Методическая статья

Перфорированные патч-зажим записи из мышей Обонятельные сенсорные нейроны в неповрежденном нейроэпителии: Функциональный анализ нейронов выражая идентифицированного одоранта рецептор

DOI:

10.3791/52652

⸱

13 июля 2015 г.

 , 
1UMR Centre des Sciences du Goŭt et de l'Alimentation, CNRS, INRA, Université de Bourgogne

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Анализ физиологических свойств обонятельных сенсорных нейронов все еще сталкивается с техническими ограничениями. Здесь мы записываем их через перфорированный пластырь-зажим в интактном препарате обонятельного эпителия у мышей, нацеленных на гены. Этот метод позволяет охарактеризовать свойства мембран и реакции на специфические лиганды нейронов, экспрессирующих определенные обонятельные рецепторы.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Анализируя физиологические реакции обонятельных сенсорных нейронов (ОСН) при стимуляции специфических лигандов важно понять основы обонятельных приводом поведения и их модуляции. Эти свойства кодирования в значительной степени зависят от начального взаимодействия между молекулами запаха и обонятельной рецептора (или) выражается в OSNs. Идентичность, специфика и лиганд спектр выраженных или являются критическими. Вероятность найти лиганд или выражены в OSN выбранной случайным образом в пределах эпителия является очень низким. Для решения этой проблемы, этот протокол использует генетически мышей отмеченных выражающие флуоресцентного белка GFP под контролем промотора, определенных ОР. OSNs находятся в тесной и организованной эпителия, выстилающих носовую полость, с соседние клетки, влияющие на их созревание и функции. Здесь мы опишем метод, чтобы изолировать нетронутыми обонятельного эпителия и записывать через патч-зажим записи свойства OSNs еxpressing определенные одоранта рецепторы. Протокол позволяет характеризовать свойства ОСН мембранные, сохраняя при этом влияние соседней ткани. Анализ результатов патч-зажим дает точную количественную оценку лиганд / или взаимодействий, трансдукции и фармакологии, свойства кодирования OSNs "и их модуляции на уровне мембраны.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Обонятельные сенсорные нейроны (OSN) представляют собой первый шаг обонятельной восприятия. Расположенный в обонятельный эпителий, выстилающей полость носа у грызунов, они преобразуют химическую информацию пахучих веществ в потенциалы действия, отправленных через их аксонов в мозг. Чтобы лучше понять, обонятельные механизмы кодирования, необходимо охарактеризовать трансдукции и мембранные свойства OSNs. До недавнего времени большинство из методов, используемых для характеристики свойств OSNs млекопитающих не проводили на диссоциации OSNs 1-4. Процесс диссоциации использует различные механические и химические (т.е., ферменты) процессы, чтобы освободить OSNs из их среды. Эти процессы вызывают низкое число доступных ячеек для записей. Это низкое количество может быть еще более важным в случае GFP меченых клеток. Диссоциация также удаляет местной ячейки к клетке взаимодействия между OSNs и других клеток обонятельного эпителия, что может усилить survivаль и модуляции свойств OSNs. Для того, чтобы обойти процедуру диссоциации, нетронутыми препарат разработан 5.

Каждый ОСН выражает один обонятельный рецептор (OR) выбран из большого семейством генов 6. Есть ~ 1000 ОШ, выраженные в основном обонятельного эпителия у мышей. Из-за большого числа или в животных дикого типа, шансы записать OSNs экспрессирующих тот же или очень низкой. Чтобы преодолеть эти ограничения, генные целевой мышей доступны в которой все OSNs экспрессирующие идентифицированных или помечены флуоресцентного белка 7-9. Эти меченые OSNs были использованы, чтобы сделать функциональный анализ в диссоциированных препаратов 7,10,11 с недостатками, упомянутых ранее. Без изменений подготовка эпителий 5 из генетически маркированных мышей поэтому обходит эти вопросы. Это позволяет осуществлять мониторинг деятельности OSNs выражающих именно определенные ОШ в среде, максимально приближенных в VIVO, насколько это возможно. Кроме того, патч-зажим записи OSNs также позволит точный анализ мембранных свойств, трансдукции фармакологии, лиганд / или взаимодействия. Все эти темы вряд ли могут быть проанализированы с помощью внеклеточных записи. Мы использовали этот метод для контроля ответы OSNs выражающие одоранта рецепторы SR1 и MOR23 12,13. Технико-экономическое техники было подтверждено другими группами на MOR23 выражающих OSNs 14, а также на других ОШ, выражающих нейроны 15,16. Мониторинг определенного населения OSNs может привести к анализу их свойств в различных контекстах, таких как развитие 14, старение 17, отдушка индуцированной пластичность 18 и роль вариаций в последовательности одоранта рецептора запаха кодирования 15. Этот протокол, таким образом, представляет собой мощный инструмент для мониторинга функциональных свойств, определенных OSNs на уровне мембраны.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Этот протокол следует рекомендациям по уходу животное на Университета Бургундии и был одобрен Комитетом по этике Университет де Бургундия.

