Методическая статья

В режиме реального времени измерения мембранного белка: рецептор взаимодействий с использованием поверхностного плазмонного резонанса (SPR)

DOI:

10.3791/51937

⸱

29 ноября 2014 г.

 ,  , 
1Department of Biochemistry, The Bruce and Ruth Rappaport Faculty of Medicine, The Technion-Israel Institute of Technology

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Поверхностного плазмонного резонанса (SPR) представляет собой метод, свободной от этикетки для обнаружения био-молекулярных взаимодействий в реальном времени. При этом протокол для мембранного белка: эксперименте взаимодействие с рецептором описана, обсуждая плюсы и минусы этого метода.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Белок-белковые взаимодействия имеют решающее значение для большинства, если не для всех, физиологических процессов, и понимание природы таких взаимодействий является центральным шагом в биологических исследованиях. Поверхностный плазмонный резонанс (SPR) — это чувствительный метод детектирования для изучения биомолекулярных взаимодействий без меток в режиме реального времени. В типичном эксперименте SPR один компонент (обычно белок, называемый «лигандом») иммобилизуется на поверхности сенсорного чипа, в то время как другой («аналит») находится в свободном растворе и вводится на поверхность. Ассоциация и диссоциация аналита от лиганда измеряются и отображаются в режиме реального времени на графике, называемом сенсограммой, из которого выводятся данные о предравновесии и равновесии. Отсутствие меток, потребление небольшого количества материала и предоставление кинетических данных до равновесия часто делают SPR предпочтительным методом при изучении динамики белковых взаимодействий. Однако следует иметь в виду, что из-за высокой чувствительности метода полученные данные необходимо тщательно анализировать и подкреплять другими биохимическими методами.

SPR особенно подходит для изучения мембранных белков, поскольку он потребляет небольшое количество очищенного материала и совместим с липидами и моющими средствами. Этот протокол описывает эксперимент SPR, характеризующий кинетические свойства взаимодействия между мембранным белком (транспортером ABC) и растворимым белком (родственным белком, связывающим субстрат транспортера).

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Белок-белковых взаимодействий (PPI); Образование и диссоциация белковых комплексов, являются ключевые события во многих биологических процессах (например, репликация, транскрипция, трансляция, сигнализация, клетка-клетка связи). Полу-количественные исследования ИПП часто выполняются с использованием выпадающее меню или иммуно-осадков эксперименты. Тем не менее, эти (и подобные) методы ограничены в диапазоне от сродства, которые могут быть измерены (низкий микромолей и более высоким сродством) в связи с этапов промывки, которые присущи таких методов. Такие методы "конечной точки" не может определить переходные или низким сродством взаимодействия, которые часто больших биологических последствий. Кроме того, временное разрешение таких подходов является крайне ограниченным, как правило, порядков медленнее, чем темпы реакции. SPR преодолевает эти недостатки из-за его повышенной чувствительностью и превосходной временным разрешением 1,2. SPR представляет собой способ, свободной от этикетки, и, таким образоммолекулярное взаимодействие может быть измерена (при условии, что изменения массы могут быть обнаружены). В дополнение к ИПП, он широко используется для характеристики белка-лиганд, белок-лекарство (или малую молекулу), белок-ДНК и белок-РНК взаимодействий 3-5. Результаты записываются и нанесены в реальном времени, что позволяет быстрое изменение условий эксперимента и гибкой эксперимента.

