Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Живая съемка никотина индуцированной сигнализации кальция и высвобождение нейромедиаторов Наряду вентральной гиппокампа Аксоны

8.7K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/52730

⸱

24 июня 2015 г.

 ,  , 
1Department of Neurobiology and Behavior, Stony Brook University, 2Department of Pharmacological Science, Stony Brook University

В этой статье

Краткое содержание

Мы разработали генно-химерный препарат вентральной цепи гиппокампально-прилежащего in vitro, который позволяет проводить прямую визуализацию в реальном времени для анализа пресинаптических механизмов опосредованной синаптической передачи никотиновых ацетилхолиновых рецепторов (nAChR). Этот препарат также обеспечивает информативный подход к изучению пре- и постсинаптических механизмов синаптической пластичности.

Аннотация

Устойчивое усиление аксональной сигнализации и увеличение высвобождения нейротрансмиттеров за счет активации пресинаптических никотиновых ацетилхолиновых рецепторов (nAChR) является важным механизмом нейромодуляции ацетилхолином (ACh). Трудности с доступом к зондированию сигнальных механизмов в интактных аксонах и на нервных окончаниях как in vitro, так и in vivo ограничили прогресс в изучении пресинаптических компонентов синаптической пластичности. В данной работе мы представляем генно-химерный препарат вентрального контура гиппокампа (vHipp)-accumbens (nAcc) in vitro, который позволяет проводить прямую визуализацию в реальном времени для анализа как пре-, так и пост-синаптических компонентов передачи, при этом избирательно варьируя генетический профиль пре- и пост-синаптических нейронов. Мы демонстрируем, что проекции из микросрезов vHipp в качестве пресинаптического аксонального входа образуют множественные надежные глутаматергические синапсы с постсинаптическими мишенями, дисперсными нейронами из nAcc. Обнаруживается пресинаптическая локализация различных подтипов nAChR и контролируются пресинаптическая передача никотиновой сигнализации, опосредованная синаптической передачей, с помощью одновременной электрофизиологической записи и визуализации живых клеток. Этот препарат также обеспечивает информативный подход к изучению пре- и постсинаптических механизмов глутаматергической синаптической пластичности in vitro.

Введение

Холинергическая модуляции возбудимости цепи способствует фундаментальных аспектов познания, и изменены холинергическая модуляции особенностью нейродегенеративных и психоневрологических расстройств, включая болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, шизофрения и наркомании 1-4. Установлен механизм холинергической облегчению синаптической передачи в ЦНС с помощью прямой активации nAChRs, локализованных на пресинаптических сайтов. Активация этих пресинаптических рецепторов приводит к увеличению внутриклеточного Са 2+ ([Ca 2+] I), в пресинаптических терминалах - как непосредственно, из-за относительно высокой проводимости кальция определенных подтипов нАХР, так и косвенно, через внутриклеточные сигнальные каскады 5, тем самым повышая высвобождение нейромедиаторов. В самом деле, активация пресинаптических nAChRs был связан с изменениями в выпуске широкого спектра нейротрансмиттеров, включая глутамат, ГАМК, ацетилхолина,й допамина 6-10. Хотя этот процесс был изучен с помощью электрофизиологических косвенно методы в различных синапсов, оптические репортеры [Са 2+] я и переработка синаптических пузырьков позволяют более прямой и временно точное измерение пресинаптических явлений.

Пресинаптических локализации nAChRs была убедительно показал, с прямым иммуно-золота маркировки nAChRs на электронно-микроскопических (ЭМ) уровне 11,12. Некоторые другие методы также были использованы для решения локализацию Nachr косвенно, в том числе определения местоположения nAChRs subunit- флуоресцентный белок химер в культивируемых нейронах 13,14, электрофизиологические записи нАХР токов в синаптических окончаний 15,16, мониторинг никотина индуцированных изменений в [Са 2+] я в синаптических нервных терминалов по живого изображения клеток 17 и косвенного контроля высвобождения нейромедиатора в синаптической терминала поживые методы визуализации клеток с люминесцентными показателей, в том числе экзоцитоза синаптических пузырьков просмотренных стириловых амфипатических красителей FM (FM1-43 и FM4-64) и / или synapto-pHluorin и конкретных флуоресцентных нейромедиаторов журналистами, таких как CNiFERs для АХ и iGluSnFr для глутамата 18-20. В целом, эти современные подходы для выявления пресинаптических локализации nAChRs сложны и требуют специальных систем и методов, чтобы надежно идентифицировать и физиологического мониторинга до синаптической активности.

