Методическая статья

Выявление заболевания, связанного α-синуклеина-повышенной ELISA в мозге трансгенных мышей с гиперэкспрессией Human A53T Мутация α-синуклеина

10.7K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/52752

⸱

30 мая 2015 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Neurodegenerative Diseases Unit, ANSES - French Agency for Food, Environmental and Occupational Health & Safety, 2Indicia Production, 3AJ Roboscreen GmbH, 4Epidemiology Unit, ANSES - French Agency for Food, Environmental and Occupational Health & Safety, 5Experimental Facilities, ANSES - French Agency for Food, Environmental and Occupational Health & Safety

В этой статье

Краткое содержание

Описан метод ELISA, предлагающий новый количественный подход. Он специфически обнаруживает связанный с заболеванием α-синуклеин (αSD) в трансгенной модели мыши (M83) синуклейнопатии с использованием нескольких антител, направленных либо против фосфорилированной в положении Ser129 формы αS, либо против С-концевой части белка.

Аннотация

В дополнение к установленным методам, как вестерн-блоттинга, новые методы необходимы, чтобы быстро и легко количественно, ассоциированных с заболеваниями α-синуклеина (alpha; S D) в экспериментальных моделях synucleopathies. Трансгенной линии мышей (M83) более-выражения A53T & alpha; S человека и спонтанно развивается резкое клиническое фенотип между восемью и 22 месяцев, характеризующихся симптомами, включая потерю веса, упадок сил, и серьезные нарушения двигателя был использован в данном исследовании. Для молекулярных анализов alpha; S D (заболевания, связанные alpha; S) в этих мышей, ИФА был разработан специально для количественного & alpha; S D в больных мышей. Анализ центральной нервной системы в этой модели мыши показали наличие D & alpha; S, главным образом, в каудальных областях мозга и спинного мозга. Там не было никаких различий в распределении & alpha; S D между различных экспериментальных условиях, приводящих к клинической болезни, т.е. в uninoculованные и, как правило старения трансгенных мышей и мышей, привитых с экстрактами мозга от больных мышей. Конкретное определение иммунореактивности & alpha; S D с использованием антитела против Ser129 фосфорилируется & alpha; S от ELISA существу коррелируют с полученной помощью Вестерн-блоттинга и иммуногистохимии. Неожиданно, аналогичные результаты были получены с несколькими другими антителами против С-концевой части & alpha; S. Распространение & alpha; S D, предполагая участие в "прионов, как" механизм, таким образом, может быть легко контролируется и количественно в этой модели мыши с использованием подхода, ELISA.

Введение

Большинство существующих методов для обнаружения болезни, связанной с альфа-синуклеином (αSD), в экспериментальных моделях болезни Паркинсона (БП), таких как иммуногистохимия или западный блот, являются трудоемкими и не являются количественными. Это нейродегенеративное заболевание характеризуется агрегацией альфа-синуклеина в основном в виде включений, содержащих агрегированную форму обычно растворимого пресинаптического белка αS1,2 (тельца Леви и нейриты Леви). Обычно только слабо фосфорилированный αS гиперфосфорилируется в остатке серина 129 в этих включениях3 и может быть обнаружен антителами, специфически направленными против фосфорилированного по Ser129 αS, таким образом обеспечивая надежный маркер патологии.

Недавние исследования предполагают, что "прионподобный" механизм может быть вовлечен в распространение агрегации αS в нервной системе пораженного пациента4,5. Эти исследования сообщили об ускорении синуклейнопатии путем инокуляции мозговых экстрактов, содержащих αSD, в трансгенную модель мыши (M83), экспрессирующую мутированный человеческий белок αS, связанный с тяжелым моторным нарушением, возникающим по мере старения мышей6. Таким же образом, внутримозговая инокуляция агрегированного рекомбинантного αS в той же трансгенной модели мыши M83 подтвердила ускоренное агрегирование5. Индукция отложений фосфорилированного αS также была зарегистрирована после инокуляции диких мышей C57Bl/6 фибриллярным рекомбинантным αS или мозговыми экстрактами пациентов с диффузной болезнью Льюи7,8. Недавно Сасино и др.9 отметили, что после инъекции фибриллярного человеческого αS можно вызвать распространенную и прогрессирующую формацию включений αS в мозге мышей M83, но не в трансгенных мышах E46K или нетрансгенных мышах, в которых вызванные включения αS были временными и в основном ограниченными местом инъекции. Недавние исследования на обезьянах подтвердили распространение агрегатов αS после инокуляции экстрактов, полученных от пациентов с БП, у видов, более близких к людям10.

