Методическая статья

Два Методы Создание первичных клеток человека эндометрия стромальных от гистерэктомии образцов

DOI:

10.3791/51513

⸱

23 мая 2014 г.

 ,  ,  , 
1Department of Pathology, University of Virginia, 2Department of Obstetrics & Gynecology, University of Virginia

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Создание первичных эндометрия системы стромальных клеточных культур от гистерэктомии образцов является ценным биологическим техника и решающим шагом до проводит широкий спектр исследований направлена. Здесь мы описываем два методы, используемые для установления стромальных культур из хирургически удаленных эндометрия тканях больных людей.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Много усилий было посвящено установить в пробирке системах клеточных культур. Эти системы предназначены для моделирования огромное количество естественных условиях процессов в. Клеточные культуры системы, вытекающие из эндометрия образцов человека не являются исключением. Область применения простирается от нормальных циклических физиологических процессов в эндометрии патологий, таких как гинекологического рака, инфекционных заболеваний, а также репродуктивных недостатков. Здесь мы предоставляем два метода для создания первичных эндометрия стромальных клеток из хирургически удаленных эндометрия гистерэктомии образцов. Первый метод называют "методом очищающего" и включает в себя механическое выскабливание с помощью хирургических или бритвенных лезвий в то время как второй метод называют "метод трипсин". Этот последний метод использует ферментативную активность трипсина, чтобы способствовать отделению клеток и первичных клетки вырост. Проиллюстрируем шаг за шагом методологии с помощью цифровых изображений и микроскопии. Мы также Providпримеры е для проверки эндометрия линии стромальных клеток с помощью количественных реального времени полимеразной цепной реакции (КПЦР) и иммунофлюоресценции (ИФ).

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Человеком матки корпус состоит из трех слоев, в периметрий (или серозной), миометрия и эндометрия. Отличительные каждый из этих слоев является важным шагом для установления эндометрия клеточных линий. Периметрий является самой внешней слой матки и состоит из тонких, серозных клеток. Миометрия является толстый, средний слой матки и состоит из гладкомышечных клеток. Эндометрий идентифицируется как внутреннего слоя матки и включает эпителиальные и стромальных клеток населения.

Эндометрий далее подразделяется в базального слоя которого стволовых клеток населения Предполагается для повторного заполнения functionalis слой примерно каждый 28 дней 1. Functionalis слой человеческого эндометрия претерпевает значительные биохимические и морфологические изменения в связи с циркулирующих гормонов. Эти гормоны являются производными от гипофиза и яичников.

координирует производство и выброс гормонов приводит к репродуктивного цикла. Репродуктивный цикл предназначен для подготовки эндометрия для потенциальных событий имплантации эмбриона. У людей, репродуктивный цикл известен как "менструального цикла" и делится на три этапа - пролиферативная, секреторных и менструальных. Пролиферативная фаза включает в себя пролиферацию functionalis эндометрия слоя в то время как секреторная фаза отмечена functionalis созревания. В частности, внеклеточные изменения, выделениями и клеточная дифференцировка сигнал потенциального имплантации. Если имплантация не происходит до конца секреторную фазу, functionalis эндометрия слой пролить в течение менструального фазы. Важность менструации и событий, которые вызывают пролития на functionalis слоя все еще обсуждаются. В организме человека он был поставлен что менструации является результатом конкретного события середины секреторную фазу дифференцировки известнойкак "спонтанное decidualization" 2. В этой рукописи, мы предоставляем подробную методологию для обеих эндометрия методов изоляции стромальных клеток, и использовать комбинацию иммунофлюоресценции и цифровых изображений, чтобы продемонстрировать эффективность этих подходов. Кроме того, мы применяем обычно используют искусственное модели спонтанного decidualization для подтверждения изоляции эндометрия стромальных клеток.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Гистерэктомия образцы, используемые в этой рукописи были собраны в соответствии с Университетом IRB-утвержденным протоколом этики пронумерованных IRB-HSR # 14424.