1. Животные

  1. Используйте генетически мышей ИЛИ IRES-tauGFP доступные в Jackson Laboratory. Эти мыши были разработаны в лаборатории доктора Питера Mombaerts 'для того, чтобы проанализировать аксонов адресности и развитие обонятельной системы 19. Например, MOR23-IRES-tauGFP линия, инвентарный номер 006643, несет официальное название штамма B6; 129P2- Olfr16 tm2Mom / MomJ; Аналогично, линия SR1-IRES-tauGFP, инвентарный номер 6717 носит официальное название В6; 129P2- Olfr124 tm1Mom / MomJ.
  2. Что касается возраста животных: на лучший исход протокола, использовать животных между 2 и 4-недельного возраста. В этой возрастной группе, рассечение легче (мягкие кости, прочнее обонятельный эпителий) и дендритные ручки биgger сравнить старых животных.

2. Подготовка электродов и решения

  1. Для стимулирующих пипеток: покупка prepulled стимулирования пипетки. В противном случае, подготовить их вручную.
    1. С использованием пламени, согнуть шесть 1 мм стеклянные пипетки на 1 см от кончика. Вставьте эти шесть пипеток плюс прямые 7-е место в 1,5 см термоусадочной трубки укрепить с помощью глазка.
    2. Термоусадочная трубки для поддержания баррелей прикрепленные вместе. Присоединение дополнительного трубки термоусадочные другой оконечности баррелей. Потяните стимулирующее пипетки с съемника нескольких баррель.
    3. Добавить немного белого жидкого клея вокруг глазка для укрепления изогнутой советы. Дайте высохнуть O / N.
  2. Подготовка 1 или 2 л внеклеточной решение нормальный Рингера (в мм: 124 NaCl, KCl, 3, MgSO 4 1,3, CaCl 2 2, NaHCO 3 26, NaH 2 PO 4 1,25, глюкоза 15; рН 7,6 и 305 мОсм). Хранить при температуре 4 ° Cдо использования.
  3. Подготовка исходного раствора внутриклеточного (в мм): KCl 70, KOH 53, метансульфоновая кислота, EGTA 30, 5 HEPES 10, сахароза 70; рН 7,2 (КОН) и 310 мОсм. Хранить при 4 ° С до использования. Хорошо в течение нескольких недель.
  4. Подготовка внутриклеточного решение для записи с нистатин экспромтом (в последнюю минуту) до эксперимента.
    1. Взвешивание 3 мг нистатин, добавить 50 мкл ДМСО; вихрь 20 сек, то разрушать ультразвуком 2-3 мин, пока полностью не разбавляют.
    2. Добавьте 20 мкл ДМСО-нистатин раствора в 5 мл раствора внутриклеточного. Вихревой 20 сек, а затем разрушать ультразвуком 3 минуты. Держите это решение при 4 ° С и защищают от прямого света, нистатин светочувствительный. Это решение может быть использовано в течение нескольких часов. Заменить каждый день.
    3. После обонятельный эпителий препарат под микроскопом, принять некоторые из этого раствора в 1 мл шприц с пламенем удлиненные желтого наконечника для заполнения электрода; защиты от прямого света. После того, как в РТ, нистатин решенияне является стабильным; заменить решение в 1 мл шприц каждый час или держать его на льду.
  5. Потяните записи электроды с съемника, чтобы получить длинную шею и небольшие чаевые (~ 2 мкм) с сопротивлением 15-20 МОм с внутренним решением нистатина.
  6. Подготовка одоранта раствор при 0,5 М в ДМСО под вытяжным шкафом; Аликвоту и держать при температуре от -20 ° С до использования. Развести не одоранта в растворе Рингера до желаемой концентрации. Заполните стимулирующее пипетки.

