Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Электропрядения фактор роста Освобождение микросфер в волокнистых Строительные леса

12K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/51517

⸱

16 августа 2014 г.

 , 
1Biomedical Engineering, Wayne State University

В этой статье

Краткое содержание

Этот протокол сочетает в себе электроспиннинг и микросферы для разработки тканевых каркасов для прямых нейронов. Фактор роста нервов инкапсулировали в микросферы PLGA и электровращали в волокнистые каркасы гиалуроновой кислоты (ГК). Биоактивность белка проверяли путем посева скаффолдов ганглиями спинного корня первичного цыпленка и культивирования в течение 4-6 дней.

Аннотация

Эта процедура описывает метод изготовления многогранного субстрата для направления роста нервных клеток. Эта система включает в себя механические, топографические, адгезивные и химические сигналы. Механические свойства контролируются типом материала, используемого для изготовления электропрядущих волокон. В этом протоколе мы используем 30% метакрилированную гиалуроновую кислоту (ГК), которая имеет модуль упругости при растяжении ~500 Па, для получения мягкого волокнистого каркаса. Электроспиннинг на вращающейся оправке создает выровненные волокна для создания топографического сигнала. Адгезия достигается за счет покрытия каркаса фибронектином. Основной задачей, рассматриваемой в данном документе, является подача химического сигнала по всей глубине каркаса в течение длительного времени. Эта методика описывает изготовление микросфер поли(молочная ко-гликолевая кислота) (PLGA), содержащих фактор роста нервов (NGF), и непосредственное пропитывание каркаса этими микросферами в процессе электроспиннинга. Из-за суровых производственных условий, в том числе высоких сил и электрических зарядов, жизнеспособность белка измеряется после производства. Система обеспечивает высвобождение белка в течение более 60 дней и, как было показано, способствует росту первичных нервных клеток.

Введение

Один из текущих проблем в нервной тканевой инженерии является создание нерва канал (NC), который имитирует внеклеточного матрикса, где нервы расти естественным образом. Исследования показали, что клетки реагируют на нескольких факторов, в их среде, включая механическое, топографических, клея и химических сигналов 1-3. Одной из основных проблем в этой области состоит в определении соответствующую комбинацию сигналов и изготовления систему, которая может поддерживать сигналы в течение длительного периода, чтобы поддерживать рост клеток 4. Периферические нейроны, как известно, предпочитают мягкую подложку, быть направлены на выровненных волокон и отвечать фактора роста нервов (NGF) 5-7. НК, который может обеспечить химические сигналы, в течение нескольких недель, как было показано, чтобы обеспечить улучшенную функциональное восстановление ближе к аллотрансплантатов, текущего золотого стандарта для ремонта нерва 8,9.

Различные материалы и способы производства могут быть использованы для производства механической и Топографическаяаль киев 10-13. Механические сигналы присущи выбранного материала, что делает выбор соответствующей материала для применения критического 1,13. Методы производства контролировать топографические сигналы включают разделение фаз, самосборки и электропрядения 1,13. Для приложений, микромасштабных микрофлюидики, photopatterning, травление, соли выщелачивании или газа пены также можно использовать 14-17. Электропрядения стала самой популярной пути к инженеру волокнистые субстраты для тканевой культуры благодаря своей гибкости и простоте производства 13,18-23. Нановолокна изготавливают путем приложения высокого напряжения к полимерного раствора заставляя его отражению себя и протянуть короткого промежутка для выполнения 24. Выровнены каркас может быть создана путем сбора волокон на заземленной вращающейся оправке, и неприсоединившиеся каркасы собирают на неподвижной плите 25. Адгезия сигнализации может быть достигнуто путем нанесения покрытия на волокнистую базового интерфейса умч фибронектин или конъюгации адгезии пептид, например, РГД, к HA до электропрядения 26.

Химические сигналы, такие как факторы роста, наиболее трудно поддерживать в течение длительного периода, так как они нуждаются в источнике для контролируемого высвобождения. Многие системы были попытки добавить контролируемого высвобождения в electrospun волокнистых сетей с различной степенью успеха. Эти методы включают наложения электропрядения, эмульсии электропрядения, основной оболочки электропрядения и белка сопряжение 27. Кроме того, электропрядения традиционно делается в летучем растворителе, который может влиять на жизнеспособность белка 28, таким образом сохраняя биологическую активность белка должны быть рассмотрены.

