Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

После в режиме реального времени Влияние пневмококковой факторов вирулентности в острой Mouse пневмонии Модель Использование биолюминесцентных бактерии

14.8K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/51174

⸱

23 февраля 2014 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department Genetics of Microorganisms, Interfaculty Institute for Genetics and Functional Genomics, University of Greifswald

В этой статье

Краткое содержание

Пневмококк является ведущим возбудителем тяжелой внебольничной пневмонии и отвечает за более чем 2 миллиона смертей во всем мире. Влияние бактериальных факторов, вовлеченных в фитнес или вирулентности можно отслеживать в режиме реального времени в острой мыши пневмонии или бактериемия модели с использованием биолюминесцентных бактерии.

Аннотация

Пневмония является одной из основных проблем здравоохранения в развивающихся и промышленно развитых странах и связана со значительным заболеваемости и смертности. Несмотря на успехи в знании этой болезни, наличия отделениях интенсивной терапии (ОИТ), а также использование сильнодействующих противомикробных препаратов и эффективных вакцин, показатели смертности остаются высокими 1. Пневмококк является ведущим возбудителем внебольничной пневмонии (ВП) и одним из наиболее распространенных причин бактериемии у людей. Это возбудитель оснащен арсенал поверхностно-подвергается адгезинов и вирулентности факторов, способствующих пневмонии и инвазивных пневмококковых инфекций (IPD). Оценка роли в естественных бактериальных фитнес или факторов вирулентности имеет первостепенное значение, чтобы разгадать S. пневмонии патогенности механизмов. Мышиные модели пневмонии, бактериемии и менингита используются для определения влияния пневмококковых факторов при разразличных стадиях инфекции. Здесь мы опишем протокол для мониторинга в режиме реального времени пневмококковой распространения у мышей после интраназального или внутрибрюшинными инфекций с биолюминесцентных бактерий. Результаты показывают, умножение и распространение пневмококков в нижних дыхательных путей и крови, что может быть визуально и оценивали с помощью системы визуализации и программное обеспечение прилагаемого анализа.

Введение

Инфекции дыхательных путей, вызванных вирусами или бактериями остаются одним из наиболее распространенных внебольничных или клинических проблем по всему миру, вызывая примерно одну треть всех смертей в мире. Ключевые виды бактерий являются гемофильной и пневмококк 2. Однако эти виды бактерий, как правило, общие компоненты природной флоры дыхательных путей. Таким образом бактериальная каретки также определенного риска развития инвазивного заболевания и в зависимости от иммунного статуса или предрасположенности лиц. Бессимптомно колонизация срабатывает с инвазивными инфекциями. Пневмококк является ведущим возбудителем внебольничной пневмонии (CAP) и один из самых распространенных причин бактериемии у людей. У здоровых лиц С. пневмонии (пневмококки), часто протекает бессимптомно и безвредные колонизаторы верхних дыхательных путей, где они сталкиваются с непатогенных бактерийиз флорой, но и с патогенов, таких как Haemophilus SPP. или золотистый стафилококк и первая линия системы обороны иммунной человека. Ставки по транспортировке являются самыми высокими в маленьких детей (37%) и даже выше в переполненных детских садах (58%) 3-5. Самый молодой населения и пожилых людей, получив пневмококк через аэрозольной передачи от перевозчиков и носоглотки выделениями 6, принадлежат к группам высокого риска и вакцинации с использованием одного из пневмококковых конъюгированных вакцин (PCV10 или PCV13 у детей и 23-валентной полисахаридной PPSV23 у взрослых) Рекомендуется в Соединенных Штатах (США) и многих европейских странах 4. PPSV23 охватывает серотипов, ответственных за ~ 90% бактериемией пневмококковых заболеваний в США и Европе, предотвращая, таким образом, эффективно инвазивных пневмококковых заболеваний (IPD) у взрослых, в то время как PCVs охватывают наиболее распространенные серотипы у детей. Следовательно, IPD из-за типов вакцин (VT) являются РедуCED но невакцинных серотипов отображения высокой вирулентности потенциал и устойчивость к антибиотикам появились 4,7-12. Носоглотки в качестве резервуара является отправной точкой для пневмококков распространяться на пазух или среднего уха, начавших вредных местных инфекций. Что более важно, пневмококки распространяться непосредственно через дыхательные пути в бронхах и легких, в результате чего, угрожающей жизни CAP 4,13. Легочные инфекции часто сопровождаются ткани и разрушения барьера, что позволит возбудителя распространяться в кровь и вызывает IPD. Случаи CAP и IPD являются самыми высокими в ослабленным иммунитетом лиц или в крайних возрастных 4,13. Обстоятельства, ответственные за преобразование из комменсал к патогена с высокой вирулентностью находятся в стадии обсуждения. Однако, помимо изменений в восприимчивости хозяина и эволюционной адаптации сопровождается более высокой вирулентностью и увеличение сопротивления к антибиотикам были предложены иметь решающее влияние на PNEumococcal инфекции 14-16.

