Методическая статья

Изучение микробных сообществ В Vivo: Модель узла опосредованного взаимодействия между Candida Albicans И Синегнойной палочки В Airways

DOI:

10.3791/53218

⸱

13 января 2016 г.

 ,  ,  ,  , 
1Recherche translationnelle: relations hôtepathogènes, Université Lille

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В то время как in vitro изучение взаимодействий хозяина и патогена позволяет охарактеризовать специфические иммунные реакции, модели in vivo необходимы для наблюдения за эффектами сложных реакций. Используя воздействие Candida albicans с последующей инфекцией легких, опосредованной Pseudomonas aeruginosa, мы создали мышиную модель микробных взаимодействий, участвующих в патогенности ИВЛ-ассоциированной пневмонии.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Изучение хозяин-патоген взаимодействия позволяет понять основные механизмы патогенности во микробной инфекции. Прогноз хозяина зависит от участия адаптированной иммунного ответа против патогена 1. Иммунный ответ является сложным и результаты от взаимодействия патогенов и несколько иммунных или неиммунных сотовых типов 2. В пробирке исследования не могут характеризовать эти взаимодействия и сосредоточиться на клеточных патогенов взаимодействий. Кроме того, в дыхательных путях 3, особенно у пациентов с гнойным хроническим заболеванием легких или в механически вентилируемых пациентов, Полимикробные общины присутствуют и осложняют хозяин-патоген взаимодействия. Синегнойная палочка и Candida Albicans оба проблема возбудителей 4, часто изолированы от трахеобронхиального образцов, и связан с тяжелыми инфекциями, особенно в реанимации 5. Микробные взаимодействия имеютСообщалось, между этими патогенами в пробирке, но клинические последствия этих взаимодействий остается неясным 6. Для изучения взаимодействия между C. Albicans и P. палочки, на мышиной модели С. Albicans дыхательных путей колонизации, после чего P. aeruginosa- опосредованной острой инфекции легких была выполнена.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Модели на животных, особенно мышей, были широко используется для изучения иммунных ответов против патогенных микроорганизмов. Несмотря на то, врожденные и приобретенные иммунитет отличается грызунов и человека 7, легкость в размножении и развитии нокаутом для многочисленных генов, сделать мышам отличную модель для изучения иммунных ответов 8. Иммунный ответ является сложным и в результате взаимодействия патогена, резиденты микробной флоры и несколько иммунные (лимфоциты, нейтрофилы, макрофаги) и неиммунные (эпителиальные клетки, эндотелиальные клетки) сотовые типы 2. В пробирке исследования не позволяют наблюдать эти сложные взаимодействия и в основном сосредоточены на уникальных клеток патогенных взаимодействий. В то время как модели на животных должны использоваться с осторожностью и ограничиваться очень специфических и соответствующих вопросов, мышиные модели обеспечивают хорошее представление млекопитающего иммунного ответа в естественных условиях и может обратиться части важных вопросов клинических 7.

в дыхательных путях, микробного сообщества является сложным связывая большое количество различных микроорганизмов 6. В то время как то, что является «нормальной» микробиомом дыхательных путей остается определить, резиденты общины часто полимикробной, и происходят из различных экологических источников. Пациенты с гнойным хроническим заболеванием легких (муковисцидоз, bronchectasis) или механически вентилируемых больных отмечается особые флору из-за колонизации дыхательных путей с помощью экологически приобретенных микроорганизмов 9. Синегнойная палочка и Candida Albicans являются проблемой возбудителей 5, часто изолированы вместе с трахеобронхиального образцов и отвечает тяжелой оппортунистической инфекции у таких пациентов, особенно в реанимацию (ICU) 4.

Выделение этих микроорганизмов во время острой пневмонии в ОРИТ результатов в антимикробной обработки против P. б палочкиут дрожжи, как правило, не считается патогенным на этом сайте 5. При взаимодействии между P. пробирке палочки и С. Albicans были широко сообщалось и показали, что эти микроорганизмы могут влиять на рост и выживаемость друг с другом, но исследования не может заключить, если наличие C. Albicans является вредным или полезным для хозяина 10. Мышиные модели были разработаны для решения этой актуальность P. палочки и С. Albicans в естественных условиях, но взаимодействие между микроорганизмами не был ключевой момент. В самом деле, модель была создана, чтобы оценить вовлечение С Albicans в иммунном ответе, и исход.

