Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Отслеживание костного мозга мышей моноцитов

9.5K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/52476

⸱

27 февраля 2015 г.

 ,  ,  , 
1Centre d'Immunologie et des Maladies Infectieuses (CIMI), INSERM, U1135, CNRS, ERL 8255, Sorbonne Universités, UPMC Univ Paris 06, CR7

В этой статье

Краткое содержание

Моноциты являются ключевыми регуляторами врожденного иммунитета и играют решающую роль в обновлении периферической мононуклеарной фагоцитарной системы и в случае воспаления. В данной рукописи описана процедура визуализации костного мозга кальварии мышей в режиме реального времени для изучения механизма мобилизации моноцитов.

Аннотация

Мультифотонная визуализация в реальном времени предоставляет прекрасную возможность для изучения переноса клеток и межклеточных взаимодействий в их физиологической трехмерной среде. Биологическая активность иммунных клеток в основном зависит от их подвижности. Моноциты крови имеют короткий период полураспада в кровотоке; Они берут начало в костном мозге и конститутивно высвобождаются из него. При воспалительном состоянии этот процесс усиливается, что приводит к моноцитозу крови и последующей инфильтрации периферических воспалительных тканей. Идентификация биомеханических событий, контролирующих транспорт моноцитов из костного мозга в сосудистую сеть, является важным шагом для понимания физиопатологической значимости моноцитов. Мы выполнили покадровую съемку in vivo с помощью двухфотонной микроскопии костного мозга черепа мыши Csf1r-Gal4VP16/UAS-ECFP (MacBlue). Мышь MacBlue экспрессирует флуоресцентные репортеры усиленный голубым флуоресцентным белком (ECFP) под контролем миелоидного специфического промотора 1 в сочетании с мечением сосудистой сетью. Мы описываем, как этот подход позволяет отслеживать отдельные медуллярные моноциты в режиме реального времени для дальнейшей количественной оценки миграционного поведения в паренхиме костного мозга и сосудистой сети, а также межклеточных взаимодействий. Этот подход позволяет по-новому взглянуть на биологию субпопуляций моноцитов костного мозга и дополнительно изучить, как эти клетки могут подвергаться влиянию при конкретных патологических состояниях.

Введение

Костный мозг играет центральную роль в кроветворении и представляет собой основной резервуар моноцитов, которые конститутивно рециркулируют между кровью и медуллярной паренхимой, обновляют пул циркулирующих моноцитов с короткой продолжительностью жизни 2,3 и участвуют в восстановлении равновесных тканевых макрофагов и дендритных клеток 4. Во время воспаления или после транзиторной аплазии моноциты активно мобилизуются либо из костного мозга, либо из селезенки 5, 6, 7 и колонизируют воспаленные органы. Несколько осей хемоаттрактанта были вовлечены в процесс мобилизации миелоидных клеток из костного мозга 8, 5, 6,9. Помимо миелоидного компартмента, костный мозг также является важным местом прайминга Т-лимфоцитов 10 и нишей иммунологической памяти 11,12. Таким образом, эта ткань является центральной для многочисленных исследований в области гематологии и иммунологии. Наши знания о структурной организации медуллярных миелоидных клеток в основном основаны на анализе гистологического среза неподвижных тканей 13. Такой статический взгляд не позволяет изучить динамику клеточного обмена между различными отделами костного мозга, который является основой его функциональной активности.

Прижизненная визуализация представляет собой важный биологический вклад в изучение подвижности клеток, клеточной адгезии и межклеточных взаимодействий, которые ранее были описаны только в системах in vitro. Технические проблемы для правильной прижизненной визуализации включают в себя возможность достичь интересующей ткани с оптической точки зрения и максимально изолировать ее от физиологических (дыхание, мышечные или перистальтические сокращения) или механических дрейфов (разрушение и разгибание тканей после операции, воздействие объектива микроскопа, а также температурные и сосудистые/оксигенационные возмущения). Микроскопические дрейфы могут ограничивать способность удерживать фокус в течение длительного времени и могут вносить артефакты в количественную оценку подвижности клеток. Одной из альтернатив, проверенных для нескольких тканей для уменьшения этих технических трудностей, является работа с эксплантированной тканью, инкубированной в термостатированной и насыщенной кислородом среде; Однако полное нарушение лимфатического и сосудистого кровообращения может быть проблематичным. Прижизненная визуализация костного мозга черепа имеет ряд преимуществ в отношении этих вопросов. Во-первых, он требует минимального хирургического вмешательства. Во-вторых, толщина кости в этой области позволяет напрямую визуализировать ниши костного мозга без истирания, тем самым уменьшая физиологические возмущения. Мозговая сеть может быть визуализирована в парасагиттальной области кости; Однако синусоиды более заметны в лобно-теменной области, где костный матрикс тоньше12,14.

