Оценка стволовых клеток Недвижимость в человека рака яичников клеток с использованием много- и отдельных клеток на основе сферах Анализы

Hui Wang; Anna Paczulla; Claudia Lengerke

doi:10.3791/52259

Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Оценка стволовых клеток Недвижимость в человека рака яичников клеток с использованием много- и отдельных клеток на основе сферах Анализы

9K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/52259

⸱

3 января 2015 г.

Hui Wang¹^,² , Anna Paczulla¹ , Claudia Lengerke¹^,²

¹Department of Biomedicine, University Hospital Basel, ²Department of Internal Medicine II, University Hospital Tübingen

В этой статье

Краткое содержание

Анализы сфер in vitro обычно используются для идентификации раковых стволовых клеток. Здесь мы сравниваем анализы на основе одиночных и многоклеточных сфер. Более трудоемкие одноклеточные анализы или добавки метилцеллюлозы дают более точные результаты, в то время как многоклеточные анализы, выполняемые в жидкой среде, могут сильно зависеть от плотности клеток.

Аннотация

Годы исследований показывают, что рак яичников содержит гетерогенную смесь клеток, включая субпопуляцию так называемых "раковых стволовых клеток" (CSCs), ответственных за инициацию, поддержание и рецидив опухоли после обычной химиотерапии. Поэтому идентификация ЦСК яичников является важной целью. Обычно используемым методом оценки потенциала ЦСК in vitro является анализ сфер, при котором клетки покрываются в неадгезивных условиях культивирования в бессывороточной среде с добавлением факторов роста, и формирование сфер оценивается через несколько дней. В этой статье мы рассмотрим доступные в настоящее время протоколы для анализов на рак яичников человека и проведем параллельный анализ между широко используемыми многоклеточными анализами и более точной системой, основанной на осаждении одиночных клеток. Наши результаты показывают, что как многоклеточные, так и одноклеточные анализы сфер могут быть использованы для исследования образования сфер in vitro. Более трудоемкие и дорогие анализы на основе одиночных клеток больше подходят для функциональной оценки отдельных клеток и приводят к более точным результатам в целом, в то время как анализы на основе нескольких клеток могут сильно зависеть от плотности покрытых клеток и требуют предварительных экспериментов по титрованию. Добавки метилцеллюлозы к многоклеточным анализам могут быть эффективно использованы для уменьшения механических артефактов.

Введение

Появляется все больше доказательств того, что карциномы яичников состоят из гетерогенных смесей клеток и содержат так называемые «раковые стволовые клетки» (ОСК), ответственные за инициацию, поддержание и рецидив заболевания после традиционной цитотоксической терапии^1-3. Поэтому разработка молекулярных стратегий, нацеленных на ЦСК яичников, является важной целью и обещает улучшить терапию пациентов с раком яичников.

Предпосылкой для понимания молекулярных особенностей СКК является их надежная изоляция от не-ОСК. Тем не менее, идентификация ЦСК яичников представляется сложной задачей. В то время как экспрессия CD133 и активность а....