Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Строительство и характеристика Fold биореактора Роман вокального

9K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/51594

⸱

1 августа 2014 г.

 ,  ,  , 
1Biomedical Engineering Program, University of Delaware, 2Department of Materials Science and Engineering, Delaware Biotechnology Institute, University of Delaware

В этой статье

Краткое содержание

Построен и охарактеризован новый биореактор голосовых складок, способный доставлять физиологически значимую вибрационную стимуляцию культивируемым клеткам. Это устройство для динамической культивирования в сочетании с волокнистым поли(ε-капролактонным) каркасом создает миметическую среду голосовых складок, которая модулирует поведение мезенхимальных стволовых клеток.

Аннотация

Инженерия механически активных тканей in vitro требует представления физиологически значимых механических условий культивируемым клеткам. Для имитации динамической среды голосовых складок был сконструирован и охарактеризован новый биореактор голосовых складок, способный производить вибрационные стимулы на основных частотах фонации. Устройство состоит из генератора функций, усилителя мощности, селектора динамиков и параллельных вибрационных камер. Индивидуальные виброкамеры создаются путем сэндвичинга изготовленной на заказ силиконовой мембраны между парой акриловых блоков. Силиконовая мембрана не только служит дном камеры, но и обеспечивает механизм для крепления каркаса, нагруженного ячейками. Вибрационные сигналы, генерируемые динамиком, установленным под нижним акриловым блоком, аэродинамически передаются на мембрану с помощью колеблющегося воздуха. Восемь одинаковых вибромодулей, закрепленных на двух неподвижных металлических стержнях, размещены в антивлажной камере для длительной эксплуатации в инкубаторе для клеточных культур. Вибрационные характеристики биореактора голосовых складок анализируются неразрушающим способом с помощью лазерного доплеровского виброметра (ЛДВ). Полезность устройства для динамического культивирования продемонстрирована путем культивирования клеточных конструкций в присутствии синусоидальных колебаний с частотой 200 Гц и смещением средней мембраны 40 мкм. Мезенхимальные стволовые клетки, культивируемые в биореакторе, реагируют на вибрационные сигналы, изменяя синтез и деградацию компонентов внеклеточного матрикса, отвечающих за голосовые складки. Представленная здесь новая биореакторная система предлагает превосходную платформу in vitro для изучения механотрансдукции, вызванной вибрацией, и для инженерии функциональных тканей голосовых складок.

Введение

Человеческий голосовой складки, состоит из эпителиального слоя, собственная пластинка (LP) и Vocalis мышц, является специализированным мягких тканей, который преобразует поток воздуха из легких в акустических волн для звукоизвлечения. 1 голосовых складок регулярно колебаться при нормальной фонации, экспонирование штаммы до 30% на основных частотах в диапазоне от 100-300 Гц. 2 взрослых голосовой складки LP градиент структура состоит из поверхностного (SLP), промежуточный (ILP) и глубокий слой (DLP). Дальнейшие классификации групп эпителия и SLP как слизистой слоя, и сочетает в себе НРП и DLP в вокальной связки. 3 SLP слой содержит первую очередь аморфную матрицу с редко разбросанных коллагеновых волокон, в то время как связки обогащается зрелой волокон коллагена и эластина обеспечить достаточную прочность. 4 Структура и механика новорожденных голосовых складок значительно отличаться от своих зрелых коллег. Хотя механизмс регулирующими вокальный развитие раза и созревание еще не до конца понял, экспериментальные доказательства указывали на определяющих ролей вокализации, полученных механическим воздействиям.

Несколько медицинские условия, в том числе злоупотребления голоса, инфекций, химических раздражителей и хирургических процедур, может привести к повреждению голосовых связок. Вокальные расстройства раза повлиять оценкам 3-9% населения США. Современные методы лечения голосовых расстройств сгиба ограничены 5 и на основе клеток тканевой инженерии подход стволовых стала перспективной стратегии для восстановления голосовой функции раза. Мезенхимальные стволовые клетки (МСК), являются подходящей альтернативой первичных голосовых фибробластов сгиба для голосовой складки тканевой инженерии. 6-9 судьба стволовых клеток спецификация и развитие последующее ткани опосредованы конкретной нише они проживают в, из которых механическое состояние является жизненно важным фактором. 10 Механические силы являются важнейшими регуляторами тканевого морфогенеза ай гомеостаз, особенно для тканей, которые обычно подвергнутых Загрузка. 11 из ткани инженерной точки зрения, было показано, что воздействие физиологически соответствующие механические стимуляции способствует дифференциации клеток и тканей конкретной матрицы ремоделирование стволовых. 12-15