3. Подготовка обонятельного эпителия

Примечание: мышей ИЛИ-IRES-tauGFP выразить tauGFP под контролем промотора ИЛИ. В этих мышей, все нейроны, выражающие или интерес помечены GFP. Этот протокол адаптирован для ОШ, выраженных во всех зонах. Тем не менее, вскрытия и записи легче для ОШ, выраженных в зоне спинного.

  1. Обезболить животное путем инъекции смеси кетамина и ксилазина (150 мг / кг и 10 мг / кг БПКу веса, соответственно). Обезглавливание может быть выполнена с острыми ножницами для молодых мышей или с надлежащим образом грызунов гильотины для старых мышей.
    1. Использование кольцевых рассечения ножницами сделать продольный разрез медиальной через кожу спины. Снимите кожу, потянув ее на части. Используя ножницы, вырезать нижние челюсти на нижнечелюстного сустава. Снимите верхние передние зубы корональной вырезанной параллельно к зубам.
    2. Сделайте разрез корональной головы позади глаз и держать только переднюю часть головы. Опустите его в ледяной Рингера раствор для вскрытия под сферу.
  2. Проанализируйте под действие: в брюшной стороне, сделать продольный разрез вдоль верхней челюсти / зубов. Отрежьте спинной кости в продольном направлении, после спинно-боковой части носовой полости. Удалить большинство костей и вкус; перевести перегородку и эпителий, прикрепленный к ней в окисленной Ringer при комнатной температуре.
  3. Для окончательного вскрытия: Прямо перед началом записисессия, удаляйте эпителий от подлежащей перегородки щипцами. Снять эпителий с пинцетом и с двумя 4-5 мм разрезами ножницами (использование microvannas ножницы) на передней части перегородки, где адгезия сильнее.
    1. Осторожно снимите вомероназальный орган путем разрезания его вдоль спинного подключения к перегородки эпителия. Перевести эпителия к записи камеры со слоем слизи вверх; держать его квартиру в камере с арфой.
  4. Установите камеру под прямой микроскоп, снабженный флуоресцентной оптики и чувствительного камеры. Представьте себе препарат на экране компьютера в высоком увеличении через 40X воды погружения объективной числовой апертурой (0.8) и дополнительную 2X 4X или увеличении достигнутого лупой. Заливать непрерывно с кислородом Рингера при комнатной температуре (1-2 мл / мин).

4. Запись сессии

  1. Поиск для люминесцентных ячейки: возбуждают подготовку на 480нм для EGFP, который излучает свет в диапазоне 530-550 нм; цель одна дендритных ручки, которая надежно видно флуоресценции и при ярком поле.
  2. Заполните электрод с внутриклеточной раствора с нистатин; удалить пузырьки, осторожно постукивая по электрода.
  3. Вставьте электрод на держатель электрода, применять положительное давление в пипетку; Сопротивление должно быть 15-20 МОм.
  4. Доведите электрод близко к камере; когда сопротивление достигает ~ 40 МОм, отпустите положительное давление и применять небольшое отрицательное давление для достижения gigaseal.
  5. После того, как печать будет достигнута, устанавливается мембранный потенциал на -75 мВ;
  6. После того, как клетка открыта, перейдите протоколов стимуляции, фармакологического лечения. Для измерения ответа на один одоранта стимуляции, запись 200-500 мс спонтанной активности, стимулировать за 500 мс и измерить реакцию клетки на срок до 10 сек 13. Для фармакологического лечения, заливать фармакологические агенты нажелаемая концентрация 20.