Связь между изменениями αS и болезнью Паркинсона предполагает, что αSD является потенциальным биомаркером болезни Паркинсона11. Недавнее исследование показало обнаружение олигомерных растворимых агрегатов альфа-синуклеина в человеческой цереброспинальной жидкости (ЦСЖ) и плазме как потенциального биомаркера болезни Паркинсона на основе конвенциональной системы сэндвичного ELISA с использованием одного и того же антитела для захвата и обнаружения αS12. На основе того же метода мультимерные белки были распознаны в биологических образцах, включая мозг, потому что существуют множественные копии эпитопов, присутствующих в собранных формах13. Очень недавно патологический αS в ЦСЖ пациентов с доказанной патологией тельца Леви был обнаружен с помощью комплекта ELISA с высокоспецифичным антителом против αSD (5G4) и иммунопреципитации14. Эти методы могут дифференцировать пациентов с БП/ДЛБ от других типов деменции.

"Прионподобное" распространение агрегации αS было далее изучено в трансгенной модели мыши M83 с использованием подхода ELISA, который был разработан для специфического идентифицирования αSD15. В этом исследовании мы сообщаем о детальном протоколе ELISA, используемом для количественного обнаружения αSD в больных мышах (независимо от того, были ли они инокулированы αSD из больных мышей M83) и особенно в мозговых областях, специально нацеленных на патологический процесс в этой трансгенной модели мыши M834.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все процедуры и протоколы с участием животных были в соответствии с Директивой ЕС 86/609 / EEC и ратифицированной придет, французского национального комитета для рассмотрения этики в животных экспериментирования (протокол 11-0043). Животных содержали и уход в АНСЕС одобрил экспериментальные установки в Лионе (утверждение Б 69387 0801).

1. Получение мышей

  1. Эвтаназии мышей путем внутрибрюшинной инъекции летальной дозой пентобарбитала натрия.
  2. Получить весь мозг от черепа мыши и поместите его в 35 мм пластиковой чашке Петри на льду, пока добыча.
  3. Выписка шейного отдела спинного мозга.
    Примечание: Извлечение & alpha; S или от одной из половин мозга после сагиттальной срезов или из вскрытых мозга мыши, доступна после экспериментов, приведенных в таблице 1.
ЭкспериментальT Мыши
Посевной (мозг эквивалент) 		Период выживания
(Точек на дюйм) 		Медиана / максимальная выживаемость
(дней) 		& alpha; S обнаружения разработки по ELISA
/ ВБ / IHC
1 Неинокулированную мышей 441 ± 166 419/736 8/8
2 Инокулировали мышей (0,2 мг) 150 ± 52 140/241 9/9

Таблица 1. Список экспериментов, выполненных на мышах M83. Прививки проводили в течение 6 недель эксперимента 2 в стриато-кортикальной области с 20 мкл гомогената мозга больного мыши (1% вес / объем в глюкозы 5%), после того, как анестезия 6 недель гомозиготных мышей M83 на 3% изофлуран ингаляции. дюйм: дней после inoculвания.

2. & alpha; S Выписка из мозга Половинки

  1. Сагиттально сократить мозг, чтобы получить две половинки. Взвесьте каждую половину в ribolysis пробирку, содержащую мелющих шаров.
  2. Подготовьте высоким содержанием соли (HS) буфера, содержащего 50 мМ Трис-HCl, рН 7,5, 750 мМ NaCl, 5 мМ ЭДТА, 1 мМ DTT, 1% фосфатазы и ингибитор протеазы коктейли. Добавить соль высокого буфер половин мозга, чтобы получить 20% (вес / объем) гомогенаты.
  3. Подготовка образцов из половин мозга с помощью механического гомогенизатора при 6,0 м / с в течение 23 сек в два раза. После первого 23 сек гомогенизации, поместить пробирки, содержащие гомогенатах на льду в течение 2 мин до второго цикла 23-сек.
  4. Центрифуга образцов при 1000 х г в течение 5 мин, чтобы устранить неразмолотом фрагменты мозга. Восстановление супернатанты, разделить на 200 мкл аликвоты и хранить их при температуре -80 ° C для последующего анализа ELISA.

