Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Синтез индоксил-гликозидов для обнаружения гликозидазой деятельности

6.2K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/52442

⸱

27 мая 2015 г.

 , 
1Department of Chemistry, Faculty of Sciences, University of Hamburg

В этой статье

Краткое содержание

Индоксилгликозиды являются хорошо зарекомендовавшими себя и широко используемыми инструментами для скрининга ферментов и мониторинга активности ферментов. В частности, для структур типа глюкозы предыдущие синтезы оказались сложными и малопродуктивными. Наш новый подход использует сложные эфиры индоксиловых кислот в качестве ценных промежуточных продуктов для получения значительного количества индоксилгликозидов с хорошим выходом.

Аннотация

Индоксилгликозиды оказались ценным и универсальным инструментом для мониторинга активности гликозидазы. Индоксилы выделяются в результате ферментативного гидролиза и быстро окисляются, например, кислородом воздуха, до красителей типа индиго. Эта реакция позволяет быстро и легко проводить скрининг in vivo без выделения или очистки ферментов, а также экспресс-тесты на агаровых планшетах или в растворе (например, сине-белый скрининг, микролунки) и используется в биохимии, гистохимии, бактериологии и молекулярной биологии. К сожалению, синтез таких субстратов оказался затруднительным из-за различных побочных реакций и низкой реакционной способности индоксилгидроксильной функции. Особенно для структур глюкозного типа наблюдались низкие выходы. В нашем новом подходе эфир индоксиловой кислоты используется в качестве ключевых промежуточных продуктов. Сложные эфиры индоксиловой кислоты с различными структурами замещения получали по масштабируемым путям. Фазовое переносное гликозилирование с этими акцепторами и перацетилированными гликозилгалогенидами может быть выполнено в обычных условиях с высокими выходами. Расщепление сложных эфиров и последующее мягкое опосредованное серебром гликозилирование дает перацетилированные индоксилгликозиды с высоким выходом. Наконец, снятие защиты выполняется в соответствии с Земпленом.

Введение

В течение долгого времени производство индиго был экономически очень важный процесс. Перед крупномасштабных химических синтезов дал дешевый доступ к индиго, предшественники были получены из природных источников с дохристианских времен. Выращивание индиго обеспечения растений (естественно индиго) в Европе стал неблагодарным в 17-м веке, как количество индиго предшественники индийской индиго (0,2-0,8%) составляет около 30 раз выше. В конце 19-го века химического синтеза индиго подавил обычный выращивание 1,2.

Indigo предшественники, происходящие в растениях включают индикана (1), Insatan A (2) и Isatan B (3) (рис 1). Все они состоят из индоксил мотива, связанного с гликозильного остатка. Расщепление гликозидной связи, например, с помощью ферментативного гидролиза, приводит к выделению индоксил (4). Сама индоксил практически бесцветны, но могут быть быстро окисляется с образованием индиго Краситель (5). Это чувствительная реакция была адаптирована в биохимии, бактериологии, гистохимии и молекулярной биологии для мониторинга активности ферментов. Скрининг активности в естественных условиях без выделения или очистки ферментов, а также экспресс-тесты на чашках с агаром или в растворе (например, бело-голубым скрининга, микро-скважин) возможно. В зависимости от остатка (например, сложные эфиры, гликозиды, сульфаты), связанного с индоксил фрагмента, пригодными субстратами в различных классов ферментов (например, эстераз, глюкозидазы, сульфатазы) были разработаны 3. В следующем внимание будет уделено формированию и применению индоксил гликозидов.

figure-introduction-1
Рисунок 1: Природные предшественники индиго и формирование красителя индиго путем гидролиза.цель = "_ пустое"> Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Замещение картина индоксил фрагмента определяет цвет и физические свойства полученного красителя индиго. Наиболее распространенные шаблоны замещения 5-бром-4-хлор (сокращенно от X; зеленовато-голубой), 5-бром (синий) и 5-бром-6-хлор (пурпурный), так как они образуют мельчайшие частицы красителя, делают не образуют гранулы и имеют наименьший диффузию из участков гидролиза. Последнее свойство особенно важно для естественных условиях экспериментов в 3.