Культуры ткани биореакторы предназначены для имитации нужного физиологического среды для клеток или тканей роста в пробирке. Для голосовой складки тканевой инженерии, это особенно важно для воссоздания механическую среду из phonating голосовых складок. Идеальный вокал биореактор раз должны эффективно доставлять вибрационные сигналы, чтобы культуры клеток, позволяя поспешное контроль над частоты, амплитуды и длительности колебаний. Titze и его коллеги разработали вокальный биореактор раза (T1 биореактора) 16, который сочетает статического растяжения с высокой частотой (20-200 Гц) колебаний, чтобы стимулировать клеточное производство матричных протеинов. Усинг этот биореактор, Уэбб и его коллеги 17 изучали эффекты 10-дневных, 100-Гц колебаний на фибробластов кожи, культивируемых в гиалуроновой кислоты (HA) на основе гидрогеля. Конструкции подвергается вибрации выставлены повышенной экспрессии HA-2-синтазы (HAS2), Decorin, Фибромодулин и матриксной металлопротеиназы-1 (MMP1), относительно статических элементов управления. Стимулирующие эффекты оказались зависит от времени. Совсем недавно, наша группа 18 собрал вокальную биореактор раза (J1 биореактора) с использованием усилителя мощности, генератор функцию, закрытый громкий динамик и окружности-якорь силиконовую мембрану, которая передает колебательное воздух на прилагаемые клеток. Неонатальной крайней плоти фибробласты культивируемых в биореакторе J1 были подвергнуты 1 ч вибрации в 60, 110 или 300 Гц, с в плоскости деформации до 0,05%. Результаты КПЦР предположили, что экспрессия некоторых генов ECM был умеренно изменены в ответ на различных частотах колебательныхи амплитуды.

Эти биореакторы конструкции, в то время интригует, есть несколько ограничений. Например, система T1 требуется большое количество разъемов и баров для механического соединения, что ограничивает максимальные частоты достижимы. Кроме того, клетки могут быть подвергнуты нежелательному механического перемешивания и жидкости возмущения, что усложняет интерпретацию данных. J1 биореактор, с другой стороны, показывает относительно низкую эффективность преобразования энергии и не удобно. Кроме того, вибрация часто отделяет клеточные нагруженные конструкции из базового силиконовая мембрана. J2 голосовой складки биореактор сообщили здесь, разработаны на основе той же принципу, что и версии J1, оптимизирован для последовательности и воспроизводимости. Вибрации фонации имитирующие генерируются аэродинамически в индивидуально подобранной камер вибрационных где MSC населенных волокнистый поли (ε-капролактон) (PCL) леса являются effectivелы обеспечено. Лазерная доплеровская виброметрия (LDV) позволяет пользователю проверить вибрационный профиль мембрана / эшафот сборки. В нашей демонстрации, МСК подвергаются 200-Гц синусоидальной вибрации с (всего) модель 1-ч-на-1-ч-офф в общей сложности 12 час в день в течение 7 дней. Сотовые ответы на введенных вибрационных сигналов исследованы систематически. В целом, вокал раза J2 обеспечивает наиболее удобные функции, позволяя динамическое клеточных культур исследования, которые будут проводиться в высокой пропускной способности и воспроизводимым способом.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

1. Биореактор Ассамблея (видео 1)

