Применение матрицы-лазерной десорбцией / время ионизации полета (MALDI-TOF) масс-спектрометрии (MS) непосредственно к культуре крови бульона ускоряет идентификацию бактерий. Представленный метод является быстрым и надежным методом идентификации грамотрицательных бактерий непосредственно из культуры крови бульоне.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Быстрое выявление грамотрицательных бактерий из крови культуральной жидкости Использование MALDI-TOF масс-спектрометрии
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Важную роль в клинической лаборатории микробиологии является обеспечение быстрой идентификации бактерий, вызывающих инфекции кровотока. Традиционный идентификация требует суб-культуру сигнальное культуры крови бульоне с идентификации доступных только после колоний на твердой агар созрели. MALDI-TOF MS является надежным, быстрый способ идентификации большинства клинически значимых бактерий при нанесении на колоний на твердых средах. Применение MALDI-TOF MS непосредственно к культуре крови бульона является привлекательным подход, поскольку он имеет потенциал для ускорения идентификации видов бактерий и улучшить клиническое управление. Тем не менее, важной проблемой для преодоления является удаление предварительно анализ интерферирующих смол, белков и гемоглобина, содержащихся в культуре образцов крови, которые, если их не удалить, мешают MS спектров и может привести к недостаточному или низкими оценками идентификации дискриминации. Кроме того, необходимо сосредоточиться BacterИ.А. развивать спектры достаточно высокого качества. Представленный метод описывает концентрацию, очищение, и извлечение грамотрицательных бактерий, позволяющих раннего выявления бактерий из сигнальном культуры крови бульоне.
Введение
Пациенты с инфекции кровотока (BSI) из-за бактерий по-прежнему имеют высокую смертность в стационаре, начиная от 6-48% 1. Доставка соответствующего эмпирического антибиотика способствует выживанию и в подгруппе пациентов с тяжелым сепсисом, каждый час задержки в соответствующей терапии коррелирует со снижением выживаемости 2,3. Соответственно, одной из ключевых задач клинической лаборатории является быстрое обнаружения, идентификации и общайтесь присутствие бактерий в культурах крови сообщить клинические решения. Было показано, что микробиологическая лаборатория имеет наибольшее влияние на антимикробной терапии на момент отчетности Граму 4<....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
1. Кровь Культура Отвары Отметить как «Позитивный»
- Снимите сигнализируется бутылку культуры кровь из непрерывного мониторинга инкубационного шкафа и поместить его в кабинете биологической безопасности. Примечание: Бутылки могут содержать опасные микроорганизмы и универсальные меры предосторожности должны быть выполнены. В связи с риском инфекционных аэрозолей в выборке, все процедуры отбора проб должны быть выполнены в шкафу с ламинарным потоком биобезопасности класса II.
2. Граму готов
- Подготовьте Граму от сигнальное культуры крови бульоне в соответствии с местными институциональными протоколов. Примечан....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Сгенерированный MALDI-TOF MS спектры по сравнению с интегрированной справочной базы данных спектров. Логарифмическая оценка присваивается за доверие матча между тестовой изолята и справочную базу данных изолирует, с рекомендацией счетом ≥ 1,7, необходимых для возможного выявления до уровня родов (рис. 1) и ≥ 2,0 для вероятного идентификации для определения видов (рис. 2). Сообщить видовом уровне при счете ≥ 1.7 и первые 5 идентификации подобраны с помощью программного обеспечения Typing.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Важно при применении MALDI-TOF MS в культуральной жидкости крови, что шаги сообщение центрифугирования выполняются с достаточной осторожностью, чтобы не ремикс разделенных компонентов. Особенно важно, чтобы удалить культуры крови составляющие и клеточных белков человека, включая гемоглобина, которые могут производить шипы, препятствующие со спектрами MALDI-TOF.
Хотя МС производит рекомендуем сократить партитуры ≥ 2.0 для видов и ≥ 1,7 для идентификации рода, другие отчеты предложили более ни.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы заявляют, что они не имеют конкурирующие финансовые интересы.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| BACTEC Plus Aerobic/F Medium | Becton Dickinson; BD, Франклин Лейкс, Нью-Джерси, США 442192 | ||
| BACTEC Lytic/10 Anaerobic/F Medium | Becton Dickinson; BD, Франклин Лейкс, Нью-Джерси, США 442265 | ||
| BACTEC Peds Plus Medium | Becton Dickinson; BD, Франклин Лейкс, Нью-Джерси, США 442194 | ||
| Vacutainer - Устройство для переноса крови | Becton Dickinson; BD, Франклин Лейкс, Нью-Джерси, США | 364880 | Одноразовое устройство для отбора проб, снижающее риск травмы от укола иглой |
| Vacutainer SST 5,0 мл, Advance plus | Becton Dickinson; BD, Франклин Лейкс, Нью-Джерси, США 367954 | Сыворотка Разделительная трубка | |
| Шприц 10 мл | Бектон Дикинсон; BD, Franklin Lakes, NJ, США | 302143 | |
| Трансферный пипетка | Samco, США | 222-20S | |
| Трансферный пипетка (с тонким наконечником) | Samco, США | 232-20S | |
| микроцентрифужная пробирка (2,0 мл) | Eppendorf, Гамбург, Германия | 0030.120.094 | |
| Стерильная вода (без ДНКазы и РНКазы) | Life Technologies, Карлсбад, Калифорния, США | 10977-015 | |
| Муравьиная кислота | Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, США | F0507 | |
| Матричный раствор | Bruker Daltonics, Бремен, Германия | 285074 | 10 мг/мл &альфа;-циано-4-гидроксикоричная кислота, 50% ацетонитрила, 2,5% трифторуксусной кислоты |
| Настольный микрофлекс LT MALDI-TOF MS | Bruker Daltonics, Бремен, Германия | Использование программного обеспечения BioTyper 3.1 (Build 65) и FlexControl 3.3 (Build 99) |
Ссылки
- Bearman, G. M., Wenzel, R. P. Bacteremias: a leading cause of death. Arch. Med. Res. 36 (6), 646-659 (2005).
- Leibovici, L., Shraga, I., Drucker, M., Konigsberger, H., Samra, Z., Pitlik, S. D. The benefit of appropriate empirical antibiotic treatment in patients with bloodstream....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
Теги