Возбудитель наделен множеством адгезинов посреднических тесный контакт слизистой эпителиальных клеток. После преодоления слизи в дыхательных путях, пневмококковая соблюдение клетки-хозяева, облегчается с помощью прямых взаимодействий поверхностных, подвергшихся воздействию адгезинов с клеточными рецепторами и, используя компоненты внеклеточного матрикса или сывороточных белков, как преодоление молекулам 4,17,18. Как универсальные патогены пневмококки также оснащены факторов, участвующих в уклонении от иммунной защитных механизмов. Кроме того, они имеют способность адаптироваться к различным принимающих кругах, таких как легких, крови и спинномозговой жидкости (ликвора), соответственно 5,17,19,20.

Влияние бактериальных факторов на патогенез и воспалительные принимающих ответов исследуется в экспериментальных моделях на животных пневмонии, бактериемии или менингита 21-25. Несмотря на то, патоген человека, эти модели мыLL-создан, чтобы расшифровать пневмококковой ткани тропизм, механизмы вирулентности или protectivity кандидатов пневмококковых вакцин. Генетический фон инбредных линий мышей определяет восприимчивость к пневмококков. BALB / с мышей, инфицированных интраназально пневмококков Было обнаружено, что устойчивые, а CBA / Ca и SJL мыши были более чувствительны против пневмококковых инфекций 22. Это означает, что, похожи на людей, генетического фона и принимающих защитных механизмов определить исход инфекции. Таким образом, необходимы дальнейшие усилия, чтобы разгадать сопротивления локусов в геноме мышей менее чувствительными к пневмококковых инфекций. Полученные данные привели к изменениям в в естественных условиях протоколов вирулентности. Вместо инбредных мышей BALB / с мышей, часто используемых в прошлом, очень уязвимые CD-1/MF1 беспородных линии мышей являются в настоящее время часто используется для изучения влияния потерь на-функции пневмококковой вирулентности или пригодности факторов 26-28. Кроме того, наличиебиолюминесцентной пневмококков и оптических методов визуализации позволяет в режиме реального времени биолюминесценции Bioimaging инфекций. В пневмококков оптимизированный ген кассета luxABCDE (плазмиды Paul-Tn 4001 luxABCDE Км г) был вставлен в одном месте интеграции в хромосому транспозонного мутагенеза. Биолюминесцентный пневмококки были использованы для оценки ослабления пневмококковых мутантов, дефицитных по вирулентности или фитнес-факторов и их транслокации из одной анатомической сайта на другой 26,28-31.

Здесь мы предлагаем протокол для биоизображений пневмококковых инфекций в мышиной пневмонии или сепсиса модели. Усиление и распространение биолюминесцентного пневмококков в интраназально или внутрибрюшинно инфицированных мышей можно легко контролировать с течением времени с помощью оптической системы формирования изображения и того же животного в различные моменты времени.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Эксперименты инфекции животных, описанные здесь, должны выполняться в строгом соответствии с местными и международными (например, европейского права здравоохранения Федерации лабораторных животных Наука ассоциаций (FELASA)) принципами и правилами по использованию позвоночных животных. Эксперименты должны быть одобрены местным этического совета и институционального комитета по уходу за животными. Все эксперименты с S. пневмонии в лаборатории или инфекций животных проводятся в Кабинете класса II биобезопасности.

