При помощи этой технологии часто включает в пробирке расширения, чтобы создать аутотрансплантатов для регенерации ткани. В этом исследовании способ расширения ткани, регенерации, и реконструкции в естественных условиях была разработана для того, чтобы свести к минимуму обработку клеток и биологических материалов вне тела.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Измельченной ткани в сжатом коллагена: Сотовый содержащих Biotransplant одноместным-ступенчатую реконструктивной Ремонт
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Традиционные методы клеточной экспансии и трансплантации аутологичных клеток для целей тканевой инженерии могут проводиться в специально оборудованных помещениях для культивирования клеток человека. Эти методы включают в себя изоляцию клеток в суспензии одиночных клеток и несколько трудоемких и трудоемких мероприятий перед трансплантацией обратно пациенту. Предыдущие исследования показывают, что само тело может быть использовано в качестве биореактора для клеточного расширения и регенерации тканей с целью минимизации манипуляций ex vivo с тканями и клетками перед трансплантацией пациенту. Целью данного исследования была демонстрация метода забора тканей, выделения непрерывного эпителия, измельчения эпителия на мелкие кусочки и включения их в трехслойный биоматериал. Затем трехслойный биоматериал служил средством доставки, чтобы обеспечить хирургическую обработку, обмен питательными веществами в процессе трансплантата и контролируемую деградацию. Биоматериал состоял из двух внешних слоев коллагена и ядра из механически стабильного и медленно разлагаемого полимера. Измельченный эпителий был включен в один из слоев коллагена перед трансплантацией. Измельчая эпителиальную ткань на мелкие кусочки, можно было разложить кусочки и тем самым стимулировать размножение клеток. После первоначального забора трансплантатов происходит экспансия и реорганизация клеток, а также созревание внеклеточного матрикса, что позволяет врастать капиллярам и нервам и далее созревать внеклеточному матриксу. Этот метод сводит к минимуму манипуляции ex vivo и позволяет проводить забор клеток, подготовку аутотрансплантата и трансплантацию пациенту в качестве простого одноэтапного вмешательства. В будущем расширение тканей может быть инициировано вокруг 3D-формы внутри самого тела, в соответствии с конкретными потребностями пациента. Кроме того, этот метод может быть выполнен в обычных хирургических условиях без необходимости использования сложных средств культивирования клеток.
Введение
Большинство тканевой инженерии исследования по трансплантации кожи и мочеполового тракта включают аутологичных урожаи клеток из здоровых тканей и расширение клеток в специально оборудованных клеточных культивирования объектов 1,2.
После расширения клеток, клетки обычно сохраняется для последующего использования, когда пациент готов получить аутотрансплантата. морозильники азота позволяют длительное хранение при низких температурах -150 ° С или ниже. Процесс замораживания должен быть осторожным и контролировать, чтобы не потерять клетки. Один из рисков гибели клеток вне кристаллизация внутриклеточной воды в процессе оттаивания, которое может привести к разрыву клеточных мембран. Сотовый замораживания обычно выполняется путем медленного и регулируемого охлаждения (-1 ° С в мин), используя высокую концентрацию клеток, фетальной бычьей сыворотки и диметилсульфоксида. После оттаивания эти клетки должны быть обработаны снова удаления среды замерзания и культивирование клеток на пластике культуры или егобиоматериала перед трансплантацией обратно пациенту.
Все вышеупомянутые шаги трудоемким, трудоемким и дорогостоящим 3. Кроме того, все в пробирке обработка клеток, предназначенных для трансплантации пациенту тщательно регулируются и требует хорошо подготовленных и аккредитованных персонала и лабораторий 4. В общем, чтобы обеспечить безопасную и надежную производственный процесс, технология может быть установлена только в очень небольшом количестве технически передовых центров и более широкое использование в распространенных хирургических заболеваний сомнительна.
Для того чтобы преодолеть ограниченность культивирования клеток в лабораторных условиях, понятие пересадки измельченной ткани для расширения клеток в естественных условиях вводят с помощью самого тела как биореактор. Для этих целей, как аутографты преимущественно будут пересажены на 3D плесени в соответствии с формой, которая необходима для окончательного восстановления органа Iпроценты 5-7.
Первоначально, идея пересадки фарш эпителий был представлен Миком в 1958 году, когда он описал, как эпителий растет от краев раны. Он показал, что маленький кусочек кожи приведет к увеличению рентабельности и тем самым его потенциал для расширения клеток на 100% за счет сокращения кусок дважды в перпендикулярных направлениях (рисунок 1) 8. Эта теория была поддержана использования отверстиями частичных протезов толщина кожи для трансплантации кожи 9 и в коже ранозаживляющие модели 10.
