В этом отчете представлено подробное описание трансплантации мышиной тимины от мышей разного возраста от донорских мышей разного возраста под почечную капсулу реципиентов иммунодефицитных мышей. Целью данного подхода является моделирование развития Т-клеток и событий отбора тимуса in vivo.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Выделение и Трансплантация различных престарелых мышиных тимуса трансплантатов.
* These authors contributed equally
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Механизмы, которые регулируют эффективность тимуса выбора остаются плохо определены. Метод, представленный здесь позволяет в естественных условиях анализов разработки и отбора Т-клеток, специфичных для себя и чужеродных антигенов. Подход влечет за собой имплантацию тимуса трансплантатов, полученных от различных старых мышей в иммунодефицитных SCID получателей. За сравнительно короткий период времени получатели полностью восстанавливают Т-клеток, полученных из тимуса имплантированного трансплантата. Только тимоцитов посева тимус во время изоляции испытывают выбор и развиваться в зрелые Т-клеток. Таким образом, изменения в природе и специфичность Т-клеток привитых в зависимости от возрастных тимуса событий может быть оценена. Хотя техническая экспертиза необходима для успешного тимуса трансплантации, этот метод обеспечивает уникальную стратегию для изучения в естественных условиях широкий спектр патологий, которые из-за или в результате аномальной функции тимуса и / или гомеостазесть.
Введение
Тимус является органом, в котором критические события в развитии Т-клеток происходят 1. Резиденты тимоциты, на перестройкой Т-клеточного рецептора (TCR) α и β генов, пройти серию взаимодействий с lymphostromal и антиген-представляющих клеток (APC) в коркового и мозгового регионов тимуса 2. Тимуса позитивной селекции опосредуется корковых эпителиальных клеток тимуса (TEC) для получения тимоцитов, которые распознают антигенные пептиды в контексте принимающей главного комплекса гистосовместимости (МНС) класса I и II молекул 2-3. После тимуса влечет за собой негативный отбор очистку аутореактивных тимоцитов, приводимый от взаимодействия с....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Мышиные исследования были одобрены уходу и использованию комитета Институциональные животных (IACUC) из Университета Северной Каролины в Чапел-Хилл и все по уходу за животными была в соответствии с руководящими принципами IACUC.
1. Подготовка новорожденных и взрослых Thymi
- Подготовьте все реагенты и оборудования перед эвтаназии мышей-доноров.
- Стерилизовать хирургических инструментов в автоклаве или других соответствующих методов. Все хирургические процедуры должны выполняться под колпаком с ламинарным потоком для поддержания стерильных условиях и избежать загрязнения. Соберите необходимые инструменты для извлечения из thymi мышей-доноров.....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Успех этой процедуры зависит от минимальной хирургической травмы, а также точного позиционирования трансплантата под почечную капсулу. Тимуса трансплантата должны быть сокращены, чтобы обеспечить соответствующего размера тимуса разделы для последующей трансплантации, как показано на рисунке 1. После схеме на рисунке 1, thymi от новорожденных или взрослых мышей могут быть использованы для успешной пересадки субкапсулярной с последовательной и воспроизводимые результаты приживления Т-клет.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
События, регулирующие отбор тимуса, плохо изучены. Последние исследования продемонстрировали онтогенные изменения в эффективности отбора. Сочетание этого подхода с различными трансгенными мышами-донорами и реципиентами тимуса еще больше облегчит исследования по выявлению событий и параметров, которые регулируют отбор тимуса. Примечательно, что трансплантация тимуса используется для лечения и контроля Т-клеточных расстройств и нарушений тимуса, наблюдаемых, например, у атимических младенцев без функциональных Т-клеток и у.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы не имеют конкурирующих финансовых интересов, которые можно было бы раскрыть.
Благодарности
Эта работа была поддержана финансированием, полученным от Национальных институтов здравоохранения (1R01AI083269).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Этанол | Decon Laboratories | 2705HC | |
| PBS | GIBCO | 14190-144 | pH 7.4 |
| Раствор бетадина | Purdue Products | 67618-150-17 | |
| Игла 18 калибра | BD | 305195 | |
| шовные материалы (1.0 метрические) | Ethicon | J493G | 18" (45см) |
| Зажимы для ран AUTOCLIP (9мм) | Clay Adams® Марка | 427631 | |
| Переводная пипетка | Fisher Scientific | 13-711-20 | Стерильная, одноразовая |
| мышь анти-CD3 Ab | eBioscience | 11-0031-85 | Клон: 1452C11 |
| Мышь анти-CD4 Ab | eBioscience | 48-0042-82 | Клон: RM4-5 |
| Мышь анти-CD8 Ab | eBioscience | 25-0081-82 | Клон: 53-6.7 |
| Ланцет | Medipoint | Goldenrod 4 мм | |
| Тихоокеанский апельсин Сукцинимидиловый эфир, соль триэтиламмония | Invitrogen | P30253 | |
| 96-луночные круглые боттонные полипропиленовые пластины | Corning | 3365 | |
| 1,2 мл полипропиленовые кластерные тубы | Corning | 4401 | |
| 5 мл полипропиленовые трубки с круглым дном | BD | 352002 | |
| 40 мкМ Нейлоновые элементы Ситечко | Falcon | 352340 | |
| 16% раствор параформальдегида, ЭМ класс | Услуги электронной микроскопии | 15710 | опасная |
| оптическая мазь Puralube | Fisher Scientific | NC0138063 | |
| лимфолит | Cedarlane | CL5030 | |
| 60 мм чашка для клеточной культуры | Corning | 430196 | 60 мм x 15 мм, стерильный |
Ссылки
- Kappler, J. W., Roehm, N., Marrack, P. T cell tolerance by clonal elimination in the thymus. Cell. 49 (2), 273-280 (1987).
- Takahama, Y. Journey through the thymus: stromal guides for T-cell development and selection. Nat. Rev. Immunol. 6, 127-135 (2006).
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
Больше статей
Трансплантация тимусного трансплантатавыделение тимуса мышиимплантация под капсулу почкианализ методом проточной цитометрииоценка приживления Т-клетокиммунодефицитные мыши-реципиентыисследование тимусной селекциихирургическое позиционирование трансплантатареконституция периферических Т-клетоквозрастные изменения тимуса