Здесь мы опишем протоколов и оборудование для в пробирке сокультуры системы брюшной гиппокампа (vHipp) - прилежащем ядре (ССАС) цепи, которая обеспечивает прямой доступ для определения и анализа пред- и пост-синаптические компоненты синаптической передачи. Мы показываем примеры пресинаптической локализации nAChRs и живых клеток визуализации нАХР опосредованной Са 2+ сигнализации и нейромедиатор релиз Алонг vHipp аксоны. Естественно (и простой) расширение протокола, представленного здесь подготовка пред- и пост-синаптических контактов, состоящих из нейронов разных генотипов. Таким образом вклад конкретного генного продукта в пред- и / или постсинаптических механизмов модуляции может быть оценена непосредственно.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все эксперименты на животных были проведены в соответствии с Национальными Институтами Здоровья Руководства по уходу и использованию лабораторных животных (NIH публикации N: 80-23, пересмотренная в 2012 году) и исследования были одобрены Институциональные уходу и использованию животных для научных комитетов в Стони Brook University (# 1618 и # 1792).

1. vHipp-ССАС Synaptic Co-культуры

  1. Жертва мышей (послеродовой день 0 - 3, от дикого типа (WT) или α7 nAChRs трансгенной линии мышей) с СО 2. Обезглавьте каждый щенок и сохранить хвост в 1,5 мл центрифужную пробирку для пост-факто генотипирования. Выполните следующие действия в стерилизованную капотом.
  2. Удалить верхнюю часть черепа с ножницами и щипцами, чтобы подвергнуть весь мозг. Начиная с этапе, когда кору головного мозга часть друг от друга каудально, получить корональной раздел, который содержит задние кору включая vHipp 5,21 при вскрытии микроскопом.
  3. Проанализируйте VТкани полоски Hipp, содержащие область СА1-подлежащая ткань в соответствии с развивающейся мозга мыши атлас 22 (рис 1А). Переход к 35-мм блюдо культуры, содержащий холодную питательных сред (4 ° C), нарезать небольшими тонкими ломтиками (около 100 мкм × 100 мкм) microslices.
  4. Предварительно инкубируют 12 мм поли-D-лизином / ламинин покрытием покровные стекла внутри 24-луночных планшетах для культуры тканей с культуральной среде (~ 500 мкл) в течение по крайней мере 30 мин в термостате при 37 ° С. Удалить носители до посева microslices.
  5. Тарелка с огневой полировкой пипетки Пастера в центре покровного стекла с минимальным количеством информации (~ 50 мкл, содержащий ~ 20 штук microslices), чтобы облегчить прикрепление эксплантов. Пластинчатые vHipp microslices происходящие из одного животного (либо + / + или - / - генотип трансгенной линии α7) на каждой покровное.
  6. После эксплантов оседают на покровное, мягко добавить дополнительные средства массовой информации (~ 100 мкл) по гое стенки так, чтобы уровень средств массовой информации является достаточно высоким, чтобы полностью покрыть эксплантов на периферии, а не те, в центре покровного стекла.
  7. После вывода / N инкубации в 37 ° C, 5% СО 2 инкубатора, разогнать ССАС нейроны из эмбриональных дней 18 послеродовой день 1 мас мышей и добавить к эксплантов.
    1. Рассеките из ССАС тканей в соответствии с развивающейся мозга мыши атласа 20 (рис 1B).
    2. Нарезать небольшими кусочками (около 500 мкм × 500 мкм) microslices и передачи в 15 мл трубки.
    3. Treat с 0,25% трипсина (2 мл) в течение 15 мин при 37 ° С. Стирка ткани куски три раза холодным стиральной сред (5 мл, 4 ° С), а затем одной стирки в холодной культуральной среды (5 мл, 4 ° С). Разрешить суспензии в покое в течение 5 мин в каждой стадии промывки, а затем сливают супернатант осторожно.
    4. Диссоциируют клетки путем осторожного растирани в 2 мл культуральной среды со слегка огневой полировкой пипетки Пастера.
    5. ТрансFER клеточной суспензии в другую 15 мл пробирку и центрифугируют при 2000 х оборотов в минуту в течение 5 мин. Удалить супернатант и ресуспендирования клеток в культуральной среде в количестве 1 мл на 6 детенышей. Дисперсные клеток осторожно пипеткой в ​​СМИ несколько раз с огневой полировкой пипетки Пастера.
    6. Добавить 0,25 мл клеток рассеянных ССАС к каждому покровного с vHipp эксплантов.
    7. Поддержание культур в увлажненной 37 ° C, 5% CO 2 инкубаторе. Поместите культуры пластины на смоченной стерильной марлевой подушечки механически стабилизировать и поддерживать влажность, способствуя образованию синапсов.

