Методическая статья

Электротаксис Исследования клетки легких рака с использованием многоканального Dual-электрического поля микрофлюидных Chip

DOI:

10.3791/53340

⸱

29 декабря 2015 г.

 ,  , 
1Research Center for Applied Sciences, Academia Sinica, 2Institute of Biophotonics, National Yang-Ming University, 3Biophotonics & Molecular Imaging Research Center (BMIRC), National Yang-Ming University, 4Department of Mechanical and Mechatronic Engineering, National Taiwan Ocean University, 5Ph.D. Program in Microbial Genomics, National Chung Hsing University

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Многие микрофлюидные устройства были разработаны для использования в изучении электротаксиса. Тем не менее, ни один из этих чипов не позволяет эффективно изучать одновременные химические и электрические эффекты (ЭФ) на клетки. Мы разработали устройство на основе полиметилметакрилата, которое обеспечивает лучше контролируемую сосуществующую ФВ и химическую стимуляцию для использования в исследованиях электротаксиса.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Поведение направленной миграции клеток под постоянным током электрического поля (dcEF) упоминается как электротаксис. Значительную роль физиологического dcEF в руководстве движения клеток во время эмбрионального развития, дифференциации клеток и заживление ран было продемонстрировано во многих исследованиях. Применяя микрожидкостных фишки на электротаксис анализа, процесс расследования сокращается и экспериментальные ошибки к минимуму. В последние годы микрофлюидальные устройства изготовлены из полимерных веществ (например, полиметилметакрилат, ПММА, или акриловую) или полидиметилсилоксана (ПДМС) широко используются при изучении ответов клеток на электрическую стимуляцию. Однако, в отличие от многочисленных шагов, необходимых для изготовления устройства PDMS, простой и быстрый строительство акриловых микро фл uidic чип делает его пригодным как для прототипирования и производства устройств. Тем не менее, ни один из представленных устройств не способствовать эффективному исследование одновременного химического и DCEF воздействие на клетки. В этом докладе мы описываем нашу конструкцию и изготовление акриловой основе многоканального двойного электрического поля (MDF) обломок расследовать одновременный эффект химической и электрической стимуляции на клетках рака легких. Чип МДФ имеет восемь комбинаций электрических / химические раздражения в одном тесте. Чип не только значительно сокращает необходимое время эксперимента, но также увеличивает точность электротаксис исследований.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Поведение адгезивных клеток, движущихся по направлению к анода или катода под постоянным током электрического поля (dcEF) упоминается как электротаксис. Electrotactic поведение клеток играет важную роль в эмбриогенезе, регенерации нерва, и заживления ран. 1 Опухолевые клетки, такие как раковые клетки крысы простаты, рак молочной железы клеток 2, 3 и легких клетки аденокарциномы 4-8 показали electrotactic движение при приложенном dcEF , Физиологический EF была измерена в железе тканей. 9,10 электротаксис Также сообщалось в железе ассоциированный опухолевых клеток. 2,3 Взятые вместе, электротаксис раковых клеток, как полагают, является фактором метастазы. 11 Управление электрического руководство раковые клетки под dcEF может быть потенциальным подходом для будущего лечения рака. Тем не менее, сегодня, подробный молекулярный механизм электротаксис остается спорным. Таким образом, исследование инфluence электрической стимуляции по миграции раковых клеток может способствовать развитию стратегий для лечения рака.

Недавно, био-Микрожидкостных устройства были изготовлены для изучения клеточных ответов течь силы сдвига, 12 химических градиентов, 13 и электрических стимулов 4 в пробирке. Изготовление био-Микрожидкостных устройств, использующих полидиметилсилоксана (PDMS) или полиметилметакрилат (ПММА, также известный как акрил) успешно снизили интенсивность отказов таких экспериментов. Кроме того, с помощью акриловых основе микрожидкостных устройства в качестве прототипа для исследования биологических предметы проще, чем с помощью PDMS чипов. Различные функции в устройствах на акриловой основе были разработаны для электротаксис исследования. Тем не менее, ни один из предыдущих конструкций не способны одновременно испытать влияние различных химических условий и электрического поля на клетки для электротаксис исследования. Таким образом, мы разработали устройство микрожидкостных-му вltichannel двойного электрического поля (MDF) чип, содержащий четыре независимых каналов культура и восемь различных экспериментальных условиях в одном чипе.

