Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Juxtacellular Мониторинг и локализация отдельных нейронов в подкорковых структурах головного мозга оповещения, глава выдержанные крыс

10.9K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/51453

⸱

27 апреля 2015 г.

 ,  , 
1Department of Physics 0374, University of California, San Diego, 2Department of Psychiatry and Neuroscience, Centre de Recherche de l’Université Laval Robert-Giffard

В этой статье

Краткое содержание

Этот протокол описывает разработку и хирургическую имплантацию механизма, ограничивающего голову, для мониторинга нейронной активности в подкорковых структурах мозга у бдительных крыс. В нем описаны процедуры изоляции отдельных нейронов в юкстацеллюлярной конфигурации и эффективного определения их анатомического расположения.

Аннотация

Существует множество методов мониторинга внеклеточной активности отдельных нейронных единиц. Тем не менее, мониторинг этой активности из глубоких структур мозга у ведущих себя животных остается технической проблемой, особенно если структуры должны быть нацелены на стереотаксически. Этот протокол описывает удобные хирургические и электрофизиологические методы, которые поддерживают голову животного в стереотаксической плоскости и однозначно изолируют спайковую активность отдельных нейронов. Протокол сочетает в себе подкрепление головы бдительных грызунов, юкстацеллюлярный мониторинг с помощью микропипеточных электродов и инъекцию ионтофоретического красителя для определения местоположения нейронов в апостериорной гистологии. Хотя каждый из этих методов сам по себе хорошо зарекомендовал себя, протокол фокусируется на специфике их совместного использования в одном эксперименте. Эти нейрофизиологические и нейроанатомические методы сочетаются с поведенческим мониторингом. В настоящем примере комбинированные методы используются для определения того, как самостоятельно генерируемые движения вибриссы кодируются в активности нейронов в соматосенсорном таламусе. В более общем плане, этот протокол легко адаптировать для мониторинга активности нейронов в сочетании с различными поведенческими задачами у крыс, мышей и других животных. Важно отметить, что комбинация этих методов позволяет экспериментатору напрямую связывать анатомически идентифицированные нейрофизиологические сигналы с поведением.

Введение

Мониторинг нейронной активности в предупреждении животного активно занимается поведенческой задачи имеет решающее значение для понимания функции и организацию нервной системы. Внеклеточной записи электрической активности от отдельных нейронов единиц уже давно штапельного инструмент системной неврологии и до сих пор широко используется в настоящее время. Разнообразие типов электродов и конфигураций доступны в зависимости от научных и технических требований конкретного эксперимента. Хронически имплантировали Microdrives или электродные массивы часто используются в свободно движущихся животных, включая птиц, грызунов и приматов 1-4. Кроме того, острые проходы с металлическими или стеклянных микроэлектродов через внешний микроманипулятором часто используются для записи с анестезированных или головных-сдерживается животных. Стекло микропипетки электроды имеют то преимущество, что они могут быть использованы в juxtacellular или "клеток, прикрепленный" конфигурации однозначно выделитьдеятельность отдельных нейронов без осложнений после специальной шип сортировки 5. Эти электроды дополнительно разрешить запись с анатомически определенных клеток или местах, так как они могут быть использованы для введения небольших месторождений красителей или нейроанатомической индикаторов, или даже заполнить отдельные ячейки записаны. Эта конфигурация была успешно применена у крыс, мышей и птиц 6-10. Сейчас опишем метод сосредотачивается на juxtacellular мониторинга и депозитов внеклеточного красителей в боевой готовности, головные выдержанные крыс. Обратите внимание, что в отличие от одной клетки juxtacellular заполняет эти отложения красителя не предоставляют информацию о морфологии клеток или аксонов прогнозов 11, но они позволяют точно анатомическую локализацию примерно 50 мкм и, что особенно важно, имеют значительно более высокую доходность оповещения животных. Информация о одноклеточных juxtacellular заполняет тем не менее, при условии, в качестве альтернативной стратегии для анатомической маркировки.