Визуализация Intravital зависит от наличия наиболее точного флуоресцентного репортера, маркирующего интересующую популяцию. Мечение in vitro очищенной клеточной популяции перед адоптивным переносом привело к важной характеристике ниш гемопоэтических стволовых клеток 15 или эндотелиальных микродоменов костного мозга в пользу приживления опухоли 16 и предоставило несколько фундаментальных входных данных по ключевым концепциям иммунологии 17 . Однако этот подход обычно требует сотен тысяч клеток, чтобы впоследствии обнаружить их in vivo. Это можно объяснить высокой смертностью после окрашивания, разведением во всем организме и изменением состояния активации, что может привести к смещению хоуминга. Эндогенное мечение из трансгенной мышиной системы в значительной степени преодолевает эти ограничения и позволяет визуализировать поведение эндогенных остеобластов 8, мегакариоцитов 18 или субпопуляций миелоидной линии 6. Тем не менее, следует быть осторожным при рассмотрении специфичности флуоресцентного репортера среди изучаемой подпопуляции.

Csf1r-Gal4VP16/UAS-ECFP, называемая MacBlue mouse 1, является ценной трансгенной системой для изучения медуллярных моноцитов с визуализацией в реальном времени 6. Внутривенное введение высокомолекулярного родамина-декстрана отличает медуллярную паренхиму от сосудистой синусоидной сети костного мозга. Используя этот подход, можно отследить поведение моноцитов в различных мозговых компартментах в конкретном физиопатологическом контексте, представляющем интерес. Кроме того, мы предлагаем дополнительную стратегию для сравнения динамики моноцитов с динамикой нейтрофилов путем мечения in vivo с использованием специфического антитела.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

ПРИМЕЧАНИЕ: Все протоколы эксперимента были утверждены французской экспериментов на животных и этике комитетом и утверждены на "Службы по защите и др Санте Animales, Environnement" с номером А-75-2065. Примеры размеры выбраны так, чтобы обеспечить воспроизводимость экспериментов, и в соответствии с 3R регулирования животных этической.

1. Подготовка мыши

  1. Анестезия
    1. За короткий период томографии (менее 1 ч), анестезию мыши путем внутрибрюшинной инъекции 200 мкл физиологического раствора, содержащего кетамином (100 мг / кг) и ксилазина (10 мг / кг).
    2. Кроме того, в течение более длительного периода визуализации (до 4 ч), анестезию мыши с вдыхании изофлуран 2,5% испаренного в 70/30 смеси O 2 / N 2 O, через адаптированной маски.
    3. ПРИМЕЧАНИЕ: Этот способ обеспечивает более стабильную потерю сознания и избегает серийный внутрибрюшинного введения препаратов.
    4. После того, как мышь под наркозом, проверьте бессознательного через стимуляцию подушечку лапы с щипцами.
  2. Сосудистая окрашивание / дополнительная окрашивание
    1. Для сосудов окрашивания: Вводят внутривенно в хвостовую вену, 200 мкл родамина-декстрана (2 МДА, 10 мг / мл в солевом буфере).
    2. Для окрашивания нейтрофилов: вводят 2 мкг Ly6G-РЕ (клон 1A8) в 100 мкл физиологического раствора внутривенно в хвостовую вену.
  3. Иммобилизация
    1. Для иммобилизации, используйте на заказ стереотаксической держатель, выполненный с возможностью микроскопом и обезболивающий газа ингалятора.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Sterotactic держатель металлическая опора с двумя металлической пластиной скобках, один из которых фиксируется и другие сменные и адаптации, ужесточить голову животного.
    2. Установите головку мыши между удерживающими пластинами для обеспечения изоляции от дыхательные движения. Затянуть уши между пластины крепления и головы, чтобы растянуть СК. Проверьте стабильность и дыхание благосостояния животного.
  4. Снимите кожу головы
    1. Осторожно использовать этанол 70% для увлажнения волос в кожу головы с помощью стерильного аппликатора, избегая контакта с глазами.
    2. Разрежьте кожу стерильными ножницами и щипцами, чтобы полностью удалить кожу головы от назад теменной кости лобной кости. Беречь до 3 мм от глаз и ушей, чтобы предотвратить обширный кровотечение. Снимите рыхлой соединительной ткани, покрывающей череп (надкостницы). Промойте оставшиеся волосы теплой PBS-пропитанной бумажной салфеткой.
  5. Система погружения настроить
    1. Вставить резиновое кольцо диаметром 18 мм с хирургическим клеем непосредственно на черепе с помощью небольшой иглы, чтобы контролировать распределение. Клей всей периферии резинового кольца, чтобы предотвратить утечку (30 мкл, должно быть достаточным).
    2. Очистите череп под кольцом в последний раз с PBS-пропитанной бумажной салфеткой, а затем добавить 37 ° C PBS для полного погруженияЧереп. Добавить каплю NaCl 0,9% раствора или специального глазной мази на каждый глаз мыши, чтобы избежать сухость глаза. Перетащите стереотаксической держатель под цели.
    3. Примерно расположить поле с помощью микроскопа окуляра через прямой передачи.