Рисунок 1:. Мик теория Согласно теории кроток, в эпителий растет от краев раны. Увеличивая площадь воздействия по технологии мясорубки, измельченной ткани epithelializes раны от многих местах.
Настоящее исследование основано на гипо-тезис, что тот же принцип может быть применен к подкожной клетчатке, помещая измельченный эпителий вокруг формы. Эпителиальные клетки мобилизует из рубленого трансплантатов (реорганизовать), охватывают участки раневые (миграцию) и деления (развернуть) для того, чтобы сформировать непрерывную neoepithelium который покрывает область раны и отделяет постороннее тело (пресс-формы) с внутренним корпусом ( Рисунок 2).
Рисунок 2:. Мультфильм 3D формы с рубленым эпителия для расширения в естественных интракорпоральной ткани в соответствии с теорией Меек При использовании измельченной ткани, размещенный на форме и затем пересаживают в подкожной клетчатке, гипотеза о том, что эпителиальные клетки мигрируют из края фарша ткани, реорганизовать и расширить таким образом, чтобы образовывать непрерывную neoepithelium который покрывает область раны и отделяет постороннее тело (пресс-формы) с внутренним корпусом.
Хотя предыдущие исследования в естественных условиях показывают многообещающие результаты, дальнейшие улучшения могут быть достигнуты путем укрепления аутотрансплантатов, так что регенерированный эпителий может выдерживать механическую травму лучше 7. Для этих целей, были определены важные предпосылки для успешного биоматериала, такие как: легкий диффузии питательных веществ и отходов, возможность плесени в 3D образом и легкости хирургического обработки. Выводы были сделаны, что эти потребности могут быть удовлетворены путем добавления композитный биоматериал для фарша ткани.
Данное исследование направлено на развитие леску, состоящую из измельченной ткани в пластиковый сжатые коллаген, содержащий армирующий стержень биоразлагаемого материала. С помощью этих средств, жизнеспособные клетки могут мигрировать из рубленого частиц тканей и размножаются с морфологические черты, характерные для оригинальной эпителия (кожи или уротелии). Используя пластиковую сжатие, подмости был снизитьд в размере от 1 см до примерно 420 мкм, как из рубленого частиц были помещены в коллагене верхнего уровня. Ядро ткани может быть любой полимер, но должна быть изменена с гидрофильной поверхностью, с тем чтобы соединяются друг с другом с покрывающими коллагеновых слоев 11.
Способ обеспечил повышенную целостность эшафот путем включения вязаную сетку, состоящую из поли (-капролактон) (PCL) в течение двух пластиковых сжатый коллагеновых гелей с использованием его в качестве каркаса для культивирования фарш слизистая оболочка мочевого пузыря или фарш кожу от свиней. Конструкция поддерживалась в условиях культуры клеток до 6 недель в пробирке, демонстрируя успешное формирование слоистой, многослойной уротелии или плоского эпителия кожи на верхней части сплоченный гибридной конструкции. Конструкт был прост в обращении и может быть зашивается в месте для целей дополнения пузыря или покрытия дефектов кожи. Все части эшафот тканевой FDA одобрен и техникаможет быть использован для процедур одноступенчатых путем сбора ткани, мясорубки, пластической сжатия, и трансплантировать обратно пациенту в виде одной-ступенчатую вмешательства. Процедура может быть выполнена для расширения тканей и реконструкции в стерильных условиях в любом общем блоке хирургии.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Все протоколы животных были предварительно одобрены графства комитета Стокгольме животных и все процедуры соответствовали нормативам по использованию животных, а также соответствующими федеральными законами.
1. Процедуры животных
- Подготовка животных для хирургии
- Подготовьте операционный стол со всеми материалами и инструментами, необходимыми для работы в стерильных условиях. Выполните операцию исключительно в стерильных условиях, чтобы снизить риск инфекции и оптимизировать условия в хирургии выживания.
- Быстрое животное в течение 12 ч до операции и измерить свой вес. Администрирование внутримышечную инъекцию azaperone (2 мг / кг) в течение премедикации. Обезболить животное с внутримышечных инъекций tiletamine гипохлорида (2,5 мг / кг), zolazepam гипохлорида (2,5 мг / кг), медетомидин (25 мкг / кг) и атропин (25 мкг / кг).
- Вводят phenobarbiturate (15 мг / кг) до endotracheаль интубации и продолжить общий наркоз с 0,8% -2% изофлуран. Вставьте периферийную катетер вены в одно ухо и влить глюкозу (25 мг / мл) внутривенно во время процедуры для поддержания благосостояния животного.
- Поместите устройства на уху или хвоста контроля для проверки температуры, артериального давления, насыщенности и периферическую пульс. анестезия управления болью стимуляции ушах или копыт. Применять мазь для глаз, чтобы предотвратить сухость под наркозом.
