Маточно-трубное перенос эмбрионов использует маточно-трубное соединение в качестве барьера, чтобы предотвратить отток эмбриона, которые могут возникнуть при выполнении передачи матки. Вазэктомии мужчины обязаны получить псевдобеременных получателей переноса эмбрионов. Обсуждаются Оба метода.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Маточно-трубное Эмбрион Трансфер и Вазектомия в мышиной модели
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Перенос эмбрионов предимплантационной суррогатной женщина является необходимым шагом для производства генетически модифицированных мышей или изучать эффекты эпигенетических изменений возникла в процессе развития предимплантационной на последующее развитие плода и здоровье взрослых. Использование эффективной и последовательной методики переноса эмбриона имеет решающее значение для повышения поколение генетически модифицированных животных и определить влияние различных методов лечения на имплантации ставок и выживания к перспективе. Эмбрионы на стадии бластоцисты, как правило, передается переводом матки, выполняя прокол в стенке матки ввести манипуляции эмбрион пипетки. Отверстие выполняется в матке не закрывается после пипетка была снята, и эмбрионы могут отток в брюшную полость в связи с положительным давлением матки. Прокол может также произвести кровоизлияние, что ухудшает имплантацию, блокирует перенос пипетки и может повлиять эмбриона дАЗВИТИЕ, особенно когда эмбрионы без Zona передаются. Следовательно, этот метод часто приводит к очень переменными и общей выживаемости низким эмбриона. Как избежать этих негативных последствий, маточно-трубное перенос эмбрионов воспользоваться маточно-трубное стыке как естественный барьер, который препятствует оттоку эмбриона и избежать прокола стенки матки. Вазэктомии мужчин необходимы для получения псевдобеременных получателей. Техника для выполнения вазэктомии описывается как дополнение к маточно-трубное переноса эмбрионов.
Введение
Перенос эмбрионов, вероятно, наиболее часто хирургическая процедура, проводимая в модели мыши. Эта техника имеет важное значение для получения потомства от эмбрионов, подвергнутых в пробирке методов манипуляции и, следовательно, является необходимым шагом для развития генетически модифицированных моделей по пронуклеусов инъекции, лентивирусным трансдукции, или образования химер. Кроме того, методика позволяет изучение развития последствий различных оскорблений, происходящих в процессе разработки предимплантационной. Использование искусственных репродуктивных технологий 1 или воздействия аномальных концентраций различных веществ или метаболитов
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
В соответствии с USDA уходу и использованию животных Руководства Все эксперименты на животных были утверждены Белтсвилль Площадь уходу и использованию животных Комитеты (BAACUC 11-015).
1. Анестезия и обезболивание (общий для обоих хирургических процедур)
- Взвесьте мыши и загружать следующие анестетики и анальгезирующее в двух 1 мл шприцев с 27 г хвои:
- Кетамин (0,1 мг / г: 0,01 мл / г раствора 10 мг / мл) и ксилазина (0,01 мг / г: 0,005 мл / г раствора 2 мг / мл).
- Бупренорфин (0,1 мкг / г: 0,01 мл раствора 0,01 мг / мл).
- Остановите мышь, поднимая загривок ш....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Маточно-трубное перенос эмбрионов обеспечивает среднее для передачи эмбрионов в матку избегая некоторых осложнений, связанных с матки переноса эмбрионов 2,9,10. В таблице 1 мы показываем некоторые характерный результат, мы получили передачи CD1 бластоцисты подвергаются различным видам манипуляций получателям CD1 следуя протоколу, описанному. Выживание в перспективе (% эмбрионов в результате чего щенка) или выживание в E15 (в случае лентивирусов воздействию) аналогично между эмбрионами просто .......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Вазэктомия является относительно прямой хирургическая техника, которая не включает в себя основные трудности. При дезинфекции с повидон-йод и этанола убедитесь, что в прошлом для мытья (этанолом) удаляет повидон йод, так как это может вызвать раздражение брюшины. Доступ к семяпровода также может быть достигнуто путем мошонке или выполнения поперечного разреза в брюшной полости 8. Разреза мошонки было рекомендовано трансверсальна разреза брюшной полости в связи с сравнительно меньший разрез, необходим.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы заявляют каких конкурирующих финансовых интересов.
