Здесь мы описываем полуинвазивный подход оптической микроскопии для индукции фототромботического сгустка Розовой Бенгалии в соматосенсорной коре мыши in vivo. Описаны технические аспекты процедуры визуализации от индукции фототромботического события до применения и сбора данных.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Роза Бенгалия фототромбоза конфокальной оптической томографии
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Методы визуализации in vivo стали более широко использоваться из-за последних достижений в области красителей и оптических технологий, что позволяет визуализировать клеточные события у интактного животного. Кроме того, способность вызывать физиологические болезненные состояния, такие как инсульт in vivo, повышает его полезность. Описанная здесь методика позволяет проводить физиологическую оценку клеточных реакций в ЦНС после инсульта и может быть адаптирована для других изучаемых патологических состояний. Представленная методика использует лазерное возбуждение светочувствительного красителя Rose Bengal in vivo для индуцирования очагового ишемического события в одном кровеносном сосуде.
Видеопротокол демонстрирует подготовку черепного окна с тонким черепом над соматосенсорной корой у мыши для индукции фототромботического события Роуз Бенгал, сводя к минимуму повреждение основной твердой мозговой оболочки и мозга. Хирургическая подготовка первоначально выполняется под препарирующим микроскопом с помощью специально изготовленной хирургической/визуализационной платформы, которая затем переносится на конфокальный микроскоп, оснащенный адаптером для перевернутого объектива. Представлены репрезентативные изображения, полученные с использованием этого протокола, а также покадровые последовательности индукции инсульта. Этот метод эффективен тем, что одна и та же область может быть повторно визуализирована в последующие дни, что облегчает продольные исследования in vivo патологических процессов после инсульта.
Введение
Техника, описанная разрешений визуализация в естественных условиях клеточных реакций сразу же после индукции бенгалроза фототромбоза в неповрежденной мыши. Бенгальский розовый (4,5,6,7-тетрахлор-2 ', 4', 5 ', 7'-tetraiodofluorescein) является светочувствительный краситель используется, чтобы вызвать ишемический инсульт в моделях на животных (мыши и крысы). После болюсного введения РБ через хвостовую вену и последующего освещения через разбавлять черепа с 564 нм лазерного света, тромб индукционных вызывая физиологическую инсульт 1. Метод был впервые описан Розенблюм и Эль-Саббан в 1977 году, а позже была адаптирована Уотсон в середи....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Примечание: Все процедуры на животных были одобрены уходу и использованию комитета Институциональная животных университета Техаса Научного центра здоровья в Сан-Антонио и согласуются с руководящими принципами прибыть.
1. Обезболивающие для корковых Подготовка
- Наведите в индукции камеры с 2-3% изофлуораном смешивается с кислородом для анестезии. Соблюдайте уменьшение частоты дыхания, как мышь наводится. Зажмите лапу мыши, чтобы определить, является ли мышь готова переехать в носовой конус. Примечание: Уровень наркотизации является важным шагом в любом в естественных условиях подготовки и уход должны быть приняты, чтобы ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Целью этого метода было вызвать ишемический инсульт в моделях на животных (мыши и крысы) после болюсной инъекции RB через хвостовую вену и последующего освещения разбавленной черепа с 561 нм лазерного света. Изображения на рисунке 4 показывают прогрессирование образования сгустка в пределах одного судна при облучении в области 0, 1, 1,5 и 2 мин. До образования сгустка все судно белый из-за сыпучий бенгалроза. После индукции облучения сосуда существует очевидная потемнение частей судна и указывает на инд.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Возможность перевести экспериментальный хода патофизиологии от животного к человеку заявка была сталкивается с неудачей. Тем не менее, использование моделей животных, таких как модели фототромбоза, позволяет улучшить понимание хода патофизиологии и исследование новых терапевтических подходов, чтобы обеспечить нейропротекции после инсульта. Маленькие штрихи корковых и microinfarctions произведенные фототромботической модели клинически значимых субклинического или "тихой" инсульт 13-15, который имеет .......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.
Благодарности
Финансирование этой работы было предоставлено: AG007218 и NIH F32 AG031606.
Изображения были сгенерированы в Core Optical Imaging Facility, который поддерживается UTHSCSA, NIH-NCI P30 CA54174 (CTRC at UTHSCSA) и NIH-NIA P01AG19316.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Реагенты | |||
| Роза Бенгал | Сигма | 330000 | |
| Изофлуран Анестетик | MWI Ветеринарный запас | 088-076 | |
| Vetbond | 1469SB | 1469SB | |
| aCSF | 126 мМ NaCl, 2,5 мМ KCl, 1,25 мМ<суб>2PO<суб>4, 2 мМ MgCl<суб>2, 2 мМ CaCl<суб>2, 10 мМ глюкозы и 26 мМ NaHCO<суб>3 (рН 7,4). | ||
| [header] | |||
| Оборудование | |||
| Ножницы для препарирования | Биопромышленные изделия | 500-410 | |
| Операционные ножницы 14 см | Биопромышленные изделия | 12-055 | |
| Щипцы Dumont High Tech #5 стиль, прямые | Биопромышленные продукты | TWZ-301.22 | |
| LabJack 132X80 | Optosigma Co | 123-6670 | |
| Платформа для Labjack 8X 8 | Optosigma Co | 145-1110 | |
| Держатель для ушей из стереотаксической установки | Stoelting/Cyborg | 51654 | |
| Dispomed Labvent Аппарат для анестезии грызунов | DRE, Inc. | 15001 | |
| Техно IV Изофлуран испаритель | DRE, Inc. | 34001 | |
| F Канистра с воздухом | DRE, Inc | 80120 | |
| Дыхательная трубка для баллона | DRE, Inc | 86111B | |
| Адаптер для грызунов для трубки | DRE, Inc | 891000 | |
| O2 регулятор для кислородных баллонов | DRE, Inc | CE001E | |
| Индукционная камера для грызунов | DRE, Inc | 15004C | |
| Ethicon Silk 6-0; 18 in с иглой P-3 | Шовный материал Express | 1639G | |
| Объектив инвертор Оптический адаптер | LSM технологии | ||
| Foredom дрель Dual voltage 110/120 | Foredom | 134.53 | |
| Meisinger 3.9 мм сверло | Meisinger | (Ref#310 104 001 001 009) |
Ссылки
- Watson, B. D., Dietrich, W. D., Busto, R., Wachtel, M. S., Ginsberg, M. D. Induction of reproducible brain infarction by photochemically initiated thrombosis. Annals of Neurology. 17, 497-504 (1985).
- Rosenblum, W. I., El-Sabban, F.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
