl Roth, Карлсруэ, Германия | 2363.2 | |
| Агаровые пластины для крови | Oxoid, Wesel, Германия | PB5039A | |
| Канамицин | Карл Рот, Карлсруэ, Германия | T832.2 | |
| Эритромицин | Sigma-Aldrich, Тауфкирхен, Германия | E6376 | |
| Фетальная бычья сыворотка (FBS) | PAA Laboratories, Кельбе, Германия | A11-151 | |
| Мыши CD-1, самка | River, Зульцфельд, Германия | CD1SIFE06W08W | самки мышей CD-1, возрастом от шести до восьми недель |
| Кетамин 500 мг, раствор для инъекций Curamed | Schwabe-Curamed, Карлсруэ, Германия | ; | |
| Ромпун 2%, раствор для инъекций | Bayer Animal Health, Монхайм, Германия | ||
| BD Plastipak 1 мл шприцы | Becton Dickinson, Heidelberg, Германия | 300015 | стерильные шприцы Luer-Lok с иглой |
| Gel Loader Tips | PeqLab | 81-13790 | Mµ ltiFlex Tips |
| Гиалуронидаза | Sigma-Aldrich | H3884-100 мг | Гиалуронидаза типа IV-S из теста крупного рогатого скота |
| Oxygen | Air Liquide, Dü Ссельдорф, Германия | M1001L50R2A001 | |
| Isoflurane | Baxter, Unterschleiß heim, Германия | ||
| pGEM-T Easy | Promega, Мангейм, Германия | ||
| Олигонуклеотиды | Eurofins MWG, Эберсберг, Германия | ||
| Qiaprep Spin Midiprep Kit | Qiagen, Hilden, Германия | 27104 | |
| Набор для очистки ДНК ПЦР | Qiagen, Hilden, Германия | 28106 | |
| Программное обеспечение Living Image 4.1 | Caliper Life Sciences/PerkinElmer, Родгау, Германия | ||
| Система газовой анестезии XGI-8 | Caliper Life Sciences/PerkinElmer, Родгау, Германия | ||
| Система визуализации спектра IVIS | Caliper Life Sciences/PerkinElmer, Родгау, Германия | ||
| Биофотометр | Eppendorf AG, Гамбург, Германия |
Ссылки
- Niederman, M. S., et al. Guidelines for the management of adults with community-acquired pneumonia. Diagnosis, assessment of severity, antimicrobial therapy, and prevention. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 163, 1730-1754 (2001).
- WHO,
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