Физический принцип позади инструментов, основанных SPR является использование оптической системы, которая измеряет изменение показателя преломления на поверхности датчика при изменении массы 2. Один из взаимодействующих партнеров (далее лиганд) иммобилизуют на чипе полимерной матрицы и второй молекулы (далее аналита) протекает по поверхности. Аналит связывания с лигандом изменяет массу на поверхности чипа. Это изменение массы непосредственно и пропорционально связан с изменением показателя преломления поверхности. Результаты приведены в реальном времени ипредставлены в виде единиц отклика (RU) как функции времени. Такой участок называется Сенсограмма (например, Рисунок 1). Поскольку SPR следующим полный временной ход взаимодействия, предварительно равновесные константы кинетической скорости получены, в дополнение к равновесию аффинности. Как подробно описано ниже, предварительно равновесное поведение данной системы имеет много информации, и обеспечивает очень различные точки зрения, чем только равновесия. После того, как система калибруется, эксперименты очень быстро и требуют только небольших количеств белкового материала (мкг на нг количество). Сбор полную кинетическую информацию о данной системе может быть достигнуто в дни. Высокая чувствительность SPR обеспечивает измерения, которые невозможно с помощью любого другого способа 6. Тем не менее, это высокая чувствительность является "палка о двух концах", поскольку это может быть основным источником ложных положительных данных. Любой фактор, который влияет на отражающую индекс записывается и отображается на Сенсограмма. В качестве такого, APуправления щих образовательных должны быть использованы для устранения ложных срабатываний и поддержки со стороны взаимодополняющих подходов Настоятельно рекомендуется.

Рисунок 1 иллюстрирует развитие ППР эксперимента с использованием НТА-покрытием сенсорного чипа. Сенсограмма в панели А показан инъекции ионов никеля по матрице NTA (безвычитательных данных), и панели BD отображать данные после вычитания сигнала, извлеченного из отрицательного клетки управления. Красные и синие стрелки показывают начало и конец впрыска, соответственно. Иммобилизация лиганда на чипе постепенно изменяет массу до инъекции не будет прекращено. Стабильный плато наблюдается после прекращения введения лиганда отражает стабильную ассоциацию лиганда к поверхности (фиг 1B, цикл 2). После того, как стабильный базовый достигается буфер вводят в течение лиганда и опорной ячейки (рис 1B, цикл 3) .Этот инъекции служит в качестве "пустой" контроль, и будетвычитается при анализе. После инъекции, незначительные изменения записываются, отражающие поток массы через чип. Затем в отдельном цикле (Фиг.1В, цикл 4), аналит вводится; Постепенное увеличение RU представляет собой объединение анализируемого вещества в с лигандом. Сайты связывания становятся постепенно заняли пока равновесие не будет достигнуто. Как только заканчивается инъекции, снижение на Руси отражает диссоциацию комплекса. Из таких sensograms константы скорости предравновесных и равновесные могут быть получены (см ниже). Рисунок 1 изображает кратковременное взаимодействие между лигандом и анализируемым веществом. Когда взаимодействие является более стабильным, снижение уровня RU медленнее, отражая более низкую Уб.

Здесь мы опишем ППР эксперимент по характеризующие взаимодействие между мембраной транспортера (моющее средство растворяют) и его функциональная партнера, его родственным субстрат-связывающий белок 6,7. Выбран модСистема Эл ATP связывающего кассетного (ABC) транспортер, ModBC-из Archeaglobus fulgidus. Эта система была выбрана для его высокую воспроизводимость результатов, высокое отношение сигнал-шум, и классический "вкл / выкл" ставок. Кроме того, гомологи ABC транспортеры доступны в качестве важных отрицательных контролей. Транспортер, ModBC (лиганд) извлекают из мембраны с использованием моющего средства, очищают и иммобилизованного на чипе. Его растворим взаимодействия партнер Moda, является анализируемого вещества. В качестве отрицательного лиганда управления, отличается ABC Transporter RbsBC используется ("лиганд B").

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Белок выборки и подготовки буфера