1. Приобретение Образец от клинической Источник

  1. Получить правительство и учреждение на основе этических принципов и документацию утверждения перед началом.
  2. Провести все шаги в стерильных условиях.
  3. Сохранение пациента, полученных ткани в медиа-среде RPMI (или DMEM с высоким содержанием глюкозы /) в 50 мл пробирку при 4 ° С, если образец не может быть обработан в культуре немедленно. В течение максимум 24 часов Образцы могут храниться в этом состоянии.
  4. Промыть образец ткани три раза стерильной 1X фосфатно-буферным раствором (PBS) и отменить решение между стирок.

2. Подготовка первичных клеточных линий с использованием очищающего метод

  1. Добавить 4-10 мл питательной среды (RPMI или DMEM с высоким содержанием глюкозы /, дополненной 10% фетальной бычьей сыворотки и 1% пенициллин-streptomyCIN) в ткани и добавить Fungizone (0,25 мкг / мл конечная концентрация) в течение 30 мин.
  2. Откажитесь от средств массовой информации роста.
  3. Вымойте ткань дважды 1X PBS.
  4. Поместите ткань на планшет для культивирования 6 см клеток различать миометрия и эндометрия слоев (см. рис 2А-2С также описание). Отделите эндометрий.
  5. Использование скальпеля или лезвия бритвы, секут ткани на мелкие кусочки, почесывая на блюдо 6 см клеточной культуре. Эти царапины облегчить присоединение развивающихся первичных клеток эндометрия. По сравнению с методом трипсина, больше ткани требуется (см. рисунок 2D для приближения).
  6. Аккуратно добавьте 2 мл питательной среды для поцарапал блюдо (фрагменты ткани будут видны и в идеале иммобилизованных от движения царапин).
  7. Передача пластину (ы) для назначенного инкубаторе для клеточных культур (37 ° C и 5% CO 2). Назначить место для линий первичных клеточных, от др.э клеточных культур блюда. Первичные культуры более чувствительны к инфекции и контаминации.
  8. Осматривают клетки под световым микроскопом ежедневно. Небольшие популяции клеток должна выйти на второй или третий день со всего нарезанных тканей (см. рис 3B).
  9. Для поддержания культуры, мыть осторожно с 1X PBS и добавить свежей питательной средой (2 мл) каждые три дня. При увеличении скорости пролиферации, дополнительные носители роста (3-4 мл) можно добавить к 6 см культуральный планшет (ы).
    Примечание: Во время стирки и СМИ изменений, кусочки ткани, вероятно, будет атмосферный. Это не повлияет на рост ненужных клеток. Кусочки ткани следует всасывается последующей стадии (2.10), поскольку новые колонии вряд ли появится после одной недели.
  10. Когда 6 см пластины составляет примерно 75 - 80% сливной (см. рисунок 3B), прохождение с помощью 0,05% трипсина. Первичные элементы не могут быть пассировать на неопределенный срок - заморозить вниз на одну тарелку клеток, как только два или три пластины маintained. Если несколько каналов требуется, выполните протокол увековечении (обзор в работе 3).

3. Подготовка первичных клеточных линий с использованием трипсин метод

  1. Поместите небольшой кусочек ткани эндометрия (см. рис 2D для приближения) в 2 мл 0,25% трипсина с добавлением канамицина (0,03 мг / мл конечная концентрация).
  2. Инкубируйте ткани при 37 ° С на вращающихся платформу в течение 30 мин.
  3. Кратко вихрь ткани.
  4. Центрифуга образца при 200-400 мкг в течение 2 мин и отбросить супернатант.
  5. Добавить свежий трипсин и канамицин.
  6. Инкубируйте ткани при 37 ° С при вращении в течение часа.
  7. Vortex ткани для 5-10 сек.
  8. Добавить 2 мл питательной среды (с добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки и 1% пенициллин-стрептомицин), чтобы отключить трипсина.
  9. Центрифуга клетки при 200-400 мкг в течение 2-3 мин.
  10. Удалите супернатант и добавить 2 мл Growй СМИ к гранулированных клеток.
  11. Пластина на чашку 6 см клеточной культуре. Зачистка тарелку, как в шаге 2.5 Подготовка первичных клеточных линий с использованием очищающего метод не является необходимым, но усиливает привязанность и разрастание первичных культурах.
  12. Монитор клетки под световым микроскопом ежедневно. Клетки обычно видны под световым микроскопом после 24-48 часов (см. фиг.3С).
  13. Для поддержания культур, мониторинг клетки и изменить медиа каждые 2-3 дня, как в шаге 2.9.
  14. Для прохождения клетки, используйте 0,05% или 0,25% трипсин, когда клетки достигают 75-80% слияния (см. рис 3в).

