Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Создание человека Множественная миелома модели ксенотрансплантата в Курица по изучению роста опухоли, инвазии и ангиогенеза

12.7K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/52665

⸱

1 мая 2015 г.

 ,  ,  , 
1Department of Internal Medicine V, Innsbruck Medical University, 2Oncotyrol GmbH, 3Tyrolean Cancer Research Institute, 4Division of Vascular Biology, Department of Medical Biochemistry and Biophysics, Karolinska Institute

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

Человеческие множественной миеломы (ММ) клетки требует поддерживающей микроокружение мезенхимальных клеток и компонентов внеклеточного матрикса для выживания и пролиферации. Мы установили в естественных условиях куриного эмбриона модели с привитых человека миеломы и мезенхимальных клеток для изучения эффектов противоопухолевых лекарств на рост опухоли, инвазии и ангиогенеза.

Аннотация

Множественная миелома (ММ), злокачественное заболевание плазматических клеток, остается неизлечимым и новые препараты, необходимые для улучшения прогноза пациентов. Из-за отсутствия микросреды костей и авто / паракринная факторов роста клетки ММ человека трудно культивировать. Таким образом, существует настоятельная необходимость в создании собственно в пробирке и в естественных системах культивирования для изучения действия новых терапевтических клеток ММ на человека. Здесь мы представляем модель для роста клетки множественной миеломы человека в сложной 3D-среде в пробирке и в естественных условиях. Клеточные линии ММ ОПМ-2 и RPMI-8226 были трансфицированы выразить трансгена GFP и культивировали в присутствии мезенхимных клеток человека и коллагена типа I матрицы в виде трехмерных сфероидов. Кроме того, сфероиды были привиты на хориоаллантоисной мембране (САМ) куриных эмбрионов и рост опухоли контролировали с помощью стерео флуоресцентной микроскопии. Обе модели позволяют исследование новых терапевтических друGS в сложной 3D окружающей среды и количественного определения массы опухолевых клеток после гомогенизации трансплантатов в трансгенной конкретных GFP-ELISA. Кроме того, кровеносных сосудов, ответы на хозяина и вторжения опухолевых клеток в подстилающей ткани хозяина можно контролировать ежедневно стереомикроскопом и проанализированы иммуногистохимического окрашивания против опухолевых клеток человека (Ki-67, CD138, Виментин) или настенной клеток-хозяев, охватывающих кровеносных сосудов (десмин / ОУРА).

В заключение, onplant система позволяет исследовать рост клеток ММ и ангиогенез в сложной среде 3D и позволяет скрининг новых терапевтических соединений, направленных на выживание и размножение клеток ММ.

Введение

Множественная миелома (ММ) характеризуется пролиферацией злокачественных плазматических клеток в костном мозге, поражением костей и иммунодефицитом 1. Несмотря на наличие новых вариантов лечения, таких как ингибиторы протеасом (бортезомиб) и иммуномодулирующие препараты (помалидомид и леналидомид), ММ по-прежнему остается неизлечимым злокачественным новообразованием с мрачным прогнозом 2. Плохой прогноз может быть объяснен чрезвычайной гетерогенностью клонов клеток ММ, которая способствует вариабельному ответу на терапию, в частности, при длительном лечении и давлении отбора клонов ММ.

Доклинические испытания новых лекарств и их комбинаций in vitro и in vivo являются критически важным и трудоемким этапом для будущей разработки лекарств. Таким образом, необходимы полезные in-vivo модели ММ для лучшего понимания биологии заболевания и открытия новых лекарств. На самом деле, лучшими моделями ксенотрансплантации для лечения гематологических злокачественных новообразований и лечения являются мыши с иммунодефицитом, такие как мыши с тяжелым комбинированным иммунодефицитом (SCID) 4-7, мыши без ожирения с диабетом/SCID (NOD/SCID) 8,9 или мыши с нокаутом β-микроглобулина NOD/SCID 10,11.

Хотя мышиные модели человеческого ММ в некоторых аспектах могут напоминать фенотип человеческого заболевания, мыши с иммунодефицитом являются инбредными, поэтому моделируют только одну индивидуальную реакцию на лекарство, и затраты очень высоки. Из-за иммуносупрессии животные нуждаются в специальных условиях содержания, и приживление человеческого ММ у мышей требуется от 6 недель до 2 месяцев 9,12, если клетки не пересаживают непосредственно в костный мозг с использованием технически сложной процедуры с более низкими показателями выживаемости животных 7,13. В связи с этим были разработаны новые методы с использованием моделей органоидов на основе стволовых клеток 14, тканевой инженерии 15 или сложных 3D-моделей клеточных культур 16. Они будут конкурировать в ближайшем будущем с классическими экспериментами на животных для доклинических испытаний лекарств, но не могут заменить тесты на системную токсичность в живых организмах.