Этот подход непосредственно касается объединения механические, топографические, химические и клейкие сигналы, чтобы создать настраиваемый каркас для роста периферических нервов. Механика Леса точно регулируется путем синтезаметакрилированные гиалуроновой кислоты (ГК). Сайты methacrylation применяются для крепления фото реактивные сшивателей. не сшитый материал уже не растворимы в воде и исключительно с разбивкой по ферментов 29. Степень сшивания изменяет скорость деградации, механики и другие физические свойства материала. Использование HA с 30% methacrylation, который имеет модуль упругости при растяжении ~ 500 Па, создает мягкий субстрат, который близок к родным механики нервной ткани и, как правило, предпочтительный для нейронов 26,29. Электропрядения на вращающейся оправке используется для создания выровненных волокон для топографической кия. Использование электропрядения наряду с микросфер обеспечивает химические сигналы в эшафот в течение длительного периода. Для поддержки нейрита микросферы роста содержащие NGF используются для создания химического сигнала. В отличие от большинства материалов electrospun ГА растворим в воде, так что NGF не сталкивается жесткие растворители в процессе производства. Чтобы добавить клейкую сигнал, СКСffold покрыта фибронектина. Заполненный система содержит все четыре типа сигналов, описанных выше: мягкие (механических) выровненных (топографических) волокон с NGF выпуская микросферы (химические), покрытую фибронектина (клея). Производство и тестирование этой системы описывается в данном протоколе.

Процесс начинается с производства микросфер с вода-в-масле-в-воде двойной эмульсии. Эмульсии стабилизируют, поверхностно-активного вещества, поливиниловый спирт (ПВС). Внутренняя водная фаза содержит белок. Как он будет добавлен к масляной фазе, содержащей материал оболочки PLGA растворяли в дихлорметане (ДХМ), поверхностно-активное вещество создает барьер между фазами, защищающих белка из DCM. Эта эмульсия является чем диспергируют в другой водной фазе, содержащей ПВС, чтобы создать внешнюю поверхность микросфер. Стабильная эмульсия перемешивают, чтобы позволить ДХМ испаряется. После промывки и лиофилизации вы остались с сухой микросфер продолжениеAining белок.

После того, как микросферы будут завершены, они будут готовы к electrospun в каркасах. Сначала вы подготовить электропрядения решение. Вязкость раствора имеет решающее значение для правильного формирования волокна. Решения чистого HA не отвечают этому требованию; ПЭО добавляется в качестве полимера-носителя, чтобы дать возможность электропрядения. Микросферы добавляют к раствору и electrospun в результате волокнистой строительные леса, с микросферами, распределенных по всему.

После того, как производство завершено, белок должен быть проверен, чтобы проверить свою жизнеспособность. Для этого, первичка, который реагирует на NGF может быть использован. Этот протокол использует ганглии задних корешков (DRG) с 8-10 дневных куриных эмбрионах. Клеточные пучки высевают на каркасах, содержащих микросферы, наполненные NGF или те, которые являются пустыми. Если NGF все еще жизнеспособна вы должны увидеть расширенную рост аксонов на NGF, содержащих лесов. Если NGF, больше не жизнеспособны он будетне способствует нейриты для расширения и должны выглядеть примерно контролем.

Точная процедура описано здесь сосредоточено на нервной поддержки, однако, с простых изменений в материале, методом электроформования и белков система может быть оптимизирована для различных типов клеток и тканей.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

1 вода / масло / вода Двухместный Эмульсия Microsphere Производство

  1. Первый подготовить 2% и 0,5% вес / объем растворов поливинилового спирта (ПВС) в деионизированной воде. Перемешать решения при 50 ° С, до момента отрыва, это может занять несколько часов. Готовят раствор 2% объем / объем изопропилового спирта в деионизированной воде.
  2. Готовят водный раствор гидрофильного желаемого белка. В таблице ниже приведены примеры формулировок.

figure-protocol-1
Таблица 1:. Пример белковых растворов следующие белковые растворы успешно инкапсулируются и electrospun с использованием этого протокола. Другие гидрофильные белковые растворы могут быть использованы при необходимости.