  1. Подготовка образца: очистить белки, представляющие интерес, и убедиться, что все агрегаты будут удалены, путем инъекции белка до эксперимента на колонку для гель-фильтрации или центрифугирования (обычно 10 мин при 100000 мкг достаточно).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Несмотря на то, желательно, очень чистые белковые препараты не обязательным. SPR успешно используется с менее чем совершенный очищения и даже с общей экстракта 8,9.
  2. Подготовка буфера:
    1. Подготовка буфера эксперимента (называемая "работает буфер", или Rb). Для протокол, описанный здесь, используют 50 мМ Трис-HCl рН 7,5, 150 мМ NaCl и 0,05% (вес / объем) DDM (н-додецил β-D-maltoside). Имейте в виду, что выбор буфера композиции может быть легко изменены в соответствии с исследуемой системы.
    2. Фильтровать все буферы и образцы белка с использованием 0,22 мкм фильтры. Убедитесь, что заранее, что фильтры белково-совместимы. В общем, последнее время на рынке платформ SPR содержать в линию де-Gasser; если это не так, то де-газа буферы перед использованием.
    3. Диализировать ночь или разбавления проб против РБ, чтобы избежать буферных несоответствия. Диализ (или любой другой метод замены буфера) особенно целесообразно при использовании химических веществ с высокой вязкостью (например, сахароза, глицерин, ДМСО). Перед подсоединением бутылку RB на входе в насос сохранить сторону 10 мл РБ в отдельную пробирку.
  3. Развести концентрированного состава лиганда в РБ до конечной концентрации ~ 20 мкг / мл. Как правило, для стабильного лиганда иммобилизации, использовать низкие концентрации лиганда с более длинными инъекций при низком расходе, в отличие от высоких концентрациях, высокого потока и более коротких инъекций.
  4. Развести аналита в РБ до желаемой концентрации. Как правило, проверить диапазон концентраций для системы неизвестной близости от 10 мкм до 10 нм в десять-кратные разведения. Всегда начинайтес более низких концентрациях первого.

2. Sensor Chip

  1. Выбор Чип: Используйте нитрилацетатом (НТА) в сочетании чип подходит для фиксации белки с олиго-гистидин тег.
  2. Использование чипа:
    1. При использовании нового чипа, взять чип из футляра, промойте аккуратно с двойным дистиллированной воде (DDW), высушить тщательно оставшиеся жидкости, при деликатных дворники, и убедитесь, что не прикасаться к поверхности слоя золота. Поместите чип обратно в ножны в правильной ориентации (вставка гладкая, когда чип должным образом размещены).
    2. При повторном чип, вынуть хранится обломок из буфера, тщательно промыть DDW и сухой мягко, как указано выше, и поместите в исходное оболочки.
      ПРИМЕЧАНИЕ: накопление неспецифической нежелательной материала на чипе может повлиять на его "жизнеспособности". Это можно контролировать путем сравнения РУС перед лиганда иммобилизации и после отгонки. Хотя многие измерения могут бытьсделано, используя тот же чип NiNTA, вопрос о его долговечности не "ясна", и сильно зависит от различных чипов.
  3. Чип док: Откройте дверь сенсорного чипа и поместите чип в ножны. При использовании нового чипа, ввода серийного номера чипа вести учет использования. Закройте дверь и нажмите 'док чип.

3. Температурные режимы

  1. Установка температуры чипа клеток до 25 ° С (или в предпочтительном температуре эксперимента).
  2. Дополнительно: установлен отсек образцы в 7 ° C, чтобы белки стабильны в течение всего эксперимента.

4. Решения для погрузки и разгрузки

Подготовьте следующие решения для погрузки и зачистки: 0,5 мМ NiCl 2 в РБ, 350 мМ ЭДТА в РБ (добавить моющее средство в растворе EDTA до конечной концентрации, что и в РБ), 0,25% ДСН, в H 2 O и 100 мМ HCl в Н 2 O. При использовании микро-центрифуги ваннах годов, и не SPR назначенных трубы, не забудьте отрезать крышки трубок.

5. Премьер-SPR прибор с РБ

6. запуск нового

  1. Указан расход, который будет использоваться в ходе эксперимента. Для получения результатов, описанных здесь, установить поток в 50 мкл / мин.
    Примечание: Этот параметр может быть изменен во время эксперимента.
  2. Определить пути потока и справочную вычитание. Для получения результатов, описанных здесь, поставленных пути Fc = 1 и FC = 2, вычитание FC = 2-1.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Программа будет отображать в режиме реального времени вычитание двух измеренных клеток. Имейте в виду, что этот параметр не может быть изменен во время эксперимента.
  3. Выберите подходящий образец стойку (это может повлиять на образец объемного расхода).
  4. Сохраните файл с результатами.