Ранее было продемонстрировано, что куриный эмбрион является подходящим организмом для ксенотрансплантации клеток и тканей человека из-за отсутствия адаптивного иммунного ответа до вылупления 17-19. Более того, каждый куриный эмбрион отражает индивидуальную реакцию на применяемые препараты или опухолевые клетки из-за генетического разнообразия внутри куриной популяции. Хориоаллантоисная мембрана (КАМ) является хорошо зарекомендовавшей себя системой для изучения опухолезависимого ангиогенеза 20-22. Когда солидные опухоли присаживаются в CAM, они проявляют многие характеристики рака in vivo, включая пролиферацию, инвазию, ангиогенез и метастазирование 23-27.

Основываясь на предыдущем опыте нашей группы с моделями ксенотрансплантатов CAM20,26,27, была создана модель человеческого ММ, которая сочетает в себе преимущества 3D-системы культивирования человека с моделью ex ovo развивающихся куриных эмбрионов. Эта система моделирования ММ позволяет в режиме реального времени отслеживать прогрессию роста ММ, количественно оценивать клеточную массу и проводить доклинические испытания лекарственных препаратов.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Согласно австрийскому законодательству, а Управления лабораторных животных благосостояния Здравоохранение эмбрионов птиц США не считаются живыми позвоночных животных, пока hatching.The НИЗ Управление лабораторией животных благосостояния не предоставил письменное руководство в этой области (HTTP: // www.grants.nih.gov/grants/olaw/references/ilar91.htm и NIH Издание № 06-4515 .:).

1. Культура клеток и Лентивирусов Трансфекцию

  1. Культура линии клеток ММ ОПМ-2, среда RPMI-8226 и мезенхимальных стволовых клеток человека из костного мозга в среде RPMI 1640, дополненной 10% фетальной бычьей сыворотки теленка и 100 МЕ / мл пенициллина, 100 мкг / мл стрептомицина и 2 мМ глутамина, в присутствии 5% СО 2 при 37 ° С.
  2. Трансфекции 5 × 10 6 клеток НЕК 293FT клетки с вирусной сборки смеси (9 мкг) ДНК и 3 мкг / V5 pLenti6 Dest EGFP вектора путем использования 30 мкл реагента для трансфекции липосомальной и трансфекции среду (10 мл). Удалить трансфекции среду после 12 ч иДобавьте 10 мл DMEM среде с 10% бычьей сыворотки теленка и 1% заменимых аминокислот (NEAA).
  3. Через 5 дней, собирать супернатанты HEK293FT клеток после центрифугирования плавание клеток (1000 XG, 5мин). Определить титр вируса путем ПЦР в реальном времени, как описано в другом месте 28.
  4. Трансфекции 1 × 10 6 клетки ММ с EGFP лентивирусных частиц (1 х 10 5 частиц) в луночного планшета в полной среде роста 24. После 3-х дней, начать процесс отбора добавлением 2 мкг / мл бластицидин в культуральную среду. Для коммерчески доступного EGFP лентивирусов, использовать 500 мкг / мл неомицина.
  5. Через 2 недели отбора, кластеры EGFP экспрессирующие клетки ММ появится; собирают клетки центрифугированием (1000 х г, 5 мин) и расширить их ОПМ-2 EGFP и RPMI-8226 EGFP сублиний для экспериментов (раздел 2 и 3).

2. 3D-модель множественной миеломы Сфероид

  1. Типа я Холод раствора коллагена и 10 х DMEM, оп лед.
  2. Смешайте 1/10 объема 10 х DMEM среды в коллагеновой матрице; добавить NaOH (0,2 N), чтобы нейтрализовать кислотную коллагеновую раствора до рН 7,4; магазин коллаген / средний решение на льду.
  3. Смешайте трансгенные линии клеток ММ (OPM-2 EGFP или RPMI-8226 EGFP; 250000 за сфероида,) с мезенхимальных клеток человека (50000 клеток / сфероида, то есть, 30 мкл капли).
  4. Центрифуга смесь клеток в 15 мл пробирки (1000 хг, 5мин), добавить холодную подготовленный коллагена смесь (1 мл) к осадку клеток и хорошо перемешать (с 1000 мкл кончика).
  5. Сразу пипетки 30 мкл смеси коллагена / клеток (100 мкл кончика) в 24-луночный планшет по стерильным парафиновой пленки и позволить клеток / коллагена смесь для полимеризации в течение 30 мин при 37 ° С (см фиг.1А).
  6. Наложение MM сфероиды с 1 мл культуральной среды, содержащей 1, 10 и 100 нм Бортезомиб (см фиг.1В).
  7. После 72 ч инкубации при 37 ° С, сфероиды документафлуоресценции стереомикроскопия (рис 1С).
  8. Передача каждого сфероид с помощью щипцов с широкими плоскими губками в реакционную трубку для измерения GFP (рис 1D).