5. Анализ данных

  1. Анализ течения, вызываемые одоранта стимуляции, как следует: максимальную амплитуду, рост времени (время, необходимое для достижения 90% от максимальной амплитуды, в мс), суммарный ток (площадь под кривой в PAS), время на 50% (время между началом и смещение ответ на 50% от максимальной амплитуды, в мс).
    1. Использование пик трансдукции токов (максимальная амплитуда достигается) в различных концентрациях, рисовать и соответствовать кривую, используя уравнение Хилла: Я = Imax / (1 ​​+ (К 1/2 / С) п), где я представляет пиковый ток , Imax максимальный отклик у насыщающих концентрациях К1 / 2 концентрации, при которой была достигнута половина максимального ответа, C концентрации одоранта и п коэффициент Хилл.
  2. Анализ записей мембранного потенциала в текущей зажим для максимальной деполяризации, по Тотал вызывало потенциал (площадь под кривой) в mVsec; запись спонтанной пики активности в течение 30 сек до 1 мин записей; запись возбудимость через шипы вызываемых инъекции токов (5-10 Па).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Результатом этого протокола зависит от качества вскрытия. Это рассечение шаги должны быть короткими (менее от 10 до 15 мин) и точным (т.е., чтобы избежать повреждения эпителия). Рисунок 1 иллюстрирует, как идеальная подготовка похоже на разных уровнях увеличения. На малом увеличении при ярком поле различные типы клеток (например, ручек, поддерживающих OSNs клетки) различимы (1А). На самом высоком уровне увеличения, как правило, 80X, чтобы 160X, в светлом поле, дендритные ручки ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Способность этого протокола правильно контролировать свойства здоровых OSNs в значительной степени зависит от качества препарата. Таким образом, шаги рассечение являются критическими. Во-первых важно обратить внимание на качество (рН, осмолярность), оксигенации и температуры (льдом холодной, но не замороженной) в рассечение среды. Во-вторых, манипуляция эпителия с рассекающих инструментов должны быть как можно более ограниченным, чтобы избежать убытков. Наконец, важно, чтобы получить препарат, как плоский, как это возмо...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы хотели бы поблагодарить Питера Момбертса за щедрый подарок в виде мышей OR-GFP; Энн Лефранк и приют для животных CSGA за отличный уход за животными. Финансирование было предоставлено CNRS в виде грантов ATIP и ATIP Plus, Региональным советом Бургундии (гранты FABER и PARI), Университетом Бургундии (программа BQR).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
вибрационный стол с клеткой ФарадеяTMC63-500 SERIESтребуется: изолирует регистрирующую систему от вибраций, вызванных окружающей средой (движения экспериментатора, вибрации оборудования, такого как вентиляторы для охлаждения компьютеров и т.д.); также может быть приобретен с клеткой Фарадея, или оснащен специально изготовленной клеткой Фарадея; эта клетка рекомендуется для предотвращения электрических шумов от оптики
окружающей средымикроскопOlympusBX51WIвертикальный микроскоп оснащен эпифлуоресцентной функцией; фиксированный или движущийся столик в зависимости от предпочтений пользователя
объективовOlympusLUMPLFL40XWкак минимум 2 объектива: 4X или 10X для грубого приближения к ячейке; и 40X иммерсионный дальний пример Olympus LUMPLFL40XW / IR /0,8 / WD: 3,3 мм
лупаOlympusU-TVCACАБСОЛЮТНО ОБЯЗАТЕЛЬНО: размещается в световом тракте между объективом и камерой; позволяет увеличивать изображение на экране, чтобы точно дотянуться до ручки с записывающим электродом