Первый доклад о indigogenic метода для обнаружения эстеразы был опубликован в 1951 году и Barrnett Селигман, который занятого индоксил ацетат и бутират 4. О десятилетие спустя indigogenic принцип был адаптирован для локализации глюкозидазы млекопитающих 5. До сих пор несколько индоксил гликозидов были разработаны, хотя их синтез оказался трудно. Большинство синтезов на основе использования в -acetylated индоксил N в качестве акцептора и соответствующих гликозилгалогенидом донора 6-14. Гликозилирование проводят в ацетоне с помощью гидроксида натрия. В этих условиях количество побочных реакций происходит, значительно уменьшая выход. Специально для глюкозы структур типа очень низкие выходы гликозилирования сообщалось (например, 15% (N-ацетил-5-бром-4-хлор-индол-3-ил) -2,3,4,6-тетра-О-ацетил -β-ᴅ-глюкопиранозид 6 и 26% (N-ацетил-5-бром-4-хлор-индол-3-ил) -2,3,2 ', 3', 4'-пента вывода -acetyl- β-ᴅ-xylobioside 14 в более недавний пример). Через новый подход, используя сложные эфиры indoxylic кислоты, значительное количество индоксил гликозидов были получены с хорошим выходом (например, (N-ацетил-5-бром-4-хлор-индол-3-ил) -2,3,4, 6-тетра-О-ацетил-β-ᴅ-глюкопиранозид выход 57%).

_content "> Следующий протокол описывает простой синтез indoxylic кислоты аллилового эфира (5-бром-4-хлор) и на их основе синтеза с индоксил гликозида (X-Gal). Простой модельный эксперимент показывает ферментную реактивность β- галактозидазы с использованием X-Gal.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Общие замечания:

Все реакции проводились с использованием вытяжного шкафа и соответствующих средств индивидуальной защиты. Все реагенты и растворители (в год; содержание воды для сухих растворителей: MeCN <50 ppm; et2O <0,01%; СН2Кл2 <0.003%; ТГФ <0,005%) были закуплены из коммерческих источников и использованы в том виде, в котором они были получены. ТЛХ проводили на пластинах Merck Silica Gel 60 F254. Соединения обнаруживали с помощью ультрафиолета и/или обработки EtOH/H2SO4 (9:1) и последующего нагревания. Колоночную хроматографию проводили с использованием силикагеля Merck/Fluka 60 (230-400 меш). Фильтрация проводилась с помощью воронки Бюхнера и аспираторного насоса. Растворители удаляли с помощью ротационного испарителя (40 °C, ~200 об/мин). Продукты сушили в высоком вакууме (пластинчато-роторный насос). Реакции, требующие использования сухих растворителей, проводились в атмосфере аргона.

Ниже описан синтез X-Gal (16) с использованием аллилового эфира 5-бром-4-хлор-индокисловой кислоты (12). Для других соединений с различными схемами замещения, а также метиловых эфиров, полученных в соответствии с этой синтетической последовательностью, см. ссылку 17-19.

1. Акцептор: Синтез аллилового эфира 5-бромо-4-хлориндоксиловой кислоты18 (12)