3. 3D Множественная миелома модели ксенотрансплантата в CAM

  1. Выдержите куриные яйца в специальном инкубаторе для птиц яйца на 37 ° C и 70% влажности в течение трех дней.
  2. После этого открытые яйца и эмбрионы передачи в стерилизуют этанолом, квадрат, 10-см пластиковой весом лодки с клеточной культуры пластины крышкой и инкубировать "экс ово" для дальнейших шести дней, так что САМ способен развивать (рис 2А).
  3. Типа I Холод раствора коллагена и 10 х DMEM на льду, смесь 1/10 объема 10 х DMEM среде в коллагеновой матрице, добавить NaOH (0,2 N), чтобы нейтрализовать кислотную коллагеновую раствора до рН 7,4; магазин коллаген / средний решение на льду.
  4. Смешайте клеточных линий трансгенных мм (OPM-2 EGFP илиRPMI-8226 EGFP; 250000 в сфероида,) с мезенхимальных клеток человека (50000 клеток / сфероид).
  5. Центрифуга клетки в 15 мл пробирки (1000 XG, 5мин; для каждого испытуемого соединения 1 флакона), добавьте 1 мл холодного подготовленную смесь коллагена с препаратом (при желаемой рабочей концентрации) к осадку клеток и хорошо перемешать (с 1000 мкл кончика).
  6. Поместите коллагена падает (30 мкл каждый) на парафином в 6 также паштет в течение 30 мин, чтобы позволить полимеризации внеклеточного матрикса при 37 ° С.
  7. Передача "onplants", начиная с шага 3.6 с использованием щипцов для необработанной поверхности САМ (2 см от эмбриона) от 9-дневных эмбрионов куриных (4 onplants для каждого эмбриона курицы, рис 2B)
  8. Через 5 дней роста в естественных условиях в яйцо инкубатор при 37 ° С и 70% влажности, ксенотрансплантатах документа флуоресценции стереомикроскопии (рис 2С). Эвтаназии куриные эмбрионы гипотермией при 4 ° С в холодильнике в течение 5 часов.
  9. Удалить ксенотрансплантаты с нижележащего CAM ткани глазного ножницами и щипцы с широкими плоскими челюстями. Используйте их для измерения GFP (раздел 4, рис 2D) или для иммуногистохимического анализа кровеносных сосудов и / или вторжение опухолевых клеток (раздел 5).

4. Количественное определение белка EGFP методом ИФА

  1. Передача каждого сфероида мм или ксенотрансплантата вырезали в 0,5 мл буфера РИПА содержащий 200 мкг / мл ингибиторов протеазы.
  2. Перемешать сфероид / ксенотрансплантат с ткани гомогенизатора на льду.
  3. Выполните три замораживания / оттаивания-циклов в жидком азоте и 37 ° С на водяной бане.
  4. Центрифуга гомогената при температуре 4 ° С в течение 20 мин (12000 г) и хранения супернатанты.
  5. Развести образцы 1:20 в буфере для анализа (200 мкл) из комплекта ELISA. Измерьте GFP-уровни коммерческой GFP ELISA набор с использованием биотинилированных анти-GFP антитела, в соответствии с протоколом производителя.