2. Иммуноцитохимия

  1. Fix культур (5 - 7 дней в пробирке) в 4% параформальдегид / 4% сахарозы / PBS (~ 500 мкл на покровное, 20 мин, RT).
  2. Проницаемыми культур с 0,25% Triton X-100 / PBS (~ 500 мкл на покровное, 5 мин, RT).
  3. Блок культуры с 10% нормальный осел сыворотки в PBS (~ 500 мкл на покровное, 30 мин, RT) до antibodу окрашивание. Инкубируйте с первичными антителами O / N при 4 ° С. Используйте следующие первичные антитела: анти nAChRs (α 4 -ECD 1: 500; против α-субъединицы 5, 1: 500), анти-везикулярного транспортера глутамата 1 (1: 250), анти-GAD65 (1: 100).
  4. Вымойте первичных антител с PBS (3 раза / ~ 500 мкл на покровное, 5 мин), а затем инкубировать культур в вторичными антителами конъюгированных с Alexa 488 (~ 500 мкл на покровное, 1: 500) или Alexa 594 (~ 500 мкл на покровное , 1: 500) в течение 1 ч при 37 ° С.
  5. Выдержите культур в αBgTx конъюгированных с Alexa 594 (~ 500 мкл на покровное, 1: 1000 в культуральной среде) в течение 45 мин при 37 ° С до фиксации для маркировки поверхности α7 * nAChRs.
  6. Монтаж и уплотнение покровные.
  7. Захват изображений с флуоресцентного микроскопа, снабженного План-Apochromat целей (20X с 0,8 NA или 63x нефти с 1,4 NA) и ПЗС-камеры.

3. FM1-43 основе везикулярного Fusion

  1. Поддержание культур (5 - 7 дней в пробирке) в камере изображений, установите камеру на спиннинг диск конфокальной микроскопии. Постоянно заливать (1 мл / мин) с коктейлем HBS при комнатной температуре.
  2. Остановка перфузии и нагрузки культур с 10 мкМ FM1-43 в 56 мМ K + ACSF (~ 500 мкл) в течение 90 сек (окрашивание), мыть внешний краситель от 15 мин с Са 2+ свободный HBS, содержащего ADVASEP-7 (0,1 мм) чтобы убрать мусор связанный с мембраной FM1-43.
  3. Стимулирование культур с 56 мМ K + ACSF (~ 500 мкл) без FM1-43 в течение 120 сек (Обесцвечивание), перезагрузить культур с FM1-43 использованием тех же условий, и мыть снова Ca 2+ свободный HBS, содержащего ADVASEP-7 для 15 мин.
  4. Приобретение FM1-43 флуоресцентные изображения с вращающимся диском конфокальной микроскопа, снабженного цели план-Apochromat (60X воды с 1,4 NA, возбуждения 488 нм, эмиссии 530 нм) и захвата изображения с ПЗС-камерой.
  5. Сбор исходных изображений флуоресценции FM1-43 (каждые 2 сек в течение 1 мин), Как предварительно никотина управления; применять никотин (1 мкМ) по быстрой перфузии (2 мл / мин) в течение 1 мин, а затем промыть никотин с HBS коктейль. Держите покадровой захвата изображений до, во время и после нанесения никотина каждые 2 сек в течение 5 мин.
  6. Количественно FM1-43 интенсивности флуоресценции (F до окрашивания) и после (F) Обесцвечивание никотина приложение на каждом синаптической бутона.
  7. Рассчитать общую сумму высвобождаемым FM1-43 флуоресценции вдоль аксонов vHipp путем количественного различия интенсивности флуоресценции FM1-43 до и после нанесения никотина (; F = F -F окрашивание Обесцвечивание). Анализ фракции снижению интенсивности флуоресценции после никотина со следующим уравнением: F = уменьшение%; F / F окрашивание.