  1. Поместите 40 мл 0,5% раствора ПВА в 50 мл центрифужную пробирку и отложите в сторону.
  2. В 15 мл центрифужную пробирку растворить 300 мг 65:35поли (молочной-со-гликолевой кислоты) (PLGA), в 3 мл дихлорметана. Вихревой смеситель может быть использован для ускорения растворения PLGA.
  3. Объединить 200 мкл раствора белка и 4 мкл 2% раствора PVA. Вылейте белка смесь в раствор PLGA (шаг 1,4). Решения останется в основном отдельно.
  4. Поместите пробирку в стакан воды со льдом. Используя палочку ультразвукового при ~ 10 Вт (RMS), не агитировать решение в течение нескольких секунд (5-10) до получения однородной кремово-белые эмульсии создается.
  5. Налейте эмульсии в 50 мл пробирку, содержащую 0,5% PVA (этап 1.3). Смешайте раствор на высокой скорости на вортексе для ~ 20 сек. Решение будет развиваться мутный вид.
  6. Эмульсию переносили в химический стакан 200 мл и место на магнитной мешалки при 350 оборотах в минуту в течение 2 мин. Добавить 50 мл 2% изопропилового спирта в стакан на мешалке. Смесь оставляют продолжают перемешивание в течение не менее 1 часа, чтобы позволить, чтобы испарить DCM и PLGA, чтобы затвердеть.
  7. Передача тОн микросфер раствор в центрифужные пробирки.
  8. Центрифуга при 425 мкг в течение 3 мин. Микросферы будет собирать на дне пробирки, и появляется белая. Осторожно удалите супернатант из трубы, выше микросфер, и хранить в бутылке 500 мл.
  9. Промыть микросферы с деионизированной воды на заполнение трубы три четверти полный и встряхивая его, чтобы перераспределить микросфер в жидкости.
  10. Повторите шаги 1,10 и 1,11 в четыре раза.
  11. После окончательного полоскания, удалите супернатант снова и место в бутылке 500 мл с другими образцами. Замораживание микросферы, полученные в центрифужную пробирку, а затем лиофилизуют в течение по крайней мере 24 часов.
  12. Визуализация микросферы под световым микроскопом или с помощью сканирующего электронного микроскопа. Микросферы размером не более 60 мкм являются для эффективного электропрядения. Если микросферы являются слишком большими, более длинные ультразвуком или вортексе раз может потребоваться на этапе 1,6 или 1,7.
    13. <литий> Храните высушенные микросферы в -20 ° C морозильник.
  13. Дополнительно: Используйте анализа белка, в соответствии с инструкциями производителя, чтобы проверить количество белка в бутылке 500 мл с шага 1,10 30. Это используется, чтобы вычислить процент инкапсулированного белка в микросферах, путем вычитания количества в растворе от того, что был использован в процессе производства.

Примечание: Чтобы визуализировать расположение белка в микросферы добавить родамин 2 мкг / мл в растворе PLGA 31 и инкапсулировать FITC конъюгированного белка 1 показан пример..