Короче говоря,Протокол состоит из трех основных этапов. На первом этапе, крыса приспособиться к телу пресечения в ткани носка (рис 1) в течение 6 дней. На втором этапе, подголовник аппарат (рис 2) и записи камеры хирургическим путем имплантировали такое, что крысы могут быть сохранены в стереотаксической плоскости в течение нескольких последующих сессиях записи (рисунок 3); Эта процедура позволяет экспериментатору целевой конкретных подкорковых областей мозга для электрофизиологического исследования на основе стандартной ссылкой координаты 12. Третий этап включает в себя размещение крысу в соответствующем приспособлении для проведения поведенческих и электрофизиологических опытов (рисунок 4), строительство электрод из кварцевой капиллярной трубки (Рисунок 5), что делает juxtacellular нейронные записи, которые однозначно изолировать отдельные единицы 6-9, и Маркировка анатомические Locatiна сайта записи с Чикаго Небесно-голубой краской (рис 6 и 7). Записи выполняются с одновременным мониторинг поведения; Однако, технические детали поведения будет зависеть от научных целей каждого эксперимента и, таким образом, выходит за рамки одного протокола. После завершения экспериментальной процедуры, которые могут быть повторены на несколько дней, животное эвтаназии. Мозг извлекается и обрабатывается в соответствии со стандартными методами с использованием нейроанатомической либо светлом поле или флуоресцентной микроскопии.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Экспериментальные протоколы были проведены на самках крыс Long Evans (250 - 350 г) в соответствии с федеральной предписанных руководящих принципов по уходу за животными и использования и были утверждены Комитетом по уходу и использованию Институциональная животного в Калифорнийском университете Сан-Диего.

1. акклиматизации крыса тела пресечения

ПРИМЕЧАНИЕ: Установите крысу на ограниченном рационе. Поток крысу один раз в день сразу после каждого ежедневного сеанса обработки, чтобы акклиматизироваться крысу с ограничением (описано ниже). Обеспечить достаточно корма для поддержания животного при 80% от его первоначального веса. Эта сумма составляет примерно 6 граммов корма в день в течение 250 г женского Long Evans крысы.

  1. Акклиматизироваться крысы решаются людьми. Аккуратно сдерживать крысу от руки на периоды примерно 5 сек каждые 30 сек. Делайте это в течение 15 мин в день на 2 дня подряд. Daily Monitor крыс признаки стресса в течение всего периода обучения. Симптомы включают в себя борьбу IРеакция на сдержанность, вокализации и зубной болтовней.
  2. На 3-й день, поместите крысы в кузове-сдерживающим ткани носок (рис 1) в течение 15 мин в день в течение двух последовательных дней.
  3. На 5-й день, поместите крысы внутри носка и поместите носок в виде жесткой трубки на экспериментальной кондуктор (рис 4). Оставьте крысу в трубке в течение 15 мин в день на 2 дня подряд.
  4. Немедленно поток крысу после каждой тренировки. В конце последней сессии (6-й день) дают неограниченный доступ к пище. Выберите для имплантации только те крысы, которые не показывают признаки чрезмерного стресса на последней тренировочной день.
    Примечание: Хотя выбор для имплантации крыс субъективно, в руках более 90% крыс установлено, что в ответ на привыкание и способны пройти имплантации.