1. Подготовка инфекционных складе биолюминесцентных Pneumocococi

  1. Подготовка запас пневмококковых культуры в Todd-Hewitt бульона с добавлением 1% (вес / объем) дрожжевого экстракта и конечная концентрация 20% глицерина для поддержания при 80 ° С
  2. Plate небольшое количество глубокой заморозки складе пневмококковой культуры на кровяным агаром и инкубировать бактерии в течение 10 ч при 37 ° С в 5% СО 2. Тон кровяной агар пластина содержит соответствующие антибиотики, такие как канамицин (150 мкг / мл) для вставки транспозона гена кассеты luxABCDE в геном.
  3. Суб-культивировать свежий колонию на новый кровяным агаром в течение максимум 10 часов.
  4. Инокуляции THY среде, дополненной 10% (об / об) инактивированной нагреванием (30 мин при 56 ° С) эмбриональной телячьей сыворотки (FBS) с пневмококков и начать культуру при OD 600 из 0.05-0.07.
  5. Выдержите пневмококки без перемешивания при 37 ° С и 5% CO 2, пока культура не достигнет OD 600 из 0,35-0,40. Рост займет от 3-4 часов.
  6. Урожай пневмококки центрифугированием при 3750 х г в течение 10 мин и ресуспендируют биолюминесцентного пневмококков в фосфатном буферном растворе с рН 7,4 (PBS), дополненной 0,5% FBS.
  7. Регулировка посевной до желаемой концентрации в PBS/10% FBS. Доза инфекции зависит от пневмококковой используемого штамма и генетического фона микрофонэ. Для заражения беспородных CD-1 мышей интраназально S. пневмонии D39 Lux доза инфекции должна быть скорректирована до 1 х 10 7 КОЕ в суспензии 20 мкл с добавлением 90 единиц гиалуронидазы. Не трясите и не вихрь пневмококки, так как это вызовет автолиз.
  8. Проверьте концентрацию посевной путем посева в 10 раз серийные разведения на кровяной агар и подсчета колоний после ночного роста при 37 ° С в 5% CO 2.
  9. Проверьте биолюминесценции от пневмококковой посевного путем измерения биолюминесценции с помощью оптической системы формирования изображения.

2. Интраназальная и Внутрибрюшинное Заражение мышей с Bioluminescent пневмококков

  1. Используйте женский беспородных мышей в возрасте 7-10 недель для острой пневмонии и сепсиса модели. Вес этих мышей должна быть в пределах 20-30 г.
  2. Обезболить мышей путем внутрибрюшинной инъекции кетамина и ксилазина. Приготовить смесь 1,0 мгкетамин и 0,1 мг ксилазина в 100 мкл стерильной 0,9% (вес / объем) хлорид натрия для мышей с массой тела 20 г. Это согласуется с дозой 50 мг / кг массы тела в течение кетамина и 5 мг / кг массы тела в течение ксилазина. Чтобы быть точным, вес мышей перед инъекцией анестетиков.
  3. Введите смесь в внутрибрюшинного полости и поместите животных обратно в клетку, пока анестетики не действовать, и животные наркотизируемого. Дыхание мышей будет очень медленным и регулярным. Мыши должны быть полностью наркотизированных, так что интраназальное прививка и вдыхание бактериальной суспензии не приведет к чихание и, следовательно, потерю посевного материала. Об этом можно судить, зажимая мышь в конце хвоста; полностью наркотизируемого мышь не будет хватать отзывчивость.
  4. Аккуратно поднять наркотизируемого мышь и держать мышь между пальцами и большим пальцем с носа вертикальном (рис. 1).
  5. Используйте пипетки с длинными узкими наконечниками (гель LoaderСоветы) и падение биолюминесцентного пневмококки в нескольких мелких капель на ноздри (10 мкл / ноздрю) мыши 26-29. Мышь невольно вдыхать бактерии. Держите мыши 1-2 мин в вертикальном положении и наблюдать чихает ли мышь или держит посевной.
  6. Infect 7-10 неделе старый CD-1 мышей интраназально с инфекцией дозе 1 × 10 7 или 7,5 х 10 7 пневмококков штамма D39 и TIGR4, соответственно, для мониторинга инфекции в реальном времени. Предел обнаружения для системы без поглощения ткани хозяина примерно 1 × 10 6 бактерий биолюминесцентного.
  7. Заразить мышей внутрибрюшинно (IP) для оценки и bioimage вирулентность пневмококков в модели инфекции сепсис мыши. Использование 5 х 10 3 КОЕ в 100 мкл штамма D39 и 1 × 10 4 штамма TIGR4. Мыши не наркоз при использовании маршрут IP.
  8. Инокулировать контрольных мышей с PBS.
    figure-protocol-1
    Рисунок 1. Интраназальная инфекция CD-1 мышей с S. пневмонии. Нажмите здесь, чтобы увеличить изображение .