Предыдущая модель создана Ру и др уже используется первоначальный колонизацию C. Albicans сопровождается острой легочной инфекции, вызванной P. палочки. Используя их модель, авторы обнаружили, пагубное роль рRIOR С. Albicans колонизации 11. Однако Ру др использовали высокую нагрузку С Albicans в их модели с 2 х 10 6 КОЕ / мышь в течение 3 дней подряд. Мы установили 4-дневный модель С Albicans колонизация дыхательных путей, или по крайней мере настойчивости без повреждения легких, в этой модели C. Albicans был получен до 4 дней после однократного закапывания 10 5 КОЕ на мышь (рис 2B) 12,13. После 4 дней, не наблюдалось никаких признаков воспалительного набора клеток, воспалительного цитокина, ни производства эпителиальных повреждений. Через 24 - 48 ч, на пике присутствии C. Albicans, хотя наблюдалось сотовой и цитокинов врожденного иммунного ответа, не было никаких доказательств повреждения легких. Удивительно, мыши, таким образом, колонизировали с С. Albicans 48 час до интраназальная инстилляцию P. палочки были ослаблены инфекции по сравнению с мышами с P. одна палочка инфекции. яndeed мышей выставлены меньшее повреждение легких и снижение бактериальной нагрузки 12,13.

Несколько гипотез может объяснить это благотворное влияние предварительного колонизации C. Albicans на P. палочки -опосредованной острую инфекцию легких. Во-первых, межвидовая перекрестные помехи с участием микроорганизмов каждый систем кворума зондирования, homoserinelactone основе P. Система палочки и фарнезола основе С. Система Albicans, были оценены. Во-вторых, С. Albicans действуя в качестве "приманки" для цели П. палочки переадресации возбудителя из легких эпителиальных клеток изучали. Обе гипотезы были признаны недействительными (неопубликованные данные). Третья гипотеза, что из "грунтования" врожденной иммунной системы К. Albicans несет ответственности за повышенной последующего врожденной реакции против P. палочки. Этот последний гипотеза была подтверждена. Действительно С. Albicans колонизация привела к грунтования врожденного иммунитета throuGH IL-22, в основном, секретируемый клетками врожденной лимфоидных, что приводит к увеличению бактериальной зазора и снижение повреждения легких 12.

В заключение, хост является центральным актером во взаимодействии микроорганизмов, модулирующих врожденный иммунный ответ и с участием различных воспалительных типов клеток. В то время как эти сложные иммунные взаимодействия могут быть расчленены в пробирке начальные гипотезы могут быть предоставлены только уместно в моделях естественных условиях. Следующий протокол представляет собой пример исследования в естественных условиях принимающей опосредованного патогена взаимодействия, которые могут быть адаптированы к других микроорганизмов.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

По региональным этика областной комитет для экспериментов на животных одобрил этот метод, в соответствии с национальным и международным ухода за животными и использования в исследовательских принципов исследования.

1. Сбор образцов

  1. Хранение образцов
    1. Соберите все образцы и сразу не хранить на - 20 ° C или на льду до тех пор, хранения морозильной чтобы избежать ухудшения. Поместите стерильные фосфатно-солевой буфер (PBS) на льду, чтобы улучшить бронхоальвеолярного лаваж (БАЛ) производительность.
  2. Хирургия
    1. Стерилизовать все оборудование, используя хирургическую автоклава.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Если это возможно, рекомендуется использовать два различных набора инструментов для брюшной и грудной шагов, чтобы избежать перекрестного загрязнения. Требуется рассечение оборудование, изображенной на рисунке 4A