3. & alpha; S Выписка из рассеченной мозга регионов

  1. Проанализируйтевесь мозг в 35 мм пластиковой чашке Петри на льду с низким лупы питания (8X увеличение), используя два forcipes, концы которых хранятся вместе, за исключением, когда рассекает гиппокамп. Не превышать 10 минут, чтобы сохранить целостность мозга. Поместите правую сторону мозга и получить следующие участки мозга в следующем порядке:
    1. Отдельная один из двух обонятельных луковиц, используя щипцы, размещенные позади лампочки. Снять его с мозгом с помощью вниз движения. Повторите эту операцию для второй лампы.
    2. Аккуратно клин щипцы между двумя кор и переместить его вперед, чтобы облегчить диссоциацию двух кор. Ведение мозг в месте с одной щипцами, используйте другой, чтобы отделить кору от гиппокампа.
    3. Расположите щипцов на 2 мм ниже коры. Поддержание нежный давление на щипцы, пока верхняя часть гиппокампа не видно. Слезьте первую часть коры, и повторите со второй частью. Используйте пинцет, чтобы отделить два корначиная с гиппокампа и движется по направлению к передней части мозга.
    4. Расположите открытый щипцы вокруг одного из гиппокампа. Закройте щипцы в нижней части гиппокампа затем осторожно удалить его, восстанавливается в максимально возможной степени. Повторите процедуру для второго гиппокампа.
    5. Расположите открытый щипцы ниже один из полосатых и аккуратно отделить его от мозга. Используйте пинцет, чтобы удалить оставшуюся кору полосатого тела. Повторите эту процедуру для второго стриатуме.
    6. С помощью щипцов, чтобы аккуратно нажать на 2 мм по контуру мозжечка, чтобы облегчить отделение от мозжечка головного мозга. Поместите щипцы позади мозжечка и удалить его путем перемещения щипцы вперед.
    7. Используйте широкую часть щипцов, чтобы поднять средний мозг для того, чтобы ясно видеть, где он присоединяется к ствола мозга. Сделайте вертикальный разрез на стыке затем снимите ствол мозга.
    8. Расположите щипцы за среднего мозга, которые яы состоит из четырех округлых структур. Надрезать вертикально до тех пор, средний мозг не был полностью отделен от остальной мозга.
  2. Подготовьте гомогенатах переменной% (вес / объем) в HS буфера, в зависимости от количества доступных тканей, т.е. 5% гомогената на вес от 10 до 30 мг, 10% за весом от 30 до 80 мг, и 20% при весе выше 80 мг.
    1. Добавить адекватный объем HS буфера рассеченных областей мозга, чтобы получить ожидаемый% гомогената.
    2. Вихревые и убедитесь, что ткани полностью погружен в буфер HS.
    3. Однородный образцов, полученных из вскрытых участках головного мозга или шейного отдела спинного мозга с помощью гомогенизатора тканей, состоящей из боросиликатного стекла трубки и двух пестики, А и В.
    4. Налейте каждый регион мозга, чтобы быть раздавлен прямо в трубку. Вставка пестик A в трубу и отвода его. Повторите это движение около десяти раз, чтобы отделить ткань. Затем используйте пестик В до Соказанию в измельчение ткани с еще 20 движений. Передача гомогенатах в 1,5 мл пробирку с 1 мл пипетки.
  3. Центрифуга образцов при 1000 х г в течение 5 мин при 4 ° С, чтобы устранить любые неразмолотом фрагменты мозга. Получить супернатанты, разделить их на 200 мкл аликвоты и хранить их при температуре -80 ° C для последующего анализа ELISA.