2 электропрядения с микросфер

  1. Перед подготовкой электроформования решение, создать 0,5% вес / об раствора фотоинициатора, в деионизированной воде при растворении при 37 ° С. Этот процесс может занять несколько часов.
  2. Создание 2% вес / объем метакрилированные гиалуроновой кислоты (MEHA) (см Burdick и соавт. Для синтеза) 29, 3%вес / объем 900 кДа поли (этиленоксид) (ПЭО) и 0,05% вес / об раствора инициатора фото в деионизированной воде.
    1. Рассчитать необходимое количество Меха и ПЭО для требуемого объема. Например, 10 мл электропрядения решение требует 200 мг MEHA и 300 мг ПЭО.
    2. Растворить ПЭО в деионизированной воде при 90% от требуемого конечного объема (9 мл на данном примере). Это может занять несколько часов, нагревают мешалка или водяной бане при 37 ° С может быть использован для ускорения процесса.
    3. Затем добавьте Меха и использовать вихревой смеситель для перемешивания раствора до ясно. Это займет всего несколько минут.
    4. Наконец добавить 0,5% раствор фото инициатора заполнить оставшийся объем 10% (1 мл на этом примере).
  3. Добавить микросфер в нужной концентрации до 400 мг / мл. Смешайте раствор на вихревом смесителе до тех пор, микросферы не будут равномерно распределены в растворе.
  4. Перенесите раствор в шприц и присоединить 6 дюймовый 18 калибра блЕНТ кончик иглы.
  5. Поместите шприц в шприцевой насос и установить его обойтись в 1,2 мл / час.
  6. Лента слой алюминиевой фольги по сбору пластины или оправки. Это позволяет легко чистить и хранения готовой эшафот. Вращающейся оправки используется для создания выровненных волокон. Плоской пластины или стационарный сердечник приведет к случайным образом расположенных волокон.
  7. Подключите провод заземления от источника питания высокого напряжения к устройству сбора. Подключите положительный вывод к игле.
  8. Регулировка шприцевой насос, и сбора поверхность таким образом, что существует 15 см между кончиком иглы и поверхности сбора.
  9. Начните полимерной накачки, когда решение видна в конце шприца, включите источник напряжения и установить напряжение до 24 кВ. Внимание: После того, как напряжение включен не прикасайтесь к металлическим частям системы. Зарядка может также перейти на короткие расстояния от электрифицированных частей к коже.
  10. Запустите решение до гesired толщина леса достигается. После завершения отключите источник напряжения и шприцевой насос.
  11. Удалить фольгу с эшафот прилагается. Заполненные леса, содержащие белок, хранятся в -20 ° C морозильник.