  1. N-ацетилирование: синтез N-(4-бром-3-хлор-2-метилфенил)-ацетамида (6)
    1. Растворите 10,0 г (45,7 ммоль) 4-бром-3-хлор-2-метиланилина в 30 мл дихлорметана.<бр/> Осторожность! Дихлорметан вреден и охлаждает раствор на ледяной бане.
    2. Добавьте по каплям 6,50 мл (68,7 ммоль) ангидрида уксусной кислоты и дайте смеси нагреться до комнатной температуры. Смесь можно перемешивать в течение 8 часов или в течение ночи. Осторожность! Ангидрид уксусной кислоты является коррозионным и легковоспламеняющимся.
    3. Удалите растворитель и повторно кристаллизуйте этилацетат/метанол 9:1 (выход: 97% (11,6 г, 44,2 ммоль), бесцветное твердое вещество).
      Осторожность! Этилацетат является раздражающим и легковоспламеняющимся. Осторожность! Метанол токсичен и легко воспламеняется.
  2. Окисление: синтез N-ацетил-5-бром-6-хлор-антраниловой кислоты (7)
    1. Дефлегмию смесь из 2,30 г (8,76 ммоль) 6 (продукт получен из стадии 1.1) и 2,10 г (8,52 ммоль) MgSO4•7Н2О в 40 мл воды в 3-горлышковой круглодонной колбе, оборудованной охладителем и капельной воронкой.
    2. Добавьте по каплям 50 мл насыщенного раствора KMnO4 в воду в реакционную смесь в течение 3 часов. Затем нагрейте еще 2 часа под действием обратных температур, около 135 °C в масляной ванне. Осторожность! Марганцовка вредна и окисляет.
    3. Охладите до комнатной температуры и отфильтруйте пиролюзит (MnO2), который образуется в процессе реакции.
      Осторожность! Пиролюзит вреден.
    4. Добавьте соляную кислоту (37%) в фильтрат до pH 1, затем отфильтруйте продукт и высушите в вакууме, (выход: 70% (1,80 г, 6,15 ммоль), бесцветное твердое вещество).<бр/> Осторожность! Соляная кислота вызывает коррозию.
  3. Деацетилирование: синтез 5-бром-6-хлор-антраниловой кислоты (8)
    1. Растворить 3,90 г (13,3 ммоль) из 7 (продукт, полученный на стадии 1.2) в 70 мл 1 Н водного раствора гидроксида натрия и нагреть при температуре около 100 °C (масляная ванна) в течение 5 ч<бр/> Осторожность! Гидроксид натрия вызывает коррозию.
    2. Остудите до комнатной температуры и добавьте соляную кислоту (37%) до pH 1, затем отфильтруйте продукт с помощью воронки Бюхнера и высушите в вакууме, (выход: 88% (2,93 г, 11,7 ммоль), бесцветное твердое вещество).
  4. Образование ангидридов: синтез 5-бром-6-хлоризоевого ангидрида (9)
    1. Суспендировать 8,17 г (32,6 ммоль) из 8 (продукт, полученный на шаге 1.3) в 33 мл сухого ацетонитрила.<бр/> Осторожность! Ацетонитрил вреден и легковоспламеняется.
    2. Перемешать при комнатной температуре и добавить 5,3 мл и раствор 3,22 г (10,8 ммоль) трифосгена в 18,5 мл сухого дихлорметана по каплям одновременно в течение 30 минут. Затем нагревают в течение 3 часов при температуре 50 °C (масляная ванна). Осторожность! Пиридин вреден и легко воспламеняется.