Благодарности
Эта работа была поддержана за счет средств Департамента животных и птичьего наук к БТ.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Кетамин | VEDCO | Ketaved ANADA 200-257 | Заказывается лицензированным ветеринаром. |
| Xylazine | Lloyd Laboratories | Anased NADA #139-236 | По заказу лицензированного ветеринара. |
| Бупренорфин | Дженерик | NDC 400-42-010-01 | Заказывается лицензированным ветеринаром. |
| Глазная мазь | Novartis | Genteal | |
| Antibiotic | Pfizer | Clavamox NADA #55-101. | Добавляется в питьевую воду (0,3 мг/мл амоксициллина тригидрата и 0,075 мг/мл клавуланата калия). Добавьте 1,5 мл восстановленной бутылки объемом 15 мл в 250 мл воды. |
| Повязка зубчатые щипцы | ROBOZ | RS-8120 | Подойдут любые прямые щипцы из хирургической стали среднего размера. |
| Микрорассекающие зубчатые щипцы | ROBOZ | RS-5137 | изогнуты под углом 90°м. При желании можно использовать прямые щипцы. |
| Слегка изогнутые микродиссекционные щипцы | ROBOZ | RS-5136 | Эта модель особенно полезна для удержания яйцевода. |
| Ножницы | ROBOZ | RS-5880 | Подойдут любые обычные хирургические стальные маленькие прямые ножницы. |
| иглы 27 G | Beckton-Dickinson | 305136 | Меньшие иглы (30 G). 25 G может быть немного больше. |
| Аппликатор клипс | MiKRon | 42763 | |
| 9 мм Клипсы | MiKRon | 427631 | |
| Съемник клипс | MiKRon | 7637 | Вместо этого можно использовать две пары щипцов для зубов (ROBOZ RS-8160). |
| Иглодержатель для швов | ROBOZ | RS-7820 | |
| Шовный материал | Dowist Gell | 5-0 Dexon S 7204-21 | Может быть заменен на любой рассасывающийся шов от 4-0 до 6-0 с узкой изогнутой иглой. |
| Стеклянные капилляры | VWR | 100 ul калиброванные пипетки 53432-921 | Он включает в себя систему аспиратора рта, к которой требуется всего лишь присоединение 0,22 µ m в трубке, чтобы быть готовым к использованию. Более подробную информацию можно получить в Nagy et al.8 |
| Горелка | KISAG AG | Typ 2002 | Газовая горелка, может заряжаться от Kigas (CH-4512, от того же поставщика). Также можно использовать спиртовые горелки, но газ обеспечивает более высокую температуру, и эта горелка обеспечивает небольшое и точное пламя. |
| Стереомикроскоп | Leica | MZFLIII | Это дорогой эстереомикроскоп с флуоресценцией, который можно использовать и для других целей. Есть более дешевые варианты, такие как Leica MZ8 или Nikon SMZ-10 или SMZ-2B, и это лишь некоторые из них. Лучше использовать два стереомикроскопа, один для работы с эмбрионами (который не обязательно должен быть очень хорошим), а другой для реципиента. Тот, который используется для реципиента, должен находиться на большом расстоянии от сценической пластины до линзы объектива, чтобы иметь возможность сфокусироваться на 3-4 см выше сценической пластины (где будет размещен яйцевод) и при этом оставить некоторое пространство для хирурга; Большинство стереомикроскопов могут это делать, но некоторые не могут. |
| Иллюминация волоконной оптики | Dolan Jenner | Fiber lite | Для илюминации операционной области. Существуют различные системы. |
| Теплые сцены | американского | прицелаhttp://store.amscope.com/tcs-100.html | Их можно разместить над рабочей поверхностью стереомикроскопа. Некоторые модификации (вставка палочки для выравнивания предметного столика) могут понадобиться, если он слишком короткий для стереомикроскопа. Для утепления клетки можно использовать большую теплую сцену, если таковая имеется. Если нет, можно использовать обычную грелку, но необходимо проверять температуру. |
| культуральные чашки для манипуляций с эмбрионами | Falcon | 353001 | 351008, в которых делаются более узкие капли. |
Ссылки
- Fernandez-Gonzalez, R., et al. Long-term effect of in vitro culture of mouse embryos with serum on mRNA expression of imprinting genes, development, and behavior. Proc. Natl. Acad. Sci USA. 101, 5880-5885 (2004).
- Bermejo-Alvarez, P., Roberts, R. M., Rosenfeld, C. S.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