3 Белки Биоактивность Тестирование

  1. Подготовка питательных сред клеток. Добавить 10% об / об эмбриональной телячьей сыворотки, 1% об / об L-глутамина и 1% объем / объем пенициллин-стрептомицин в модифицированную по способу Дульбекко среде Игла в.
  2. Выберите покровные стекла, которые соответствуют полностью в луночного планшета.
  3. Использование 3- (триметоксисилил) пропилметакрилат для лечения покровные, как описано производителем. Methacrylation повышает эшафот приверженность покровные.
  4. Прикрепите метакрилированные покровные в области сбора в electrospinner со съемной двухсторонней ленты перед электропрядения. Спиннинг на покровные облегчает обработку и осмотр.
  5. Electrospin до желаемой толщины, как описано выше.
  6. осле электропрядения осторожно удалите покровные от оправки. Поместите на эшафот покровные покрытием в ясный камеры азота и убедитесь, что весь кислород продувается.
  7. Поместите камеру и эшафот под 10 мВт / см 2 365 нм света в течение 15 мин. После сшивания место в соответствующего размера пластины а. Убедитесь, что эшафот стороной вверх.
  8. Место леса под бактерицидной лампой в течение 30 мин для стерилизации. При желании фибронектина или другого белка, используется в качестве покрытия, чтобы усиливать адгезию клеток. Следуйте инструкциям производителя для покрытия строительных лесов.
  9. Урожай ганглии задних корешков (DRG), как описано ранее Холленбек 32. Один DRG будут необходимы для каждого лесов покрыты покровным испытания.
  10. Поместите 100-200 мкл СМИ на каждом эшафот в пластине также. Осторожно поместите одну DRG на каждом эшафот в медиа-капли. Для толстой эшафот могут быть необходимы больше средств массовой информации; DRG должны быть полностью погружен, а не floaтин.
  11. Выдержите на эшафот и DRG на 37 ° С в течение 4 часов, чтобы позволить сотовый придерживаться на эшафот.
  12. Заполните СМИ до соответствующего уровня для колодца и поместить обратно в инкубатор. Продолжить инкубации в течение 4-6 дней.
  13. После инкубационного периода тщательно удалять из каждой лунки и осторожно мыть один раз с PBS. Закрепить клетки в течение 30 мин с использованием 4% вес / об параформальдегида.
  14. Пятно клетки, использующие пятно антитела для нейрофиламентов. Это позволит визуализировать из нейритов для количественного определения. DAPI также может быть использован для просмотра ядра клеток. Протокол пример окрашивание описывается Sundararaghavan и коллег 14.
  15. Визуализация клеток с использованием флуоресцентного микроскопа.
    1. Поместите планшет, на столик микроскопа.
    2. Найдите клеточной массы с помощью фильтра и возбуждения настройки для DAPI.
    3. После того, как клетки является переключение фильтра для FITC визуализировать расширенные нейриты. Uпеть функцию стежка на микроскопом собирать и объединять столько изображений, сколько необходимо, чтобы увидеть всю структуру. Повторите эти действия для DAPI, FITC и светлом поле.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Микросферы 50 ± 14 мкм в диаметре со инкапсуляции белка более 85% были последовательно производятся и electrospun в каркасах. Размер определялась визуализации образцы микросфер из трех отдельных производственных партий. Образы, где захваченные на оптическом микроскопе и длины, где определяли с помощью коммерческого программного обеспечения лаборатории. Рисунок 1 показана гистограмма распределения по размерам. Скорость Инкапсуляция также тестировали из трех отдельных партий микросфер, путем количественно...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Многие исследования показали, что нервные клетки могут быть направлены на топографических киев (выравнивания волокна) и химические сигналы (факторы роста) 1,2,10,11,35. Электропрядения является легким способом для создания выровненных волокон. Факторы роста стимулировать рост нервных, но для того, чтобы включить их в нервные трубопроводов (НЗ), метод для замедленного высвобождения требуется. Чтобы создать более надежную систему с обеих киев, эти два сигнала должны быть объединены. Некоторые методы были ранее ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Эта работа была частично профинансирована через Фонд Ричарда Барбера и стипендию Томаса Рамбла (TJW).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
DAPIInvitrogenD1306
Irgacure 2959BASF24650-42-8Защита от света
PEO 900 kDaSigma-Aldrich189456
Methacryloxethyl thiocarbamoylrhodamine BPolysciences, Inc.23591-100Приготовьте стоковый раствор в
шприцевом насосеДМСО KD ScientificKDS100
Источник питанияГамма высоковольтныйES30P-5W
МоторТрием Электродвигатели, Inc0132022-15Необходимо прикрепить к изготовленной на заказ оправке
Тахометр Сетевой инструмент СкладESI-330Используйте для контроля скорости
оправкиOmnicure UV Spot Cure System с коллимационным адаптеромEXFOS1000
ИглыFisher Scientific14-825-16H
Покровные стеклаFisher Scientific12-545-81
Поливиниловый спиртSigma-AldrichP8136-250G
Изопоропиловый спиртSigma-AldrichI9030-500mL
Бычья сыворотка Альбумин (BSA)Fisher ScientificBP9703-100
BSA-FITCSigma-Aldrich080M7400
&бета;-фактор роста нервов (NGF)R& D Systems1156-NG
65:35 Полимолочная гликолевая кислота (PLGA)Sigma-Aldrich1001554270
дихлорметанSigma-Aldrich34856-2L
Coomassie (Bradford) Protein AssayThermo Scientific1856209
3-(триметоксисилил)пропилметакрилатSigma-Aldrich1001558456
ФибронектинSigma-AldrichF2006
DMEMLonza12-604F
FBSAtlanta BiologicalsS11150
PBSHycloneSH30256.01
GlutamineFisher ScientificG7513
Pen-StrepSigma-AldrichP4333
Параформальдегидальфа AesarA11313 