      Осторожность! Трифосген токсичен и может выделять фосген.
    3. Удалите около 75% растворителя и погасите реакцию, добавив 100 мл дистиллированной воды, и отфильтруйте продукт. Умываем небольшим количеством холодного дихлорметана.
    4. Высушите продукт в вакууме, (выход: 88% (7,53 г, 27,2 ммоль), бесцветный твердый).
  5. N-алкилирование: синтез 5-бром-6-хлор-N-[(метоксикарбонил)аллил]-изатоевого ангидрида (10)
    1. Растворите 25 г (90 ммоль) из 9 (продукт, полученный на шаге 1.4) в 250 мл безводного диметилформамида. и охладите на ледяной бане.<бр/> Осторожность! Диметилформамид вреден и легко воспламеняется
    2. Добавьте 1,15 эквивалента гидрида натрия (60% в парафине) порционно.
      Осторожность! Гидрид натрия является коррозионным и легковоспламеняющимся; сильная реакция с водой/льдом.
    3. После 30 минут помешивания при 0 °С дать прогреться до комнатной температуры и по каплям добавить 1,2 эквивалента аллилбромоацетата.
    4. После помешивания в течение 5 часов погасите реакцию, добавив 500 мл дистиллированной воды и процедите продукт.
    5. Промыть водой (3 раза, 100 мл) и высушить изделие в вакууме, (выход: 93% (31,5 г, 84,1 ммоль), бесцветное твердое).
  6. Открытие ангидрида: синтез аллилового эфира 5-бром-6-хлор-N-(метоксикарбонилаллил)-антраниловой кислоты (11)
    1. Растворите 10 г (27 ммоль) из 10 (средство, полученное на шаге 1.5) в 100 мл аллилового спирта.<бр/> Осторожность! Аллиловый спирт вреден и опасен для окружающей среды.
    2. Добавьте 350 мг (8,70 ммоль) гидрида натрия (60% парафина) порционно.
    3. После перемешивания в течение 6,5 часов или в течение ночи удалите растворитель.
    4. Сырой продукт подвергается колоночной хроматографии (колонка 30 х 6 см; 240 г диоксида кремния) петролейный эфир/этилацетат 2:1; RF = 0,66), (выход: 80% (8,30 г, 21,3 ммоль), желтое масло).
      Осторожность! Петролейный эфир легковоспламеняющийся, раздражающий и опасный для окружающей среды.
  7. Конденсация Дикмана: синтез аллилового эфира 5-бром-4-хлориндокисловой кислоты (12)
    1. Смешайте 3,0 г (7,7 ммоль) 11 (продукт, полученный на стадии 1.6) и 1,75 г (15,6 ммоль) трет-бутоксида калия в 100 мл сухого диэтилового эфира.<бр/> Осторожность! Трет-бутоксид калия является коррозионным и легковоспламеняющимся.
      Осторожность! Диэтиловый эфир вреден и чрезвычайно легко воспламеняется.
    2. Нагрейте смесь под дефлегмом (охладителем) в течение 2 часов при температуре 40-45 °C.
    3. Удалите около 75% растворителя, и добавьте разбавленную соляную кислоту (100 мл, 1 М).<бр/> Осторожность! Не высыхайте полностью, может произойти разложение.
    4. Продукт отфильтровать и высушить в вакууме (выход: 84% (5,14 г, 15,5 ммоль), бесцветный или слегка зеленый твердый).