2. Мыши, Бактериальные и штаммов дрожжей

  1. Домовых мышей в соответствии с местным использованием животных в реруководящие принципы поиска комитета в проветриваемом стойке без превышения 5 мышей в клетку, с пищей и водой экспромтом, в уровень биобезопасности 2 жилья объекта в связи с использованием уровня биобезопасности 2 микроорганизмов: P. палочки и С. Albicans.
  2. Хранить бактериальных штаммов при -80 ° С в 40% глицерине среды.
    1. Добавить бактерии непосредственно из замороженных исходных в культуральную пробирку, содержащую 3 мл стерильного Лурии-Бертани бульоне с помощью прививки петли 10 мкл. Оставить O / N при 37 ° С с орбитальным встряхивания (400 оборотов в минуту) в день до закапывания.
    2. Урожай бактерии путем центрифугирования при 2000 мкг в течение 5 мин.
    3. Аспирируйте супернатант в соответствующем распоряжении закрытой для биологически опасных отходов. Заметим, белый клейкий осадок на дне пробирку.
    4. Промыть и приостановить гранул с использованием 5 мл PBS.
    5. Повторите шаги 2.2.2 2.2.3 второй раз, чтобы выполнить второй стирки.
    6. Ресуспендируют осаждали с помощью бактерий 1 мл PBSи краткое встряхиванием.
    7. Определить плотность посева с использованием оптического денситометра при 600 нм, используя измеритель оптической плотности. Плотность 0,9 соответствует 10 9 КОЕ / мл для PAO1, разбавленных соответственно.
      Примечание: Этот результат должен быть получен для каждого используемого штамма путем определения плотности последовательных разведений калиброванного инокулята.
    8. Проверьте прививочный по серийному логарифмических разведениях и пластины 100 мкл каждого разведения на Бромкрезоловый фиолетовый агар (BCP) пластин и O / N культуры. Администрирование каждой мыши интраназально 50 мкл раствора, содержащего 1 х 10 8 до 2 × 10 8 КОЕ в мл (5 х 10 6 до 1 × 10 7 КОЕ на мышь).
  3. Использование С. Albicans SC5314 в качестве опорного напряжения. Экономия напряжение в 40% глицерине среде при -80 ° С.
    1. Дополнение дрожжей-пептон-декстроза бульон с 0,015% амикацин, чтобы избежать бактериального загрязнения и будет способствовать дальнейшему счет.
    2. Добавить дрожжи, используя 10-# 181; л прививки петли в подготовленную YPD-бульона с добавлением амикацин O / N при 37 ° С.
    3. Урожай дрожжи центрифугированием при 2000 х г в течение 5 мин.
    4. Удалить супернатант в соответствующем распоряжении bioharzard отходов. Белый осадок прилипший должны наблюдаться в нижней части пробирку.
    5. Мытье и приостановить осаждали бактерии с использованием 5 мл PBS и краткое вортексе.
    6. Повторите шаги 2.2.2 2.2.3 второй раз, чтобы выполнить второй стирки.
    7. Ресуспендируют гранул с использованием 1 мл PBS и краткое встряхиванием.
    8. Определить размер инокулята путем подсчета на гематоцитометр Mallassez с помощью стандартного микроскопа при 40-кратном увеличении.
      Примечание: Концентрация (в КОЕ / мл) получают, используя следующую формулу: (число дрожжей х 10 5) / (число подсчитанных сетки прямоугольников на гематоцитометр Mallassez).
    9. Проверьте по серийным логарифмической разбавления до 10 -5 и 10 -6 подтвердить, что раствор содержит 2 х 10 6 КОЕ / мл.
    10. Табличка на YPD чашках с агаром с добавлением 0,015% амикацина.

3. Airways Колонизация C. Albicans

Примечание: После адаптации к окружающей среде, мышей взвешивали два раза в день.