  1. Сделать алюминиевую форму (кольцевую головку + прокладка контактный) с заранее определенными внутренними и внешними размерами (рис. 1).
  2. Используя формы, начиная с шага 1.1, сфабриковать силиконовая мембрана (диаметр: 42 мм, толщина: 1,5 мм, рисунок 1) с укоренившейся рукава (диаметр: 12 мм, толщина ~ 0,25 мм, сформированной разделительного штифта на рисунке 1) в средний использованием коммерчески доступного набора силиконовый эластомер.
  3. Сделайте пару акриловых блоков (рис. 2 (4, 5)) с круглым отверстием (диаметр: 24 мм) в середине, выгравировать на вершину (толщиной 1,8 см) и нижний (толщиной 0,9 см) блоки с соответствующими гребни и впадины 10.
  4. Бутерброд силиконовую мембрану между парными акриловых блоков. Закрепить с четырьмя угловыми винтами с помощью микро отвертку крутящего момента, установленный на постоянной силы (35 сН · м). В результате водонепроницаемый, 24 мм в ширину и 18 мм в глубину вибрации камеры создается (рис. 2С).
  5. Смонтировать "расширенный диапазон мини-сабвуфер 3 (рис. 2D, 8 Ω/20 W) под камеру вибрации через другой набор угловых винтов на нижней акриловой блока. В этот момент, индивидуальный модуль вибрации в собранном виде.
  6. Репликация семь дополнительных модулей вибрации. Прикрепите четыре из них к одному из двух стационарных алюминиевых шин (40 см х 10 см х 2,5 см), поместив основания колонок в равномерно расположенных круглых отверстий (диаметр 7 см, толщина 2 см) нарезать баров. Стабилизация каждую колонку путем вставки винта через сторону алюминиевой панели в каждом круговом отверстии.
  7. Индивидуально контролировать громкоговорители селектором динамика. Подключение отдельных колонок для селектора путем присоединения провода к положительной и отрицательной входов на корпусе акустической затем к соответствующим выходам на селекторе. Селектор динамик позволяет сигнал от тон функциональный генератор, после прохождения через усилитель мощности, чтобы достичь все восемь динамиков сразу (рис. 2Е).
  8. Поместите две камеры массивы, селектор громкоговорителей и электронику в корпус анти-влажности. Дом весь узел в коммерческом инкубаторе для клеточных культур.
  9. Поток основные кабели (через трубки из ПВХ медицинского назначения), соединяющий усилитель мощности и селектор громкоговорителей через узел фильтра на задней части инкубатора.

2. Леса Изготовление и характеристика

  1. Растворить PCL гранул в хлороформе при концентрации 15% мас. Загрузить раствора в 10 мл шприц колпачком с 21 г тупым концом иглы.
  2. Блокировка шприц на программируемой шприцевой насос и регулировка подачи со скоростью 1 мл / час.
  3. Поместите фольги, покрытой коллектор алюминия напротив иглы по горизонтали, с иглой кончик к коллектору расстоянии ~ 18 см.
  4. Зажмите положительный АЛАЙаллигатор клип к середине иглы, и первом крокодил к алюминиевому коллектора, затем установите напряжение на высоковольтного источника питания на 15 кВ. ВНИМАНИЕ: высокое напряжение, держать дистанцию ​​от иглы.
  5. Последовательно включите шприцевой насос и блок питания; быстро чистым / удаления остаточного раствора полимера вокруг кончика иглы с помощью сухой бумажной салфеткой перед струй стабильной волокна и Тейлор конус 19 формируются.
  6. Разрешить волокна накапливаться на Al коллектора до толщины ~ 250-300 мкм (~ 7 час в текущих условиях прядильных). Сохраните этот строительные леса в вакуумном эксикаторе в течение 1-2 дней, чтобы удалить остатки растворителя.
  7. Изображение каркасы, напылением золотом, с помощью сканирующего электронного микроскопа, чтобы показать последовательное морфологии волокна. 10