2. Двухфотонное Приобретение изображений

  1. Используйте многофотонную микроскопа в сочетании с Ti: кристаллического лазера Sapphire, которая обеспечивает 140fs импульсы NIR света, избирательно настраиваемый от 680 до 1080 нм, а акустооптического модулятора для управления мощности лазерного излучения. Используйте конфигурацию, включающую 3 внешних, не являющихся descanned детекторов (NDD) (которые позволяют одновременную запись 3 флуоресцентных каналов) с комбинацией 2 дихроичных зеркал (565 нм и 690 нм), 565/610 и 500/550 полосовых фильтров, и 485 Короткая фильтр нижних частот, с целью Apochromat × 20 (NA = 1) погружения в воду цели.
  2. Установите камеру нагрева для обеспечения хорошей homeothermy из anaesthetized мыши.,
    Примечание: Температура может быть установлена ​​1 ч до визуализации сеанса для лучшей стабильности. В нашем случае, 32 ° С была выбрана, чтобы получить оптимальную температуру тела анестезированной мыши (36-37 ° C) и выдерживают до 4 ч. Эта температура может быть адаптирована к системе используется (цифровой датчик может быть использован, чтобы проверить эту точку). Кроме того, камера нагрева используется темный / черный и охватывает часть системы (целей и моторизованной пластины), чтобы избежать внешнего источника света.
  3. Включите систему
    1. Включите Ti: Sapphire лазера, то вся система микроскопа. Запустите программу приобретения. Установите диапазон длины волны лазерного излучения 870 нм. Выберите подходящий NDD для записи.
      ПРИМЕЧАНИЕ: В нашем случае, генерация второй гармоники (ГВГ) 19 и голубой флуоресцентный белок (ECFP) обнаруживаются NDD после 485 короткий фильтр нижних частот. ECFP также обнаружен NDD после фильтра 500/550 полосовой и Rhodamin-декстран обнаружены тон NDD после 565/610 полосового фильтра.
  4. Настройка параметров сбора
    1. Используйте "в прямом эфире приобретения" команду визуализации программного обеспечения и с помощью регулятора направления микроскопа, настроить фокус на области с ECFP и родамина сигнала. Установите мощность лазера до минимума, чтобы получить наилучшее соотношение сигнал-шум с минимальным фото-повреждения.
      ПРИМЕЧАНИЕ: установка мощности варьируется в зависимости от глубины области интересов. Обычно настройки АОМ установлены около 20%, что представляет собой мощность лазера выходит за рамки цели около 15 мВт. Это лучше увеличить коэффициент усиления мощности на ФЭУ для каждого NDD, чтобы уменьшить фото-отбеливание и фото-повреждения. Типовые настройки сбора являются однократное сканирование с временем пикселей выдержки 1,58 мкс, а разрешение 512 х 512 пикселей с 1,5 увеличении.
  5. Выберите регионах, представляющих интерес
    1. После того, как параметры записи установлены, использовать снова "Живое" команду приобретение,и обследовать ткани, чтобы выбрать нужный (х, у, г) поле и будет отслеживать в режиме реального времени.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Как правило, мы выбрали области, включая как сосудистых и паренхиматозных областей.
    2. Регистрация на поле с командой программного обеспечения "Позиция".
      Примечание: Эта команда запоминает х, Y, Z координаты разных отдаленных областях.
    3. Выберите и зарегистрировать дополнительные поля, представляющие интерес (до 3), используя ту же процедуру.
    4. Установите 3D Z-стек с помощью программной команды "Z-Stack" на первом в памяти положение в соответствии с требуемым объемом с выбранной увеличения. Запомните глубокое положение, а затем верхнее положение. Нормализация мощность лазера с глубиной.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Для многократного изображений сопутствующей поля, мы приобретаем 5 ломтиков, разделенных Z-шагов 3 мкм для каждого поля, чтобы приобрести объем 12 мкм толщины. Эти параметры могут быть адаптированы к типу клеток исследуемой.
  6. Приобретение Launch
    1. Выберите220; временные ряды "Команда программное обеспечение и выбрать длительность интервала времени и количества циклов. Начните покадровой обработки изображений в соответствии с промежутком времени и продолжительности, необходимой, выбрав "Пуск эксперимент" команду программного обеспечения.
      ПРИМЕЧАНИЕ: В нашем случае, мы приобретаем одну объем каждые 30 секунд в течение 60 циклов, представляющих 30 мин в режиме реального времени. Меньший промежуток времени может быть выполнена быстро, чтобы отслеживать клеток прокатки в кровеносном сосуде. В этом случае растворитель Z-стека и не более чем 2 различных областях могут быть записаны в то же время.
    2. Регулярный мониторинг настроить.
      1. Всегда следите за животное, чтобы убедиться, что в бессознательном состоянии.
        ПРИМЕЧАНИЕ: встряхивания усов или ноги животного являются индикаторами возрождения. В этом случае дыхание животного прерывисто, количество изофлуран может быть несколько снижена. Сильный дрейф ткани во время приобретения индикатор возрождения мыши.
      2. Убедитесь, что цель правильно погружены в воду. Обновить 37 ° C PBS betweeп две поглощения (30 мин).
        ПРИМЕЧАНИЕ: постепенное исчезновение сигнала при приобретения индикатор утечки PBS.
  7. Конец процедуры
    1. После того, как необходимые видео записано, усыпить животное путем смещения шейных позвонков быстро до реанимации.
      Примечание: заживление ран, приводит к образованию струпа в от 24 до 48 ч, что ограничивает возможность производить продольное изображений.

