Методическая статья

Лицевого нерва аксотомии у мышей: модель для изучения двигательных нейронов ответ на повреждение

13.1K просмотров

DOI:

10.3791/52382

23 февраля 2015 г.

В этой статье

Краткое содержание

Мы представляем хирургический протокол, подробно описывающий, как выполнить разрезание или раздавливание аксотомии лицевого нерва у мыши. Аксотомия лицевого нерва может быть использована для изучения физиологической реакции на повреждение нерва и тестирования терапевтических методов.

Аннотация

Цель этого хирургического протокола является выявление лицевого нерва, который иннервирует лицевой мускулатуры, при выходе ее из stylomastoid отверстия и вырезан или раздавить его, чтобы вызвать повреждение периферического нерва. Преимущества этой операции являются его простота, высокая воспроизводимость, а также отсутствие влияния на жизненно важных функций или подвижности из последующего паралич лицевого нерва, что приводит к относительно мягкой хирургического результата по сравнению с другими моделей повреждения нерва. Одним из основных преимуществ использования черепной модель повреждения нерва является то, что мотонейроны находятся в относительно однородной популяции в лицевой двигательной ядра в моста, что упрощает изучение клеточных тел мотонейронов. Из-за симметричной природы лицевого нерва иннервации и отсутствие перекрестных помех между лицевыми ядер двигательных операция может быть выполнена в одностороннем порядке unaxotomized сторона, выступающей в качестве парного внутреннего контроля. Разнообразие анализов могут быть выполнены в послеоперационном периоде, чтобы ословš физиологическая реакция, детали которого выходит за рамки данной статьи. Например, восстановление мышечной функции может служить маркером для поведенческого реиннервации, или мотонейроны можно количественно измерить выживаемость клеток. Кроме того, мотонейроны могут быть точно получены с помощью лазерного микродиссекции для молекулярного анализа. Поскольку лицевой нерв аксотомии является минимально инвазивной и хорошо переносимым, оно может быть использовано на разнообразных генетически модифицированных мышей. Кроме того, эта операция модель может быть использована для анализа эффективности периферических лечения повреждений нервов. Травмы лицевого нерва предоставляет средства для исследования не только двигательные нейроны, но и ответы центральной и периферической глии микросреды, иммунной системы, и целевой мускулатуры. Лица модели повреждения нерва широко принятой моделью периферических нервов травмы, которая служит в качестве мощного инструмента для изучения повреждение нерва и регенерации.

Введение

Существует множество периферийных модели повреждения нерва, но тот, который выделяется для изучения двигательных нейронов является лицевая модель нерв аксотомии. Лицевого нерва, также известный как черепно-мозговых нервов VII, берет свое начало в Понс и иннервирует мышцы мимики 1,2. В этом хирургического протокола, лицевой нерв подвергается при выходе ее из stylomastoid отверстия и либо сократить или дробленый. Тяжесть травмы нерва могут быть классифицированы в соответствии с Сандерленд 3 классификаций, которые отличает эту травму, основанную на сохранности аксонов, Эндоневрий, Периневрий и эпиневрии, которые соединительной слои ткани, последова....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все процедуры выполняются утверждаются университета Индианы школы медицины Уходу за животными и использованию комитета и следуйте Национальный институт инструкций по охране.

1. Хирургическая техника

  1. Поддерживать асептики во время этой процедуры с помощью стерильных перчаток, инструментов и стерильных операционного поля в соответствии с NIH руководящих принципов 25. Стерилизовать инструменты перед началом операции по стерилизации в автоклаве их (см таблицу специфических реагентов / Оборудование для полного списка). Используйте стеклянная бусина стерилизатора для стерилизации инструментов во время опер....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

После лицевого нерва аксотомии выполняется, потеря мотонейронов происходит в результате травмы. Выживание двигательных нейронов после травмы зависит от многих переменных, таких как пол, возраста животных на момент операции, и временной точки, при которой на счету мотонейронов сделали, и Моран и рассмотрения Graeber 24 и Jinno и рассмотрения Ямада 22 и суммировать данные выживаемости мотонейронов. Как правило, около 86% мотонейронов выжить 28 дней после аксотомии 14,15,26. Кинетика потери.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Критическим шагом для этого протокола является правильное положение мыши до начала операции. Если мышь лежит не ровно на боку, ухо не заклеено под правильным углом или разрез сделан в неправильном месте, то найти лицевой нерв становится намного сложнее. Когда эта техника будет освоена, операции будут занимать всего несколько минут на одну мышь.

Для закрытия раны можно использовать швы, клей или зажимы для раны. Раневые зажимы предпочтительны из-за небольшого размера разреза и быстроты, с кото.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Эта работа финансируется NIH RO1 NS 40433 (K.J.J.).

....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
СтереомикроскопLeicaM60
Маркировочная лентаFisherScientific 15-952
Vannas-Tü Пружинные ножницы bingen - прямые/острые/режущая кромка 8,5 см/5 ммИнструменты Fine Science15003-08Стерилизуйте перед использованием
щипцы Dumont #5/45 - стандартные наконечники/угловые 45°/Dumoxel/11 смИнструменты для тонкой науки11251-35Стерилизуйте перед использованием
зажимы для швов Michel - 7,5 мм x 1,75 ммИнструменты для тонкой науки12040-01Описаны как "зажим для раны" в протоколе, стерилизовать перед использованием
аппликатор зажима для ран перекрестного действия Hagenbarth 5"George Tiemann & Co160-910Используется для наложения зажима для раны, стерилизации перед использованием
Аппликатор и средство для снятия швов Michel - Для зажимов 7,5 ммFine Science Tools12029-12Используется для снятия зажима для раны
0,9% Хлорид натрия для инъекций, USPHospira0409-4888-10
Бетадин, 16 унций, с дозаторомFisher Scientific19-027132
70% Этанол
со стеклянными шариками
Стерилизатор

Ссылки

  1. Kaufman, M., Bard, J. The Anatomical Basis of Mouse Development. , Elsevier. New York, NY. (1999).
  2. Ashwell, K. The adult mouse facial nerve nucleus: morphology and musculotopic organization. Journal of Anatomy. 135, 531-538 (1982).
  3. Sunderland, S.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Похожие статьи