3. Визуализация пневмококковой Распространение в легких и крови Использование Imaging System

Распространение Изображение пневмококков после интраназального заражения женщин беспородных мышей CD1 в режиме реального времени с использованием в естественных условиях системы визуализации.

  1. Включить систему визуализации и запустить программное обеспечение для анализа изображений, расположенную на preconfigurated компьютере.
  2. Система формирования изображения инициализирует автоматически и CCD камера термоэлектрически охлаждают до 90 ° С, прежде чем активным.
  3. Параметры и отбора по зависеть от числа мышей, измереннойодновременно и на основании биолюминесцентного сигнала. Поле зрения (FOV) для мониторинга биолюминесценции животных является переменной и увеличение колеблется между FOV 22,5 см для измерения пять мышей, и поле зрения 3,9 см для измерения одного мыши или частей животного, как грудь или голова.
  4. Используйте регулярно время экспозиции 1 мин, средней степенью биннинга, и поле зрения 22,5 см (комплект D). Во-первых, выберите режим визуализации люминесцентных и затем установите параметры визуализации.
  5. Излучение сигнала может зависеть от бактериального штамма и штамма мыши и используемого пигмента мыши. Бритье грудь мышей при использовании, например, мышей C57BL / 6, который может быть выгодным при визуализации развитие пневмонии у этих мышей.
  6. Изображение инфицированных мышей на prechosen промежутки времени. Измерить биолюминесценции мышей в модели острой пневмонии с интервалами времени в максимальном 8-12 часов. Монитор также благосостояние зараженных мышей observiнг их внешний вид, поведение и определение потери веса.
  7. Обезболить мышей в наркотическом камере анестезии системе съемочной аппаратуры до измерений в камере. Начните вдыхания смеси изофлураном и кислорода и ждать, пока мыши не дышать медленно и регулярно.
  8. Наведите наркозом животных в визуализации камеры системы и держать мышей в положении лежа на спине. ПЗС-камера в верхней части камеры будет потом изображения мышиный дыхательных путей.
  9. Поместите животных с их носом в в пробирки, чтобы вдыхания анестетиков.
  10. Изофлюран вступление в изображения камеры через трубку газа допускается для поддержания анестезии.
  11. Для активации ПЗС-камеры на верхней части камеры и начать биолюминесцентного оптических изображений, нажмите "приобрести" в ПО для обработки изображений. На экране сразу же собой фотографию мышей в закрытой камере появляется. После одной минуты измерению накладку данных биолюминесценции и фото показан.
  12. Остановить анестезии после наложение изображения появится в окне программного обеспечения и положить мышей обратно в их клетках.
  13. Мыши контролируются для восстановления.
    figure-protocol-2
    Рисунок 2. Анестезии и мониторинга мышей, инфицированных биолюминесцентного пневмококков с использованием анестезии ИВИС и систему IVIS спектр, соответственно.) Система IVIS Спектр изображений. B) Система анестезии IVIS с инкубационной камере. С) Мышей анестезировали в инкубационной камере . D) Мышей расположен внутри камеры IVIS Спектр изображениями с их нос вдыхая анестетик._blank "> Нажмите здесь, чтобы посмотреть увеличенное изображение.