4. Сохранение дополнительных ткани для анализа (SNAP Холодильные и формалина крепление)

  1. Вымойте образец дважды 1X PBS.
  2. Аспирируйте столько жидкости, сколько возможно.
  3. Для оснастки замораживания поместите образец ткани эндометрия в 1,7 трубки центрифуги (см. рис 2F и 2G). Наведите 1,7центрифужную пробирку в жидком азоте в течение 10 сек или до можно видеть, что ткань замораживали.
    Примечание: Будьте осторожны, не прикасайтесь непосредственно жидкого азота при подготовке образцов. Образцы можно хранить при -80 ° С до дальнейшей обработки или анализа.
  4. Для формалина фиксации, вырезать небольшой кусочек ткани эндометрия (см. рис 2H), и погрузите в 10% буферном цинка формалина. Через 24 ч отбрасывать формалин и добавить 70% этанола в образцах ткани до дальнейшей обработки.

5. Иммунофлуоресценции (ИФ)

  1. Фиксация Сотовый
    1. Подготовка клеток на культуральной слайда или пластины.
    2. Осторожно, мыть клетки с 1X PBS.
    3. Добавить предварительно охлажденной (4 ° С) метанола и ацетона (смешивали в соотношении 1:1) в течение 5 мин.
    4. Воздух сухой слайд прежде чем продолжить. Slide можно хранить при температуре 4 ° С в течение 1-2 недель, если это необходимо.
  2. Обработка ЕСЛИ
    1. Увлажняет клетки с 1X PBS в течение 10 мин. Для FOllowing шаги 1-6, проводить все моет и инкубации на вращающейся платформе.
    2. Блок использованием 1X PBS с добавлением 1% бычьего сывороточного альбумина (BSA) и 1% видов конкретных сыворотки (источник 2-й антитела) в течение 30 мин при комнатной температуре (RT).
    3. Выдержите в первичных антител (см. производителей рекомендации для разведения антител). См. Материалы для специфических антител. Развести первичных антител в свежем буфере блокирующего как на шаге 5.2.2. Это инкубирование может быть проведено в течение по крайней мере 2 ч при комнатной температуре или в течение ночи при 4 ° С.
    4. Промыть 3 раза с 1X PBS в течение 5 мин каждый.
    5. Выдержите в вторичными антителами (см. производителей рекомендации для разведения антител). Развести вторичного антитела в свежем буфере блокирующего, как в шаге 5.2.2. Для предотвращения фото-отбеливание, важно проводить это и последующие шаги в отсутствие света.
    6. Промыть 3 раза с 1X PBS в течение 5 мин каждый.
    7. Thoroughlу высохнуть слайды.
    8. Добавить монтажные СМИ и DAPI контрастного решение.
    9. Применить покровное и запечатать края с использованием герметика (ы). Слайды можно хранить при температуре 4 ° С в темноте в течение до 2 недель.