Акриловый основе МДФ чип, впервые сообщил Хоу и др., 8 интегрируется электрической стимуляции и несколько химически изолированных каналов. Эти химически изолированные каналы могут быть использованы для культуры различных типов клеток в одном эксперименте. DcEF в каналах производится по сети электропитания. Два независимых электрических полей, одна с прикладной напряженности электрического поля (EFS), а другой с 0 EFS, проводятся в каждом химически изолированный канал. Таким образом, микросхема обеспечивает более контролируемый сосуществующих EF и химическое раздражение. Более того, результаты численного моделирования химической диффузии внутри чипа MDF указать, что перекрестное загрязнение не происходило между каналами после экспериментального периода в 24 ч. 8

По сравнению с ДевиCE сообщает Li и др., 14 чип МДФ обеспечивает большую площадь культуры, которая позволяет для дальнейшего биохимического анализа электрически стимулированных клеток. Кроме того, с большей площадью наблюдения чипа МДФ, в несколько ячеек можно наблюдать в тесте, так что анализ скорости миграции или направленности электрически стимулированных клеток является более точным. Чип конструкций одноканальные предыдущих исследований, представленных Хуанг и др. 4 и Цай и др. 15 позволяют только один тип клеток или химических веществ, подлежащих испытанию. Тем не менее, чип МДФ могут быть использованы для изучения влияния различных химических веществ на электротаксис, а также последствия электрической стимуляции на разных типах клеток. Другими словами, чип МДФ позволяет эффективно изучении зависимостей химических доз.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Проектирование и изготовление МДФ Chip

  1. Нарисуйте индивидуальный рисунок акриловой слой, используя коммерческое программное обеспечение, такое как AutoCAD, и сохранить шаблон.
    1. Просмотрите дизайн четыре слоя акрилового листа рисунка на рисунке 1А и подтвердить соединений между слоями.
  2. Изготовление всех акриловые листы и ленту двухсторонний методом лазерной абляции с помощью СО 2 -лазера рисок (фиг 1B, 2A, 2B и). 16
    1. Включите лазерный Чертилка и подключить аппарат к контролирующей ноутбука.
    2. Запустите программное обеспечение и коммерческую открыть шаблон предназначен в шаге 1.1, нажав "предназначен файла шаблона."
    3. Поместите кусок пустой акрилового листа или двухсторонней ленты на сцене XYZ лазерного Чертилка.
    4. Установите фокус лазерного луча на поверхности акрилового листа или двухсторонней ленты с авто-alignmenт палку, предоставляемая производителем лазерного Чертилка.
    5. Отправить на проектную шаблон для лазерного Чертилка для прямого обработки акрилового листа или двухсторонней ленты.
  3. Снимите защитную бумагу с акриловых листов с помощью щипцов и взорвать поверхность чистой газообразным азотом.
  4. Стек акриловые листы и объединить их под давлением 2 кг / см 2 в тепловом тычковых течение 45 мин при 110 ° C, чтобы сформировать поток / электрический монтаж стимуляции канала.
  5. Подготовка микроскопа покровного стекла в качестве клеточной культуральной подложки в кристалле.
    1. Положите крышку стекла в сосуд для окрашивания и заполните банку с десятикратным разбавлением моющего средства, перечисленные в списке материалов.
    2. Положите крышку стекла и окрашивания банку в ультразвуковой очиститель STERI-и очистить защитное стекло в течение 15 мин.
    3. Вылейте моющего средства из окрашивания банку, наполнить банку дистиллированной водой и повторите шаг 1.5.2 3 раза.
    4. Сушат очищенный покровного стекла путем продувки газообразным азотом перед тем придерживаясь его на двусторонней клейкой ленты.
  6. Придерживайтесь очищенный покровного стекла для потока / электрической стимуляции сборки канала с двухсторонней ленты с рисунком в шаге 1.2.
  7. Придерживайтесь 13 штук акриловых адаптеров для отдельных отверстий в слое 1 чип сборки МДФ с супер клеем. Чип сборки МДФ затем полным (рис 2D).
  8. Стерилизацию полный чип сборки MDF с 30 мин УФ-облучения до использования.