4. Количественное и оценки биолюминесценции мышей, инфицированных Bioluminescent S. пневмонии

  1. Определите интенсивность биолюминесценции мышей или выбранного региона мышей путем количественного определения общих выбросов фотонов (фотонов / сек) с помощью программного обеспечения для анализа изображений.
  2. Используйте значения излучения фотонов, которые предоставляются в паспорте Excel подготовить график. Поскольку изменение данных часто высока в сгруппированных мышей, генерировать коробка усов график, отображающий разницу в мышей, инфицированных различными пневмококковых штаммов.
  3. Обеспечить фотонов в мышей или, альтернативно результаты как в среднем сияния (фотон / сек / см 2 / СР) выбранной области.
  4. Данные измерений из ROI (область интересов,) в режиме фотонного может быть количественно сравнивать между отличается в естественных систем визуализации с различными пришелНастройки ра, так как измерения в единицах сияния автоматически учитывать настройки камеры (например, время интегрирования, биннинга, е / стоп, и поле зрения).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Приобретение и поглощение метионина имеет решающее значение для пневмококков для поддержания фитнес в принимающей нише 32,33. Метионин ABC транспортер липопротеинов кодируется в D39 СДПГ _ 0151 генов (TIGR4: sp_0149) и назвал MetQ 32. Пневмококки дальше производить метионин ферменты биосинтеза (D39: Spd_0510 - Spd_0511; TIGR4 Sp_0585 - Sp_0586, Мете и MetF). Отсутствие метионина в химически определенной среде влияет на рост пневмококков и похожи, отсутствие метионина связ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Все эксперименты, проведенные на животных, должны быть одобрены местными властями и комиссий по этике. В естественных условиях в инфекции экспериментов бактериальная нагрузка в различных принимающих нишах зараженных животных должно быть определено в различные моменты времени после инфицирования. В этих условиях эксперимента животные должны быть принесены в жертву до выделения бактерий из крови, носоглотки, bronchoalvelar промывания или органов, таких как легкие, селезенка, и мозг. Чтобы рассчитать количес...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы не имеют ничего раскрывать.

Благодарности

Исследования в лаборатории при поддержке грантов от Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG HA 3125/3-2, DFG HA 3125/4-2) и Федеральным министерством образования и научных исследований (BMBF) Медицинская инфекции геномики (ФКЗ 0315828A) в SH.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Бульон Тодда ХьюиттаCarl Roth, Карлсруэ, ГерманияX936.1 
Дрожжевой экстрактCarl Roth, Карлсруэ, Германия2363.2 
Агаровые пластины для кровиOxoid, Wesel, ГерманияPB5039A 
КанамицинКарл Рот, Карлсруэ, ГерманияT832.2 
ЭритромицинSigma-Aldrich, Тауфкирхен, ГерманияE6376 
Фетальная бычья сыворотка (FBS)PAA Laboratories, Кельбе, ГерманияA11-151 
Мыши CD-1, самкаRiver, Зульцфельд, ГерманияCD1SIFE06W08Wсамки мышей CD-1, возрастом от шести до восьми недель
Кетамин 500 мг, раствор для инъекций CuramedSchwabe-Curamed, Карлсруэ, Германия;
Ромпун 2%, раствор для инъекцийBayer Animal Health, Монхайм, Германия 
BD Plastipak 1 мл шприцыBecton Dickinson, Heidelberg, Германия300015стерильные шприцы Luer-Lok с иглой
Gel Loader TipsPeqLab81-13790Mµ ltiFlex Tips
ГиалуронидазаSigma-AldrichH3884-100 мгГиалуронидаза типа IV-S из теста крупного рогатого скота
OxygenAir Liquide, Dü Ссельдорф, ГерманияM1001L50R2A001 
IsofluraneBaxter, Unterschleiß heim, Германия 
pGEM-T EasyPromega, Мангейм, Германия 
Олигонуклеотиды Eurofins MWG, Эберсберг, Германия 
Qiaprep Spin Midiprep Kit Qiagen, Hilden, Германия27104 
Набор для очистки ДНК ПЦРQiagen, Hilden, Германия28106 
Программное обеспечение Living Image 4.1Caliper Life Sciences/PerkinElmer, Родгау, Германия 
Система газовой анестезии XGI-8Caliper Life Sciences/PerkinElmer, Родгау, Германия 
Система визуализации спектра IVIS Caliper Life Sciences/PerkinElmer, Родгау, Германия 
БиофотометрEppendorf AG, Гамбург, Германия 
Charles