Ссылки

  1. Wrobel, M. R., Sundararaghavan, H. G. Directed migration in neural tissue engineering. Tissue Eng Part B Rev. , (2013).
  2. Schmidt, C. E., Leach, J. B. Neural tissue engineering: strategies for repair and regeneration. Annual Review of Biomedical Engineering. 5, 293-347 (2003).
  3. Madduri, S., di Summa, P., Papaloizos, M., Kalbermatten, D., Gander, B. Effect of controlled co-delivery of synergistic neurotrophic factors on early nerve regeneration in rats. Biomaterials. 31, 8402-8409 (2010).
  4. Madduri, S., Gander, B. Growth factor delivery systems and repair strategies for damaged peripheral nerves. J Control Release. 161, 274-282 (2012).
  5. Madigan, N. N., McMahon, S., O'Brien, T., Yaszemski, M. J., Windebank, A. J. Current tissue engineering and novel therapeutic approaches to axonal regeneration following spinal cord injury using polymer scaffolds. Respir Physiol Neurobiol. 169, 183-199 (2009).
  6. Sundararaghavan, H. G., Monteiro, G. A., Firestein, B. L., Shreiber, D. I. Neurite growth in 3D collagen gels with gradients of mechanical properties. Biotechnol. Bioeng. 102, 632-643 (2009).
  7. Hudson, T. W., Evans, G. R., Schmidt, C. E. Engineering strategies for peripheral nerve repair. Clin Plast Surg. 26, 617-628 (1999).
  8. Kokai, L. E., Bourbeau, D., Weber, D., McAtee, J., Marra, K. G. Sustained growth factor delivery promotes axonal regeneration in long gap peripheral nerve repair. Tissue Eng Part A. 17, 1263-1275 (2011).
  9. Bronzino, J. D., Peterson, D. R. The Biomedical Engineering Handbook, Third Edition - 3 Volume Set: Tissue Engineering and Artificial Organs. , 3 edition edn, CRC Press. (2006).
  10. Bell, J. H. A., Haycock, J. W. Next generation nerve guides: materials, fabrication, growth factors, and cell delivery. Tissue Eng Part B Rev. 18, 116-128 (2012).
  11. Ruiter, G. C. W., Malessy, M. J. A., Yaszemski, M. J., Windebank, A. J., Spinner, R. J. Designing ideal conduits for peripheral nerve repair. Neurosurgical focus. 26, (2009).
  12. Olakowska, E., Woszczycka-Korczyńska, I., Jędrzejowska-Szypułka, H., Lewin-Kowalik, J. Application of nanotubes and nanofibres in nerve repair. A review. Folia Neuropathol. 48, 231-237 (2010).
  13. Gunn, J., Zhang, M. Polyblend nanofibers for biomedical applications: perspectives and challenges. Trends Biotechnol. 28, 189-197 (2010).
  14. Sundararaghavan, H. G., Masand, S. N., Shreiber, D. I. Microfluidic generation of haptotactic gradients through 3D collagen gels for enhanced neurite growth. Journal of Neurotrauma. 28, 2377-2387 (2011).
  15. Sundararaghavan, H. G., Metter, R. B., Burdick, J. A. Electrospun fibrous scaffolds with multiscale and photopatterned porosity. Macromol Biosci. 10, 265-270 (2010).
  16. Edalat, F., Sheu, I., Manoucheri, S., Khademhosseini, A. Material strategies for creating artificial cell-instructive niches. Current Opinion in Biotechnology. 23, 820-825 (2012).
  17. Annabi, N., et al. Synthesis of highly porous crosslinked elastin hydrogels and their interaction with fibroblasts in vitro. Biomaterials. 30, 4550-4557 (2009).
  18. Castaño, O., Eltohamy, M., Kim, H. -W. Electrospinning technology in tissue regeneration. Methods Mol. Biol. 811, 127-140 (2012).
  19. Chew, S. Y., Wen, J., Yim, E. K. F., Leong, K. W. Sustained release of proteins from electrospun biodegradable fibers. Biomacromolecules. 6, 2017-2024 (2005).
  20. Han, D., Gouma, P. -I. Electrospun bioscaffolds that mimic the topology of extracellular matrix. Nanomedicine. 2, 37-41 (2006).
  21. Prabhakaran, M. P., et al. Electrospun biocomposite nanofibrous scaffolds for neural tissue engineering. Tissue Eng Part A. 14, 1787-1797 (2008).
  22. Xie, J., MacEwan, M. R., Schwartz, A. G., Xia, Y. Electrospun nanofibers for neural tissue engineering. Nanoscale. 2, 35-44 (2010).