камерыOlympusDP72требуется хорошая камера, чтобы видеть нейроны как во флуоресценции, так и в светлом поле; управляющее программное обеспечение простое и позволяет делать снимки и делать живое изображение камерой для контроля приближения электрода к ячейке. Сверхчувствительная камера не обязательно
фильтруетOlympus/Chromaв зависимости от флуоресцентного белка, используемого у мышей; пример для GFP: возбуждение: BP460-490: излучение: HQ530/50m
усилительHEKAEPC10USB отслеживает токи, протекающие через регистрирующий электрод, а также контролирует затяжение, посылая сигнал TTL на шпритцер; настройка EPC10 контролируется компьютерным
программным обеспечением.HEKAPatchmasterуправляет усилителем во время эксперимента
с помощью микроманипулятораSutterMP225с прецизионным микроманипулятором, позволяющим осуществлять точные движения с точностью до 1/10 микрометра; эта модель очень стабильна; избегайте гидравлических манипуляторов, которые могут дрейфовать
электродами съемникомSutterP97с широкой желобчатой нитью накала FT345-B;   подготовить записывающие пипетки около 2°Мкм; m диаметром с длинным наконечником для доступа к ячейкам; Сопротивление должно составлять от 15 до 20 МОм при использовании перфорированного патч-зажима раствора
стеклаSutterBF120-69-10в наших условиях регистрации это стекло идеально подходит для записи пипеток
в камере записиWarner InstrumentsRC-26G, камера нужна для установки препарата под микроскоп. Для поддержания препарата в центре камеры следует использовать сетку/анкер
стекло для стимуляции
WPITW100F-4прикреплено группами по 7 штук, эти пипетки используются для приготовления предварительно вытянутых стимулирующих пипеток
многоствольного пуллераMDIPMP-107-Zпо ассоциации тяги и скручивания, этот пуллер позволяет нам готовить затяжные электроды с 7 цилиндрами
прецизионного напорного инжектора Компания TooheyP/N T25-1-900 Одноканальный     этот прецизионный инжектор давления управляет давлением, сбрасываемым в многоствольном съемнике; он управляется вручную или усилителем с помощью 5 В; TTL
микроманипуляторНаришигэЮ-1грубый манипулятор достаточно подвести затяжной электрод вплотную к месту записи
трубкиН/Дтайгон трубка для доведения давления от пышки к пыхтению
растворы/перфузия/химикаты
вакуумный насосgardner denverсерии300Вибрационный мембранный насос более тихий и эффективный, чем другие типы насосов
перфузионной системыН/ДН/Дгравитационной перфузионной системы с полиэтлиленовыми трубками для ввода и вывода наружного раствора из регистрирующей камеры
нистатинаSigma-AldrichN3503обязательного для перфорации внутреннего раствора для перфорированного патч-зажима
DIMETHYLSULFOXIDESigma-AldrichD5879используется для растворения нистатина для внутреннего раствора при перфорированном пластыре 
Раствор хлорида натрияSigma-AldrichS9625внеклеточный
Раствор хлорида калияIntracellular/внеклеточный растворSigma-AldrichP4504
Дигидрат хлорида кальцияВнеклеточный растворSigma-AldrichC7902
Одноосновной моногидрат фосфата натрия (2PO4)Sigma-AldrichS9638внеклеточный раствор
сульфата магния гептагидрат (MgSO4 7H2O)Sigma-Aldrich63140внеклеточный раствор
глюкозыSigma-AldrichG8270внеклеточный раствор
бикарбонат натрияSigma-AldrichS6297внеклеточный раствор
EGTA (Этиленгликоль-бис(2-аминоэтиловый эфир)-N,N,N′,N′-тетрауксусная кислота)Sigma-AldrichE3889внутренний раствор
гидроксид калияSigma-AldrichP1767внутренний раствор
МетилсульфоксидSigma-AldrichW387509внутриклеточный раствор
Hepes-NaSigma-AldrichH7006внутриклеточный раствор
СахарозаSigma-AldrichS0389внутриклеточный раствор
.