2. Индоксилгликозид: синтез X-Gal17

  1. Фазовое гликозилирование: синтез (5-бром-4-хлор-индокс-3-иловая кислота аллиловый эфир) 2,3,4,6-тетра-O-ацетил-β-ᴅ-галактопиранозида (14)
    1. Смешайте 400 мг (1,21 ммоль) индоксиловой кислоты аллилестера 12 (препарат, полученный на стадии 1.7), 410 мг (1,21 ммоль) тетрабутиламмония гидрогенсульфата и 500 мг (1,21 ммоль) донора 2,3,4,6-тетра-О-ацетил-α-ᴅ-галактопиранозилбромида (α-ацетобромогалактозы) в 10 мл дихлорметана. Осторожность! Вреден гидрогенсульфат тетрабутиламмония.
    2. Добавьте 10 мл водного раствора карбоната калия (1 М).<бр/> Осторожность! Карбонат калия вызывает коррозию.
    3. Перемешать при комнатной температуре до полного расходования донора (ТСХ: петролейный эфир/этилацетат).
    4. Отделите органическую фазу (разделительную воронку), высушите над Na2SO4 и удалите растворитель.
    5. Сырой продукт подвергнуть колоночной хроматографии (петролейный эфир/этилацетат 1:1; RF = 0,33). (выход: 86% (690 мг, 1,04 ммоль), бесцветное твердое).
  2. Расщепление и декарбоксилирование сложных эфиров: синтез (N-ацетил-5-бром-4-хлор-индол-3-ил) 2,3,4,6-тетра-О-ацетил-β-ᴅ-галактопиранозида (15)
    1. Растворить 600 мг (0,908 ммоль) из 14 (препарат, полученный на шаге 2.1) в 15 мл сухого тетрагидрофурана.
      Осторожность! Тетрагидрофуран вреден и легко воспламеняется.
    2. Добавьте 800 μл морфолина и 105 мг (9,09 μмоль) тетракиса (трифенилфосфина)палладия(0) и перемешайте в течение ночи при комнатной температуре.
      Внимание! Морфолин легковоспламеняющийся и коррозионный.
    3. Удалите растворитель.
    4. Добавьте 400 мг (2,40 ммоль) ацетата серебра, 800 мг (5,79 ммоль) карбоната калия и 10 мл уксусного ангидрида.
      Осторожность! Ацетат серебра является раздражающим и опасным для окружающей среды.
    5. Нагревать до 90-100 °C в течение 20 минут.
    6. После остывания до комнатной температуры разбавить дихлорметаном.
    7. Промойте смесь дважды водой и один раз разбавленным раствором NaHCO3 (10%).<бр/> Осторожность! Бикарбонат натрия вызывает коррозию.
    8. Высушите органическую фазу над Na2SO4 (фильтр) и удалите растворитель.
    9. Подвергнуть сырой продукт колоночной хроматографии (PE/EA 1:1; RF = 0,24), (выход: 88% (495 мг, 8,00 ммоль), бесцветный твердый).
  3. Земплен деацетилирование: синтез (5-бром-4-хлор-индол-3-ил)-β-ᴅ-галактопиранозида (16)
    1. Растворить 396 мг (0,436 ммоль) 15 (продукт, полученный на шаге 2.2) в 10 мл метанола.
    2. Добавьте каталитическое количество метанолата натрия и перемешайте в течение ночи при комнатной температуре.
      Осторожность! Метанолат натрия легковоспламеняющийся и коррозионный.
    3. Нейтрализовать Amberlite IR-120 H+ (фильтр) и концентрат.
      Осторожность! Амбарлит IR-120 H+ является раздражающим.
    4. Высушите продукт в вакууме (выход: 87% (170 мг, 0,416 ммоль), бесцветное твердое вещество).

3. Иллюстрирование модельного эксперимента: доказательство активности β-галактозидазы с использованием X-Gal

  1. Приготовьте 0,5 мМ раствор X-Gal в буфере объемом 500 мкл (Tris-HCl 20 мМ; pH 7,4; 50 мМ NaCl, 0,1 мМ этилендиамитетрауксусной кислоты; или любой другой подходящий буфер для вашего фермента) в микроцентрифужной пробирке (X-Gal можно растворить в нескольких мкл диметилсульфоксида).
  2. Добавьте 1 мкл β,1-3-галактозидазы (EC 3.2.1.23 10 000 Ед/мл; или любую другую подходящую β-галактозидазу) и встряхните (600 об/с) при 37 °C.
  3. Следите за реакцией. Краситель типа индиго образуется через короткий промежуток времени.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Самые первые синтезы индикана и 5-бром-индикана были опубликованы Робертсоном еще в 1927 и 1929 годах15,16. Благодаря использованию метилового эфира индоксиловой кислоты в качестве акцептора реакционная 2-позиция была заблокирована, что позволило частично подавить побочные реакции. Гликозилирование в системе ацетон/гидроксид натрия после снятия защиты и декарбоксилирования (160 °C, уксусный ангидрид, 1 ч) и последующего деацетилирования привело к получению индикана и 5-бром-индикана. Основываясь на этой концеп...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Из-за плохих выходов и ограничений, особенно для структур глюкозного типа и более сложных сахаридов, был разработан новый синтетический подход к индоксилгликозидам. Сложные эфиры индокисловой кислоты оказались ценными ключевыми промежуточными продуктами и были получены модульным, масштабируемым путем. Все этапы отличаются высокой производительностью, а благодаря дешевым исходным материалам и простоте обработки возможен многограммовый синтез. Преимуществом аллилового эфирного подхода является блокировка реакционноспособно...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.