5. Immunohistochemical Анализ сосудов и вторжение в опухолевых клетках

  1. Исправление вырезали ксенотрансплантатов с кулачковым области в 4% параформальдегид O / N при 4 ° С.
  2. Место назначения ксенотрансплантатов в заливочных кассет и передавать их в ткани вложения станции с увеличением градуированной серии спирта (50%, 70%, 80%, 95% этанола, ксилол и парафин; каждый шаг 60 мин).
  3. Раздел ксенотрансплантатов (5 мкм) с использованием настольной поворотного микротома. Выпекать парафиновых срезов на стеклах O / N на 56 ° C.
  4. Deparaffinize разделы по убывающей градуированной алкоголя серии в бидистиллированной воде (ксилол, 95%, 80%, 70%, 50% этанола, дважды дистиллированной воде; каждый шаг 10 мин).
  5. Выполнение извлечение антигена на водяной бане (95 ° C, 20 мин) с раствором извлечения антигена (citrate- буфера, рН 7,0, объем 100 мкл).
  6. Блок активности эндогенной пероксидазы с 100 мкл 3% H 2 O 2 / метанол в течение 30 мин.
  7. Блок-секций в PBS, содержащий10% фетальной сыворотки теленка в течение 45 мин (объем 100 мкл).
  8. Пятно в течение 1 часа с 100 мкл первичного антитела (1 мкг / мл), разведенного в PBS, содержащий 1% фетальной телячьей сыворотки при комнатной температуре.
  9. После промывки 3 раза в PBS, инкубируют в течение 1 ч с биотинилированного вторичного антитела (0,1 мкг / мл) в PBS, содержащий 1% фетальной телячьей сыворотки при комнатной температуре.
  10. После промывки 3 раза в PBS цветную реакцию с раствором авидин / биотин-комплекс (ABC) и диаминобензидина (DAB) подложки в соответствии с инструкциями производителя.
  11. 5.11. Остановить реакцию путем переноса разделов двойной дистилляции воды, контрастирующая с гематоксилином и смонтировать разделы с синтетическим монтажа среды.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

В пробирке анализа целевых соединений в 3D Множественная миелома сфероидных анализов

Из-за ограничения культивирования первичных ММ клетки человека в пробирке мы установили новые 3D-модели культуры в пробирке для линий ММ клеток человека делает использование внеклеточной матрицы роста и благоприятной первичных мезенхимных клеток человека из костного мозга (рис 1а, б). EGFP линии трансгенных клеток ММ позволяют визуализировать и кол...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Разработка новых терапевтических агентов для огнеупорной ММ требует меньше времени и средств в естественных систем, чтобы оценить чувствительность клеток ММ человека к наркотикам. До сих пор, только несколько в естественных систем для доклинической оценки новых анти-миеломы терапии. Все они имеют свои ограничения для крупномасштабного скрининга библиотек соединений 29.

Лучшие современные модели для клеток ММ человека весьма иммунные дефицитные мыши 7,13,30 и Турция эмбрионы 29.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы не имеют конкурирующие финансовые интересы

Благодарности

Авторы хотят поблагодарить г-жу Корнелию Хейс за ее прекрасную техническую помощь в иммуногистохимии и подготовке куриных эмбрионов. Эта работа была поддержана Австрийским научным фондом (грант FWF No P19552) и Европейским союзом (проект ЕС FP7 Optatio No: 278570).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
RPMI-8226 клеткиDSMZACC 9STR профилированные
OPM-2 клеткиDSMZACC 50STR профилированные
мезенхимальные стволовые клетки человека PromoCellPC-C-12974
HEK293FT ячейки InvitrogenR700-07
RPMI1640 MediumSigma AldrichR0883
Фетальная бычья сыворотка  HyCloneThermoScientificSH30070.03
L-Glut- Pen-Strepping растворSigmaG6784
DMEM MediumGibco31966
NEAASigma Life SciencesM7145
Трансфекционная среда/Opti-MEM Gibco51985
eGFP лентивирусные частицыGeneCopoeiaLPP-EGFP-LV105Готовые к применению вирусные частицы
pLenti6/V5Dest6 eGFP векторInvitrogenPN 35-1271от авторов
ViralpowerTM упаковочный микс ИнвитрогенP/N 35-1275
Реагент для трансфекции/Липофектамин 2000Инвитроген11668-027
БластицидинИнвитрогенR210-01
НеомицинБиохромA2912
Коллаген-Тип1  Крысиный хвостBD Biosciences354236
порошок DMEMLife TechnologiesArt.Nr. 10338582
плитидепсинPharmamar
bortezomibLKT Lab., Inc.B5871
SPF-белые куриные яйцаЧарльз РиверОплодотворенные  белые Леггорн  куриные яйца
Пластиковые весовые лодочкиneoLabArt.Nr. 1-1125для экс-ово-культуры
Петридиш квадрат (Крышки)SimportD210-16для экс-ово-культуры
RIPA Buffer (10x)Cell Signaling#9806
Protease Таблетки ингибитораRoche11 836 170 001
Complete Mini EDTA-free GFP
ELISACell Biolabs, Inc.AKR-121
Histocette IISimportM493-6
PFA  37%Roth7398.1
DPBSLonzaBE17-512F
Абсолют этанолаNormapur20,821,321
Roti-HistolRothArt.Nr.6640.4
ParaplastSigmaA6330
Предметные стекла микроскопа SuperFrostR. Langenbrinck Арт.-Nr.
Labor- u. Medizintechnik03-0060
DakoCytomation Wash Buffer 10xDakoCytomationCode-Nr.
S 3006
Target Retrieval Solution (10x)   pH 6,1DAKOCode-Nr.
S 1699
H2O2Merck
m-a-hu клон ASMA 1A4DAKOM0851
m-a-hu CD138 клон MI15DAKOM7228
m-a-hu клон Vimentin V9DAKOM0725
m-a-hu клон Desmin D33DAKO  M0760
m-a-hu Ki67  клон MIB-1   ДАКО  M7240
биотинилированный козий - антимышиный IgGVector Laboratories Inc.BA-9200
Vectastain Elite ABC KitVector Laboratories Inc.# PK-6100
FAST DAB Набор таблеток.Sigma Biochemicals# D4293
Mayer' s haemalaun solutionMerck1,092,490,500
Roti HistokittRothArt.Nr.6638.2
Настольный ротационный микротомThermo Electron, Shandon Finesse ME+
Станция для встраивания тканейLeica, TP1020
Инкубатор для яицGrumbach BSS160
Стереофлуоресцентный микроскоп, оснащенный подключенным цифровым фотоаппаратом (Olympus E410) и гибким холодным светом;Olympus, SZX10
Ultra Turrax ГомогенизаторIKA T10