  1. Под вытяжным шкафом, депозитные 500 мкл севофлурана на 4 см х 4 см марли (техника открытым падение) 14.
    1. Сразу же место марлю на полу приблизительно 750 мл индукции камеры. Сразу же место платформу сетки-приподняты над марлю, чтобы избежать прямого контакта между животным и марли.
    2. Закрыть крышкой и герметичный ждать от 1 до 2 мин, чтобы позволить распространение севофлурана в камере.
    3. Перевести мышь из клетки, чтобы сетка платформы и закрывают крышкой. Свет анестезия с консервативной спонтанного дыхания должно быть достигнуто в 30 до 45 сек.
    4. Монитор для гипотонии, наблюдая потерю рефлекса, при котором точка мышь может быть удалена ерум коробку и привил.
  2. Интраназально закапывания (может быть выполнена через 10 секунд обученным оператором).
    1. Держите мышь одной рукой расположен на спине в вертикальном положении (рис 4В).
    2. Использование указательный палец, поддерживать голову и использовать большой палец, чтобы держать челюсть закрыт, чтобы избежать мокротой (рис 4C).
    3. Как описано на шаге 2.3.8, убедитесь, что готова С. Решение Albicans содержит 2 x10 6 КОЕ на мл для 50 мкл привили громкости.
      ПРИМЕЧАНИЕ: вторая критическая точка является Закапывать объем. Объем ниже 50 мкл может привести к недостаточному или неоднородному колонизации закапывания дыхательных путей, больший объем может вызвать удушье тонущую / и смерть.
    4. Привить мыши интраназально, приближаясь к пипетки в ноздри.
    5. Внесите капли 50 мкл, образующий пузырь, содержащий решение о ноздри, затем вдыхается spontaneouslу дыхание мыши.
    6. Место мыши в области восстановления (например, большой хорошо газированные голые клетка с ВЛ отопления лампы). Мыши не должно контролироваться до полного пробуждения. Не оставляйте без присмотра животное, пока он не восстановил достаточную для поддержания сознания грудины лежачее положение и восстановить нужный рефлекс. В этот момент, мышь может быть возвращен в нормальное корпуса клетке.

4. П. палочки -индуцированных Острая инфекция легких

ПРИМЕЧАНИЕ: Мыши взвешивают в течение следующих четырех дней. Обычно, мыши набирать вес во время C. Albicans опосредованной колонизация дыхательных путей (2А).

  1. Подготовка суспензии, содержащей Р. палочки в день инстилляции после вывода / N роста (раздел 2.2).
  2. Кратко Обезболить использованием вдыхании севофлурана, как описано выше (раздел 3.1).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Для выполнения острую инфекцию легких, рекомендуется бактериальной нагрузки предложены вТаблица 1.
  3. Привить мыши, как описано выше (раздел 3.2) с особым вниманием к восстановлению после закапывания.