6. Экстракция РНК

  1. Гранул 1 × 10 7 клеток путем центрифугирования. Все материалы и реагенты в этом протоколе должны быть РНКазы.
  2. Клетки лизируют в 1 мл реагента TRIZOL и инкубировать гомогенизированных образцов в течение 10 мин при комнатной температуре до полной диссоциации комплексов нуклеопротеидных.
  3. Добавить 200 мкл хлороформа на 1 мл TRIzol. Встряхивать вручную в течение 15 с и инкубировать в течение 2-3 мин при комнатной температуре.
  4. Центрифуге при максимальной скорости (15000 мкг) в течение 15 мин при 4 ° С. Три слоя приведет.
  5. Передача верхнюю водную фазу в свежую пробирку микроцентрифужных. Добавить 1 мкл гликогена увеличить выход РНК; Однако, этот шаг необходим только когда маленькийколичество РНК ожидается.
  6. Добавить 0,5 мл изопропилового спирта к водному слою, и инвертировать образцы в 3-5 раз. Инкубируйте образцы при комнатной температуре в течение 10 мин. Чтобы увеличить выход, образцы могут быть помещены в -20 ° С или -80 ° С в течение 30 мин.
  7. Центрифуге при максимальной скорости в течение 10 мин при 4 ° С.
  8. В этот момент, небольшой осадок РНК должны быть видны. Удалите супернатант.
  9. Вымойте РНК с 1 мл 75% этанола.
  10. Центрифуге при максимальной скорости в течение 5 мин и отбросить супернатант. Образцы можно мыть больше, чтобы избавиться неорганические загрязнения один раз, но этот шаг не является необходимым.
  11. Вкратце, высушить РНК гранул до осадок РНК не высохнет (обычно занимает 7-10 мин).
    Примечание: Еще один шаг может быть использован для уменьшения неорганические вещества и уменьшить время сушки. После удаления супернатанта из этанола стирки, образцов спиновых на максимальной скорости за дополнительную минуту и ​​аспирации остаточной жидкости. Будьте осторожны, не аспирации осадок.
  12. Растворить в РНК РНКазы без воды, в зависимости от размера гранул РНК. Объемы обычно составляет от 10-50 мкл.
  13. Инкубируйте образцы при 55 ° С в течение 10 мин, и измерения концентрации РНК.
  14. Храните образцы при -20 ° С до дальнейшей обработки.

7. Обратной транскрипции

  1. Доведите образца РНК (1-3 мкг) до объема 9 мкл Н 2 О.
  2. Тепло РНК до 70 ° С в течение 10 мин.
  3. Чтобы создать основной смеси AMV, объединить следующие реагенты: 5 мкл дНТФ (рабочий концентрация 50 мкМ), 5 мкл олигонуклеотидов ДНК (N6 работает концентрации 80 мкМ), 5 мкл 5X из AMV буфера и 1 мкл AMV . Это решение мастером микс предназначен в одном образце.
  4. Добавить 16 мкл мастер-микс к нагретой РНК. Конечный реакционный объем будет 25 мкл реакции.
  5. Используйте следующие ПЦР условия для обратной транскрипции: (1 этап) 42 ° C в течение 90 мин, (STAGE 2) 95 ° C в течение 5 мин, и (Этап 3) 4 ° С до дальнейшей обработки.

8. Настоящее ПЦР Время

  1. Проведение ПЦР-реакции с использованием праймеров, температуры отжига номера цикла, и реагенты, найденные в таблице 1.
    Примечание: Это идеальное место, чтобы следовать инструкциям производителя при использовании ПЦР реагенты (см. каталог компании и чисел в материалах).

9. Экстракорпоральное Decidualization протокол (полученный из работы 4 и 5)

  1. Plate клетки эндометрия.
  2. Расти к слияния 75-85%.
  3. После клетки становятся сливающиеся, мыть один раз с 1X PBS.
  4. Быстро, добавить гормонов без СМИ (Фенол бесплатно RPMI с добавлением 5% угля полосы FBS и 1% пенициллин-стрептомицина).
  5. После 24 часов, добавить гормональные бесплатно среде с медроксипрогестеронацетата (MPA) в конечной концентрации 1 мкМ и 8-bromoadenosine 3 ', 5'-Циклического монофосфата (цАМФ) в конечной концентрации 0,5 мМ.
  6. После по меньшей мере 48 ч, остановить реакцию и сохранить пластину (ы) для дальнейшей обработки.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Как подчеркивается в разделе протокола, обязательно проводить все методы в рамках государственных, институциональных и этических принципов при обращении и подготовки ткани человека.

В эту рукопись является иллюстрацией общего процесса по методу "очищающего" (Фиг.1А) и "метод трипсин" (фиг.1В) используется для установления первичных культур эндометрия. Эти методы подробно описаны в разделе протокола (см. детали 1 -. 3.). Оба ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Другие группы описали и адаптированы методологии для подготовки эндометрия стромальных культур, большинство из которых используют коллагеназы 4,12,13,15-18. В этой рукописи, мы обеспечили методику и доказательства в течение двух упрощенных первичных стромальных эндометрия методов культуры, оба из которых используемых нашей лаборатории по экономическим причинам и удобной доступности трипсина и / или лезвием бритвы.