- Удаление мочевого биопсии
- Катетеризировать мочевой пузырь с использованием 10-французский силиконовый катетер с помощью введения расширитель для просмотра уретры и вставить катетер через уретру и в мочевой пузырь, чтобы опорожнить мочу под полу-стерильных условиях. Заполните пузырь с стерильным физиологическим раствором до давления 20-25 см H 2 O, примерно 100-300 мл, а затем пустой до 20 см Н2О (прибл. 8 мл / кг массы тела).
- С гое свиньи тщательно повернулся к боковой позиции, выполнить основную предоперационной стерилизацию кожи с применением хлоргексидина глюконата. Нанесите диатермия пластину к плечу после удаления шерсть с бритвенными ножниц.
- Включите свинью тщательно в положении лежа на спине и снять брюшной волосяной покров с использованием бритья ножницы и сделать основной предоперационной стерилизацию кожи живота с применением хлоргексидина глюконата.
- Встраивание конечностей с мягкой одежды, чтобы свести к минимуму риск повреждения гиперэкстензии суставов в конечностях. Стерилизовать кожу с брюшка животного с последовательным применением глюконата хлоргексидина и поместите стерильный драпировке вокруг операционного поля.
- До кожного разреза, применяются внутривенные анальгетик, состоящую из бупренорфина (45 мкг / кг), Carprofen (3 мг / кг) и местной инъекции лидокаина в средней линии ниже пупка. Проверьте болевой реакции, взявшись за SKв щипцами. Сделать более низкую срединный разрез через фасции и брюшины с помощью диатермии для остановки кровотечений. Локализация в мочевой пузырь, который имеет полностью внутрибрюшинную положение в свинью и может быть свободно предоставляемый мобилизации его через операционную рану.
- Возьмитесь мочевого пузыря с помощью пинцета и измерить его стерилизованной рулетка и пометить биопсии эллиптической формы около 2 см в продольном направлении и 1 см в поперечном направлении, или меньше, используя стерилизованный ручку (свинья терпит сокращение четверти размера пузыря очень хорошо). Вырежьте отмеченную область, используя скальпель, и поместите биопсии мочевого пузыря в DMEM в стерильных условиях.
- Выполните аутотрансплантации с biotransplant или закрыть мочевой пузырь путем наложения швов его 5-0 Викрил в два слоя. Закройте брюшной фасции осторожно 2-0 или 3-0 работает викрил. Закройте подкожного с 3-0 Викрил и кожу 3-0 Ethilon. Поместите повязку на рану и осторожно накак правило, животного, пока она не придет в себя достаточно от наркоза и не выражает боль.
- Перемещение животное объекте по уходу за животными, чтобы обеспечить условия для послеоперационного ухода. Положите животное в одном клетке с нагревательным лампы и посещать животному до полного восстановления от наркоза, а затем пусть животные застопорился в парах.
- Обеспечить беспрецедентный восстановление отношении боли и благополучия и администрировать бупренорфин (45 мкг / кг) внутримышечно для послеоперационного обезболивания и trimetoprim (4 мг / кг) и сульфонамида (20 мг / кг) два раза в день в течение трех дней и один раз в день в течение пяти дней чтобы снизить риск послеоперационных инфекций.
- Удаление кожи биопсии
- Подготовьте операционный стол со всеми необходимыми материалами. Обезболить животное, как описано выше в пункте 1.1. Снимите шерсть с помощью воска, мыть и стерилизовать области разреза бетадин и 70% -ным спиртом, а затем поместить стерильный драпировки arounD области разреза.
- Используйте дерматома собрать биопсии кожи частичная толщиной 0,3 мм. Поместите образец кожи в DMEM, прежде мясорубки, как описано в пункте 2.2. Обложка области раны с жирной мази и повязки.
2. Фарш Подготовка ткани
- Мочевой пузырь Слизистая
- Промыть биопсию мочевого пузыря в два раза в DMEM. Поместите биопсии мочевого пузыря на стерилизованной рассекает пластины со слизистой оболочкой вверх и зафиксировать одну из сторон к плите с помощью рассечение булавки.
- Отделить ткани слизистой от детрузора с использованием тонких ножниц и щипцов (Рисунок 3) и держать слизистую влажной путем капает физиологический раствор или DMEM над ним.
- Используйте устройство мясорубки, поместив его на слизистую оболочку, а затем передать устройство одного конца до другого по вертикали и горизонтали, применяя ручной давление, чтобы получить кусочки фарша ткани 0,8 мм х 0,8 мм (0,8 мм расстояние между rotatinг режущие лезвия).