4. Выявление & alpha; S методом ИФА

  1. Развести антитела покрытий 0,01 нг / мл. Используйте либо анти-alpha; S кроличьи поликлональные или моноклональные антитела, клон 42 в 50 мМ Na 2 CO 3 / NaHCO 3 буфера (рН 9,6).
  2. Шерсть 96-луночных микропланшетов 100 мкл на лунку раствора для покрытия этого, и оставить на 4 ° CO / N. Использование поликлональное антитело кролика против & alpha; S в растворе для покрытия для ИФА с использованием антител обнаружения syn514, клонировать 42, LB509, AS11, 4D6 или 8A5. Использование анти-alpha; S моноклональное антитело клон 42 в виде раствора для нанесения покрытияв сочетании с анти-pSer129 & alpha; S антитела обнаружения.
    Примечание: Если необходимо, пластины могут храниться при температуре 4 ° С в течение одной недели перед ELISA выполняется.
  3. Использование промывки планшетов мыть пластины пять раз с 300 мкл фосфатно-солевом буфере с 0,05% Твин-20 (PBST) на лунку. Из этого шага вперед, инкубационный при комнатной температуре.
  4. Добавить 200 мкл PBS, Т20 блокирующего буфера на лунку. Встряхивают в течение 1 ч при 150 об. Промыть пластины пять раз PBST.
  5. Развести гомогенатах мозга (разведение 1: 100 в 20% гомогенатах, 1:50 из 10% гомогената и 1:25 из 5% гомогенатах в PBST BSA 1%), и добавить 100 мкл в каждую лунку. Тогда инкубировать в течение 2 часов при встряхивании при 150 оборотах в минуту. Промыть пластины пять раз PBST.
  6. Добавить различные антитела обнаружения & alpha; S в PBST с 1% BSA в разведениях, указанных в Списке материалов. Инкубировать в течение 1 ч при 150 об. Промыть пластины пять раз PBST.
  7. Добавить либо анти-mouse или анти-IgG кролика HRP конъюгаты разбавляли 1: 8000 в PBST с добавлением 1% BSA в течение 1 ч при встряхивании при 150 оборотах в минуту. Промыть пластины пять раз PBST.
  8. Добавить 100 мкл 3,3 ', 5,5'-тетраметилбензидин раствора (TMB) в каждую лунку и инкубировать в течение 15 мин в темноте при встряхивании при 150 оборотах в минуту.
  9. Остановить реакцию, добавив 100 мкл 1 N HCl на лунку затем измерить оптическую плотность при 450 нм с микропланшетного.
  10. Для анализа данных, вычесть значение ОП, полученное в хорошо со всеми реагентами, за исключением каких-либо образцов мозга мыши (а) заготовки из значений оптической плотности, измеренных для каждого из анализируемых образцов.

5. Картирование эпитопов

  1. Выполнение картирование эпитопов в соответствии с методом, описанным Osman 16. Вкратце, местная пептиды человеческой последовательности α-синуклеина, содержащего 12 аминокислот на нитроцеллюлозу с 10 перекрывающихся аминокислот.
  2. Блок 50 мМ Трис / 150 мМ NaCl буфером с рН 10, содержащим 0,05% Tween 20 и 5% обезжиренное молоко. Инкубируйте антитела в блокирующем растворе при концентрации 2 мкг антитела на мл при 2-10 ° CO / N.
  3. Промыть мембраны три раза с помощью 50 мМ Трис / 150 мМ NaCl, рН-буфер 10, содержащим 0,05% Твин 20. инкубировать с козьим антителом против мышиного IgG HRP конъюгата. Вымойте мембраны еще пять раз, используя тот же буфер, то пятно, используя вестерн-блот ТМВ окрашивания комплект.

6. Статистический анализ

  1. Используйте R программного обеспечения и nlme пакет для выполнения смешанных эффектов регрессии для моделирования ОП. Для каждого сравнения, выполнять смешанную модель эффект регрессии. Используйте фиксированный эффект отличить от бессимптомных симптоматическое групп.
  2. Использование случайный эффект с учетом изменчивости повторений для заданного мыши. Проверьте гомоскедастичность путем изучения остатков и при необходимости использовать функции дисперсии моделировать структуру дисперсия внутри группы ошибок в соответствии с Пинейро и Бейтс 17. Установите 0,05 как значимости пороге P.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

В этом исследовании, ИФА, используемые конкретно определены, ассоциированных с заболеваниями alpha; S (& alpha; S D) в гомогенатах мозга, полученных в буфер с высоким содержанием соли от больных мышей M83. Использование антитела специфически распознавать pSer129 & alpha; S (р = 0,0074), ИФА легко отличает старый, больной мышей (> 8 месяцев) от молодых (2-5 месяцев), здоровых мышей M83 (рис 1). Несколько другие антитела показали высокие сигналы аналогично (> 0,6 ОП) только в мозг...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Использование ELISA был продемонстрирован в частности, обнаружить & alpha; S D непосредственно из гомогенатов мозга мыши в течение заболевания в модели трансгенной мыши M83. В самом деле, это ИФА может легко отличить больные M83 мышей от здоровых мышей M83, используя только целые гомогенаты мозга в высокой концентрации соли буфера.