3. Анализ данных

  1. Коррекции дрейфа
    1. Используйте Imaris битовой плоскости программное обеспечение для 3D автоматического слежения.
    2. Откройте последовательность 3D изображения на Imaris. Выберите команду "спот", а также генерировать ручной трекинг (щелчка мыши + SHIFT) для всех временных точках в течение как минимум 4 разных опорных точек, если возможно равномерно распределены в этой области.
    3. Применяйте коррекцию дрейфа с помощью команды "правильно дрейфа" на вкладке "Редактирование траектории».
    4. Проверьте тон Качество коррекции в х, у и, в частности в г, чтобы избежать артефактные колеблющихся.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Если коррекция не является удовлетворительным, попробуйте другие опорные точки или исключить видео из анализа.
  2. Отслеживать сотового
    1. Используйте "добавить новые точки" команду и выберите "Track пятна с течением времени" настройки алгоритма. Перейдите к следующему шагу.
    2. Применить процедуру автоматической отслеживания клетка либо на всей канала, представляющего интерес, используя команду "источник канала". Набор объектов (то есть, клетки) диаметром до 10 мкм. Перейдите к следующему шагу.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Выбор будет зависеть от различия между объектами и специфике измеряемого сигнала. Короче говоря, автоматическое отслеживание по всему каналу возможно только при обнаружении сигнала является специфичным для объекта интереса. Потому что оба ГВГ и ECFP обнаруживаются NDD после 485 короткий фильтр, отслеживания будет более конкретным и эффективным использованием ECFP сигнал, записанный на NDD после 500/550 полосовые фильтры. Кластерный или плотные упакованные объекты требуют ручного выбора отдельных объектов, подобных шагу 3.1.2.
    3. Выберите "качество" тип фильтра, установить порог для исключения отслеживание неспецифических объектов. Перейдите к следующему шагу.
    4. Выберите «броуновское алгоритм Motion" с точными параметрами "Максимальное расстояние" и "размер зазора» между двумя пятнами. Подтвердить поколение дорожки.
    5. После того, как треки рассчитывается автоматически, выберите "продолжительность трека" тип фильтра, установить порог для устранения треки короче 120 сек (что составляет 4 временные точки).
    6. Обязательно: После автоматического слежения, проверить качество треков.
      1. Разверните шкалу времени, чтобы проверить, что объекты Следуйте по пути. Если нет, используйте опции коррекции точки трека доступны на вкладке «править»: Удалить ложные или неправильные треки с "удалить" команда (удалить любой трек рoint индивидуально с помощью команды "Отключить"). Если трек путь является непрерывным, добавить недостающие моменты времени (, мыши, + Shift), выделите все точки на данной трассе, и использовать команду "Connect" на вкладке "Редактирование траектории».
  3. Параметры Количественная
    1. Выберите вкладку "Статистика" в команду "Настройки", выберите динамических параметров, представляющих интерес в списке. Выберите "Экспортировать все статистические данные в файл" и сохраните файл первенствовать генерируется.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Некоторые динамические параметры, полученные непосредственно из программного обеспечения, таких как длин треков, мгновенной скорости, средней скорости, а также отслеживать прямолинейность. Коэффициент подвижности 6, 20 может быть определена, но прямо не предусмотрено программой.