Циклы 7. Эксперимент

Каждый эксперимент состоит из циклов, сохранить ясную запись инъекций, сделанных в EAч цикл, и отделить лигандов "Загрузка пустой инъекции буфера, и анализируемый инъекции в разных циклах.

  1. Цикл 1: подготовка Чип и никель загрузки
    1. Убедитесь, что поток и пути установлены согласно шагу 6.1 и 6.2.
    2. Вводите 350 мМ ЭДТА в течение 1 мин, чтобы смыть остатки.
    3. Установите поток до 10 мкл / мин.
    4. Внедрить 0,5 мМ NiCl 2 в течение 2 мин.
      Примечание: В настоящее время чип смолы покрыт ионов никеля.
  2. Цикл 2: лиганды иммобилизации
    1. Набор потока до 15 мкл / мин, направление потока FC = 2.
    2. впрыскивает лиганда A до достижения RU значения, которые в 10-20 раз от его молекулярной массы. Например, можно загрузить лиганд 50 кДа до 500-1000 Руси. Записывайте значения RU достигнута.
    3. Набор потока до 15 мкл / мин, направление потока FC = 1.
    4. Вводите лиганда B (контроль) до того же значения RU, как лиганда A. Монитор вычитание Сенсограмма (FC = 2-1) он-лайн, чтобы помочь управлятьДлина инъекции.
    5. Набор потока до 50 мкл / мин, направление потока Fc = 1 и FC = 2, не мыть системы 5-20 мин до исходного уровня (Fc = 2-1) стабилизируется.
  3. Цикл 3: Blank инъекции. Это инъекции будет служить для заготовки вычитания, следовательно, включают все компоненты, которые будут введены с анализируемым веществом, за исключением самого аналита.
    Примечание: длина впрыска может изменяться в зависимости от времени, необходимого для достижения равновесия (плато) сигнала.
    1. Набор потока до 15 мкл / мин, направление потока Fc = 1 и FC = 2, FC = вычитания 2-1.
    2. Вставьте команду 'ждать' (называемый далее как «ждать») в течение 30 сек (чтобы иметь стабильный базовый уровень).
    3. Подайте 15 сек РБ.
      ПРИМЕЧАНИЕ: длительность впрыска будет варьироваться между различными системами, в зависимости от их предравновесных кинетических констант (в основном K A).
    4. Подождите 120-600 сек регистрировать фазу диссоциации.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Длина этой стадии варьируется в зависимости от K d: медленнее диссоциации больше этот шаг должен быть. Для очень медленных разлетным комплексов (K D <10 -4 сек -1), подождите 10-15 минут, а затем переходите к поверхности регенерации (см ниже).
  4. Цикл 4: Аналит впрыска
    1. Копировать / вставить точные условия, используемые в справочной инъекции (цикл 3) Таким образом, эти две инъекции в дальнейшем могут быть вычтены. Изменение расположения слота в стойке с одной холдинговой управления решение одной, которая содержит анализируемый раствор. Выберите концентрацию, которая немного выше ожидаемого K D. Если никаких предварительных знаний не доступна, выберите 1 мкм, как хорошей отправной точкой.
  5. Цикл 5: Буфер впрыска
    1. Повторите цикл 3.
  6. Цикл 6: Аналит впрыска
    1. Повторите цикл 4.
  7. Цикл 7: Chip сдирать
    1. Установите поток до 50 мкл / мин.
    2. Вводите 350 мМ ЭДТА в течение 1 мин. Повторите этот шаг еще два раза. Не используйте одну инъекцию 3 мин, так как это может привести к повреждению чипа.
    3. Вводите 0,25% SDS в течение 1 мин. Повторите этот шаг еще два раза. Не используйте одну инъекцию 3 мин, так как это может привести к повреждению чипа.
    4. Если исходный уровень не достигнут, вводят 100 мМ HCl в течение 1 мин в качестве дополнительного стадии десорбции.
    5. Вставьте команду 'конец запуске', которая переключает в режим ожидания.
  8. Хранение Chip
    1. Расстыкуйтесь сенсорного чипа и вывести его из прибора.
    2. Возьмите датчик из ножен, не прикасаясь к поверхности, промыть DDW, и место в 50 мл пробирку, содержащую РБ. Хранить при 4 ° С.