Наиболее важные шаги для успешных результатов, используя этот ИФА являются: правильно рассекает различные регионы мозга мыши по разработке необходи...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы не заявляют об иных конкурирующих интересах.

Благодарности

Авторы хотели бы поблагодарить Дэмиен Gaillard для прививок и последующей деятельности в экспериментах на животных. Эта работа была поддержана АНСЕС (Французского агентства по продовольствия, окружающей среды и охраны здоровья и безопасности) и грантом Фонда Франции Паркинсона.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
LB509Abcamab27766Detection antibody 1/2,000
AS11Produced at AnsesDetection antibody 1/1,000
4D6Abcamab1903Detection antibody 1/2,000
PSer129Abcamab59264Detection antibody 1/3,000
PSer129 EP1536YAbcamab51253Detection antibody 1/1,000
syn514Abcamab24717Detection antibody 1/500
clone 42BD Biosciences610787Coating and detection antibody (1/2,000)
8A5Provided by Dr. AndersonDetection antibody 1/2,000
polyclonal anti-αsyn antibodyMilliporeAB5038PCoating antibody
Anti-mouse IgG HRP conjugateSouthern Biotech1010-05
Anti-rabbit IgG HRP conjugateSouthern Biotech4010-05
Goat anti-mouse IgG HRP conjugateDianova115-035-164
HS bufferAdjust at pH 7.5 and keep at 4 °C
  • Tris-HCl 50 mM
Euromedex26-128-3094-B
  • NaCl 750 mM
Euromedex1112-A
  • EDTA 5 mM
EuromedexEU0007-B
  • DTT 1 mM
Sigma43815
PBSAdjust at pH 7.5
  • Na2HPO4 1 mM
Euromedex1309
  • KH2PO4 1.5 mM
Euromedex2018
  • NaCl  137 mM
Euromedex1112-A
  • KCl 2.7 mM
EuromedexP017
Tween 20Euromedex2001-C
BSASigmaA7906
DTT 1 mMSigma43815Stock solution 100 mM, toxic
1% phosphatase cocktailPierce78428
1% protease inhibitor cocktailRoche04 693 132 00150x concentrated
Microplate MaxiSorpTMThermo Scientific442404
Tampon carbonate 50 mM pH 9.6
  • Na2CO3, 10H2O
Sigma713602.86 g/L
  • NaHCO3
Merk63293.36 g/L, pH 9.6
Superblock T20 PBS blocking bufferPierceE6423H10x concentrated
TMBSigmaT0440Used for ELISA
TMBAnalytik Jena AG847-0104200302Used for epitope mapping
HCl 1 NChimie plus40030
RibolyserThermoFast prep FP120keep on ice at this step
Grinding tubesBiorad355-1197
Plate washerTecanColumbus Pro
Plate readerBioradModel 680
Low power magnifier VWR630-10628X magnification
Forceps Dumont#7WPI14097For dissection steps
Transfer pipette 1ml SamsoSamso043231
1.5 ml tubesDutscher033290