- кожа
- Если biopsis кожи толщиной: поместите кожу помещается в стерильный рассекает пластины и использовать хирургические ножницы, чтобы отделить эпидермис от подкожного жира и дермы. Эпидермис тонкий и полупрозрачный (ок. 0,3 мм), когда он готов к мясорубки.
- Используйте мясорубки устройство, поместив его на эпидермис. С давлением, проходить устройство от одного конца до другого по вертикали и горизонтали, чтобы получить кусочки фарша ткани 0,8 мм х 0,8 мм.
3. Подготовка пластических сжатых PCL / Коллаген аутотрансплантатов
- Поместите все ингредиенты на льду держать холод. Посуда, необходимые: трубки сокола, 10x DMEM, 1x DMEM, 1 N NaOH и крысиный хвост коллагена типа 1.
- Смешайте 2 мл 10х DMEM (осторожно, чтобы избежать пузырей) с 12 мл коллагена типа 1. Добавьте 1 N NaOH, капля за каплей, чтобы принести рН до 7.4-8 (цвета в среде следует указать рН путем перехода от интенсивной желтый к контактук). Кроме того, использование рН полоску.
- Осторожно добавьте 2 мл 1x DMEM и перемешать раствор. Пластина примерно 2 мл коллагена в каждую лунку стального прямоугольного формы (20x30x10 мм) и инкубируют при 37 ° C в 5% CO 2 в течение 10 мин.
Примечание: Концентрация коллагена должно быть 2,06 мг / мл в 0,6% -ной уксусной кислотой и количество коллагена 1 мл / см 2. - После того, как коллаген устанавливает в форму, поставить биоматериал (PCL) на верхней части коллагеновый гель (20 мм х 30 мм) и залить оставшейся коллаген (около 6 мл) поверх него. Инкубировать при 37 ° С в 5% CO 2 в течение 20 мин.
- Поместите фарш ткани (за 1: 6 расширение) на верхней части коллагеновым гелем. Нажмите воду из конструкции механической силы с использованием пластиковой сжатие следующим образом (Рисунки 3 и 4).
- Поместите толстый слой марли колодки на стерильной поверхности. Поместите один сетка из нержавеющей стали (400 мкм) на верхней части gauzе колодки и затем лист нейлоновую сетку (110 мкм толщиной). Тщательно передачи коллаген гель / фарш ткани на нейлоновую сетку и осторожно удалите прямоугольный стальной формы.
- Поместите новый слой нейлоновую сетку на верхней части коллагена гель / фарша ткани. Поместите вторую металлическая сетка на верхней части нейлоновую сетку. Поместите в положении давлений или загрузки пластины весом минимум 120 г (т.е. стеклянной пластины) в течение 5 мин.
- Удалите вес, нейлоновые и стальные сетки. В аутографты теперь готовы быть пришит к свиньи пузыря в полную толщину кожных ран или культивировали в пробирке.
- Для культивирования в пробирке, разрезать тонкую конструкцию на мелкие кусочки, установленных 12-луночных планшетах. Добавьте 1 мл кератиноцитов среды. Место пластин в инкубаторе при 37 ° С, 5% СО 2 и культуры до 6 недель и изменения носителя 3 раза в неделю.
4. Шов аутотрансплантатов
- Шов из аутотрансплантата сфарш слизистой оболочки мочевого пузыря, чтобы свиньи пузыря
- Держите аутотрансплантатом влажный в DMEM в течение времени ожидания. Шовный аутотрансплантата с мелкими пробег мононити швов. Используйте нерассасывающегося 5-0 Ethilon для исследовательских целей.
- Проверьте водонепроницаемыми путем заполнения мочевого пузыря физиологическим раствором через рентгеноконтрастных мочевого катетера. Если это возможно, покрывают аутотрансплантата со слоем большого сальника. Закройте брюшной стенки, подкожную клетчатку и кожу, как описано в 1.2.6. Применить для перевязки ран.
- Шов из аутотрансплантата с мясным эпидермиса кожи до полного толщины рану
- Держите аутотрансплантатом влажный в DMEM в течение времени ожидания.
- Шовный аутотрансплантата к нижней части кожи на полную толщину раневой по узловыми швами по углам и в середине аутотрансплантата держать аутотрансплантата тесно прикрепленный к подстилающей поверхности.
- Накройте рану пластиковой повязки, которая держит рана влажная.
5. прекращение
- Седативный животное с внутримышечной инъекцией zolazepam гипохлорида (2,5 мг / кг) и медетомидина (25 мкг / кг) до прекращения и применять контрольные устройства к уху или хвоста для проверки пульса и артериального давления.