3. Биореактор Ассамблея и характеристика

  1. Удар цилиндрический диск (диаметр 8 мм) с четырьмя руками (длина: 2мм) из формовани мата PCL (рис. 2А) по первым использованием 12 мм биопсии диаметр удар сократить внешний диаметр диска. Тогда используйте второй, 8 мм биопсии удар, чтобы сделать четыре 2 мм длиной выемки равномерно расположенных вокруг круглого лезвия забить, где руки должны быть сокращены. После забив с 8 мм удар, использовать лезвие скальпеля, чтобы сократить края руках наружу. Вставьте эшафот в паз силиконовой мембраны через вытянутыми руками (видео 1). Свести вставленный эшафот, слегка нажав на поверхность с помощью плоскую пинцет.
  2. Прикрепите небольшой кусочек тонкой алюминиевой фольгой (8 мм х 2 мм, ортогональной формы, рис. 2б) на эшафот PCL, чтобы помочь лазерный отражение.
  3. Закрепите собранный силиконовая мембрана / PCL эшафот (как указано в шаге 1.4) в камере вибрации. Добавить 1,5 мл воды в камере для того, чтобы гидратации каркас PCL до вибрации.
  4. Используя функцию генератора, ввести вибрации знаклов (например, 200 Гц синусоидальные волны с напряжением от пика до пика, пик-пик, 0,1 V) к зажатой акриловой камеры. С помощью вольтметра точно измерить напряжение на каждом входе громкоговорителя. Примечание: считывание Vpp от генератора функции будет отличаться от возможного напряжения подаваемого в динамик.
  5. Соберите в одной точке LDV и закрепите оптоволоконный лазерный датчик голову к наклонно-поворотное устройство штатив. Угол головку датчика так, чтобы он направлен перпендикулярно к поверхности стола. Подключите головку датчика LDV к модулю сбора данных по коаксиальному кабелю то модуль к ноутбуку через USB.
  6. Фокусировки лазерного луча перпендикулярно на различных заданных точках на силиконовой мембраной (рис. 2В и рис. 3).
  7. Использование программного обеспечения сбора данных, записывать смещение середины мембраны. Нажмите кнопку "Настройки приобретение» в меню «Параметры»; затем изменить режим измерения для "БПФ221;. Затем нажмите кнопку "Непрерывное измерение" в главной панели инструментов нажмите кнопку пик, который формирует на выбранной частоте (рис. 6D) для записи перемещений.
  8. Участок нормального среднего мембраны смещение (W 0) в зависимости от относительного положения через подложку. Построить 3D палитру профиля поверхности вибрационного помощью Origin программного обеспечения для анализа 8.5 данных.

4. Вибрационный Культура клеток

  1. Мозга, полученных МСК субкультуре человеческой кости в T150 колбу с тканевой культурой в начальной плотности посева 4000-5000 клеток / см 2 в MSC обслуживания средств массовой информации.
  2. После 7-8 дней культивирования клеток (до ~ 85% слияния), Trypsinize клеток с клеточной диссоциации реагента, такого как Accutase, подсчет с помощью гемоцитометра, центрифуги (440 х г в течение 5 мин), и повторно приостанавливать осадок клеток в свежий MSC обслуживание СМИ в концентрации 4,5 × 10 6 клеток / мл.
  3. Погрузите scaffo PCLсть в 70% этанола O / N. После выпаривания растворителя подвергать обе стороны помост к бактерицидной УФ-света (254 нм) в течение 5-8 мин.
  4. Замочите на эшафот PCL в 20 мкг / мл фибронектина раствора при 37 ° С в течение 1 часа. Вставьте фибронектина покрытием эшафот в силиконовой мембраны. Соберите биореактор о чем подробно говорится в пункте 1.
  5. Распределить 40 мкл клеточной суспензии равномерно на обеспеченного PCL эшафот. Разрешить клетки приложить для 1-1,5 часа перед добавлением еще 1,5 мл свежей среды в камеру вибрации.
  6. Культура MSC-Ладена PCL эшафот статически течение 3 дней и обновить средства массовой информации после завершения статической культуры.
  7. Наложите выбранные режимы вибрации для сотовых конструкций. Примечание: В качестве примера, клетки подвергаются 1-ч-на-1-ч-офф (всего) вибрации при 200 Гц с AW 0 из ~ 40 мкм в течение 12 часов в день на срок до 7 дней. Конструкции подвергаются вибрационных раздражений обозначены в качестве образцов Vib и тех Cultuкрасный статически в одинаковых камер вибрации служат статические элементы управления (Stat).

