Изолированное сердце крысы является устойчивой моделью ишемического реперфузионного повреждения. Здесь мы описываем процесс забора работающего сердца у крысы с помощью канюляции аорты in situ, перфузии сердца по Лангендорфу, симуляции ишемии-реперфузионного повреждения и окрашивания инфарктом, чтобы подтвердить степень ишемического повреждения.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Индукция и оценка ишемии-реперфузии в Лангендорфа-перфузии сердца крыс
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Биохимические события, связанные с ишемическим реперфузионным повреждением в условиях обострения, имеют большое значение для продвижения новых вариантов лечения инфаркта миокарда и сердечных осложнений торакальной хирургии. Способность некоторых препаратов предупреждать миокард против ишемического реперфузионного повреждения привела к многочисленным клиническим испытаниям с небольшим успехом. Модель изолированного сердца позволяет в режиме реального времени наблюдать за функциональными эффектами ишемического реперфузионного повреждения, включая эффекты различных фармакологических вмешательств, применяемых в любой момент времени до или в пределах окна ишемического реперфузионного повреждения. Поскольку короткие периоды ишемии могут предварять сердце к ишемическому повреждению, проводится канюляция аорты in situ, чтобы обеспечить функциональную оценку непредобусловленного миокарда. Баллон, наполненный физиологическим раствором, помещается в левый желудочек для измерения выработки давления в режиме реального времени. Ишемическое повреждение моделируется прекращением потока перфузионного буфера с последующей реперфузией. Продолжительность как ишемии, так и реперфузии может быть модулирована для изучения биохимических событий в любой момент времени. Несмотря на то, что модель изолированного сердца Лангендорфа не позволяет рассматривать системные события, влияющие на ишемию и реперфузию, она является отличной моделью для изучения острых функциональных и биохимических событий в рамках ишемического реперфузионного повреждения, а также влияния фармакологического вмешательства на пре- и посткондиционирование сердца. Цель этого протокола — продемонстрировать, как выполнять канюляцию аорты in situ и иссечение сердца с последующей ишемией/реперфузионным повреждением в модели Лангендорфа.
Введение
Выяснение событий, лежащих в основе сердечной ответ на оба ишемии и реперфузии имеют важное значение в улучшении лечения инфаркта миокарда и сердечной 1 хирургических процедур, которые требуют пережатия аорты 2. В то время как модели в естественных условиях ишемии реперфузионного повреждения позволяют очень полезный анализ конечной точки, они не столь эффективны для изучения функциональных последствий ишемии реперфузионного повреждения остро в режиме реального времени. Кроме того, в естественных условиях модели ишемии реперфузии обычно производят значительное изменчивость размера инфаркта, и прямые поставки препарата к сердцу в....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Все процедуры, перечисленные здесь были одобрены Комитетом по уходу и использованию животных в институциональная в Медицинском университете Южной Каролины. Эксперименты, описанные здесь, являются острые, эксперименты, не выживания. Таким образом, нет никакой пользы глазной мази и стерильные операционные люкс не требуется. Эвтаназии достигается путем обескровливания при уборке сердца.
1. Экспериментальная Подготовка
- Установите или постоянное давление или постоянная потока Лангендорфа перфузии устройства 4.
- Подготовьте 4 л модифицированного Krebs Хенселейта буфера (в мм: 112 NaCl, 5 KCl, 1,2 MgSO 4,
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Желудочка баллон аппарат левой позволяет мониторинга в режиме реального времени в разработанной заказчиком левого желудочка (рис 1) давления. Как описано выше 7, это давление трассировки может быть использован для вычисления многих параметров функции левого желудочка. Эти расчеты могут быть сделаны в базовой фазе, а также на этапе реперфузии, усредненное по несколько следов в каждой группе, и по сравнению с тем, чтобы определить, приводит ли фармакологическое вмешательство в сердечной предвар.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Изолированных перфузии сердца крысы могут быть успешно использованы для изучения влияния фармакологического вмешательства на сердечную предварительной ишемии реперфузии 9. Тем не менее, существуют некоторые существенные шаги по процедуре, которые должны быть стандартизированы, чтобы обеспечить воспроизводимые результаты. Поддержание температуры 37,4 ° C в системе является критическим, так как даже гипотермию и гипертермии может привести к остановке предварительной подготовки 10,11. Общее время, кот.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.
Благодарности
Эта публикация была поддержана Южная Каролина Клиническая и трансляционных исследований (SCTR) института с академической дома в Медицинском университете Южной Каролины, NIH / NCATS Грант Количество UL1 TR000062. Дальнейшая поддержка была предоставлена В.А. заслуга премии BX002327-01 к DRM. DJH поддержали NIH / NCATS Грант Количество TL1 TR000061 и NIH Grant Номер T32 GM008716. СЭО поддержали NIH Grant Номер T32 HL07260.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Хлорид натрия | Sigma Aldrich | S3014 | |
| Хлорид калия | Sigma Aldrich | P9541 | |
| Сульфат магния | Sigma Aldrich | 203726 | |
| Фосфат калия Диосновные | Sigma Aldrich | RES20765-A7 | |
| Дигидрат хлорида кальция | Sigma Aldrich | C8106 | |
| Sodium Бикарбонат | Sigma Aldrich | S5761 | |
| D-глюкоза | Sigma Aldrich | G8270 | |
| Октановая кислота | Sigma Aldrich | C2875 | |
| 2,3,5-трифенилтетразолия хлорид | Sigma Aldrich | T8877 | |
| Медицинский преобразователь давления | MEMSCAP | SP844 | |
| Перистальтический насос Masterflex | Cole Parmer | EW-07521-40 | |
| Головка насоса Masterflex с легкой нагрузкой | Cole Parmer | EW-07518-10 | |
| Нагреваемая циркуляционная водяная баня | Lauda | M3 | |
| Модуль потока трубок | Transonic | TS410 | |
| Модульная исследовательская консоль | Transonic | T402 | |
| Встроенный датчик расхода | Transonic | ME2PXN | |
| PowerLab Устройство сбора данных | AD | Instruments PL3508 | |
| LabChart Программное обеспечение сбора данных | AD Instruments | MLU60/8 |
Ссылки
- Bainey, K. R., Armstrong, P. W. Clinical perspectives on reperfusion injury in acute myocardial infarction. American Heart Journal. 167 (5), 637-645 (2014).
- Beyersdorf, F. The use of controlled reperfusion strategies....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