Ссылки

  1. Kuehl, W. M., Bergsagel, P. L. Multiple myeloma: evolving genetic events and host interactions. Nat.Rev.Cancer. 2 (3), 175-187 (2002).
  2. Kumar, S. K., Gertz, M. A. Risk adapted therapy for multiple myeloma: back to basics. Leuk.Lymphoma. , (2014).
  3. Prideaux, S. M., Conway, O. E., Chevassut, T. J. The genetic architecture of multiple myeloma. Adv.Hematol. 2014, 864058(2014).
  4. Chauhan, D., et al. A novel orally active proteasome inhibitor ONX 0912 triggers in vitro and in vivo cytotoxicity in multiple myeloma. Blood. 116 (23), 4906-4915 (2010).
  5. Kuehl, W. M. Mouse models can predict cancer therapy. Blood. 120 (2), 238-240 (2012).
  6. Nefedova, Y., Gabrilovich, D. Mechanisms and clinical prospects of Notch inhibitors in the therapy of hematological malignancies. Drug Resist.Updat. 11 (6), 210-218 (2008).
  7. Yaccoby, S., Barlogie, B., Epstein, J. Primary myeloma cells growing in SCID-hu mice: a model for studying the biology and treatment of myeloma and its manifestations. Blood. 92 (8), 2908-2913 (1998).
  8. Dazzi, F., et al. Normal and chronic phase CML hematopoietic cells repopulate NOD/SCID bone marrow with different kinetics and cell lineage representation. Hematol.J. 1 (5), 307-315 (2000).
  9. Lock, R. B., et al. The nonobese diabetic/severe combined immunodeficient (NOD/SCID) mouse model of childhood acute lymphoblastic leukemia reveals intrinsic differences in biologic characteristics at diagnosis and relapse. Blood. 99 (11), 4100-4108 (2002).
  10. Feuring-Buske, M., et al. Improved engraftment of human acute myeloid leukemia progenitor cells in beta 2-microglobulin-deficient NOD/SCID mice and in NOD/SCID mice transgenic for human growth factors. Leukemia. 17 (4), 760-763 (2003).
  11. Pearce, D. J., et al. AML engraftment in the NOD/SCID assay reflects the outcome of AML: implications for our understanding of the heterogeneity of AML. Blood. 107 (3), 1166-1173 (2006).
  12. Li, M., et al. Combined inhibition of Notch signaling and Bcl-2/Bcl-xL results in synergistic antimyeloma effect. Mol.Cancer Ther. 9 (12), 3200-3209 (2010).
  13. Tassone, P., et al. A clinically relevant SCID-hu in vivo model of human multiple myeloma. Blood. 106 (2), 713-716 (2005).
  14. Ranga, A., Gjorevski, N., Lutolf, M. P. Drug discovery through stem cell-based organoid models. Adv.Drug Deliv.Rev. 69-70, 19-28 (2014).
  15. Pereira, R. F., Barrias, C. C., Granja, P. L., Bartolo, P. J. Advanced biofabrication strategies for skin regeneration and repair. Nanomedicine.(Lond). 8 (4), 603-621 (2013).
  16. Fischbach, C., et al. Engineering tumors with 3D scaffolds). Nat.Methods. 4 (10), 855-860 (2007).
  17. Boulland, J. L., Halasi, G., Kasumacic, N., Glover, J. C. Xenotransplantation of human stem cells into the chicken embryo. J.Vis.Exp. (41), (2010).
  18. Deryugina, E. I., Quigley, J. P. Chapter 2. Chick embryo chorioallantoic membrane models to quantify angiogenesis induced by inflammatory and tumor cells or purified effector molecules. Methods Enzymol. 444, 21-41 (2008).