5. Мера легких Индекс травматизма

  1. Приготовьте раствор, содержащий FITC-меченого альбумина. Внедрить это решение 2 ч до эвтаназии животных.
    1. Взвесьте 0,2 мг альбумина-FITC с соответствующим оборудованием.
    2. Добавить 0,2 мг в 1 мл PBS. Кратко вихрь. Если сразу не используется, поместите решение в фольге, чтобы избежать воздействия окружающего света.
    3. Вводят внутрибрюшинно 200 мкл FITC-меченного раствора альбумина в каждой мыши.
  2. Эвтаназия
    1. Взвесьте мышей для последним данным веса.
    2. Эвтаназии один курсор в соответствии с местным использования животных в научных принципов комитета с использованием одного внутрибрюшинную инъекции смертельной передозировки в пентобарбитала: 300 мкл 5,47% фенобарбитала.
    3. Удалить мышь из клетки и получает лethal инъекции оператором.
    4. После инъекции, передавать мышь в одиночку другой клетке, скрытой от других животных. Наблюдайте мышь, пока отсутствие движения. Подтвердите смерть отсутствием движения, в частности, дыхательных движений, отсутствием пульса.
    5. Выполните хирургического коллекцию образцов на мертвых животных, поэтому без анестетиков, ни анальгетиков.
  3. Хирургическое сбор образцов: Грудной этап.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Для поддержания стерильных условий, все операция проводится с использованием стерильного оборудования в среде уровень биобезопасности 2.
    1. Применение этанола на кожу. Выполните разрез по средней линии грудины кожу от середины живота к ножницами. От средней линии надрезать вдоль грудной клетки с обеих сторон. Отогните кожу с обеих сторон грудной клетки визуализировать грудную клетку.
    2. Выполнение вертикальный разрез грудной клетки по обе стороны идет вверх в сторону ключицы, чтобы иметь возможность откидываться всю стену передней стенке грудной клетки с кормыгм позволяет идеальный визуализации сердца и легких (рис 5а, 5b).
    3. Собирают кровь с использованием предварительно шприц heparined путем прокалывания сердце рядом с межжелудочковой артерии. Вывод минимум 500 мкл до получения по меньшей мере 100 мкл плазмы. Поместите образец крови на льду.
    4. Выполните средней линии шейки разрез для визуализации трахеи (рис 5B и 5C). Осторожно рассекают фасцию вокруг трахеи. Поставьте шва позади трахеи (рис 5C и 5D). Впоследствии шов будет закрыт вокруг иглы cannulating, чтобы обеспечить надлежащее промывание.
    5. Катетер трахеи с использованием 20-G иглу через зонд модифицированный (рис 5D и 4А). Свяжите хирургического узел вокруг канюлированного трахеи с ранее размещенных шва.
    6. Для выполнения Бронхоальвеолярный промываний (БАЛ), мягко и постепенно вводить и привлечь 500 мкл ледяной PBS в / из легких. Поместите образец на ICE, чтобы избежать сотовой лизис.
    7. Повторите шаг 5.3.6, 3 раза, чтобы получить в общей сложности 1500 мкл БАЛ и бассейн промывание образцов в 2 мл пробирку для центрифугирования (рис 5E).
    8. Удалить легкие из груди. Поместите сегмент легких (размер должен соответствовать половине одного легкого или доли) в 1,5 мл центрифужную пробирку и быстро хранить в - 80 ° С.
    9. Поместите сегмент легких в предварительно взвешенную гемолиз пробирку, содержащую PBS, чтобы определить бактериальную нагрузку и поместить его на льду.
  4. Хирургическое сбор образцов: в животе этап.
    1. Выполните еще один разрез на левой стороне живота. Соблюдайте селезенки через брюшину.
    2. Удалить селезенки и поместите во второй гемолиз пробирку, содержащую 1 мл PBS и место на льду.
  5. Легких индекс травмы
    Примечание: альвеолярно-капиллярной проницаемости мембраны оценивают измерением FITC-меченого альбумина утечки из сосудов отсека альвеолярного-interstвоначальным отсека.
    1. Центрифуга образец крови и БАЛ в течение 10 мин при 1500 х г в. Сбор супернатанты в новые центрифужные пробирки. Гранулы соответствуют набранных плазмы или БАЛ клетки и должны быть размещены на льду.
    2. Добавить 100 мкл каждого супернатанта плазмы крови (, желтый) или BAL супернатанта к 96-луночный прозрачной пластины (300 мкл) скважин. Поставьте фольгу на плите, если он не используется сразу.
    3. Измерьте уровень флуоресценции в плазме и БАЛ супернатантами помощью флуоресценции планшетного (возбуждение, 487 нм; излучения, 520 нм).
    4. Определить индекс повреждения легких путем расчета коэффициента флуоресценции в [(БАЛ надосадочную супернатант / в крови) х 100].
  6. Бронхоальвеолярный промывание (БАЛ) Количество различных клеток.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Используйте осадок клеток, полученных из центрифугирования БАЛ на этапе 5.5.1.
    1. Если необходимо, используйте красно-клеток буфер лизиса. Добавить 500 мкл эритроцитов лизирующего буфера в центрифужную пробирку, содержащую CELл Осадок. Кратко вихря и оставить на 10 мин на льду. Добавить 500 мкл PBS, чтобы остановить красно-лизис клеток.
    2. Урожай клетки центрифугированием в течение 10 мин при 1500 х г в. Удалить супернатант и приостановить осадок клеток в 1 мл стерильной PBS. Перечислять клеток на гематоцитометр Mallassez. Использование гемацитометра графу ячейки. Концентрат клеток на слайде с цитоспиновых.
    3. Пятно клетки, используя окраску комплект, позволяющий идентифицировать клеток и количество (макрофаги, лимфоциты, нейтрофилы).
  7. Легких бактериальной бремя и бактериальной распространение
    ПРИМЕЧАНИЕ: Для оценки легких бактериальной нагрузки и бактериальной распространение, легкие и селезенка были соответственно собирали и хранили в предварительно взвешенный гемолиз пробирки, содержащие 1 мл PBS (шаг 5.3.9).
    1. Взвесьте гемолиз пробирки, содержащие 1 мл PBS, и либо легких или селезенки. Однородный образцы с тканевом гомогенизаторе, чтобы получить гомогенатов легких и селезенки гомогенатов.
    2. Депозит 100 мкл ткани гомоgenates в центрифужные пробирки, содержащие 900 мкл стерильной PBS на получение серийных разведений. логарифмические
    3. Пластина два последних соответствующие разбавленных образцов (10 -3 и 10 -2) на любой BCP-агар для P. палочки или YPD-амикацин-дополняется агар для C. Albicans легких и определение бремя селезенки.
    4. Инкубируйте пластин O / N при 37 ° С. На следующий день, перечислить колонии на пластинах.
    5. Индекс результатом весу легких, чтобы получить КОЕ на грамм легких. Размеры выборки легких не то же самое, результаты должны быть выражены в КОЕ на грамм легких.
      Формула для индекса: [КОЕ] [х вес гемолиз трубки и легких] - [вес гемолиз трубки].