- Эвтаназии животное путем введения смертельной дозы пентобарбитала натрия (60-140 мг / кг) внутривенно. Проверьте пульс и артериальное давление, пока смерть не произошло.
6. In Vitro Культура
Примечание: Чтобы оценить гистологически прогрессирование фарша ткани в PCL / коллагеновых конструктов в пробирке, коллагеновые / PCL / фарш пластыри культивируют в 12-луночных планшетах с использованием кератиноцитов среды.
- Получение кератиноцитов среды:
- Стерилизовать стеклянную бутылку емкостью 500 мл.
- Смешайте 400 мл DMEM с 100 мл F12 Хэма (смесь 4: 1). Дополнение с 10% фетальной телячьей сыворотки, 5 мкг / мл инсулина,0,4 мкг / мл гидрокортизона, 21 мкг / мл аденина, 10 -10 моль / л холерный токсин, 2 х 10 -9 моль / л трийодтиронин, 5 мкг / мл трансферрина, 10 нг / мл эпидермального фактора роста, 50 ед / мл пенициллина и 50 мкг / мл стрептомицина.
- Стерилизовать фильтрованием через фильтр с размером пор 0,2 мкм и собирать фильтрат в стерильный 500 мл флакон.
7. Иммуногистохимия
Примечание: Протокол иммуногистохимии, как правило, делится на следующие этапы: (1) фиксация и парафин, (2) микро-секционирования до 5 мкм ломтиками, размещения на слайдах, депарафинизации и повторной гидратации, (3) антиген разоблачения, окрашивания и монтажа , Перед началом последние шаги в процедуре иммуногистохимии, подготовить стиральные буферов и разоблачающий раствора антигена (см отдельные детали материала). Подготовьте комплексное решение ABC, по крайней мере за 30 минут до использования.
- фиксация
НЕТТЕ: В конце культуре в пробирке, устранить пятна следующим образом:- Подготовьте пробирки Эппендорф 1 мл 4% буферном растворе формальдегида (PFA) (Внимание:. Формальдегид токсичен ознакомьтесь паспорт по технике, прежде чем работать с этим химикатом Надевайте перчатки и защитные очки и приготовления раствора внутри вытяжного шкафа.).
- Передача каждого из коллагеновых пластырей в пробирку Эппендорф, содержащего 4% PFA. Устранить в течение ночи при комнатной температуре.
- Место образцы в 70% этаноле в течение длительного хранения при температуре 4 ° С. Образцы теперь готовы для обезвоживания и вложение в парафиновые блоки, прежде чем секционирования.
- Регидратация
- Поместите слайды в окрашивания банку с X-TRA SOLV в течение 15 мин. Повторите с помощью нового окрашивания банку с X-тра SOLV. Поместите слайды в окрашивания банку с абсолютным этанолом в течение 10 мин. Повторите с помощью нового окрашивания банку с абсолютным этанолом. Поместите слайды в окрашивания банку с 95% -ным этанолом в течение 10 мин, а после этогов сосуд для окрашивания с 70% этанола в течение 10 мин. Наконец мыть слайды дважды в течение 5 мин с дистиллированной водой.
- Антиген Разоблачение
- Поместите слайды в баночке Коплин с ТЕ-растворе и положить банку в водяной бане до кипения в течение 20 мин. Возьмем баночку из водяной бане тщательно. Охладить слайды до комнатной температуры в течение 30 мин и мыть дважды в течение 5 мин в буфере Трис. Поместите слайды в окрашивания банку с 3% -ной перекиси водорода в течение 10 мин. Промыть слайды дважды в течение 5 мин в буфере Трис. Нарисуйте круг вокруг образцов с использованием водоотталкивающими маркером.
- Блок неспецифическое связывание антитела с использованием 100-300 мкл блокирующего раствора. Удалите блокирующий раствор и добавьте 100-300 мкл первичного антитела, растворенного в рекомендуемой концентрации в Трис-буфере. Выдержите в течение ночи. Удалить раствор антител и мыть секций в трис-буфере в два раза в течение 5 мин.
- Инкубируйте с вторичными антителами в течение 1 ч при комнатной TEMPERATЮр. Промыть два раза в течение 5 мин в буфере Трис. Выдержите 30 минут с использованием набора ABC Elite (следовать инструкциям производителя). Промыть два раза в Трис-буфере.
- Разработка антитела реакцию с помощью VIP Kit вектор, следуя инструкциям производителя (1-7 мин инкубации обычно производит четкое интенсивность фиолетового). Поместите слайды в дистиллированной воде. Контрастное гематоксилином Майера в течение 30 сек.