8. Анализ данных с использованием Места Оценка программного обеспечения

  1. Выполните следующие действия, чтобы обработать исходные данные, полученные SPR до вывода кинетических параметров.
    1. Использование программного обеспечения оценки, открытыйФайл результатов, выберите циклы 3-6 Fc = 2-1 (ссылка вычитается данных).
    2. Сдвига по оси:
      1. Циклы Показать 3-6.
      2. Нулевая стоимость Y-ось исходных данных (начальная 30 сек время ожидания в каждом цикле) до всех четырех кривых.
    3. Совместите оси X- четырех кривых. Выберите выраженные черты (например, шипы начала впрыска или отделки) в полном совместите четыре кривые вдоль оси Х. Установите время начала анализируемого (или контрольного буфера) до нуля.
  2. Ссылка вычитание
    1. Вычитания фона ответа путем вычитания кривой цикла 3 из кривой цикла 4 и кривой цикла 5 из кривой цикла 6. Использование Операция вычитания кривой, которая может быть найдена в Y-оси смещается меню.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Важно выполнить этот шаг, поскольку это аннулирует любые неспецифические компоненты (не связанных с анализируемым), которые могли повлиять на индекс поверхность преломления.
      1. Сохранить вычитается кривые в Т-он лист проекта под другим именем.
    2. Обратитесь к этим кривым, как «дважды вычитается кривых": первый вычитание 2-1 вычитание выполняется на обоих инъекций, и второй вычитание одной кривой от другой.
      Примечание: данное дважды ссылок является золотым стандартом в SPR экспериментов.
    3. Наложить вычитается кривые, выполняя сдвига по оси, как описано ранее.
  3. Определение кинетики констант и подгонка модели
    1. Проведение кинетическую эксперимент
      1. Подайте серию 6-7 концентраций аналита иметь надежный данных для определения кинетических констант. Выберите анализируемых концентраций от 10-кратное выше в 10 раз ниже расчетной K D, в 2-3-кратном разбавлении. Включить "нулевой" концентрации, в дальнейшем используется для вычитания двойного значения (см. Выше) Проведение инъекции в трех экземплярах и в случайном порядке.
      2. Выровнятьи вычесть все кривые по отношению к Y-оси и оси Х до попытки подгонки модели.
    2. Модель Место
      1. Выберите подходящую программу анализа.
        ПРИМЕЧАНИЕ: Большинство имеющихся программ, уместно предложить несколько моделей, которые могут быть применены для установки и определения кинетических констант.
      2. Применение простейшей модели (Лэнгмюра) Предполагая обратимый 1: 1 взаимодействие между анализируемым веществом и лигандом для фитинга. Если убедительных данных не доступны из других экспериментальных методов для существования более сложного взаимодействия, всегда используйте простую модель Ленгмюра.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В системе, описанной в данном документе, чип NiNTA используется для иммобилизации His-меченый мембраны транспортер 6,7. Будучи гомодимер, каждый транспортер вдвойне помечены, повышение его связывание с чипом NiNTA. После никеля нагрузку, лиганд А (транспортер интерес) будет обездвижен на FC = 2, до ~ 3500 RU (протокол цикла 2, 2А черная метка). Затем, используя тот же поток и продолжительность впрыска, лиганд B (контроль лиганд) вводится на FC = 1, первоначально достигнув только до ~ 3000 RU....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