5. Биологические Оценки

  1. Сбор 200 мкл культуральной среды клеток из каждой камеры через день (день 1, 3, 5 и 7) и объединить аликвот из того же образца вместе (800 мкл каждого).
  2. Количественная сотовой производство матрицы металлопротеиназы-1 (ММР1) и ГК с использованием набора MMP1 ИФА развития и гиалуронана конкурентное комплект ELISA, соответственно, после процедуры производителей. Между тем, анализ производства растворимого предшественника эластина после ранее описанной методике ELISA. 8
  3. По завершении последнего цикла вибрации на 7-й день, быстро удалить клеточные конструкции от вибрации камеры с помощью пинцета и острые кратко промыть холодной фосфатным буферным раствором (PBS, 4 ° С).
  4. Для живой / мертвый окрашивания, инкубировать конструкции с пропидийиодидом (1:2000 в PBS) иСыто-13 (1:1000 в PBS) одновременно в течение 5 мин при комнатной температуре. Изображение окрашенные конструкции с многофотонный конфокальной микроскопии.
  5. Отдельно оснастки заморозить PBS-промыть сотовой конструкции на сухом льду и извлекать общее клеточной РНК следующий сообщалось ранее протокола для анализа генов. 9
  6. Проверьте количество и качество добытого РНК с помощью UV-VIS спектрофотометр. Образцы РНК с А260/А280 и A260/A230 отношений 1,8-2,2 используются для последующего анализа КПЦР.
  7. Обратный транскрибировать РНК (500 нг / образец) в кДНК с использованием коммерчески доступного обратный набор транскрипции.
  8. Выполните ПЦР в реальном масштабе времени системы обнаружения последовательность помощью имеющегося в продаже ПЦР мастер смеси после ранее подробно процедуры. 8
  9. Проанализируйте результаты КПЦР с помощью программного обеспечения коммерческой анализа данных КПЦР. Чтобы обеспечить надежность анализа данных, множество опорных генов (YWHAZ, ТВР, PPIA) используются в качестве междунарernal контроля, а дисперсия конкретных эффективности праймеров учитывается. 8

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

В PCL каркасы, изготовленные электроформования содержать микронных размеров пор и интерстициальные случайно перепутанные волокна со средним диаметром 4,7 мкм (фиг.4А). На более высоком увеличении, наноразмерные канавки и поры открыты на отдельных волокон (рис. 4б). Покрытие из лесов с фибронектина улучшает гидрофильность и облегчает начальную адгезию клеток / распространения на эшафоте PCL (неопубликованные наблюдения).

Синусоидальных сигналов с требуемой ча...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Успешное проектирование функциональных вокальных тканей сгиба в пробирке требуется воссоздание вокального раза, как микросреды стать посредником за поведением мультипотентными клеток. Принято считать, что ткани или органа структуры отражают функции, которые они должны выполнять. 22 Для вокальных тканей сгиба, высокие частоты вибрации, возникающие во время фонации предлагается иметь важное значение для ткани созревания. В нашем исследовании PCL каркасы используются, чтобы обеспечить структурную поддер...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Не существует конкурирующие между собой финансовые интересы.