- Промыть в проточной воде в течение 5 мин. Поместите слайды в окрашивания банку с 70% этанола в течение 1 мин. Повторите с помощью нового окрашивания банку с 70% этанола. Поместите слайды в окрашивания банку с 95% этанола в течение 1 мин. Повторите с помощью нового окрашивания банку с 95% этанола.
- Поместите слайды в окрашивания банку с X-TRA SOLV в течение 5 мин. Удалить, по одному за раз, чтобы сохранить влажный. Поместите каплю монтажа среды на верхней части каждого слайда и положить покровное стекло сверху (сделать это осторожно, чтобы избежать воздушных пузырей). Пусть слайды высохнуть в течение ночи и просматривать слайды под микрообъем.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Это исследование представляет собой метод, который показывает, как производить биоматериал для трансплантации с использованием пластиковой сжатие коллагена и измельченной ткани.
Слизистой оболочки мочевого пузыря и кожи могут быть собраны, а затем механически измельчали на мелкие частицы (рисунок 3). По пластиковой сжатия, фарш частицы включены в композитной эшафот, состоящей из расположенной в центре биоразлагаемого полимера, который механически прочным пределах внешних с...
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Это исследование представляет собой простой в использовании подход к производству стенки мочевого пузыря пластырей с аутологичной ткани для трансплантации в хирургическом столе. Пластыри образованы комбинацией биоразлагаемого полимера вязания в середине и коллагена с и без фарша ткани в наружных поверхностях в сочетании с пластиковой сжатия. Пластиковые сжатия является способ, ранее описаны другими авторами и могут быть определены как быстрое изгнание жидкости из коллагеновых гелей 12,13. Фарш ткань слизистой...
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторам нечего раскрывать.
Благодарности
Авторы благодарят Шведское общество медицинских исследований, Фонд Promobilia, Фонд кронпринцессы Ловисы, Масонский фонд по благополучию детей, Шведское общество медицины, Фонд Солстикан, Каролинский институт и Стокгольмский городской совет за финансовую поддержку.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Силиконовый катетер 10-французский | Подготовка животного к операции, секция 1 | ||
| DMEM 10x | Gibco | 31885-023 | Пластическая компрессионная секция 4 |
| 24-луночные пластины | Falcon | 08-772-1 | Пластическая компрессионная секция 4 |
| 3',3',5-трийодтиронин | Sigma-Aldrich | IRMM469 | In vitro культура; Раздел 5 |
| 4% PFA | Labmed Solutions | 200-001-8 | Иммуноцитохимия; Секция 6 |
| 70% этанол | Histolab | Иммуноцитохимия; Раздел 6 | |
| Набор ABC Elite: набор для обнаружения биотин-стрептавидина | Vector | PK6102 | Иммуноцитохимия; Раздел 6 |
| Абсолютный этанол | Histolab | 1399.01 | Иммуноцитохимия; Секция 6 |
| Аденин | Сигма-Олдрич | A8626 | In vitro культура; Секция 5 |
| Атропин 25 μ г/кг | Темгезик, RB Pharmaceuticals, Великобритания | Подготовка животного к операции, секция 1 | |
| Азаперон 2&тоньсп; мг/кг | Stresnil, Janssen-Cilag, Pharma, Австрия | Подготовка животного к операции, Раздел 1 | |
| Биобезопасность Уровень 2 капюшона | Пластическая компрессия; Раздел 4 | ||
| Решение для блокировки: В ней была получена нормальная сыворотка из того же вида, что и вторичное вторичное антитело. | Вектор | Блокирующий раствор зависит от происхождения первого антитела | Иммуноцитохимия; Секция 6 |
| Бупренорфин 45 μ г/кг | Атропин, Mylan Inc, Канонсбург, Пенсильвания | Подготовка животного к операции, секция 1 | |
| Карпрофен 3 мг/кг | Римадил, Орион Фарма, Швеция | Подготовка животного к операции, секция 1 | |
| Хлоргексидина глюконат | Гибискус 40&тонкий; мг/мл, Риджент Медикал, Англия | Подготовка животного к операции, секция 1 | |
| Холерный токсин | Sigma-Aldrich | C8052 | In vitro культура; Секция 5 |
| Банка для коплина: окрашивание банки для кипячения | Histolab | 6150 | Иммуноцитохимия; Секция 6 |
| Форма из нержавеющей стали (33 мм x 22 мм x 10 мм), изготовленная | Пластиковое сжатие; Секция 4 | ||
| DMEM | Gibco | 3188-5023 | Секция компрессионной пластики 4. Держитесь на льду при его использовании в пластической компрессии |
| эпидермального фактора роста | Sigma-Aldrich | E9644 | In vitro культуре; Секция 5 |
