Здесь мы описываем упрощенный протокол для анализа экспрессии микроРНК (микроРНК) в архивных клинических тканях с фиксированным формалином, парафином (FFPE) или свежезамороженным раком предстательной железы (PCa) с использованием количественной ПЦР в реальном времени (ОТ-ПЦР) и гибридизации in situ (ISH).
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
микроРНК экспрессии анализ рака предстательной железы Клинические тканей
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Важнейшей задачей в рака простаты (РПЖ) клинического управления ставится в неадекватности используемых в настоящее время биомаркеров для скрининга заболевания, диагнозе, прогнозе и лечении. В последние годы, микроРНК (миРНК) появились как перспективные альтернативные биомаркеры для диагностики рака предстательной железы и прогноза. Тем не менее, развитие микроРНК в качестве эффективных биомаркеров рака предстательной железы в значительной степени зависит от их точного обнаружения в клинических тканей. микроРНК анализирует рака простаты клинических образцов часто вызов в связи с неоднородностью опухоли, ошибки выборки, загрязнения и т.п. стромы Цель этой статьи заключается в описании упрощенную рабочий процесс микроРНК анализы в заархивированном FFPE или свежезамороженной рака простаты клинических образцов с использованием комбинации Количественный ПЦР в реальном времени (RT-PCR) и гибридизация (ISH). В этом рабочем процессе, мы оптимизируем существующие методологии для извлечения микроРНК из FFPE и замороженные Tissu простатыES и выражение анализирует по Taqman-зонда на основе микроРНК-ПЦР. Кроме того, мы опишем оптимизированный метод ISH анализа обнаружения formiRNA в тканях предстательной железы с использованием заблокированного нуклеиновой кислоты (LNA) - зонды, основанные. Оптимизированное протокол микроРНК ISH могут быть применены к слайдам рака простаты ткани или ткани предстательной железы микрочипов (TMA).
Введение
Рак предстательной железы является обычно диагноз мужского злокачественности, что является одним из ведущих причин рака, связанных с смертности среди мужчин. В США, по оценкам, 220,800 новых случаев и смертей 27,540 будут представлены в 2015 году 1.
Рак предстательной железы является гетерогенным заболеванием с высокой переменной болезни курс- опухоли могут быть ленивыми или очень агрессивны. Важнейшей задачей в рака простаты клинического управления ставится в неадекватности используемых в настоящее время методов / биомаркеров для скрининга заболеваний, диагностики, прогноза и лечения 2. Современные методы скрининга ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Фиксированных формалином, парафин (FFPE) или свежие образцы рака простаты замороженном были получены из SFVAMC. Образцы от пациентов с раком предстательной железы, которые подверглись радикальной простатэктомии в SFVAMC. Письменное информированное согласие было получено от всех пациентов и исследование было одобрено UCSF Комитета по населенным исследований по. Кроме того, ткани рака простаты микрочипы были закуплены из коммерческих источников и используются для анализа микроРНК с ISH. Клинико и следить за информацией для анализируемых больных раком предстательной железы была собрана.
1. Образцы тканей
- Вырезать образцы рака прос....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Профилирование экспрессии Мир-203 в LCM первичного рака простаты клинических образцов ОТ-ПЦР анализ (рисунок 1)
ОТ-ПЦР анализ экспрессии микроРНК относительной-203 в LCM раковых тканей предстательной железы первичного и соответствующего смежных нормальных областей проводили, как описано в Saini и др. 15 RNU48 был использован в качестве контроля. В таблице ниже приведены относительные выражения микроРНК-203 в рака простаты опухолевых тканях по сравнению с .......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
В этой статье мы опишем упрощенный рабочий процесс для выражения микроРНК профилирования заархивированные FFPE или свежезамороженной рака простаты клинических тканей. При раке предстательной железы, некоторые исследования свидетельствуют о важной роли микроРНК в инициации рака простаты, прогрессии и метастазирования. Тем не менее, противоречивые результаты часто получают по конкретной микроРНК 22 после извлечения микроРНК и анализирует методы отличаются друг от друга. В связи с появлением новых фактических да.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы не раскрывают финансовую информацию.
Благодарности
Мы благодарим д-р Роджер Эриксон за поддержку и помощь в подготовке рукописи.
Эта работа была поддержана Национальным институтом рака при Национальном институте здравоохранения
(Грант Количество RO1CA177984; RO1CA138642), В. А. проект программы на рак предстательной железы (BX001604).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Микротом | Leica Biosystems | RM2255 | |
| Arcturus Autopix для LCM | Arcturus/ Life Technologies | LCM1621/LCM1110 | В качестве альтернативы можно использовать систему Arcutus Xt от Life Technolgies. |
| CapSure Macro LCM Caps | Life Technologies | LCM0211 | |
| miRNeasy FFPE Kit | Qiagen | 217504 | |
| 7500 Быстрая система для ПЦР в реальном времени | Applied Biosystems/ Life Technologies | 4351106 | |
| Taqman MicroRNA Reverse Transcription kit | Прикладные Биосистемы/ Технологии Жизни | 4366596 | |
| Taqman Fast Universal PCR мастер-микс | Applied Biosystems/ Life Technologies | 4352042 | |
| DIG меченый LNA зонд для U6 | Exiqon | 99002-01 | |
| BM Purple AP субстрат | Roche | 11442074001 | |
| решение для предварительной гибридизации | Biochain | K2191050-1 | |
| Решение для гибридизации | Biochain | K2191050-2 | |
| Blocking solution | Biochain | K2191050-8 | |
| AP-конъюгированное антитело к дигоксигенину | Biochain | K2191050-7 | |
| Aqueous mounting media | Вектор Лаборатории | H-5501 | |
| Тризол (гуанидин изотиоцианат-фенольный реагент) | Life Technologies | 15596-018 | |
| Harris hematoxylin | Statlab | SL200 | |
| Eosin | Статлаб | SL201 |
Ссылки
- Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. Cancer statistics. CA Cancer J Clin. 65 (1), 5-29 (2015).
- Shen, M. M., Abate-Shen, C. Molecular genetics of prostate cancer: new prospects for old challenges. Genes Dev. 24 (18), 1967-2000 (2010).
- Sequeiros, T., et al.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
