Создание человека Множественная миелома модели ксенотрансплантата в Курица по изучению роста опухоли, инвазии и ангиогенеза

Agnieszka Martowicz; Johann Kern; Eberhard Gunsilius; Gerold Untergasser

doi:10.3791/52665

Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Создание человека Множественная миелома модели ксенотрансплантата в Курица по изучению роста опухоли, инвазии и ангиогенеза

12.7K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/52665

⸱

1 мая 2015 г.

Agnieszka Martowicz^*¹^,⁴ , Johann Kern^*¹^,² , Eberhard Gunsilius¹ , Gerold Untergasser¹^,³

¹Department of Internal Medicine V, Innsbruck Medical University, ²Oncotyrol GmbH, ³Tyrolean Cancer Research Institute, ⁴Division of Vascular Biology, Department of Medical Biochemistry and Biophysics, Karolinska Institute

^* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

Человеческие множественной миеломы (ММ) клетки требует поддерживающей микроокружение мезенхимальных клеток и компонентов внеклеточного матрикса для выживания и пролиферации. Мы установили в естественных условиях куриного эмбриона модели с привитых человека миеломы и мезенхимальных клеток для изучения эффектов противоопухолевых лекарств на рост опухоли, инвазии и ангиогенеза.

Аннотация

Множественная миелома (ММ), злокачественное заболевание плазматических клеток, остается неизлечимым и новые препараты, необходимые для улучшения прогноза пациентов. Из-за отсутствия микросреды костей и авто / паракринная факторов роста клетки ММ человека трудно культивировать. Таким образом, существует настоятельная необходимость в создании собственно в пробирке и в естественных системах культивирования для изучения действия новых терапевтических клеток ММ на человека. Здесь мы представляем модель для роста клетки множественной миеломы человека в сложной 3D-среде в пробирке и в естественных условиях. Клеточные линии ММ ОПМ-2 и RPMI-8226 были трансфицированы выразить трансгена GFP и культивировали в присутствии мезенхимных клеток человека и коллагена типа I матрицы в виде трехмерных сфероидов. Кроме того, сфероиды были привиты на хориоаллантоисной мембране (САМ) куриных эмбрионов и рост опухоли контролировали с помощью стерео флуоресцентной микроскопии. Обе модели позволяют исследование новых терапевтических друGS в сложной 3D окружающей среды и количественного определения массы опухолевых клеток после гомогенизации трансплантатов в трансгенной конкретных GFP-ELISA. Кроме того, кровеносных сосудов, ответы на хозяина и вторжения опухолевых клеток в подстилающей ткани хозяина можно контролировать ежедневно стереомикроскопом и проанализированы иммуногистохимического окрашивания против опухолевых клеток человека (Ki-67, CD138, Виментин) или настенной клеток-хозяев, охватывающих кровеносных сосудов (десмин / ОУРА).

В заключение, onplant система позволяет исследовать рост клеток ММ и ангиогенез в сложной среде 3D и позволяет скрининг новых терапевтических соединений, направленных на выживание и размножение клеток ММ.

Введение

Множественная миелома (ММ) характеризуется пролиферацией злокачественных плазматических клеток в костном мозге, поражением костей и иммунодефицитом ¹. Несмотря на наличие новых вариантов лечения, таких как ингибиторы протеасом (бортезомиб) и иммуномодулирующие препараты (помалидомид и леналидомид), ММ по-прежнему остается неизлечимым злокачественным новообразованием с мрачным прогнозом ². Плохой прогноз может быть объяснен чрезвычайной гетерогенностью клонов клеток ММ, которая способствует вариабельному ответу на терапию, в частности, при длительном лечении и давлении отбора клонов ММ.

Доклинические испытани....