Ссылки

  1. Goedert, M., Spillantini, M. G., Del Tredici, K., Braak, H. 100 years of Lewy pathology. Nat Rev Neurol. 9, 13-24 (2013).
  2. Waxman, E. A., Giasson, B. I. Specificity and regulation of casein kinase-mediated phosphorylation of alpha-synuclein. J Neuropathol Exp Neurol. 67, 402-416 (2008).
  3. Anderson, J. P., et al. Phosphorylation of Ser-129 is the dominant pathological modification of alpha-synuclein in familial and sporadic Lewy body disease. J Biol Chem. 281, 29739-29752 (2006).
  4. Mougenot, A. L., et al. Prion-like acceleration of a synucleinopathy in a transgenic mouse model. Neurobiol Aging. 33, 2225-2228 (2012).
  5. Luk, K. C., et al. Intracerebral inoculation of pathological alpha-synuclein initiates a rapidly progressive neurodegenerative alpha-synucleinopathy in mice. J Exp Med. 209, 975-986 (2012).
  6. Giasson, B. I., et al. Neuronal alpha-synucleinopathy with severe movement disorder in mice expressing A53T human alpha-synuclein. Neuron. 34, 521-533 (2002).
  7. Luk, K. C., et al. Pathological alpha-synuclein transmission initiates Parkinson-like neurodegeneration in nontransgenic mice. Science. 338, 949-953 (2012).
  8. Masuda-Suzukake, M., et al. Prion-like spreading of pathological alpha-synuclein in brain. Brain : a journal of neurology. 136, 1128-1138 (2013).
  9. Sacino, A. N., et al. Amyloidogenic alpha-synuclein seeds do not invariably induce rapid, widespread pathology in mice. Acta neuropathologica. 127, 645-665 (2014).
  10. Recasens, A., et al. Lewy body extracts from parkinson's disease brains trigger alpha-synuclein pathology and neurodegeneration in mice and monkeys. Ann Neurol. , (2013).
  11. Foulds, P. G., et al. Phosphorylated alpha-synuclein can be detected in blood plasma and is potentially a useful biomarker for Parkinson's disease. FASEB J. 25, 4127-4137 (2011).
  12. El-Agnaf, O. M., et al. Detection of oligomeric forms of alpha-synuclein protein in human plasma as a potential biomarker for Parkinson's disease. Faseb J. 20, 419-425 (2006).
  13. Lee, H. J., et al. Enzyme-linked immunosorbent assays for alpha-synuclein with species and multimeric state specificities. J Neruosci Meth. 199, 249-257 (2011).
  14. Unterberger, U., et al. Detection of disease-associated alpha-synuclein in the cerebrospinal fluid: a feasibility study. Clin Neuropathol. 33, 329-334 (2014).
  15. Betemps, D., et al. Alpha-synuclein spreading in M83 mice brain revealed by detection of pathological alpha-synuclein by enhanced ELISA. Acta Neuropathol. (Berl). 2, 29(2014).
  16. Osman, A. A., et al. A monoclonal antibody that recognizes a potential coeliac-toxic repetitive pentapeptide epitope in gliadins). Eur J Gastroenterol Hepatol. 13, 1189-1193 (2001).
  17. Pinheiro, J. C., Bates, D. M. Ch. 5. Mixed-Effects Models in S and S-PLUS. Chambers, J. 5, Springer. 206-225 (2000).
  18. Mougenot, A. L., et al. Production of a monoclonal antibody, against human alpha-synuclein, in a subpopulation of C57BL/6J mice, presenting a deletion of the alpha-synuclein locus. J Neruosci Meth. 192, 268-276 (2010).
  19. Specht, C. G., Schoepfer, R. Deletion of the alpha-synuclein locus in a subpopulation of C57BL/6J inbred mice. BMC Neurosci. 2, 11(2001).
  20. Lee, B. R., Matsuo, Y., Cashikar, A. G., Kamitani, T. Role of Ser129 phosphorylation of alpha-synuclein in melanoma cells. J Cell Sci. 126, 696-704 (2013).
  21. Perrin, R. J., et al. Epitope mapping and specificity of the anti-alpha-synuclein monoclonal antibody Syn-1 in mouse brain and cultured cell lines. Neurosci Lett. 349, 133-135 (2003).
  22. Emmanouilidou, E., et al. Assessment of alpha-synuclein secretion in mouse and human brain parenchyma. PLoS One. 6, e22225(2011).
  23. Mougenot, A. L., et al. Transmission of prion strains in a transgenic mouse models overexpressing human A53T mutated alpha-synuclein. J Neuropathol Exp Neurol. 70, 377-385 (2011).
  24. Foulds, P. G., et al. A longitudinal study on alpha-synuclein in blood plasma as a biomarker for Parkinson's disease. Sci Rep. 3, 2540(2013).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Ser129

Похожие статьи