4. Кальций изображений

  1. Промыть культур (5 - 7 дней в пробирке) быстро с нормальной HBS, а затем загрузить культур с 5 мкМ Fluo-4 Ca 2+ индикатора (АМ эфира) и 0,02% Pluronic F-127 в HBS (2 мл) в течение 30 мин при 37 ° С и 5% СО 2.
  2. Промойте Fluo-4 решение с HBS (3 раза / 5 мин). Вернуться культур в инкубатор (37 ° С / 5% СО 2) в течение не менее 30 мин.
  3. Поддержание культуры в той же камере изображений и тех же условиях, как описано в разделе FM1-43 основе везикулярного синтеза (см шаг 3.1).
  4. Сбор Fluo-4 флуоресцентные изображения аксонов проекции из vHipp микро-кусочков с целью план-Apochromat (60X воды с 1,4 NA, возбуждения 488 нм, эмиссии 530 нм) и ПЗС-камеры.
  5. Сбор исходных Fluo-4 флуоресценции изображений (каждые 10 с в течение 2 мин), как предварительно никотина контроля, применяются никотин (1 мкМ) по быстрой перфузии (2 мл / мин) в течение 1 мин, а затем промыть никотин с HBS коктейль. Держите покадровой захвата изображений до, во время и после нанесения никотина каждые 10 сек в течение 30 мин.
  6. Сохранить все кадры из сырья Fluo-4 флуоресценции изображений, экспорта в серииИзображения TIFF формат для дальнейшего анализа.
  7. Соберите интегральной интенсивности Fluo-4 флуоресценции вдоль аксонов vHipp до и после нанесения никотина.
  8. Нормализация интегрированную интенсивность флуоресценции с помощью следующего уравнения:; F / F 0 = (FF 0) / F 0, где F 0 является фоном коррекцией предварительно никотина интенсивности флуоресценции и интегрированным Р интегральная интенсивность флуоресценции вдоль vHipp аксонов в каждый момент времени после нанесения никотина. Анализ и построить нормированную интегральную интенсивность флуоресценции.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Подготовка занятых состоит из генов химерного сопутствующих культур vHipp-ССАС схем в пробирке. Прогнозы, исходящие от vHipp microslices, как предварительно синаптической аксонов ввода, можно сделать синаптические контакты с пост-синаптических мишеней, рассеянных нейронов ССАС. Никотин индуцированных устойчивый (≥ 30 мин) содействие глутаматергической передачи от ССАС нейронов, иннервируемых vHipp аксоны 21 и длительное кальций сигнализации вдоль аксонов vHipp 5 с помощью пресинаптических ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Подготовка совместно культуры описано повторно капитулирует брюшной гиппокампа-прилежащем схем в пробирке. Это позволяет подготовка относительно проста и надежный экспертиза пространственных и временных профилей, с помощью которых активация пресинаптических nAChRs вызывают улучшенной передачи глутаматергическую 5, 21.

Совместных культурах определяется как рост различных специфических типов клеток в одной тарелке, которая может обеспечить физиологические условия в проб...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы не имеют ничего раскрывать.