Благодарности

Выражаем благодарность за поддержку этой работы компанией Glycom A/S, Копенгаген, Дания.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Уксусный ангидридGrü ssing10298Коррозионный, легковоспламеняющийся
АцетонитрилSigma-Aldrich608-001-00-3Вредный, легковоспламеняющийся
Аллиловый спиртAldrich453021Вредный, опасный для окружающей среды
Amberlite IR-120 H+Fluka06428Раздражающий
Бромоуксусная кислотаMerck802260Коррозионный, токсичный, опасный для окружающей среды:
4-Бромо-3-хлор-2-метиланилинABCRAB 171687раздражающим веществом
дихлорметаномACROS326850010вредным
диэтиловым эфиромGrü ssing10274Вредный, чрезвычайно легковоспламеняющийся
ДиметилформамидACROS348430010Вредный, легковоспламеняющийся
ДиметилсульфоксидSigma-Aldrich41648
ЭтилацетатSigma-Aldrich607-022-00-5Раздражающий, легковоспламеняющийся
Этилендиаминтетрауксусная кислотаAppliChemA1103.0500Раздражающее
&бета; 1,3-галактозидаза, рекомбинантная, E. coliCalbiochem345795
Соляная кислотаVWR20252.290Коррозионный
гидрат сульфата магнияMerck105885
метанолACROS326950010Токсичный, легковоспламеняющийся
MorpholineJanssen Chimica15.868.57Коррозионный, легковоспламеняющийся
Эфир PeroleumAzelis111053Легковоспламеняющийся, раздражающий, опасный для окружающей среды
Карбонат калияGrü ssing12005Коррозионная
перманганатка калияGrü ssing12056Вредный, окисляющий
Трет-бутоксид калияMerck804918Коррозионный, легковоспламеняющийся
ПиридинSigma-Aldrich613-002-00-7Вредный, легковоспламеняющийся
Ацетат серебраFluka85140Раздражающий, опасный для окружающей среды
Гидрокарбонат натрияGrü ssing12144Коррозионный
гидрид натрияMerck814552коррозионный, легковоспламеняющийся
гидроксид натрияRiedel-de Hä ruS181200Коррозионный
метанолат натрияMerck806538Коррозионный, легковоспламеняющийся
сульфат натрияGrü ssing12175
Тетрабутиламмоний гидрогенсульфатЛанкастер5438Вредный
тетрагидрофуранSigma-Aldrich87371Вредный, легковоспламеняющийся
Tetrakis (трифенилфосфин)палладий(0)Sigma-Aldrich216666
трифосгенFluka15217Токсичный
трис (гидроксиметил)аминометан гидрохлоридСигмаТ-3253раздражающего действия