| Этилон (нерассасывающаяся мононить для кожных швов) | Ethicon | Surgery, Секция 1 | |
| Фетальная бычья сыворотка (FBS) | Gibco | 10437-036 | Пластическая компрессионная секция 4 |
| Щипцы (Адисон с зубом) | Подготовка животного к операции, Секция 1 | ||
| Марля (Gazin Mullkompresse) | Подготовка животного к операции, секция 1 | ||
| Ham's F12 | Gibco | 31765-027 | Пластическая компрессионная секция 4 |
| Гематоксилин | Histolab | 1820 | Иммуноцитохимия; Секция 6 |
| Камера влажности | DALAB | Иммуноцитохимия; Секция 6 | |
| Гидрокортизон | Sigma-Aldrich | H0888 | In vitro культура; Раздел 5 |
| Раствор перекиси водорода 30% | Sigma-Aldrich | H1009 | Иммуноцитохимия; Секция 6 |
| Инсулин | Сигма-Олдрич | I3536 | in vitro культура; Секция 5 |
| Изофлуран | Изофлуран, Бакстер, Дирфилд, Иллинойс | Подготовка животного к операции, Секция 1 | |
| Лидокаин 5 мг/мл | Ксилокаин, АстраЗенека, Швеция | Подготовка животного к операции, Секция 1 | |
| Люкоза 25&тонкая; мг/мл | Бакстер, Дирфилд, Иллинойс | Подготовка животного к операции, раздел 1 | |
| Маркерная ручка Пап-ручка | Sigma-Aldrich | Z377821-1EA | Иммуноцитохимия; Секция 6 |
| Медетомидин 25 г/кг | Domitor, Orion Pharma, Швеция | Подготовка животного к операции, секция 1 | |
| Измельчительное устройство | Applied Tissue Technologies LLC | Препарат из фарша, секция 2 | |
| Монокрил (рассасывающийся монофиламент) | Ethicon | Surgery, секция 1 | |
| NaCl | Sigma-Aldrich | S7653 | Иммуноцитохимия; Раздел 6 |
| NaOH 1 N | Merck Millipore | 106462 | Секция сжатия пластика 4 и клеточная культура |
| Нейлоновая сетка, 110 μ M размер густых пор 0,04 sq мм | Пластик компрессионный; Секция 4 | ||
| Oculentum simplex APL: мазь для защиты глаз | APL | Vnr 336164 | Surgery, секция 1 |
| PBS | Gibco | 14190-094 | Пластическая компрессионная секция 4 |
| Пенициллин-стрептомицин | Gibco | 15140-122 | Пластическая компрессионная секция 4 |
| Фенобарбитурат 15 мг/кг | Пентобарбитал, APL, Швеция | Подготовка животного к операции, Секция 1 | |
| PCL Трикотажное полотно | Пластическая компрессия; Секция 4 | ||
| Коллаген крысиного хвоста | First LINK, Ltd, Великобритания | 60-30-810 | Пластическая компрессия Секция 4, держать на льду |
| Лезвие скальпеля - 15 | Подготовка животного к операции, Секция 1 | ||
| Ножницы | Подготовка животного к операции, Секция 1 | ||
| Сетка из нержавеющей стали, 400 μ M толщина пор Размер пластиковой | компрессии; Раздел 4 | ||
| Стерильные перчатки | Подготовка животного к операции, Раздел 1 | ||
| Стерильные | Подготовка животного к операции, Раздел 1 | ||
| Стерильные простыни | |||
| Sterilium | Bode Chemie HAMBURG | Подготовка животного к операции, Раздел 1 | |
| Шовная нить Ethilon | Подготовка животного к хирургия, раздел 1 | ||
| TE-раствор (раствор для демаскировки антигена) состоит из 10 мМ Трис и 1 мМ ЭДТА, рН 9,0 | 10 мМ Трис/1 мМ ЭДТА, регулируют рН до 9,0 | ||
| тилетамина гипохлорида 2,5 мг/кг | Подготовка животного к хирургическому вмешательству, секция 1 | ||
| Трансферрин | Сигма-Олдрич | T8158 | In vitro культура; Секция 5 |
| База Тризма, H2NC | Sigma-Aldrich | T6066 | Иммуноцитохимия; Секция 6 |
| Вектор VIP набор: Фермент набор пероксидазного субстрата | Вектор | SK4600 | Иммуноцитохимия; Секция 6 |
| Викрил (рассасывающийся в оплетке) | Ethicon | Surgery, Секция 1 | |
| Трис-буфер pH 7,6 (промывочный буфер) | TE раствор: Приготовьте 10x (0,5 М Трис, 1,5 М NaCl) путем смешивания: 60,6 г Триса (основание Тризма, H<суб>2NC(CH<суб>2OH)<суб>3, M=121,14 г/моль), добавить 800 мл дистиллированной воды, довести pH до 7,6, добавить 87,7 г NaCl и залить до 1 000 мл дистиллированной водой. Разбавьте в 1 раз дистиллированной водой. | ||
| X-tra solv (растворитель) | DALAB | 41-5213-810 | Иммуноцитохимия; Секция 6. Применение под вытяжной шкаф |
| Золазепам гипохлорид | Zoletil, Virbac, Франция | Подготовка животного к операции, Секция 1 | |
| Депиляторные восковые полоски | Veet | Подготовка животного к операции, Секция 1 | |
| Пентобарбитал натрия | Lundbeck | Окончание, Секция 3 |
Ссылки
- Rheinwald, J. G., Green, H. Serial cultivation of strains of human epidermal keratinocytes: the formation of keratinizing colonies from single cells. Cell. 6, 331-343 (1975).