Благодарности

Мы благодарим доктора Джеффри Каплан за его обучение и консультации по конфокальной микроскопии. Мы также благодарим Keck электронной микроскопии Lab и доктора Chaoying Ni для SEM помощи. Эта работа финансируется Национальными Институтами Здоровья (NIDCD, R01DC008965 и R01DC011377). АБЗ признает NSF интегративной последипломного образования & Research Тренинги программы (IGERT) для финансирования.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Набор силиконовых эластомеровDow CorningSylgard 184Отверждение мембраны при 100 ° C в течение 2 ч
PCLSigma Aldrich440744-500GMn ~80 кДа, растворить O/N
ХлороформSigma AldrichC7559-5VL
МСК из костного мозга человекаLonzaPT-2501Получено с пассажем 2
МСК поддерживающей средыLonzaPT-300110% FBS в базальной среде с добавлением
с L-глутамином, гентамицином и амфотерицином
Реагент для диссоциации клеток аккутазыLife TechnologiesA11105-01
ЭтанолSigma AldrichE7023-500ML
ФибронектинSigma AldrichF2006-1MG
MMP1 DuoSet ELISA kit R& D systemsDY901
HA ELISA kitEchelon Biosciences  К-1200   
PBSLife Technologies14190-136
Пропидий йодид Life TechnologiesP1304MP
Syto-13 Life TechnologiesS7575
QuantiTect Комплект для обратной транскрипции Qiagen205311
SYBR Green PCR мастер-миксLife Technologies4309155
Замена динамикаDAYTON audio
(через Parts Express)		DS90-8Бумажный диффузор, полный диапазон (80-13 000 Гц), 85 дБ
Ergo Micro крутящая отверткаMountz#020377Диапазон крутящего момента: 20-120 cN· m
Селектор стереодинамиковRadioShack40-244Максимальная мощность 50 Вт
Функция генератора Agilent 33220AДиапазон частот 1 и микро; Гц-20 МГц
Усилитель мощности PYLE аудиоPylePro PT2400Частотная характеристика: 10 Гц-50 кГц, два динамика<бр/> канала
Инкубатор для клеточных культур Термо Фишер Steri-Cult 3307
Насос для шприцев New Era Pump SystemsNE-300
Высоковольтный источник питанияSpellmanCZE 1000RВыходное напряжение: 0-30 кВ
Сканирующий электронный микроскоп JEOL-СШАJSM-7400F
Настольный позолоченный распылитель для нанесения покрытийDenton VacuumDSK00V-0013
Доплеровский лазерный виброметр PolytecPDV-100Бесконтактное измерение скорости (0-22 кГц)
Система детектирования последовательностей ПЦР Прикладные биосистемыABI7300
Многофотонный конфокальный микроскопZeiss Zeiss510Meta NLO
UV-VIS Спектрофотометр NanoDrop Products
через Thermo Scientific		ND-2000
VibSoft Программное обеспечение для сбора данныхPolytecAcquisition Полоса пропускания до 40 МГц
Origin 8.5 Программное обеспечение для анализа данных Программное обеспечение для
qbasePlus BiogazelleV2.3
Алюминиевый сплав McMaster-CarrAlloy 6061
Акриловые блокиMcMaster-Carr
Ударопрочная  Шурупы из поликарбоната
 McMaster-Carr
Электронный кабель/провод
Медицинская трубка из ПВХUS Plastic Corp.Tygon S-50-HLПрозрачный, биосовместимый
10 мл Шприц Becton Dickinson309604
21 G Игла с тупым концомМелкие деталиNE-213PL-251-1/2"
длина Адаптеры зажима типа "Аллигатор" RadioShack270-354Полностью изолированный
8 мм биопсийный пуансонSklar  Хирургические инструменты96-1152Стерильный, одноразовый
12 мм Биопсийный пуншAcuderm (через Fisher Scientific)NC9998681
Колбы для культуры тканевых культурCorningCell Culture обработанный
анализа данных количественной ПЦР OriginLab Поликарбонатная антивлажностная камера McMaster-Carr класса