2. Имплантация записывающего механизма палаты и руководитель удерживающих

  1. Сделайте Reличие провода пайкой голой проволоки из нержавеющей стали в контактный разъем. Отрежьте провод так, чтобы 3-5 мм останки обнаружили штифтом. Автоклав опорный провод, а также всех хирургических инструментов.
  2. Администрирование кетамин / Ксилазин анестезии. Администрирование 95 мг / кг кетамина, смешанного с 5 мг / кг ксилазина внутрибрюшинно. Начальная доза длится 1 ½ до 2 ч. Дополнение анестезии каждые 30-45 мин после того, как необходимо. Смажьте глаза животного с глазной мази.
  3. Проверка вывода ног рефлекс, чтобы определить плоскость анестезии и поддержания анестезии, как это необходимо.
  4. Поместите крысу в стереотаксической крепежной рамки с уха баров (3А). Бритье волос на голове и дезинфицировать пораженное место с повидон-йода (10% раствор). Позаботьтесь, чтобы вставить уха баров соответствующим образом, чтобы они не повредили барабанную перепонку. Серьги бары с тупыми концами, являются предпочтительными.
  5. Сделайте надрез скальпелем Approxiсчете вдоль средней линии черепа от ростро-каудальном уровне глаз к задней части ушей. Используйте ножницы, чтобы вырезать и удалить 2-3 мм полоску кожи по обе стороны от разреза.
  6. Соскрести надкостницы подвергать поверхность черепа, чтобы боковых хребтов. Накройте подвергается череп с тонким слоем суперклея.
  7. Просверлить маленькое отверстие, с немного меньшим диаметром, чем 0-80 винтов, используя ½ мм Диаметр сверла заусенцев (см материалы раздела). Дрель отверстие сразу позади, где брегма шов встречает Бокового хребта, и под углом 30-45 ° в череп, так что винт может войти с верхней более боковой, чем на нижней.
  8. Винт в 0-80 плоским дном крепежный винт в отверстие (примерно на 3 оборота), на уровне 30-45 ° углом. Будьте осторожны, чтобы не винт слишком глубоко, чтобы не повредить лежащую в основе ткани головного мозга.
  9. Повторите эту процедуру для 6 дополнительных винтов в конфигурации, показанной (Фиг.3В). Применение суперклей на основе всех винтов.
  10. Поставьте иглу шприца в stereotax манипулятора. Измерьте расстояние от темени шва, и сделать вмятину в черепе с иглой ближайшем, но за пределами нужном месте краниотомии, как начало отсчета.
    ПРИМЕЧАНИЕ: В этой демонстрации, стереотаксической координаты метки 3 мм задняя и 1 мм латеральнее к темени шва.
  11. Отметить вмятину с перманентным маркером. Обратите внимание на стереотаксических координат знака, как он будет служить в качестве стереотаксической точки отсчета (3В).
  12. Сделать трепанацию черепа с центром на желаемые координаты (3 мм задней и 3 мм латерально относительно брегмы в этом примере). Оставьте твердую мозговую оболочку нетронутыми. Накройте трепанацию черепа с модифицированной искусственной спинномозговой жидкости (125 мМ NaCl, 10 мМ глюкозы, 10 мМ HEPES, 3,1 мМ CaCl 2, 1,3 мМ MgCl 2, рН 7,4) 13 (фиг.3С).
  13. Вырезать 0,2 мл центрифужную пробирку 4 - 5 мм в длину, и отрезать крышку. Поместите трубку на черепе и в центре его на трепанации черепа.
  14. Применение стоматологического цемента вокруг нижней части трубки, чтобы запечатать основание трубки к черепу. Будьте осторожны, чтобы не утечка цемента в открытой трепанации черепа (рис 3D).
  15. Бурение еще маленькое отверстие (около ½ мм диаметр) в противоположной черепной пластине и аккуратно вставьте опорный провод. Построить опорный провод с помощью пайки штифт, который взаимодействует с усилителем записи до конца проволоки (смотри раздел оборудования). Не перемещайте опорный провод, когда он находится в головном мозге, поскольку это может привести к его повреждению.
  16. Применить суперклей с отверстием, в котором была вставлена ​​проволока. Это уплотнение штифт и проволоки в месте временно.
  17. Смешайте две части комплекта силиконовых гелевых (см раздел материалов) примерно в равных частях. Подождите две минуты для смешивания и филл центрифужную пробирку примерно ⅓ полный гелем.
  18. Прикрепите под прямым углом сообщению зажим (смотри раздел Материалы) на панели подголовника. Прикрепите голову пластину (рис 2а) с проведением бар (рис 2В) под углом в 45 ° шагом, так что нижняя часть пластины к носу животного. Это полезно использовать угломер установить угол наклона, чтобы соответствовать экспериментальной кондуктор (рис 4).
  19. Прикрепите планку держась за stereotax манипулятора, так что бар параллельно уха баров. Опустите планку и пластину так, чтобы пластина задней лямбда шва и передней до хвостового крайнего винта.
  20. Возьмитесь за переднюю головной болт (в 8-32 шпильки или винта, смотрите раздел Материалы) примерно в 45 ° угол с руки помощи рычага и зажима, так что головка винта обращена вниз, а к хвосту животного. Опустите винт так, чтобы он касался муравьяerior 0-80 винты (Рисунок 3F, G).
  21. Закрепите болт и пластину в месте с зубной акрила. Применение зубной акрила вокруг кости головки винтов, опорный штифт, а по бокам в центрифужную пробирку. Подождите примерно 10 минут для зубов акриловая для сушки (Рисунок 3Н).
  22. Нанесите слой зубного цемента вокруг краев зубной акрила, вяжущие кожу имплантата. Подождите, цемент высохнуть.
  23. Совать несколько отверстий в крышке центрифуги трубы, и положите крышку на трубе.
  24. Снимите руки помощи зажима. Затем осторожно снимите головку-холдинг бар от stereotax, а затем удалить голову пластину из бара (рис 3I).
  25. Удалить животное от stereotax и управлять послеоперационный уход и контроль в соответствии со всеми применимыми правил, нормативных актов и законов (например, бупренорфин 0,02 мг / кг, каждые 8-12 ч в течение как минимум 24ч). Если воспаление развивается вокруг краев имплантата, нанесите тонкий слой мази с антибиотиком на пораженное место ежедневно, пока не решен.