  19. Deryugina, E. I., Quigley, J. P. Chick embryo chorioallantoic membrane model systems to study and visualize human tumor cell metastasis. Histochem.Cell Biol. 130 (6), 1119-1130 (2008).
  20. Kern, J., et al. GRP-78 secreted by tumor cells blocks the antiangiogenic activity of bortezomib. Blood. 114 (18), 3960-3967 (2009).
  21. Ribatti, D., Nico, B., Vacca, A., Presta, M. The gelatin sponge-chorioallantoic membrane assay. Nat.Protoc. 1 (1), 85-91 (2006).
  22. Ribatti, D. The chick embryo chorioallantoic membrane as a model for tumor biology. Exp.Cell Res. , (2014).
  23. Dohle, D. S., et al. Chick ex ovo culture and ex ovo CAM assay: how it really works. J.Vis.Exp. (33), (2009).
  24. Kobayashi, T., et al. A chick embryo model for metastatic human prostate cancer. Eur.Urol. 34 (2), 154-160 (1998).
  25. Koop, S., et al. Fate of melanoma cells entering the microcirculation: over 80% survive and extravasate. Cancer Res. 55 (12), 2520-2523 (1995).
  26. Martowicz, A., Spizzo, G., Gastl, G., Untergasser, G. Phenotype-dependent effects of EpCAM expression on growth and invasion of human breast cancer cell lines. BMC.Cancer. 12, 501(2012).
  27. Martowicz, A., et al. EpCAM overexpression prolongs proliferative capacity of primary human breast epithelial cells and supports hyperplastic growth. Mol.Cancer. 12, 56(2013).
  28. Geraerts, M., Willems, S., Baekelandt, V., Debyser, Z., Gijsbers, R. Comparison of lentiviral vector titration methods. 6, 34(2006).
  29. Farnoushi, Y., et al. Rapid in vivo testing of drug response in multiple myeloma made possible by xenograft to turkey embryos. Br.J.Cancer. 105 (11), 1708-1718 (2011).
  30. Wunderlich, M., Krejci, O., Wei, J., Mulloy, J. C. Human CD34+ cells expressing the inv(16) fusion protein exhibit a myelomonocytic phenotype with greatly enhanced proliferative ability. Blood. 108 (5), 1690-1697 (2006).
  31. Hideshima, T., Mitsiades, C., Tonon, G., Richardson, P. G., Anderson, K. C. Understanding multiple myeloma pathogenesis in the bone marrow to identify new therapeutic targets. Nat.Rev.Cancer. 7 (8), 585-598 (2007).
  32. Parikh, M. R., Belch, A. R., Pilarski, L. M., Kirshner, J. A three-dimensional tissue culture model to study primary human bone marrow and its malignancies. J.Vis.Exp. (85), (2014).
  33. Schuler, J., Ewerth, D., Waldschmidt, J., Wasch, R., Engelhardt, M. Preclinical models of multiple myeloma: a critical appraisal. Expert.Opin.Biol.Ther. 13, Suppl 1. S111-S123 (2013).
  34. Kirshner, J., et al. A unique three-dimensional model for evaluating the impact of therapy on multiple myeloma. Blood. 112 (7), 2935-2945 (2008).
  35. Jilani, S. M., et al. Selective binding of lectins to embryonic chicken vasculature. J.Histochem.Cytochem. 51 (5), 597-604 (2003).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

GFPGFPI
Создание человека Множественная миелома модели ксенотрансплантата в Курица по изучению роста опухоли, инвазии и ангиогенеза
Свяжитесь с нами
Рекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

Авторские права © 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.