    2. Для каждой ячейки, вычислить среднее значение перемещений для каждого периода времени (t) (для 30 сек времени истечения кино, & delta; t будет 30, 60, 90 сек, и т.д.).Участок среднее значение квадрата смещения в зависимости от временного интервала. Получить коэффициента подвижности путем расчета наклона линейной части кривой.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Структура черепа мыши предоставляет хорошую возможность для изучения физиологии костного мозга прижизненной визуализации. Костный быть тонким вокруг передней теменной области, можно получить доступ к продолговатого мозга ниши без истиранию кости. Рисунок 1 представляет широкий 2D поле черепа MacBlue трансгенной мыши. Костный матрикс состоит в основном из коллагена I можно было легко обнаружить с помощью ГСП 19. Введение родамина-декстрана пятна сосудистую сеть костного мозга и позволяет для о...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Критические точки естественных методологии формирования изображения в том, чтобы обеспечить стабильность фокуса для того, чтобы максимизировать продолжительность визуализации и свести к минимуму риск бактериального загрязнения и воспаления, которые могут повлиять на динамику воспалительных клеток. Визуализация черепа костного мозга следующим этих целей, как операция, чтобы получить доступ к костного мозга минимальна. Использование стерильного материала и антисептиков важно ограничить риск инфекц...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Авторы хотели бы поблагодарить Анну Дарон и Пьер Луи Loyher за помощь в редактировании, Plateforme Imagerie Питье-Сальпетриер (PICPS) за помощь в двухфотонного микроскопа и животных фонда "НАК" и Камилла Baudesson для мышей животноводства помощь. Научных исследований, ведущих к этим результатам получил финансирование от Седьмой Рамочной Программы Европейского Сообщества (FP7 / 2007-2013) по договору безвозмездной N ° 304810 - RAID-массива, и N ° 241440-Endostem, от Inserm, из Университета Пьера и Марии Кюри "Появление ", из Лос-Анджелеса" Ligue CONTRE ле рака ", от" Ассоциация Pour La Recherche сюр-ле-Рак "от и до" Agence Nationale-де-ла-Recherche "Программа Появление 2012 (ANR-EMMA-050). PH была поддержана ля "Ligue CONTRE ле рака».

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
КетаминМериал100 мг/мл, анестетик
КсилазинБайер ХелсКер10 мг/мл, анестетик
ИзофлуранБакстер2,5%, анестетик
О<суб>2/NO<суб>270/30 смесь, анестетик
Родамин-ДекстранИнвитроген2 МДа, 10 мг/мл, Окрашивание сосудов
Ly6G-PEBecton-Dickinson1A8, окрашивание нейтрофилов
Стереотаксический держательДомашняяхирургия
Этанол 70%
операция Стерильные ножницы и кусачкихирургия
Резиновое кольцодиаметром 18 мм, хирургия
Glubran 2Queryo Медицинскийхирургический клей, фиксация резинового кольца иглы
малого калибраTerumosurgery
Zeiss LSM 710 NLO многофотонный микроскоп Микроскоп Carl Zeiss
Ti:Лазер с сапфировым стеклом Когерентный хамелеон Ultra140 фсек импульсов ближнего ИК-диапазона света
Zen 2010Carl ZeissAcquistion Software
Imaris Bitplane битовых плоскостей, 3D автоматическое слежение
PBS 1XХирургияДутчера
Термостатированная камераCarl Zeissприжизненная визуализация
Клон Программное обеспечение для анализа D.