Благодарности

Мы благодарим Yehui Qin и Mallory Myers за техническую поддержку. Мы также благодарим доктора Сигизмунда Хука за предоставленное нам антитело против α4-ECD. Эта работа поддержана грантом Национального института здравоохранения NS22061 L. W. R.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
1. Питательные среды (50 мл)
Нейробазальные GIBCO1088802248 мл
Добавки B-27GIBCO0080085-SA1 мл
Пенициллин-стрептомицинGIBCO10908-0100,5 мл
Добавка GlutaMAXGIBCO35050-0610,5 мл
Нейротрофический фактор мозга (BDNF)GIBCO15140-12220 нг/мл
2. Моющее средство (HBSS, 100 мл)
HBSS, без кальция, без магния, без фенола красного;GIBCO14175-09599 мл
HEPES ( 1M)GIBCO15630-1301 мл
3. HEPES буферизированный физиологический раствор  (HBS)    pH=7,3
NaClSigmaS9888 135 мМ
KClSigmaP9333 5 мМ
MgCl2SigmaM8266 1 мМ
CaCl2,SigmaC1016 2 мМ
HEPESSigmaH3375 10 мМ
ГлюкозаСигмаG0350500 10 мМ
4. HBS Коктейль для визуализации в реальном времени pH=7.3
NaClSigmaS9888 135 мМ
KClSigmaP9333 5 мМ
MgCl2SigmaM8266 1 мМ
CaCl2,SigmaC1016 2 мМ
HEPESSigmaH3375 10 мМ
ГлюкозаСигмаG0350500 10 мМ
ТетродотоксинTocris10782 &m; M
bicucullineTocris13110 µ M
D-AP-5Tocris10550 &микро; M
CNQXTocris104520 & микро; M
LY341495Tocris120910 µ M
5. Без кальция  HBS    pH=7,3
NaClSigmaS9888 135 мМ
KClSigmaP9333 5 мМ
MgCl2SigmaM8266 1 мМ
HEPESSigmaH3375 10 мМ
ГлюкозаСигмаG0350500 10 мМ
6. 56 мМ Калий ACSF pH=7.4
NaClSigmaS9888119 мМ
KClSigmaP933356 мМ
MgSO4.7HSigmaM18801.3 мМ
CaCl2SigmaC10162.5 мМ
NaH2PO4SigmaS82821 мМ
NaHCO3SigmaS576126.2 мМ
ГлюкозаСигмаG0350500 10 мМ