3. Juxtacellular Мониторинг нейронных единиц

  1. Вынуть кварцевый капиллярной трубки на углекислого газа лазерной микропипетки съемник (смотри раздел оборудования) с диаметром кончика меньше 1 мкм (фиг.5А).
    Примечание: Параметры нагревательные будет варьироваться в зависимости от конкретного инструмента, и что требуемого диаметра шейки варьируется в зависимости от структуры мозга, представляющего интерес. Для записи в крыс таламуса, микропипетки есть шеи, начиная от 5-7 мм.
  2. Закрепите пипетки в месте под дифференциальный интерференционный контраст (DIC) микроскопа, снабженного долгосрочных целей рабочим расстоянием. Используйте пластилина провести пипетку на месте на сцене микроскопа.
  3. Медленно перемещайте стеклянную блок (0,5 - 1 см толщиной; кусок стекла, используемого для макчисле ультра-микротомных ножи удобно) в поле зрения с кончика пипетки. Использование стадии микроманипулятором, мягко коснуться кончиком пипетки к стеклу, и ее поломке. При необходимости повторите, пока пипетки наружный диаметр не в пределах 1-3 мкм (5В, С). Убедитесь, что эти микропипетки есть сопротивления между примерно 5-15 МОм.
  4. Подготовка внеклеточный раствор (135 мМ NaCl, 5,4 мМ KCl, 1,8 мМ CaCl 2, 1 мМ MgCl 2, 5 мМ HEPES, рН 7,2 с помощью NaOH) 8 и добавить 2% (вес / объем) Чикаго голубой. С помощью шприца с 30 G иглой или меньшей, заполните заднюю часть пипетки с раствором. Кроме того, для одной ячейки juxtacellular маркировки добавить 2% (вес / объем) Neurobiotin или биотинилированный декстран амин (АРП-3000 или АРП-10000) в солевом растворе в месте Чикаго голубой.
  5. Поместите крысу внутри ткани носка внутри жесткой трубки на соответствующем экспериментальном джиг ( Рисунок 4) .Wait минимум 72 ч после операции до размещения животных на голове удерживающих приспособление. Затянуть шнурок вокруг верхней грудины, а не шеи, чтобы избежать обструкции дыхательных путей. Если дыхание по-видимому, трудились или затруднен, ослабьте шнурок или переместить его назад. Выполните эту процедуру, пока крыса оповещения.
  6. Прикрепите голова сдерживающее пластину на крысах с соответствующим кусок на джиг. Для этого, во-первых прикрепить голову удерживающих пластину в месте, и затем закрепите его с помощью 4-40 винт. Будьте уверены, чтобы ждать, пока животное не спокойно, чтобы избежать применения избыточный момент в голову. Далее, поместите в 8-32 гайку на лобовом сдерживания болта, который имплантируется на крысу. Тогда винт в резьбовой из нержавеющей стальной стержень в головной болт. Прикрепите стержень в экспериментальной зажима таким образом, что он может быть затянут в месте (рис 4).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Защита животное с головы болта, а также головной сдерживающая пластина минimizes изгиба устройства и улучшает стабильность записи. В большинстве случаев запись может начаться с первого дня животное голова сдержанной. Однако, если животное ерзает чрезмерно или озвучивает, обеспечивают один день глава удерживающих привыкания тренировке перед началом каких-либо записей. В этом случае, оставить животное на оправке в течение 15 мин, а затем поместить его обратно в клетку. Повторите этот шаг на следующий день и продолжить с протоколом.
  7. Откройте записи камеры и снимите силиконовый гель. Очистите трепанацию черепа, используя тонкий пинцет, если ткань повторно выращивают в трепанации черепа.
  8. Прикрепите пипетки моторизованной микроманипулятором и вставьте в headstage предварительного усилителя.