Ссылки

  1. Ovchinnikov, D. A., et al. Expression of Gal4-dependent transgenes in cells of the mononuclear phagocyte system labeled with enhanced cyan fluorescent protein using Csf1r-Gal4VP16/UAS-ECFP double-transgenic mice. J Leukoc Biol. 83, 430-433 (2008).
  2. Parihar, A., Eubank, T. D., Doseff, A. I. Monocytes and macrophages regulate immunity through dynamic networks of survival and cell death. J Innate Immun. 2, 204-215 (2010).
  3. Geissmann, F., Jung, S., Littman, D. R. Blood monocytes consist of two principal subsets with distinct migratory properties. Immunity. 19, 71-82 (2003).
  4. Robbins, C. S., Swirski, F. K. The multiple roles of monocyte subsets in steady state and inflammation. Cell Mol Life Sci. 67, 2685-2693 (2010).
  5. Shi, C., et al. Bone marrow mesenchymal stem and progenitor cells induce monocyte emigration in response to circulating toll-like receptor ligands. Immunity. 34, 590-601 (2011).
  6. Jacquelin, S., et al. CX3CR1 reduces Ly6Chigh-monocyte motility within and release from the bone marrow after chemotherapy in mice. Blood. 122, 674-683 (2013).
  7. Swirski, F. K., et al. Identification of splenic reservoir monocytes and their deployment to inflammatory sites. Science. 325, 612-616 (2009).
  8. Germain, R. N., Miller, M. J., Dustin, M. L., Nussenzweig, M. C. Dynamic imaging of the immune system: progress, pitfalls and promise. Nat Rev Immunol. 6, 497-507 (2006).
  9. Charo, I. F., Ransohoff, R. M. The many roles of chemokines and chemokine receptors in inflammation. N Engl J Med. 354, 610-621 (2006).
  10. Milo, I., et al. Dynamic imaging reveals promiscuous crosspresentation of blood-borne antigens to naive CD8+ T cells in the bone marrow. 122, 193-208 (2013).
  11. Cavanagh, L. L., et al. Activation of bone marrow-resident memory T cells by circulating, antigen-bearing dendritic cells. Nat Immunol. 6, 1029-1037 (2005).
  12. Mazo, I. B., et al. Bone marrow is a major reservoir and site of recruitment for central memory CD8+ T cells. Immunity. 22, 259-270 (2005).
  13. Travlos, G. S. Normal structure, function, and histology of the bone marrow. Toxicol Pathol. 34, 548-565 (2006).
  14. Mazo, I. B., et al. Hematopoietic progenitor cell rolling in bone marrow microvessels: parallel contributions by endothelial selectins and vascular cell adhesion molecule 1. J Exp Med. 188, 465-474 (1998).
  15. Rashidi, N. M., et al. In vivo time-lapse imaging of mouse bone marrow reveals differential niche engagement by quiescent and naturally activated hematopoietic stem cells. Blood. , (2014).
  16. Sipkins, D. A., et al. In vivo imaging of specialized bone marrow endothelial microdomains for tumour engraftment. Nature. 435, 969-973 (2005).
  17. Cariappa, A., et al. Perisinusoidal B cells in the bone marrow participate in T-independent responses to blood-borne microbes. Immunity. 23, 397-407 (2005).
  18. Junt, T., et al. Dynamic visualization of thrombopoiesis within bone marrow. Science. 317, 1767-1770 (2007).
  19. Zoumi, A., Yeh, A., Tromberg, B. J. Imaging cells and extracellular matrix in vivo by using second-harmonic generation and two-photon excited fluorescence. Proc Natl Acad Sci U S A. 99, 11014-11019 (2002).
  20. Miller, M. J., Wei, S. H., Parker, I., Cahalan, M. D. Two-photon imaging of lymphocyte motility and antigen response in intact lymph node. Science. 296, 1869-1873 (2002).
  21. Cahalan, M. D., Parker, I. Choreography of cell motility and interaction dynamics imaged by two-photon microscopy in lymphoid organs. Annu Rev Immunol. 26, 585-626 (2008).
  22. Yost, C. C., et al. Impaired neutrophil extracellular trap (NET) formation: a novel innate immune deficiency of human neonates. Blood. 113, 6419-6427 (2009).
  23. Devi, S., et al. Multiphoton imaging reveals a new leukocyte recruitment paradigm in the glomerulus. Nat Med. 19, 107-112 (2013).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

CSF1R
Отслеживание костного мозга мышей моноцитов
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.