SPR является высокочувствительным методом для изучения молекулярных взаимодействий, и часто единственный подход, который обеспечивает мониторинг в режиме реального времени переходных (еще важных) взаимодействий. Примером может служить переходный взаимодействия, представленные здесь, которые не могли быть обнаружены с помощью любого другого метода (выпадающих анализов, липосомы седиментации анализах 6). Кроме того, в то время как другие методы ограничены к равновесию измерения (как количественной или качествен...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Все авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Исследования в лаборатории Левинсона поддерживаются грантами Израильской академии наук, Института биомедицинских исследований Раппапорта, Исследовательского фонда Meriuex и грантом Марии Кюри на реинтеграцию карьеры (OL). EV поддерживается стипендией Fine и медицинским факультетом Техниона. NLL поддерживается грантами Израильской академии наук.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Biacore T200GE Healthcare28-9750-01
Чип датчика NTA GE Healthcare14100532
BIAevaluationGE Healthcare
Biacore T200 GE Healthcare
Хлорид никеляSigmaN6136
Дигидрат вольфрамата натрияSigmaT2629
Хлорид натрия ООО «Био-Лаб»
Основание ТризмыSigmaT1503
Этилдиамин-тетрауксусная кислота дигидрат соли дигидрата (ЭДТА)SigmaE5134
n-Додецил-&бета;-D-Мальтопиранозид (ДДМ)AffymetrixD310
Раствор додецилсульфата натрия Sigma05030
Kimwipes KIMTECHKimberly-Clark34120
Соляная кислотаGADOT7647-01-0
Нейлоновый (NY) Мембранный фильтрSartorius25007--47------N
ModBC ABC транспортерLewinson lab
RbsBC ABC транспортерLewinson lab
ModA Субстрат-связывающий белок ЛабораторияЛевинсона
Программное обеспечение 19030591

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Rich, R. L., Myszka, D. G. Advances in surface plasmon resonance biosensor analysis. Current Opinion in Biotechnology. 11, 54-61 (2000).
  2. Rich, R. L., Myszka, D. G. H. igher-throughput label-free, real-time molecular interaction analysis. Analytical Biochemistry. 361, 1-6 (2007).
  3. Helmerhorst, E., Chandler, D. J., Nussio, M., Mamotte, C. D. Real-time and label-free bio-sensing of molecular interactions by surface plasmon resonance: a laboratory medicine perspective. The Clinical Biochemist Reviews. 33, 161(2012).
  4. Kyo, M., et al. Evaluation of MafG interaction with Maf recognition element arrays by surface plasmon resonance imaging technique. Genes to Cells. 9, 153-164 (2004).
  5. Katsamba, P. S., Park, S., Laird-Offringa, I. A. Kinetic studies of RNA–protein interactions using surface plasmon resonance. Methods. 26, 95-104 (2002).
  6. Vigonsky, E., Ovcharenko, E., Lewinson, O. Two molybdate/tungstate ABC transporters that interact very differently with their substrate binding proteins. Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 110, 5440-5445 (2013).
  7. Lewinson, O., Lee, A. T., Locher, K. P., Rees, D. C. A distinct mechanism for the ABC transporter BtuCD-BtuF revealed by the dynamics of complex formation. Nat. Struct. Mol. Biol. 17, 332-338 (2010).
  8. Kyo, M., Usui-Aoki, K., Koga, H. Label-Free Detection of Proteins in Crude Cell Lysate with Antibody Arrays by a Surface Plasmon Resonance Imaging Technique. Analytical Chemistry. 77, 7115-7121 (2005).
  9. Mori, T., et al. Evaluation of protein kinase activities of cell lysates using peptide microarrays based on surface plasmon resonance imaging. Analytical Biochemistry. 375, 223-231 (2008).
  10. Mol, N., Fischer, M. E. Surface Plasmon Resonance Vol. 627 Methods in Molecular Biology. Mol, N. J., Fischer, M. J. E. 1, Humana Press. 1-14 (2010).
  11. Van Der Merwe, P. A. Surface plasmon resonance. Protein– ligand interactions: hydrodynamics and calorimetry. , Oxford University Press. Oxford. 137-170 (2001).
  12. Lewinson, O., Lee, A. T., Locher, K. P., Rees, D. C. A distinct mechanism for the ABC transporter BtuCD-BtuF revealed by the dynamics of complex formation. Nat. Struct. Mol. Biol. 17, 332-338 (2010).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

ABC

Похожие статьи