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Как видно ранее при описании протокола, эксперимент должен 5 дней, чтобы завершить (Рисунок 1: Эксперимент сроки). Один оператор запросил в течение всего проведении эксперимента и может обрабатывать процессы до максимум 10 мышей. Если больше животных требуется два человека необходимы, особенно для хирургического сбора проб. Действительно, все образцы должны быть собраны в рамках 2 часов, чтобы избежать повышенного пассивный альвеолярно-капиллярной утечки FITC-меченого альбумина в последние мышей.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Животных моделей, в частности, млекопитающие, являются полезными для выяснения сложных механизмов хозяин-патоген взаимодействия в области иммунитета. Конечно, потребность в информации, получаемой только из животных моделей должны быть существенными; в противном случае, использование животных должны быть заменены моделями в пробирке. Эта модель животных иллюстрирует понимание того, что может быть обеспечено только путем животной модели, так как взаимодействие между патогенов опосредуется многокомпонентной реакци...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы хотели бы выразить признательность Университету Лилля и Институту Пастера в Лилле, особенно Тьерри Шасса и Жан-Пьеру Декавелю, ответственным за безопасность разведения и содержания животных. Эта работа была поддержана "Société de Pathologies Infectieuses de Langue Française" (SPILF).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Севоран, СевофлуранAbott05458-02250 мл пластиковый флакон
Считыватель флуоресценции Mithras  LB940Berthold Technologiesссылка в первой колонкебез комментариев
Bromo-cresol фиолетовый агарBiomerieux4302120x за единицу
Пентобарбитал содик 5,47%CEVA6742145пластиковая бутылка 100 мл
2-х головочный клапан Distrimed92831без комментариев
Стерильная инокуляционная петля 10 & микро; lDutscher10175x1,000 кондиционирование
Инсулиновые шприцы 1 млDutscher30003на 100 кондиционирование
2 позиции Культуральная пробирка 8 млDutscher64300без комментариев
Ultrospec 10 General Electric Life Sciences80-2116-30без комментариев
Гемолизные трубки 13 x 75 мм GosselinW1773Xна 100
PBS - Фосфатно-солевой раствортехнологии Life10010023расфасован по 500 мл
амикацин 1 гMylan62516778 на 10 
Гепарин 10,000 UI в 2 млPan pharma912870110x за единицу
RAL 555 набор для окрашиванияRAL Diagnostics3615503 флакона по 100 мл
1,5 мл микроцентрифужная пробиркаSarstedt55.526.006x 1000
Прозрачная 300 &микро; l 96-луночный планшетSarstedt82 1581500без комментариев
Yest-пептон-декстроза БульонSigma95763в порошке
FITC-альбуминSigmaA9771в порошке
Luria Bertani BrothSigmaL3022в порошке
иглой 25 калибраTerumo или unisharpA231x 100 кондиционирование
ЦитоцентрифугаThermo ScientificA78300003комментариев нет