    ПРИМЕЧАНИЕ: В настоящем демонстрации, небольшой схема реле на headstage используется для переключения между усилителем выводами и внешнего источника тока с высокой соблюдения (6А-С). Обратите внимание, что некоторые усилители имеют соответствующую Встроенный высококачественный источник соблюдения(См соображений и материалов разделы).
  9. Используйте моторизованный микроманипулятор двигаться кончик пипетки к стереотаксически определены знака в записи камеры. Обратите внимание на координаты этого места. Будьте осторожны, чтобы не сломать кончик пипетки на черепе.
  10. Перемещение пипетки в нужное место записи в передне-задней и Medio-поперечных осей. Затем перейти пипетку вентрально через твердую мозговую оболочку, пока он не окажется примерно 500 мкм спины от предполагаемого местонахождения записи.
  11. Медленно пипетку, прислушиваясь к всплески на аудио монитора усиленного напряжения, записанные между кончиком пипетки и опорной проволоки. После того, как всплески, которые определены, продолжайте двигаться пипетки 0-100 мкм до получения положительных отклонений происходит напряжение большее, чем наблюдается примерно 500 мкВ.
    ПРИМЕЧАНИЕ: сопротивление электродов позволит увеличить на коэффициент примерно 1,5-10 Втан это происходит.
  12. Начните запись осуществляется один раз блок был выделен как в соответствии с шагом 3,11, наряду со всеми другими поведенческими и физиологическими показателями, представляющих интерес. В настоящем демонстрации, самогенерирующимся движения вибрисс контролируется с высокой скоростью видеосъемки (см материалы раздела).
  13. Для обозначения сайт записи, переключение электродов приводит для подключения к источнику тока. Есть несколько способов сделать это, либо с помощью релейной схемы (рис 6A - C), встроенный в источник тока на усилителе, или вручную (рис 6D, смотрите шаг 3,8 и обсуждение). Pass -4 мкА с 2 сек импульсов на 50% рабочего цикла для 4 мин до ионтофоретически вводить Чикаго Голубой через пипетку.
  14. Убейте и заливать животное после нескольких процедур маркировки в соответствии со стандартной практикой. Раздел мозга и контрастирующая мере необходимости для выявления анатомического расположения записи сидетье. Контрастирующая ткань для цитохромоксидазы реактивности как на 14. Кроме того, определить Chicago Sky Blue депозиты с помощью флуоресцентной микроскопии.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Чтобы точно различать разные меченых единиц важно, чтобы все метки сделаны с той же пипеткой в ​​тот же день, без unclamping пипетку между метками. В этом случае запись участки могут быть дифференцированы по их относительного расположения в ретроспективном гистологии вместе с отмеченными манипулятора координат каждого сайта (см шаг 3,9). Для однозначной идентификации, отметьте метки по меньшей мере, 200 мкм друг от друга, и не более, чем 3-5 этикеток в области головного мозга.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Нервные узлы в брюшной задней медиальной (ВПМ) таламуса кодирования фазы движения вибрисс во время самостоятельной организации взбивать 15,16. 7А показан пример всплески активности VPM таламуса устройства, как крысы активно взбивать. 7В показана гистограмма шип раз выравнивается по мгновенной фазы движения вибрисс 17. Есть еще шипы на этапе отвода из взбивая. После записи, расположение блока метили с помощью ионофореза в Чикаго голубой краситель, как показано...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Строительство экспериментального джиг