При сравнении наших двух методов, как успешно генерировать жизнеспо...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы не имеют ничего раскрытия.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мы благодарим совместные усилия доктора Тао Данг и членов своей лаборатории за использование их изображений и микроскопа оборудования. Мы также благодарим Biorepository и тканей исследований фонда (BTRF) основной, Джефф Харпер и жителей в университете Вирджинии за предоставление нам ткани матки. Мы благодарим Karol шляхты за помощь с схематический обзор.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
0,25 трипсина или 0,05% трипсина HycloneSH3023602 или SH30004202
1,7 микроцентрифужной пробирки   Genesee Scientific22-272A
1 µ l, 20 и микро; l, 200 мл и 1 000 & микро; l Пипетка   Genesee Scientific24-401,24-402, 24-412, 24-430
15 мл Коническая трубка Hyclone339650
50 мл Коническая трубка Гиклон339652
6 см Чашка для клеточных культур Термонаучный12-556-002
8-луночные камеры Thermo ScientificAB-4162
Ацетат Fisher scientificC4-100
AMV RT Фермент/Буфер Bio LabsM077L
Бычья сыворотка альбумин (BSA) Fisher ScientificBP-1605-100
Буферный формалин цинка Термо59201ZF
Полоса древесного угля FBS ФишерNC9019735
Хлороформ Fisher ScientificBP1145-1
Чехол слип Fisher Brand12-544D
Циклический АМФ (cAMP) SigmaB7880
DMEM/Высокий уровень глюкозы HycloneSH30243FS
dNTP BiolineBIO-39025
Donkey Anti Goat -TRITC Santa CruzSC-3855
Сыворотка для осел Джексон s lab017-000-002
E Антитела к кадгерину   Эпитомика1702-1
ЭтанолFisher ScientificBP2818-1
Фетальная сыворотка крупного рогатого скота (FBS) Fisher Scientific03-600-511
Фунгизона амфотерицин B Gibco15290-018
Зонд GAPDH Life TechnologiesHS99999905
Гликоген 5Prime2301440
Козья антимышь - FITC Джексон Лаборатория115-096-003
ИзопропанолFisher ScientificBP2618-1
Kanamycin   Fisher ScientificBP906-5
Медроксипрогестерона ацетат (МПА) SigmaM1629
MeOH (Метанол) Монтажный материал Fisher ScientificA4-08-1
(с DAPI) Векторные лабраторииH-1500
N6 ДНК Олигос Скребок Инвитроген
No 15   BD371615
Пан Цитокератин  Мышь mAB Cell Signaling4545
PBS (фосфатно-солевой буфер) Fisher ScientificBP-399-4
Пенициллин-стрептомицин глутаминовый раствор 100X   HycloneSV30082.01
PML Anti Goat Antibody Санта-КрузSC-9862
Грунтовка РПМИ «Еврофинс
»;ГиклонSH30027FS
RPMI (без фенола) Gibco11835
Sybr Green   Thermo ScientificAB-4162
Taqman ТермоАБ-4138
ТризолLife Technologies15596018
антитела к виментину Эпитомика4211-1