Ссылки

  1. Niederman, M. S., et al. Guidelines for the management of adults with community-acquired pneumonia. Diagnosis, assessment of severity, antimicrobial therapy, and prevention. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 163, 1730-1754 (2001).
  2. WHO, The global burden of disease: 2004 update. World Health Organization. , (2008).
  3. Bogaert, D., et al. Colonisation by Streptococcus pneumoniae and Staphylococcus aureus in healthy children. Lancet. 363, 1871-1872 (2004).
  4. Gamez, G., Hammerschmidt, S. Combat pneumococcal infections: adhesins as candidates for protein-based vaccine development. Curr. Drug Targets. 13, 323-337 (2012).
  5. Mook-Kanamori, B. B., Geldhoff, M., vander Poll, T., Dvan de Beek, D. Pathogenesis and pathophysiology of pneumococcal meningitis. Clin. Microbiol. Rev. 24, 557-591 (2011).
  6. Musher, D. M. How contagious are common respiratory tract infections. N. Engl. J. Med. 348, 1256-1266 (2003).
  7. Brueggemann, A. B., Pai, R., Crook, D. W., Beall, B. Vaccine escape recombinants emerge after pneumococcal vaccination in the United States. PLoS Pathog. 3, (2007).
  8. Munoz-Almagro, C., et al. Emergence of invasive pneumococcal disease caused by nonvaccine serotypes in the era of 7-valent conjugate vaccine. Clin. Infect. Dis. 46, 174-182 (2008).
  9. Whitney, C. G. Impact of conjugate pneumococcal vaccines. Pediatr. Infect. Dis. J. 24, 729-730 (2005).
  10. Whitney, C. G., et al. Decline in invasive pneumococcal disease after the introduction of protein-polysaccharide conjugate vaccine. N. Engl. J. Med. 348, 1737-1746 (2003).
  11. Lynch, J. P. 3rd, Zhanel, G. G. Streptococcus pneumoniae: epidemiology and risk factors, evolution of antimicrobial resistance, and impact of vaccines. Curr. Opin. Pulm. Med. 16, 217-225 (2010).
  12. Singleton, R. J., et al. Invasive pneumococcal disease caused by nonvaccine serotypes among Alaska native children with high levels of 7-valent pneumococcal conjugate vaccine coverage. JAMA. 297, 1784-1792 (2007).
  13. Dockrell, D. H., Whyte, M. K., Mitchell, T. J. Pneumococcal pneumonia: mechanisms of infection and resolution. Chest. 142, 482-491 (2012).
  14. Lieberman, T. D., et al. Parallel bacterial evolution within multiple patients identifies candidate pathogenicity genes. Nat. Genet. 43, 1275-1280 (2011).
  15. Yang, J., Tauschek, M., Robins-Browne, R. M. Control of bacterial virulence by AraC-like regulators that respond to chemical signals. Trends Microbiol. 19, 128-135 (2011).
  16. Young, B. C., et al. Evolutionary dynamics of Staphylococcus aureus during progression from carriage to disease. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 109, 4550-4555 (2012).
  17. Kadioglu, A., Weiser, J. N., Paton, J. C., Andrew, P. W. The role of Streptococcus pneumoniae virulence factors in host respiratory colonization and disease. Nat. Rev. Microbiol. 6, 288-301 (2008).
  18. Voss, S., Gamez, G., Hammerschmidt, S. Impact of pneumococcal microbial surface components recognizing adhesive matrix molecules on colonization. Mol. Oral Microbiol. 27, 246-256 (2012).
  19. Koppe, U., Suttorp, N., Opitz, B. Recognition of Streptococcus pneumoniae by the innate immune system. Cell. Microbiol. 14, 460-466 (2012).
  20. Paterson, G. K., Mitchell, T. J. Innate immunity and the pneumococcus. Microbiology. 152, 285-293 (2006).
  21. Gerber, J., et al. A mouse model of Streptococcus pneumoniae meningitis mimicking several features of human disease. Acta Neuropathol. 101, 499-508 (2001).