Описание механических частей, используемых для построения экспериментальной приспособление (фигура 4) опущен из протокола, как это может быть построена в различных направлениях. В этой демонстрации стандарта оптико-механических частей и поддержки зажимы используются для крепления панели подголовником и тело сдержанность трубки (см материалы раздела). Подобные оптико-механической части могут...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы заявляют, что они не имеют конкурирующие финансовые интересы.

Благодарности

Мы благодарны Канадским институтам исследований в области здравоохранения (грант MT-5877), Национальным институтам здравоохранения (гранты NS058668 и NS066664) и Американо-израильскому двустороннему фонду (грант 2003222) за финансирование этих исследований.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Кетазет (Кетамин гидрохлорид)Форт ДоджН/А
Анас (раствор ксилазина)Ллойд ЛабораторизН/А
Бетадин (Повидон-йод)CVS Pharmacy269281
Loctite 495Grainger Industrial Supply4KL8620 - 40 cp цианоакрилат
Vetbond3M1469SB
Grip цемент порошокDentsply Intl675571Для основания записывающей камеры
Grip цементная жидкостьDentsply Intl675572Для основания записывающей камеры
силиконовый гельDow Corning3-4680
Струйный ремонт зубных протезов акриловый порошокLang Dental Manufacturing Co.Н/ДДля крепления подголовника к черепу
Ortho-Jet Быстроотверждаемая ортодонтическая жидкость из акриловой смолыLang Dental Manufacturing Co.Н/ДДля крепления подголовника к черепной коробке
Чикаго небесно-голубойSigmaC8679
ПараформальдегидSigma158127Для перфузии и фиксации тканей
Фосфатно-солевой буферSigmaP3813Для перфузии и фиксации тканей
Цитохром CSigmaC2506Для окрашивания цитохромоксидазой, <сильный>Рисунок 7
DiaminobenzidineSigmaD5905Для окрашивания цитохромоксидазой, Figure 7
Rat nockSew Elegant (Сан-Диего, Калифорния)N/AИзготовлен на заказ, Рисунки 1, 4
PVC tube 2 ½ «Компания U.S. Plastic Co.34108Figure 4
Subminiature D контакты и гнездаTE Connectivity205089-1Figure 3
Stainless steel музыкальный провод диаметром 0,010" PrecisionBrand Products, Inc.21010Рисунок 3
Стереотаксическая удерживающая рамаKopf Instruments Модель900Рисунок 3
Стереотаксические амбушюрыKopf Instruments Модель957Рисунок 3
Стереотаксический манипуляторKopf InstrumentsМодель 960Рисунок 3
½ мм бор с жерновамиHenry Schein100-3995
Тихий воздух Стоматологическая бормашинаMidwest Dental393-1600
Нержавеющая сталь 0-80 ⅛ ” винтовойкрепеж superstore247438Рисунок 3
0,2 мл центрифужная пробиркаFisher Scientific05-407-8AРисунок 3Изготовленный
заказ держатель головыUCSD SIO Machine ShopN/AИзготовленный на заказ, Рисунки 2 - 4
Изготовленная на заказ пластина для удержания головыUCSD SIO Machine ShopN/AИзготовленные на заказ <прочные>Рисунки 2 - 4Прямоугольный
зажим для стойкиNewportMCA-1Рисунки 3, 4; стандартные оптомеханические детали для экспериментального приспособления (Рисунок 4) также от Newport Corp.
8-32 ¾ ” винтовойкрепеж Superstore240181Для подголовника, Рисунок 3
4-40 ¼ ” Винтовойкрепеж Superstore239958Для подголовника, Рисунки 3, 4
Кварцевые капиллярные трубкиSutter InstrumentsQF-100-60-10Рисунок 5
Углекислый лазерный съемникSutter InstrumentsP-2000
Моторизованный микроманипуляторSutter InstrumentsMP-285
Микроэлектродный усилительМолекулярные устройстваMulticlamp 700BАльтернативная часть: Молекулярные устройства Axoclamp 900A
Микроэлектродный усилитель головной столMolecular DevicesCV-7BАльтернативная часть: HS-9Ax10 с молекулярными устройствами Axoclamp 900A
Изолированный импульсный стимуляторA-M Systemsмодель 2100Альтернативная часть: HS-9Ax10 с молекулярными устройствами Axoclamp 900A
АудиомониторRadio Shack32-2040
Держатель пипеткиWarner Instruments#MEW-F10TАльтернативные детали: см. Discussion, Рисунок 6A
Электродный подводящийпровод Cooner wireNEF34-1646(опционально), Рисунок 6D
Реле для усилителя головной ступениCOTO Technology#2342-05-000(необязательно) Используется с изготовленной на заказ печатной платой (UCSD Physics Electronics Shop), Рисунок 6A-C
Digital видеокамераBaslerA602fm(опционально) Для поведенческого мониторинга Рисунок 7
Puralube vet OintmentAmazon.com, IncNC0138063
на