Ссылки

  1. Titze, I. R. Mechanical-Stress in Phonation. J. Voice. 8, 99-105 (1994).
  2. Titze, I. R. On the Relation Between Subglottal Pressure and Fundamental-Frequency in Phonation. J. Acoust. Soc. Am. 85, 901-906 (1989).
  3. Gray, S. D. Cellular physiology of the vocal folds. Otolaryngol. Clin. N. Am. 33, 679-698 (2000).
  4. Thibeault, S. L., Gray, S. D., Bless, D. M., Chan, R. W., Ford, C. N. Histologic and rheologic characterization of vocal fold scarring. J. Voice. 16, 96-104 (2002).
  5. Hansen, J. K., Thibeault, S. L. Current understanding and review of the literature: Vocal fold scarring. J. Voice. 20, 110-120 (2006).
  6. Pittenger, M. F., et al. Multilineage potential of adult human mesenchymal stem cells. Science. 284, 143-147 (1999).
  7. Hanson, S. E., et al. Characterization of Mesenchymal Stem Cells From Human Vocal Fold Fibroblasts. Laryngoscope. 120, 546-551 (2010).
  8. Tong, Z., Duncan, R. L., Jia, X. Modulating the behaviors of mesenchymal stem cells via the combination of high-frequency vibratory stimulations and fibrous scaffolds. Tissue Eng. Part A. 19, 1862-1878 (2013).
  9. Tong, Z., Sant, S., Khademhosseini, A., Jia, X. Controlling the Fibroblastic Differentiation of Mesenchymal Stem Cells Via the Combination of Fibrous Scaffolds and Connective Tissue Growth Factor. Tissue Eng. Part A. 17, 2773-2785 (2011).
  10. Jones, D. L., Wagers, A. J. No place like home: anatomy and function of the stem cell niche. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 9, DOI. 11-21 (1038).
  11. Wang, J. H., Thampatty, B. P. Mechanobiology of Adult and Stem Cells. Int. Rev. of Cell Mol. Biol. 271, 301-346 (2008).
  12. Doroski, D. M., Levenston, M. E., Temenoff, J. S. Cyclic tensile culture promotes fibroblastic differentiation of marrow stromal cells encapsulated in poly (ethylene glycol)-based hydrogels. Tissue Eng. Part A. 16, 3457-3466 (2010).
  13. Kim, B. S., Nikolovski, J., Bonadio, J., Mooney, D. J. Cyclic mechanical strain regulates the development of engineered smooth muscle tissue. Nat. Biotechnol. 17, 979-983 (1999).
  14. Webb, K., et al. Cyclic strain increases fibroblast proliferation, matrix accumulation, and elastic modulus of fibroblast-seeded polyurethane constructs. J. Biomech. 39, 1136-1144 (2006).
  15. Kim, Y. J., Sah, R. L. Y., Grodzinsky, A. J., Plaas, A. H. K., Sandy, J. D. Mechanical Regulation of Cartilage Biosynthetic Behavior - Physical Stimuli. Arch. Biochem. Biophys. 311, 1-12 (1994).
  16. Titze, I. R., et al. Design and validation of a bioreactor for engineering vocal fold tissues under combined tensile and vibrational stresses. J. Biomech. 37, 1521-1529 (2004).
  17. Kutty, J. K., Webb, K. Vibration stimulates vocal mucosa-like matrix expression by hydrogel-encapsulated fibroblasts. J. Tissue Eng. Regen. Med. 4, 62-72 (2010).
  18. Farran, A. J. E., et al. Design and Characterization of a Dynamic Vibrational Culture System. J. Tissue Eng. Regen. Med. , (2011).
  19. Reneker, D. H., Yarin, A. L. Electrospinning jets and polymer nanofibers. Polymer. 49, 2387-2425 (2008).
  20. Wang, Y., Theobald, P., Tyrer, J., Lepper, P. The application of scanning vibrometer in mapping ultrasound fields. J. Phys.: Conf. Ser. 1, 167-173 (2004).
  21. Brown, W. S., Morris, R. J., Hollien, H., Howell, E. Speaking Fundamental-Frequency Characteristics as a Function of Age and Professional. J. Voice. 5, 310-315 (1991).
  22. Ingber, D. E. Cellular mechanotransduction: putting all the pieces together again. Faseb J. 20, 811-827 (2006).
  23. Titze, I. R., et al. Design and validation of a bioreactor for engineering vocal fold tissues under combined tensile and vibrational stresses. J. Biomech. 37, 1521-1529 (2004).
  24. Moore, J., Thibeault, S. Insights Into the Role of Elastin in Vocal Fold Health and Disease. J. Voice. 26, 269-275 (2012).
  25. Thibeault, S. L., Bless, D. M., Gray, S. D. Interstitial protein alterations in rabbit vocal fold with scar. J. Voice. 17, 377-383 (2003).
  26. Branski, R. C., Verdolini, K., Sandulache, V., Rosen, C. A., Hebda, P. A. Vocal fold wound healing: A review for clinicians. J. Voice. 20, 432-442 (2006).
  27. Clark, I. A., Swingler, T. E., Sampieri, C. L., Edwards, D. R. The regulation of matrix metalloproteinases and their inhibitors. Int. J. Biochem. Cell B. 40, 1362-1378 (2008).
  28. Silver, F. H., Horvath, I., Foran, D. J. Viscoelasticity of the vessel wall: The role of collagen and elastic fibers. Crit. Rev. Biomed. Eng. 29, 279-301 (2001).
  29. Kutty, J. K., Webb, K. Tissue Engineering Therapies for the Vocal Fold Lamina Propria. Tissue Eng. Part B: Rev. 15, 249-262 (2009).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Мезенхимальные стволовые клеткивибрационная стимуляциялазерный доплеровский виброметрскаффолд из PCLсиликоновая мембранавнеклеточный матриксмеханотрансдукцияклеточная культуравибрационный анализ
Строительство и характеристика Fold биореактора Роман вокального
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.