Ссылки

  1. Changeux, J. P., et al. Brain nicotinic receptors: structure and regulation, role in learning and reinforcement. Brain Res Brain Res Rev. 26 (2-3), 198-216 (1998).
  2. Levin, E. D. Nicotinic receptor subtypes and cognitive function. J Neurobiol. 53 (4), 633-640 (2002).
  3. Dani, J. A., Bertrand, D. Nicotinic acetylcholine receptors and nicotinic cholinergic mechanisms of the central nervous system. Annu Rev Pharmacol Toxicol. 47, 699-729 (2007).
  4. Mineur, Y. S., Picciotto, M. R. Nicotine receptors and depression: revisiting and revising the cholinergic hypothesis. Trends Pharmacol Sci. 31 (12), 580-586 (2010).
  5. Zhong, C., Talmage, D. A., Role, L. W. Nicotine elicits prolonged calcium signaling along ventral hippocampal axons. PloS one. 8 (12), e82719(2013).
  6. McGehee, D. S., Heath, M. J., Gelber, S., Devay, P., Role, L. W. Nicotine enhancement of fast excitatory synaptic transmission in CNS by presynaptic receptors. Science. 269 (5231), 1692-1696 (1995).
  7. Gray, R., Rajan, A. S., Radcliffe, K. A., Yakehiro, M., Dani, J. A. Hippocampal synaptic transmission enhanced by low concentrations of nicotine. Nature. 383 (6602), 713-716 (1996).
  8. Dickinson, J. A., Kew, J. N., Wonnacott, S. Presynaptic alpha 7- and beta 2-containing nicotinic acetylcholine receptors modulate excitatory amino acid release from rat prefrontal cortex nerve terminals via distinct cellular mechanisms. Mol Pharmacol. 74 (2), 348-359 (2008).
  9. Zappettini, S., Grilli, M., Salamone, A., Fedele, E., Marchi, M. Pre-synaptic nicotinic receptors evoke endogenous glutamate and aspartate release from hippocampal synaptosomes by way of distinct coupling mechanisms. Br J Pharmacol. 161 (5), 1161-1171 (2010).
  10. Zappettini, S., et al. Presynaptic nicotinic alpha7 and non-alpha7 receptors stimulate endogenous GABA release from rat hippocampal synaptosomes through two mechanisms of action. PloS one. 6 (2), e16911(2011).
  11. Fabian-Fine, R., et al. Ultrastructural distribution of the alpha7 nicotinic acetylcholine receptor subunit in rat hippocampus. J Neurosci. 21 (20), 7993-8003 (2001).
  12. Jones, I. W., Barik, J., O'Neill, M. J., Wonnacott, S. Alpha bungarotoxin-1.4 nm gold: a novel conjugate for visualising the precise subcellular distribution of alpha 7* nicotinic acetylcholine receptors. J Neurosci Methods. 134 (1), 65-74 (2004).
  13. Nashmi, R., et al. Assembly of alpha4beta2 nicotinic acetylcholine receptors assessed with functional fluorescently labeled subunits: effects of localization, trafficking, and nicotine-induced upregulation in clonal mammalian cells and in cultured midbrain neurons. J Neurosci. 23 (37), 11554-11567 (2003).
  14. Drenan, R. M., et al. Subcellular trafficking, pentameric assembly, and subunit stoichiometry of neuronal nicotinic acetylcholine receptors containing fluorescently labeled alpha6 and beta3 subunits. Mol Pharmacol. 73 (1), 27-41 (2008).
  15. Wu, J., et al. Electrophysiological, pharmacological, and molecular evidence for alpha7-nicotinic acetylcholine receptors in rat midbrain dopamine neurons. J Pharmacol Exp Ther. 311 (1), 80-91 (2004).
  16. Parikh, V., Ji, J., Decker, M. W., Sarter, M. Prefrontal beta2 subunit-containing and alpha7 nicotinic acetylcholine receptors differentially control glutamatergic and cholinergic signaling. J Neurosci. 30 (9), 3518-3530 (2010).
  17. Nayak, S. V., Dougherty, J. J., McIntosh, J. M., Nichols, R. A. Ca(2+) changes induced by different presynaptic nicotinic receptors in separate populations of individual striatal nerve terminals. J Neurochem. 76 (6), 1860-1870 (2001).
  18. Richards, C. I., et al. Trafficking of alpha4* nicotinic receptors revealed by superecliptic phluorin: effects of a beta4 amyotrophic lateral sclerosis-associated mutation and chronic exposure to nicotine. J Biol Chem. 286 (36), 31241-31249 (2011).
  19. Colombo, S. F., Mazzo, F., Pistillo, F., Gotti, C. Biogenesis, trafficking and up-regulation of nicotinic ACh receptors. Biochem Pharmacol. 86 (8), 1063-1073 (2013).
  20. St John, P. A. Cellular trafficking of nicotinic acetylcholine receptors. Acta Pharmacol Sin. 30 (6), 656-662 (2009).
  21. Zhong, C., et al. Presynaptic type III neuregulin 1 is required for sustained enhancement of hippocampal transmission by nicotine and for axonal targeting of alpha7 nicotinic acetylcholine receptors. J Neurosci. 28 (37), 9111-9116 (2008).
  22. Jacobowitz, D. M., Abbott, L. C. Chemoarchitectonic Atlas of the Developing Mouse Brain. , CRC Press. New York. (1998).
  23. Betz, W. J., Mao, F., Bewick, G. S. Activity-dependent fluorescent staining and destaining of living vertebrate motor nerve terminals. J Neurosci. 12 (2), 363-375 (1992).
  24. Amaral, E., Guatimosim, S., Guatimosim, C. Using the fluorescent styryl dye FM1-43 to visualize synaptic vesicles exocytosis and endocytosis in motor nerve terminals. Methods Mol Biol. 689, 137-148 (2011).
  25. Garduno, J., et al. Presynaptic alpha4beta2 nicotinic acetylcholine receptors increase glutamate release and serotonin neuron excitability in the dorsal raphe nucleus. J Neurosci. 32 (43), 15148-15157 (2012).
  26. Guo, J. Z., Liu, Y., Sorenson, E. M., Chiappinelli, V. A. Synaptically released and exogenous ACh activates different nicotinic receptors to enhance evoked glutamatergic transmission in the lateral geniculate nucleus. J Neurophysiol. 94 (4), 2549-2560 (2005).
  27. Szabo, S. I., Zelles, T., Vizi, E. S., Lendvai, B. The effect of nicotine on spiking activity and Ca2+ dynamics of dendritic spines in rat CA1 pyramidal neurons. Hippocampus. 18 (4), 376-385 (2008).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Визуализация живых клетокконфокальная микроскопия с вращающимся дискомникотиновые ацетилхолиновые рецепторыподготовка генных химерцепь вентрального гиппокампа и прилежащего ядраокрашивание FM 1-43кальциевый индикатор Fluo-4
Живая съемка никотина индуцированной сигнализации кальция и высвобождение нейромедиаторов Наряду вентральной гиппокампа Аксоны
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.