  22. Gingles, N. A., et al. Role of genetic resistance in invasive pneumococcal infection: identification and study of susceptibility and resistance in inbred mouse strains. Infect. Immun. 69, 426-434 (2001).
  23. Holmes, A. R., et al. The pavA gene of Streptococcus pneumoniae encodes a fibronectin-binding protein that is essential for virulence. Mol. Microbiol. 41, 1395-1408 (2001).
  24. Koedel, U., Klein, M., Pfister, H. W. New understandings on the pathophysiology of bacterial meningitis. Curr. Opin. Infect. Dis. 23, 217-223 (2010).
  25. Medina, E. Murine model of pneumococcal pneumonia. Methods Mol. Biol. 602, 405-410 (2010).
  26. Hartel, T., et al. Impact of glutamine transporters on pneumococcal fitness under infection-related conditions. Infect. Immun. 79, 44-58 (2011).
  27. Hermans, P. W., et al. The streptococcal lipoprotein rotamase A (SlrA) is a functional peptidyl-prolyl isomerase involved in pneumococcal colonization. J. Biol. Chem. 281, 968-976 (2006).
  28. Jensch, I., et al. PavB is a surface-exposed adhesin of Streptococcus pneumoniae contributing to nasopharyngeal colonization and airways infections. Mol. Microbiol. 77, 22-43 (2010).
  29. Kadioglu, A., et al. Pneumococcal protein PavA is important for nasopharyngeal carriage and development of sepsis. Mol. Oral Microbiol. 25, 50-60 (2010).
  30. Orihuela, C. J., Gao, G., Francis, K. P., Yu, J., Tuomanen, E. I. Tissue-specific contributions of pneumococcal virulence factors to pathogenesis. J. Infect. Dis. 190, 1661-1669 (2004).
  31. Francis, K. P., et al. Visualizing pneumococcal infections in the lungs of live mice using bioluminescent Streptococcus pneumoniae transformed with a novel gram-positive lux transposon. Infect. Immun. 69, 3350-3358 (2001).
  32. Basavanna, S., et al. The effects of methionine acquisition and synthesis on Streptococcus pneumoniae growth and virulence. PLoS One. 8, (2013).
  33. Hartel, T., et al. Characterization of central carbon metabolism of Streptococcus pneumoniae by isotopologue profiling. J. Biol. Chem. 287, 4260-4274 (2012).
  34. Hammerschmidt, S., et al. The host immune regulator factor H interacts via two contact sites with the PspC protein of Streptococcus pneumoniae and mediates adhesion to host epithelial cells. J. Immunol. 178, 5848-5858 (2007).
  35. Voss, S., et al. The choline-binding protein PspC of Streptococcus pneumoniae interacts with the C-terminal heparin-binding domain of vitronectin. J. Biol. Chem. , (2013).
  36. Cartwright, K. Pneumococcal disease in western Europe: burden of disease, antibiotic resistance and management. Eur. J. Pediatr. 161, 188-195 (2002).
  37. vander Linden, M., Al-Lahham, A., Nicklas, W., Reinert, R. R. Molecular characterization of pneumococcal isolates from pets and laboratory animals. PLoS One. 4, (2009).
  38. Brehm,, et al. Sequence of the adenine methylase gene of the Streptococcus faecalis plasmid pAM beta 1. Nucleic Acids Res. 15, 3177 (1987).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

интраназальное инфицированиевнутрибрюшинное инфицированиеколичественное определение биолюминесценциисистема оптической визуализацииStreptococcus pneumoniaeметионин-связывающий липопротеинмониторинг в режиме реального времени
После в режиме реального времени Влияние пневмококковой факторов вирулентности в острой Mouse пневмонии Модель Использование биолюминесцентных бактерии
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.