Ссылки

  1. Fee, M. S., Leonardo, A. Miniature motorized microdrive and commutator system for chronic neural recording in small animals. Journal of Neuroscience Methods. 112 (2), 83-94 (2001).
  2. Ventakachalam, S., Fee, M. S., Kleinfeld, D. Ultra-miniature headstage with 6-channel drive and vacuum-assisted micro-wire implantation for chronic recording from neocortex. Journal of Neuroscience Methods. 90 (1), 37-46 (1999).
  3. Szuts, T. A. A wireless multi-channel neural amplifier for freely moving animals. Nature Neuroscience. 14 (2), 263-269 (2011).
  4. Roy, S., Wang, X. Wireless multi-channel single unit recording in freely moving and vocalizing primates. Journal of neuroscience. 203 (1), 28-40 (2012).
  5. Hill, D. N., Mehta, S. B., Kleinfeld, D. Quality metrics to accompany spike sorting of extracellular signals. Journal of Neuroscience. 31 (24), 8699-8705 (2011).
  6. Pinault, D. A novel single-cell staining procedure performed in vivo under electrophysiological control: morpho-functional features of juxtacellularly labeled thalamic cells and other central neurons with biocytin or Neurobiotin. Journal of neuroscience. 65 (2), 113-136 (1996).
  7. Person, A. L., Perkel, D. J. Pallidal neuron activity increases during sensory relay through thalamus in a songbird circuit essential for learning. The Journal of neuroscience. 27 (32), 8687-8698 (2007).
  8. Kock, C. P., Sakmann, B. Spiking in primary somatosensory cortex during natural whisking in awake head-restrained rats is cell-type specific. Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 106 (38), 16446-16450 (2009).
  9. Connor, D. H., Peron, S. P., Huber, D., Svoboda, K. Neural activity in barrel cortex underlying vibrissa-based object localization in mice. Neuron. 67 (6), 10481061(2010).
  10. Hellon, R. The marking of electrode tip positions in nervous tissue. The Journal of physiology. 214, 12P(1971).
  11. Furuta, T., Deschênes, M., Kaneko, T. Anisotropic distribution of thalamocortical boutons in barrels. The Journal of Neuroscience. 31 (17), 6432-6439 (2011).
  12. Paxinos, G., Watson, C. The Rat Brain in Stereotaxic Coordinates. , Academic Press. (1986).
  13. Kleinfeld, D., Delaney, K. R. Distributed representation of vibrissa movement in the upper layers of somatosensory cortex revealed with voltage sensitive dyes. Journal of Comparative Neurology. 375 (1), 89-108 (1996).
  14. Wong-Riley, M. Changes in the visual system of monocularly sutured or enucleated cats demonstrable with cytochrome oxidase histochemistry. Brain research. 171 (1), 11-28 (1979).
  15. Moore, J. D., Deschênes, M., Kleinfeld, D. Self-generated vibrissa motion and touch are differentially represented throughout ventral posterior medial thalamus in awake, head-fixed rats. Society for Neuroscience Annual Meeting. 41 496.08/TT424 Society for Neuroscience. 41, (2011).
  16. Khatri, V., Bermejo, R., Brumberg, J. C., Zeigler, H. P. Whisking in air: Encoding of kinematics by VPM neurons in awake rats. Somatosensory and Motor Research. 27 (2), 344-356 (2010).
  17. Hill, D. N., Curtis, J. C., Moore, J. D., Kleinfeld, D. Primary motor cortex reports efferent control of vibrissa position on multiple time scales. Neuron. 72 (2), 344-356 (2011).
  18. Moore, J. D. Hierarchy of orofacial rhythms revealed through whisking and breathing. Nature. 497, 205-210 (2013).
  19. Duque, A., Zaborszky, L. Neuroanatomical Tract-Tracing 3. , Springer. 197-236 (2006).
  20. Neuroactive substances: Neuropharmacology by microiontophoresis. , Kation Scientific. Available from: http://kationscientific.com/fsubstances.html Forthcoming.
  21. Dyes and Tracers: Sitemarking and tracktracing by microiontophoresis. , Kation Scientific. Available from: http://kationscientific.com/fdyes.html Forthcoming.
  22. Urbain, N., Deschênes, M. Neuroactive substances: Neuropharmacology by microiontophoresis. (Kation Scientific), Dyes and Tracers: Sitemarking and tracktracing by microiontophoresis. (Kation). Journal of Neuroscience. 27 (45), 12407-12412 (2007).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Локализация одиночного нейронаподкорковые структуры головного мозгафиксация головы крысподдержание стереотаксической плоскостизапись с помощью микропипеточного электродаионтофоретическое введение красителямаркировка красителем Chicago Sky Blueапостериорный гистологический анализповеденческие электрофизиологические эксперименты
Juxtacellular Мониторинг и локализация отдельных нейронов в подкорковых структурах головного мозга оповещения, глава выдержанные крыс
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.