Оценка данио рерио функции почек с помощью флуоресцентного Зазор Пробирной

Summary

Данио является популярным инструментом для моделирования хронической болезни почек (ХБП). Тем не менее, их небольшой размер делает невозможным оценить функцию почек с использованием традиционных методов. Мы описываем почек флуоресцентный краситель оформление анализ ^1, что позволяет количественный анализ рыбок данио функции почек в ЦП.

Abstract

Данио рерио эмбрион предлагает послушный модель для изучения органогенеза и модель человеческих генетических заболеваний. Несмотря на свою относительную простоту, данио почки развивается и функционирует почти так же, как и людей. Основное различие в конструкции почки человека является наличие миллионов нефронов по сравнению с данио, который имеет только два. Однако, упрощая такую ​​сложную систему в основных функциональных узлов способствовал нашему пониманию того, как развивается почечная и работает. У рыбок данио, срединный находится клубочек отвечает за начальный фильтрации крови в двух pronephric канальцев, что расходятся, чтобы запустить в двустороннем вниз эмбриональной оси до слияния друг с другом в клоаку. В pronephric трубочки обильно населены подвижных ресничек, которые облегчают движение фильтрата по сегментной трубочку, позволяющая обмениваться различными растворенных веществ, прежде чем, наконец, выход через клоаку ^2-4. Многие гены, ответственные за ХБП, IncЛУДИНГ, связанные с ресничек, были изучены у рыбок данио ^5. Тем не менее, основным отступать было трудность в оценке данио функции почек после генетической манипуляции. Традиционные тесты для измерения дисфункции почек у людей оказались без поступательной к рыбок данио, главным образом из-за их водной среды и небольшого размера. Например, это физически невозможно извлечь кровь из эмбриональных поставлена ​​рыбы для анализа мочевины и креатинина содержанием, так как они слишком малы. Кроме того, данио не производят достаточно мочи на анализ на простых протеинурии "щупе», который часто осуществляется в ходе первоначальных пациента экзаменов. Опишем флуоресцентного анализа, который использует оптическую прозрачность данио, чтобы количественно контролировать зазор флуоресцентным красителем, с течением времени, из сосудистой и наружу через почки, чтобы дать считывать из функции почек ^1,6-9.

Introduction

Почки человека играет решающую роль в фильтрации обмена веществ из крови и выделение необходимых растворенные вещества для поддержания клеточного гомеостаза. Есть ряд генетических заболеваний человека, которые вызывают дисфункцию почек. Наиболее распространенным наследственным почечная болезнь аутосомно-доминантное заболевание поликистоз почек (ADPKD) характеризуется развитием наполненных жидкостью мешочки в пределах почечных канальцев; Ущерб, причиненный cystogenesis вредно для функции почек ^10. ADPKD имеет возникновение 1: 800 - 1: 1000 и составляет 8 - 10% больных в терминальной стадии почечной недостаточности (ESRF) ^11. Несколько генов были ....

Protocol

О себе Этика: Animal обслуживание, земледелия и процедуры определяются и контролируются в соответствии с Законом 1986 года Все эксперименты на животных были осуществляется на основании лицензий, выданных внутренних дел (PIL г. № 70/7892) в соответствии с биологическими животных (научные процедуры) Services Group Management и этический комитет Биологическая услуги, SGUL, Лондон, Великобритания. Все усилия были сделаны, чтобы уменьшить количество животных, используемых и уточнить обе процедуры и земледелие для того, чтобы свести к минимуму страдания и повышения благосостояния.

1. Подготовка инструментов, цистит, и флуоресцентный краситель

Results

Барде-Бидля синдром (BBS) является редким гетерогенной Цилиопатии, что затрагивает приблизительно 1: 160 000 человек по всему миру ^16. Пациенты с настоящей ряда связанных с этим проблем, включая поликистоз почек, впоследствии пациенты часто необходим диализ почек или трансплантация ^24. ESRF является наиболее распространенной причиной смерти в BBS, с около 30% пациентов развивающихся CKD ^16. В настоящее время 20 не связанных гены были вовлечены в BBS, не опубликованной генотип-фенотип асс.......

Discussion

Данио рерио предложить ценный инструмент для моделирования человеческих генетических заболеваний, их использование в качестве научного инструмента для в естественных условиях исследования позволили детально изучить генетический пробоя многих биологических систем, в том числе почек. Многое теперь понял о том, как развивается данио почек и функции. Поразительное сходство в человеческой нефрогенеза и гомологии с болезнетворные генов ²¹ проиллюстрировал, как данио стали основополагающими в понимании того.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
P-97 SUTTER Съемник микропипеток типа Flaming/Brown тип	Intracel	P-97
боросиликатные стандартные стенки капилляров	Harvard Apparatus	30-0017
Предметные стекла для микроскопа	VWR International	631-0109
Клей на основе эпоксидной смолы	Evo-Stik
Rhodamine B 10 000 МВт с маркировкой Dextran	Life technologies	D-1824
N-Phenylthiourea	Сигма-Олдрич	P7629
Метиленовый синий	Sigma-Aldrich	M9140
этил3-аминобензоат метансульфонат соль	Sigma-Aldrich	A5040
метилцеллюлоза	Sigma-Aldrich	M0512
воздушный компрессор	Jun-Air	OF302-15
Picospritzer III	Паркер Инструментс	051-0500-900
Компактный микроманипулятор с 3-х осевым управлением	Marzhauser	MM33
Препарирующий стереомикроскоп	Nikon	SMZ1000
наконечники микрозагрузчика	Eppendorf	5242956003
щипцами Dumont #5	Микрометр столика Sigma-Aldrich	F6521
	Пысер-СГИ	02А00404