Ссылки

  1. Clark, R. J. H., Cooksey, C. J., Daniels, M. A. M., Withnall, R. Indigo, Woad, and Tyrian Purple: Important Vat Dyes from Antique to the Present. Endeavour. 17, 191-199 (1993).
  2. Hunger, K. Industrial Dyes: Chemistry, Properties, Applications. , 1st, Weinheim. Wiley-VHC. (2003).
  3. Kiernan, J. A. Indigogenic Substrates for Detection and Localization of Enzymes. Biotechn. Histochem. 82, 73-103 (2007).
  4. Barnett, R. J., Seligman, A. M. Histochemical Demonstration of Esterases by Production of Indigo. Science. 114, 579-582 (1951).
  5. Pearson, B., Andrews, M., Grose, F. Histochemical Demonstration of Mammalian Glucosidase by Means of 3-(5-Bromoindolyl)-β-ᴅ-glucopyranoside. Exp. Biol. Med. 108, 619-623 (1961).
  6. Anderson, F. B., Leaback, D. H. Substrates for the Histochemical Localization of some Glycosidases. Tetrahedron. 12, 236-239 (1961).
  7. Van Dort, M. E., Lee, K. C., Hamilton, C. A., Rehemtulla, A., Ross, B. R. Radiosynthesis and Evaluation of 5-[125I]Iodoindolyl-3-yl-β-ᴅ-galactopyranoside ([125I]IBDG) as a β-Galactosidase Imaging Radioligand. Mol. Imaging. 7, 187-197 (2008).
  8. Yoshida, K., Iino, N., Koga, I. Syntheses of Halogen Substituted β-ᴅ-Glucuronides and Their Hydrolysis by Rabbit Liver β-Glucoronidase. Chem. Pharm. Bull. 32, 1759-1769 (1975).
  9. Horwitz, J. P., et al. Substrates for Cytochemical Demonstartion of Enzyme Activity I. Some Substituted 3-Indolyl-β-ᴅ-glycopyranosides. J. Med. Chem. 7, 574-575 (1964).
  10. Eschenfelder, V., Brossmer, R. 5-Bromo-indol-3-yl 5-Acetamido-3,5-dideoxy-α-ᴅ-glycero-ᴅ-galactononulopyranosidic Acid, a Novel Chromogenic Substrate for the Staining of Sialidase Activity. Glycoconjugate J. 4, 171-178 (1987).
  11. Fujii, I., Iwabuchi, Y., Teshima, T., Shiba, T., Kikuchi, M. X-Neu5Ac: A Novel Substrate for Chromogenic Assay of Neuraminidase Activity in Bacterial Expression Systems. Bioorg. Med. Chem. 1, 147-149 (1993).
  12. Berlin, W., Sauer, B. In situ Color Detection of α-ʟ-Arabinofuranisodase, a "No-Background" Reporter Gene, with 5-Bromo-3-indolyl-α-ʟ-arabinofuranoside. Anal. Biochem. 243, 171-175 (1996).
  13. Marmuse, L., et al. New Chromogenic Substrates for Feruloyl Esterases. Org. Biomol. Chem. 6, 1208-1214 (2008).
  14. Kaneko, S., Kiaoka, M., Kuno, A., Hayashi, K. Syntheses of 4-Methylumbelliferyl-β-ᴅ-Xylobioside and 5-Bromo-3-Indolyl-β-ᴅ-Xylobioside for Sensitive Detection of Xylanase Activity on Agar Plates. Biosci. Biotechnol. Biochem. 64, 741-745 (2000).
  15. Robertson, A. J. Syntheses of Glucosides. Part I. The Synthesis of Indican. Chem. Soc. , 1937-1943 (1927).
  16. Robertson, A., Waters, R. B. J. Synthese of Glucosides. Part VII. The Synthesis of 6-Bromoindican. Chem. Soc. , 2239-2243 (1929).
  17. Böttcher, S., Thiem, J. Indoxylic Acid Esters as Convenient Intermediates Towards Indoxyl Glycosides. Eur. J. Org. Chem. , 564-574 (2014).
  18. Böttcher, S., Hederos, M., Champion, E., Dékány, G., Thiem, J. Novel Efficient Routes to Indoxyl Glycosides for Monitoring Glycosidase Activities. Org. Lett. 15, 3766-3769 (2013).
  19. Böttcher, S., Thiem, J. Facile Preparation of Indoxyl- and Nitrophenyl Glycosides of Lactosamine and Isolactosamine. RSC Adv. 4, 10856-10861 (2014).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Определение гликозидазфазовый перенос гликозилированиягликозилирование с использованием серебрадеацетилирование по Цемпленутест на ферментативную активностьхромогенный субстратобразование красителя индигосинтез углеводовперацетилированные гликозиды
Синтез индоксил-гликозидов для обнаружения гликозидазой деятельности
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.