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Lowe, G., Gold, G. H. Nonlinear amplification by calcium-dependent chloride channels in olfactory receptor cells. Nature. 366 (6452), 283-286 (1993).
  2. Ponissery Saidu, S., Dibattista, M., Matthews, H. R. Odorant-induced responses recorded from olfactory receptor neurons using the suction pipette technique. J Vis Exp. (62), e3862(2012).
  3. Moss, R. L., et al. Electrophysiological and biochemical responses of mouse vomeronasal receptor cells to urine-derived compounds: possible mechanism of action. Chem Senses. 23 (4), 483-489 (1998).
  4. Kaur, A., Dey, S. Live cell calcium imaging of dissociated vomeronasal neurons. Methods Mol Biol. 1068, 189-200 (2013).
  5. Ma, M., Chen, W. R. Electrophysiological characterization of rat and mouse olfactory receptor neurons from an intact epithelial preparation. J Neurosci Methods. 92 (1-2), 31-40 (1999).
  6. Axel, R. A novel multigene family may encode odorant receptors: a molecular basis for odor recognition. Cell. 65 (1), 175-187 (1991).
  7. Bozza, T., Feinstein, P., Zheng, C. Odorant receptor expression defines functional units in the mouse olfactory system. J Neurosci. 22 (8), 3033-3043 (2002).
  8. Bozza, T., et al. Mapping of class I and class II odorant receptors to glomerular domains by two distinct types of olfactory sensory neurons in the mouse. Neuron. 61 (2), 220-233 (2009).
  9. Vassalli, A., Rothman, A., Feinstein, P., Zapotocky, M. Minigenes impart odorant receptor-specific axon guidance in the olfactory bulb. Neuron. 35 (4), 681-696 (2002).
  10. Feinstein, P., Bozza, T., Rodriguez, I., Vassalli, A. Axon guidance of mouse olfactory sensory neurons by odorant receptors and the beta2 adrenergic receptor. Cell. 117 (6), 833-846 (2004).
  11. Mombaerts, P. Genes and ligands for odorant, vomeronasal and taste receptors. Nat Rev Neurosci. 5 (4), 263-278 (2004).
  12. Grosmaitre, X., et al. SR1, a mouse odorant receptor with an unusually broad response profile. J Neurosci. 29 (46), 14545-14552 (2009).
  13. Grosmaitre, X., Vassalli, A., Mombaerts, P., Shepherd, G. M. Odorant responses of olfactory sensory neurons expressing the odorant receptor MOR23: a patch clamp analysis in gene-targeted mice. Proc Natl Acad Sci U S A. 103 (6), 1970-1975 (2006).
  14. Lam, R. S. Odorant responsiveness of embryonic mouse olfactory sensory neurons expressing the odorant receptors S1 or MOR23. Eur J Neurosci. 38 (2), 2210-2217 (2013).
  15. Zhang, J., Huang, G., Dewan, A., Feinstein, P. Uncoupling stimulus specificity and glomerular position in the mouse olfactory system. Mol Cell Neurosci. 51 (3-4), 79-88 (2012).
  16. Zhang, J., Pacifico, R., Cawley, D., Feinstein, P. Ultrasensitive detection of amines by a trace amine-associated receptor. J Neurosci. 33 (7), 3228-3239 (2013).
  17. Lee, A. C., Tian, H., Grosmaitre, X. Expression patterns of odorant receptors and response properties of olfactory sensory neurons in aged mice. Chem Senses. 34 (8), 695-703 (2009).
  18. Cadiou, H., et al. Postnatal odorant exposure induces peripheral olfactory plasticity at the cellular level. J Neurosci. 34 (14), 4857-4870 (2014).
  19. Mombaerts, P. Axonal wiring in the mouse olfactory system. Annu Rev Cell Dev Biol. 22, 713-737 (2006).
  20. Grosmaitre, X., Santarelli, L. C., Tan, J., Luo, M. Dual functions of mammalian olfactory sensory neurons as odor detectors and mechanical sensors. Nat Neurosci. 10 (3), 348-354 (2007).
  21. Duchamp-Viret, P., Chaput, M. A. Odor response properties of rat olfactory receptor neurons. Science. 284 (5423), 2171-2174 (1999).
  22. Heydel, J. M., et al. Odorant-binding proteins and xenobiotic metabolizing enzymes: implications in olfactory perireceptor events. Anat Rec (Hoboken). 296 (9), 1333-1345 (2013).
  23. Pelosi, P. Perireceptor events in olfaction). J Neurobiol. 30 (1), 3-19 (1996).
  24. Spehr, M., Wetzel, C. H., Hatt, H. 3-phosphoinositides modulate cyclic nucleotide signaling in olfactory receptor neurons. Neuron. 33, 731-739 (2002).
  25. Chen, S., Lane, A. P., Bock, R., Leinders-Zufall, T. Blocking adenylyl cyclase inhibits olfactory generator currents induced by 'IP(3)-odors. J Neurophysiol. 84 (1), 575-580 (2000).
  26. Savigner, A., et al. Modulation of spontaneous and odorant-evoked activity of rat olfactory sensory neurons by two anorectic peptides, insulin and leptin. J Neurophysiol. 101 (6), 2898-2906 (2009).
  27. Ukhanov, K., Brunert, D., Corey, E. A. Phosphoinositide 3-kinase-dependent antagonism in mammalian olfactory receptor neurons. J Neurosci. 31 (1), 273-280 (2011).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

GFP

Похожие статьи