  23. Yao, L., O'Brien, N., Windebank, A., Pandit, A. Orienting neurite growth in electrospun fibrous neural conduits. J. Biomed. Mater. Res. Part B Appl. Biomater. 90, 483-491 (2009).
  24. Sill, T. J., von Recum, H. A. Electrospinning: applications in drug delivery and tissue engineering. Biomaterials. 29, 1989-2006 (2008).
  25. Ifkovits, J. L., Sundararaghavan, H. G., Burdick, J. A. Electrospinning fibrous polymer scaffolds for tissue engineering and cell culture. Journal of Visualized Experiments: JoVE. , (2009).
  26. Sundararaghavan, H. G., Burdick, J. A. Gradients with depth in electrospun fibrous scaffolds for directed cell behavior. Biomacromolecules. 12, 2344-2350 (2011).
  27. Meinel, A. J., Germershaus, O., Luhmann, T., Merkle, H. P., Meinel, L. Electrospun matrices for localized drug delivery: current technologies and selected biomedical applications. Eur J Pharm Biopharm. 81, 1-13 (2012).
  28. Ji, W., et al. Bioactive electrospun scaffolds delivering growth factors and genes for tissue engineering applications. Pharm. Res. 28, 1259-1272 (2011).
  29. Burdick, J. A., Chung, C., Jia, X., Randolph, M. A., Langer, R. Controlled degradation and mechanical behavior of photopolymerized hyaluronic acid networks. Biomacromolecules. 6, 386-391 (2005).
  30. Péan, J. M., et al. Optimization of HSA and NGF encapsulation yields in PLGA microparticles. International Journal of Pharmaceutics. 166, 105-115 (1998).
  31. Cartiera, M. S., Johnson, K. M., Rajendran, V., Caplan, M. J., Saltzman, W. M. The Uptake and Intracellular Fate of PLGA Nanoparticles in Epithelial Cells. Biomaterials. 30, 2790-2798 (2009).
  32. Hollenbeck, P. J., Bamburg, J. R. Neurons: Methods and Applications for the Cell Biologist. , Gulf Professional Publishing. (2003).
  33. Boer, R., et al. Rat sciatic nerve repair with a poly-lactic-co-glycolic acid scaffold and nerve growth factor releasing microspheres. Microsurgery. 31, 293-302 (2011).
  34. Pujic, Z., Goodhill, G. J. A dual compartment diffusion chamber for studying axonal chemotaxis in 3D collagen. Journal of Neuroscience Methods. 215, 53-59 (2013).
  35. Madduri, S., di Summa, P., Papaloïzos, M., Kalbermatten, D., Gander, B. Effect of controlled co-delivery of synergistic neurotrophic factors on early nerve regeneration in rats. Biomaterials. 31, 8402-8409 (2010).
  36. Xu, X., et al. Polyphosphoester microspheres for sustained release of biologically active nerve growth factor. Biomaterials. 23, 3765-3772 (2002).
  37. Yan, Q., Yin, Y., Li, B. Use new PLGL-RGD-NGF nerve conduits for promoting peripheral nerve regeneration. Biomed Eng Online. 11, (2012).
  38. Gungor-Ozkerim, P. S., Balkan, T., Kose, G. T., Sarac, A. S., Kok, F. N. Incorporation of growth factor loaded microspheres into polymeric electrospun nanofibers for tissue engineering applications. J Biomed Mater Res A. , (2013).
  39. Li, X., et al. Encapsulation of proteins in poly(L-lactide-co-caprolactone) fibers by emulsion electrospinning. Colloids Surf B Biointerfaces. 75, 418-424 (2010).
  40. Wang, C. -Y., et al. The effect of aligned core-shell nanofibres delivering NGF on the promotion of sciatic nerve regeneration. J Biomater Sci Polym Ed. 23, 167-184 (2012).
  41. Liu, J. -J., Wang, C. -Y., Wang, J. -G., Ruan, H. -J., Fan, C. -Y. Peripheral nerve regeneration using composite poly(lactic acid-caprolactone)/nerve growth factor conduits prepared by coaxial electrospinning. J Biomed Mater Res A. 96, 13-20 (2011).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Электропрядения фактор роста Освобождение микросфер в волокнистых Строительные леса
Свяжитесь с нами
Рекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

Авторские права © 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.