Методическая статья

Измерения воздействия бактерий на

DOI:

10.3791/51203

⸱

22 октября 2013 г.

 ,  , 
1Department of Biological and Allied Health Sciences, Fairleigh Dickinson University

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Яйцо-в-червь (ЕНИ) анализ является полезным методом для количественной яйцекладки поведения. Изменения в откладки яиц может быть поведенческая реакция модельного организма Caenorhabditis Элеганс Потенциально вредных экологических веществ, таких как произведенные патогенных бактерий.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

C. Элеганс яйцекладка поведение влияют сигналы окружающей среды, такие как осмолярность 1 и вибрации 2. При полном отсутствии питания C. Элеганс также прекратить яйцекладка и сохранять оплодотворенные яйца в матке 3. Тем не менее, влияние различных источников пищи, особенно патогенных бактерий и, в частности Enterococcus фекальный, на яйцекладка поведение не хорошо описана. Яйцо-в-червь (ЕНИ) анализ является полезным инструментом для количественной оценки влияния различных видов бактерий, в данном случае Е. фекальный, на яйцекладка поведения.

ЕНИ анализов включает подсчет количества яиц сохраняется в матке C. Элеганс 4. Анализ ЕНИ включает отбеливание поставил, беременной взрослого C. Элеганс для удаления кутикулы и отделите сохранил яйца от животного. До отбеливания, червей подвергаются воздействию бактерий (или любой другой тип экологических кий) В течение фиксированного периода времени. После отбеливания, одна очень легко рассчитывать количество яиц, сохранил в матку червей. В этом анализе количественного увеличения яйцо удержание после E. фекальный воздействие может быть легко измерено. Анализ EIW поведенческие анализа, которые могут быть использованы для скрининга потенциально патогенных бактерий или наличие токсинов окружающей среды. Кроме того, анализ EIW может быть инструментом для скрининга препаратов, которые влияют на нейротрансмиттер сигнализации с яйцекладки поведение модулируется нейротрансмиттеров, таких как серотонин и ацетилхолин 5-9.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Caenorhabditis Элеганс, микроскопический, свободной жизни аскариды, является модельным организмом традиционно используется для изучения и развития клеточных сигнальных процессах из-за его прозрачной анатомии, хорошо характеризуется, С-геномом, последовательность, короткая поколение времени, и генетической гомологии для человека . Совсем недавно С. Элеганс стала модель организма в области экологической токсикологии и врожденный иммунитет 10, 11.

Эти самооплодотворяющимися гермафродиты черви становятся половозрелыми в течение двух-трех дней вылупления из яйца. Во время его жизненного цикла, C. Элеганс п....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1) Получение медиа Нематоды роста (НГО)

  1. Чтобы 50 пластин, добавьте 1,5 г NaCl, 8,5 г Ultrapure агар и 1,25 г пептона до 1 Lflask.
  2. Добавить 487,5 мл дН 2 O в колбу. Вихревой осторожно перемешать и охватывают открытие колбе с куском алюминиевой фольги.
  3. Стерилизовать раствор в автоклаве при стандартных условиях (121 фунтов на квадратный дюйм, 120 ° C, 20 мин).
  4. Дайте раствору остыть до 45 ° С на водяной бане.
  5. К раствору, добавьте следующую по порядку: 500 мкл холестерина из 5 мг / мл маточного раствора (растворяют в этаноле), 500 мкл 1 М CaCl 2, 500 мкл 1 М MgSO 4 и 12,5 мл КПО 4

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Этот анализ позволяет количественно количество яиц сохранены в C. Элеганс после воздействия E. фекальный. L4 постановке черви (характеризуется прозрачной открытое пространство над их вульвы, рисунок 1), подвергают воздействию E. фекальный до зрелого возраста. После сорока часов воздействия E. фекальный, отбеливание проводилось. Как кутикулы распалась в капли отбеливателя, яйца стали более очевидными (рис. 2). Количество удержанных яиц легко количестве.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Наиболее важных шагов в успешного проведения этого анализа: 1) с помощью сытых запасов C. Элеганс, 2) культивирование одного типа бактерий на планшет для анализа, 3) точно идентифицировать постановке L4 червей для воздействия E. фекальный, 4) сохранение Выдержка Е. фекальный последовательным во всех испытаниях и 5) отбеливание время не должно превышать десяти минут, чтобы предотвратить распад яйцо.

Для этого анализа важно выбрать здоровые, сытые червей. Материнское.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы хотели бы поблагодарить июня Миддлтон для подачи E. фекальный штаммов и для руководства с культурой бактерий. C. Элеганс были предоставлены CGC, которая финансируется за счет НИЗ Управления программ исследовательской инфраструктуры (P40 OD010440).

....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

E. faecalis

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Агар, сверхчистыйAffymetrix10906
Bacto PeptoneBecton Dickinson211677
Bacto TryptoneBecton Dickinson211705
Brain Heart Infusion обезвоженная средаCarolina Biological Supply781781
C. elegans, N2 штаммCaenorhabditis Genetics Centerhttp://www.cbs.umn.edu/cgc
ХолестеринАльфа Аесар А11470
Культуральные планшеты для C. elegansTritech Research Inc.T3308
Культуральные планшеты для штаммов
E. coli (OP50)Caenorhabditis Genetics Centerhttp://www.cbs.umn.edu/cgc
E. faecalis Все изоляты были подтверждены как энтерококки<

все штаммы выросли на 44,5 º С и были каталазоотрицательными и гидролизованными эскулинами. Упрощенный  (арабиноза, маннитол, метил-&альфа;-D-глукопиранозид (МГП), рибоза, сорбоза и сорбит) разрешены; и сорбоза отрицательная и сорбит, маннит и рибоза положительные). Все предполагаемые штаммы Efs  подтверждено с помощью системы API 20 STREP (Biomerieux).

МикроскопMoticSMZ 168Bлюбой микроскоп с пропускаемым освещением и 50-кратным увеличением должен быть достаточным
Стрептомицина сульфатFisher BioReagentsBP910-50
Триптик Соевый агар (соя-казеиновый Digest Агаровая среда), DifcoBecton Dickinson236950
Триптиказ соевый бульон (соево-казеиновая среда для расщепления), BBLBecton Dickinson211768
дрожжевой экстрактAcros61180-1000
Fisher Scientific-Fisherbrand 875713 предоставлено J. Middleton.td colspan="4">путем наблюдения роста на энтерококкозном агаре (BBL) и в 6% бульоне NaCl;

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Horvitz, H. R., Chalfie, M., Trent, C., Sulston, J. E., Evans, P. D. Serotonin and octopamine in the nematode Caenorhabditis elegans. Science. 216, 1012-1014 (1982).
  2. Sawin, E. R. Genetic and cellular analysis of modulated behaviors in Caenorhabditis elegans [dissertation]. , Massachusetts Insti....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Enterococcus faecalis

Похожие статьи