- Fossum, M., Nordenskjold, A., Kratz, G. Engineering of multilayered urinary tissue in vitro. Tissue Engineering. 10, 175-180 (2004).
- Salmikangas, P., et al. Manufacturing, characterization and control of cell-based medicinal products: challenging paradigms toward commercial use. Regen Med. 10, 65-78 (2015).
- Guidelines of 7 March 2013 on Good Distribution Practice of medicinal products for human use (OJ C 343/1, 23.11.2013). 7, Retrieved from: http://ec.europa.eu/health/human-use/good_distribution_practice/index_en.htm (2013).
- Fossum, M., et al. Minced skin for tissue engineering of epithelialized subcutaneous tunnels. Tissue Engineering. Part A. 15, 2085-2092 (2009).
- Fossum, M., et al. Minced urothelium to create epithelialized subcutaneous conduits. The Journal of Urology. 184, 757-761 (2010).
- Reinfeldt Engberg, G., Lundberg, J., Chamorro, C. L., Nordenskjold, A., Fossum, M. Transplantation of autologous minced bladder mucosa for a one-step reconstruction of a tissue engineered bladder conduit. BioMed Research International. 2013, 212734(2013).
- Meek, C. P. Successful microdermagrafting using the Meek-Wall microdermatome. Am J Surg. 96, 557-558 (1958).
- Tanner, J. C., Vandeput, J., Olley, J. F. The Mesh skin graft. Plastic and Reconstructive Surgery. 34, 287-292 (1964).
- Svensjo, T., et al. Autologous skin transplantation: comparison of minced skin to other techniques. The Journal of Surgical Research. 103, 19-29 (2002).
- Ajalloueian, F., Zeiai, S., Rojas, R., Fossum, M., Hilborn, J. One-stage tissue engineering of bladder wall patches for an easy-to-use approach at the surgical table. Tissue Engineering. Part C, Methods. 19, 688-696 (2013).
- Engelhardt, E. M., et al. A collagen-poly(lactic acid-co-varepsilon-caprolactone) hybrid scaffold for bladder tissue regeneration. Biomaterials. 32, 3969-3976 (2011).
- Brown, R. A., Wiseman, M., Chuo, C. B., Cheema, U., Nazhat, S. N. Ultrarapid engineering of biomimetic materials and tissues: fabrication of nano- and microstructures by plastic compression. Adv Funct Mater. 15, 1762-1770 (2005).
- Fumagalli Romario, U., Puccetti, F., Elmore, U., Massaron, S., Rosati, R. Self-gripping mesh versus staple fixation in laparoscopic inguinal hernia repair: a prospective comparison. Surg Endosc. 27, 1798-1802 (2013).
- Muangman, P., et al. Complex Wound Management Utilizing an Artificial Dermal Matrix. Annals of Plastic Surgery. 57, 199-202 (2006).
- Ajalloueian, F., Zeiai, S., Fossum, M., Hilborn, J. G. Constructs of electrospun PLGA, compressed collagen and minced urothelium for minimally manipulated autologous bladder tissue expansion. Biomaterials. 35, 5741-5748 (2014).
- Orabi, H., AbouShwareb, T., Zhang, Y., Yoo, J. J., Atala, A. Cell-seeded tubularized scaffolds for reconstruction of long urethral defects: a preclinical study. Eur Urol. 63, 531-538 (2013).
- Blais, M., Parenteau-Bareil, R., Cadau, S., Berthod, F. Concise review: tissue-engineered skin and nerve regeneration in burn treatment. Stem Cells Transl Med. 2, 545-551 (2013).
- Serpooshan, V., Muja, N., Marelli, B., Nazhat, S. N. Fibroblast contractility and growth in plastic compressed collagen gel scaffolds with microstructures correlated with hydraulic permeability. J Biomed Mater Res A. 96, 609-620 (2011).
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
Теги