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Casadevall, A., Pirofski, L. -A. The damage-response framework of microbial pathogenesis. Nat. Rev. Micro. 1 (1), 17-24 (2003).
  2. Eddens, T., Kolls, J. K. Host defenses against bacterial lower respiratory tract infection. Curr. Opi. Immunol. , (2012).
  3. Beck, J. M., Young, V. B., Huffnagle, G. B. The microbiome of the lung. Translational research : J. Lab. Clin Med. 160 (4), 258-266 (2012).
  4. Hogan, D. A., Kolter, R. Pseudomonas-Candida interactions: an ecological role for virulence factors. Science. 296 (5576), 2229-2232 (2002).
  5. Nseir, S., Ader, F. Pseudomonas aeruginosa and Candida albicans: do they really need to stick together. Crit. Care Med. 37 (3), 1164-1166 (2009).
  6. Hibbing, M. E., Fuqua, C., Parsek, M. R., Peterson, S. B. Bacterial competition: surviving and thriving in the microbial jungle. Nat. Rev. Micro. 8 (1), 15-25 (2010).
  7. Gibbons, D. L., Spencer, J. Mouse and human intestinal immunity: same ballpark, different players; different rules, same score. Mucosal Immunol. 4 (2), 148-157 (2011).
  8. Ariffin, J. K., Sweet, M. J. Differences in the repertoire, regulation and function of Toll-like Receptors and inflammasome-forming Nod-like Receptors between human and mouse. Curr. Opi. Micro.. , (2013).
  9. Slutsky, A. S., Ranieri, V. M. Ventilator-Induced Lung Injury. NEJM. 369 (22), 2126-2136 (2013).
  10. Peleg, A. Y., Hogan, D. A., Mylonakis, E. Medically important bacterial-fungal interactions. Nat. Rev. Micro. 8 (5), 340-349 (2010).
  11. Roux, D., Gaudry, S., et al. Candida albicans impairs macrophage function and facilitates Pseudomonas aeruginosa pneumonia in rat. Crit. Care Med. 37 (3), 1062-1067 (2009).
  12. Mear, J. B., Gosset, P., et al. Candida albicans Airway Exposure Primes the Lung Innate Immune Response against Pseudomonas aeruginosa Infection through Innate Lymphoid Cell Recruitment and Interleukin-22-Associated Mucosal Response. Infect. Immun. 82 (1), 306-315 (2013).
  13. Ader, F. Short term Candida albicans colonization reduces Pseudomonas aeruginosa load and lung injury in a mouse model. Crit. care. , 1-33 (2009).
  14. Risling, T. E., Caulkett, N. A., Florence, D. Open-drop anesthesia for small laboratory animals. Can Vet J. 53 (3), 299-302 (2012).
  15. Stover, C. K., Pham, X. Q., et al. Complete genome sequence of Pseudomonas aeruginosa PAO1, an opportunistic pathogen. Nature. 406 (6799), 959-964 (2000).
  16. Boutoille, D., Marechal, X., Pichenot, M., Chemani, C., Guery, B. P., Faure, K. FITC-albumin as a marker for assessment of endothelial permeability in mice: comparison with 125I-albumin. Exp. Lung Res. 35 (4), 263-271 (2009).
  17. Faure, E., Mear, J. -B., et al. Pseudomonas aeruginosa type-3 secretion system dampens host defense by exploiting the NLRC4-coupled inflammasome. American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 189 (7), 799-811 (2014).
  18. Peleg, A. Y., Hogan, D. A., Mylonakis, E. Medically important bacterial-fungal interactions. Nat. Rev. Micro. 8 (5), 340-349 (2010).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

in vivo

Похожие статьи