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Heller, D. in The endometrium: a clinicopathologic approach. Heller, D. , 56-75 (1994).
  2. Emera, D., Romero, R., Wagner, G. The evolution of menstruation: a new model for genetic assimilation: explaining molecular origins of maternal responses to fetal invasiveness. Bioessays. 34, 26-35 (2011).
  3. Gudjonsson, T., Villadsen, R., Ronnov-Jessen, L., Petersen, O. W. Immortalization protocols used in cell culture models of human breast morphogenesis. Cell Mol Life Sci. 61, 2523-2534 (2004).
  4. Brosens, J. J., Hayashi, N., White, J. O. Progesterone receptor regulates decidual prolactin expression in differentiating human endometrial stromal cells. Endocrinology. 140, 4809-4820 (1999).
  5. Jones, M. C., et al. Regulation of the SUMO pathway sensitizes differentiating human endometrial stromal cells to progesterone. Proc Natl Acad Sci U S A. 103, 16272-16277 (2006).
  6. Salamonsen, L. A., et al. Proteomics of the human endometrium and uterine fluid: a pathway to biomarker discovery. Fertil Steril. 99, 1086-1092 (2013).
  7. Haouzi, D., Dechaud, H., Assou, S., De Vos, J., Hamamah, S. Insights into human endometrial receptivity from transcriptomic and proteomic data. Reprod Biomed Online. 24, 23-34 (2012).
  8. Chen, J. I., et al. Proteomic characterization of midproliferative and midsecretory human endometrium. J Proteome Res. 8, 2032-2044 (2009).
  9. Talbi, S., et al. Molecular phenotyping of human endometrium distinguishes menstrual cycle phases and underlying biological processes in normo-ovulatory women. Endocrinology. 147, 1097-1121 (2006).
  10. Punyadeera, C., et al. Oestrogen-modulated gene expression in the human endometrium. Cell Mol Life Sci. 62, 239-250 (2005).
  11. Ponnampalam, A. P., Weston, G. C., Susil, B., Rogers, P. A. Molecular profiling of human endometrium during the menstrual cycle. Aust N Z J Obstet Gynaecol. 46, 154-158 (2006).
  12. Zhang, L., Rees, M. C., Bicknell, R. The isolation and long-term culture of normal human endometrial epithelium and stroma. Expression of mRNAs for angiogenic polypeptides basally and on oestrogen and progesterone challenges. J Cell Sci. 108 (1), 323-331 (1995).
  13. Richards, R. G., Brar, A. K., Frank, G. R., Hartman, S. M., Jikihara, H. Fibroblast cells from term human decidua closely resemble endometrial stromal cells: induction of prolactin and insulin-like growth factor binding protein-1 expression). Biol Reprod. 52, 609-615 (1995).
  14. Gellersen, B., Brosens, J. Cyclic AMP and progesterone receptor cross-talk in human endometrium: a decidualizing affair. J Endocrinol. 178, 357-372 (2003).
  15. Marsh, M. M., Hampton, A. L., Riley, S. C., Findlay, J. K., Salamonsen, L. A. Production and characterization of endothelin released by human endometrial epithelial cells in culture. J Clin Endocrinol Metab. 79, 1625-1631 (1994).
  16. Siegfried, J. M., Nelson, K. G., Martin, J. L., Kaufman, D. G. Histochemical identification of cultured cells from human endometrium. In Vitro. 20, 25-32 (1984).
  17. Rawdanowicz, T. J., Hampton, A. L., Nagase, H., Woolley, D. E., Salamonsen, L. A. Matrix metalloproteinase production by cultured human endometrial stromal cells: identification of interstitial collagenase, gelatinase-A, gelatinase-B, and stromelysin-1 and their differential regulation by interleukin-1 alpha and tumor necrosis factor-alpha. J Clin Endocrinol Metab. 79, 530-536 (1994).
  18. Dimitriadis, E., Robb, L., Salamonsen, L. A. Interleukin 11 advances progesterone-induced decidualization of human endometrial stromal cells. Mol Hum Reprod. 8, 636-643 (2002).
  19. Sakai, N., et al. Involvement of histone acetylation in ovarian steroid-induced decidualization of human endometrial stromal cells. J Biol Chem. 278, 16675-16682 (2003).
  20. Logan, P. C., Ponnampalam, A. P., Steiner, M., Mitchell, M. D. Effect of cyclic AMP and estrogen/progesterone on the transcription of DNA methyltransferases during the decidualization of human endometrial stromal cells. Mol Hum Reprod. 19, 302-312 (2013).
  21. Tamura, I., et al. Induction of IGFBP-1 expression by cAMP is associated with histone acetylation status of the promoter region in human endometrial stromal cells. Endocrinology. 153, 5612-5621 (2012).
  22. American Society for Reproductive Medicine: Quick facts about infertility. , Available from: http://www.asrm.org/detail.aspx?id=2322 (2013).
  23. Salker, M., et al. Natural selection of human embryos: impaired decidualization of endometrium disables embryo-maternal interactions and causes recurrent pregnancy loss. PLoS One. 5, (2010).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Похожие статьи