2. Настройка Солт Bridge сети МДФ Chip

  1. Перед использованием простерилизовать все пластиковые трубы, от руки гайки и микроцентрифужных трубки, показанные на рис 3B, установив время выдержки 15 мин при 121 ° C в автоклаве.
  2. Подключите фторопластовые трубки (3В-я) с чипом сборки МДФ с помощью среднего входеи выпускной адаптеры показано на фиг.1А.
  3. Подключите Луер конусность среднесрочной входе и выходе пластиковые трубы в 3В-я в 3-полосных кранами.
  4. Возьмем 2,5 мл СО 2 -equilibrated фосфатно-солевом буфере (PBS), используя 3 мл шприц и соединить шприц с 3-ходовым запорным краном на входе пластиковой трубки. Подключение пустой шприц 3 мл с 3-ходовым запорным краном на выходе пластмассовой трубки. Два шприцы, таким образом, между собой через чип MDF.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Выдержите PBS в 37 ° С 5% -CO 2 клеточной культуры инкубатор O / N, чтобы получить СО 2 -equilibrated PBS.
  5. Печать отверстия в синий и зеленый адаптеры (рис 1а) на ПММА листа слой 1 с белыми твердыми от руки гайки (3В-III).
  6. Заполните солевой мостик каналы и культуры камеры с CO 2 -equilibrated PBS в шприц, описанной в шаге установки 2.4. Избежатьформирование пузырьков.
  7. Далее, поставить CO 2 -equilibrated PBS, содержащего чип MDF в 37 ° C 5% -CO 2 клеток инкубатора культуры для O / N инкубации. Это позволяет растворенного воздуха в двухсторонней ленты, чтобы сформировать пузырьки в камерах.
  8. Смыть пузыри в каналах быстрым потоком PBS в канал, используя два шприца. Насос PBS и обратно при необходимости.
  9. Слейте PBS в каналах через 3-ходовой кран, подключенного к средней выпускной трубе.
  10. Используя новый шприц 3 мл, принять 2,5 мл СО 2 -equilibrated Дульбекко в модификации Дульбекко (DMEM) (см шаг 3,5), и заменить шприц, соединенный с входом с новым. Пополните каналы со средой.
  11. Подготовка сети соль моста.
    1. Временно удалить твердые орехи (3В-III) на зеленых адаптеров (рис 1а) и ввести 3% горячей (> 70 ° C) агарозы в соль BRIDGE канал через отверстие в зеленый адаптеров (рис 1А).
      Примечание: Получение горячей агарозы: Растворить 1,5 г порошка агарозы в 50 мл PBS. Стерилизовать установки времени выдержки 20 мин при 121 ° С в автоклаве.
    2. Остановка инъекционных агарозы, когда жидкость заполняет три четверти длины канала солевого мостика.
    3. Уплотнение поры на зеленой адаптеров (фиг.1А) путем завинчивания твердые орехи (3В-III) после инъекции агарозном.
    4. Замените твердые орехи на синем адаптеров (рис 1А) со светопрозрачных трубчатых пальцев, плотно орехи (рис 3b).
    5. Загрузите 3% предварительно нагретый агарозы в трубчатых орехов (3В-IV).
    6. Вставить электроды Ag / AgCl (3В-V) в трубчатых орехов (3В-IV), прежде чемЗатвердевание агарозы.
  12. После завершения установки сети солевого мостика, впрыснуть CL1-5 клетки рака легких в культуральные камеры, одну камеру одновременно.

3. Подготовка раковых клеток и настройка для Electrotactic эксперимента

  1. Регулярный культура клеточной линии рака легких CL1-5.
    1. Культура раковые клетки CL1-5 легких, полученные от профессора Пан-Chyr Ян, 17 в полной среде в 75T для культивирования клеток колбу на 37 ° C в 5% CO 2 атмосфере. Полная среда состоит из DMEM и 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS). Суб-культивирования клеток каждые 3 до 4 дней. Клетки, используемые для выполнения электротаксис эксперименты меньше 25 отрывков из оригинального источника.
  2. Добавить 2 мл 0,25% трипсина буфера в экспоненциально растущих клеток CL1-5 и инкубировать в течение 2 мин в 37 ° С 5% -CO 2 ячейки инкубатор культура для сотовых detachmenт.
  3. Завершить отряда процесс с 6 мл 10% FBS среде DMEM и центрифуги клетки при 300 г в течение 5 мин при комнатной температуре. Затем отбросить среды и приостановить осадок клеток 5 мл PBS.
  4. Подсчитайте количество клеток в PBS. Затем принимать по 1 × 10 6 клеток и центрифуге при 300 г в течение 5 мин при комнатной температуре.
  5. Откажитесь от PBS. Приостановить клетки с подогретого CO 2 -equilibrated DMEM и регулировать плотность клеток быть 1 × 10 6 клеток / мл.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Выдержите полной среды в 37 ° С 5% -CO 2 клеточной культуры инкубатор O / N, чтобы получить CO 2 -equilibrated DMEM.

4. Настройка для Electrotactic эксперимента

  1. С выхода микросхемы MDF, вводят 0,3 мл, 1 × 10 6 / мл, из клеток в чипе.
  2. Инкубируйте клеток семенами MDF чип в культуре клеток инкубаторе (при 37 ° С и 5% СО 2) в течение 2-4 ч.
  3. Настройка МДФ микрожидкостный система.
    1. Установите микрожидкостных системы МДФ на прозрачной индия и олова оксида стекло (ITO) нагревателя. Измерьте температуру чипа MDF с К-типа термопары обрезанный между чипом MDF и стеклом ITO. Управление нагревателем ITO с пропорционально-интегрально-дифференциальный (ПИД) регулятор. Установите температуру микрожидкостных система инкубационный MDF до 37 ° C с ПИД-регулятора.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Изготовление в ITO нагревателя и установка системы отопления культуры клеток описаны в предыдущих докладах 18,19.
    2. Установите контролем температуры МДФ чип сборки на XYZ моторизованного столика с компьютерным управлением на инвертированный микроскоп. Использование моторизованной стадии описано в шаге 5.1. Насос полной среды в культуру камер через воздухозаборники с шприцевой насос четыре канала.
  4. Насос полной среды в чип MDF при скорости потока 20 мкл / ч. Культура отходы от отъездапозволяет собираются в микропробирок (показанные как "отходы" на рис 3а).
  5. Инкубируйте клетки для другого 16-18 ч при 37 ° С в чипе MDF.
  6. Для замены среды, насос среду, содержащую 50, 25, 5, 0 и мкМ ингибитора киназы соответственно в каждой культуре камеру при расходе 20 мкл / мин в течение 10 мин.
    Примечание: Подготовка 10 мМ исходного раствора в Ро-ассоциированной ингибитор протеинкиназы Y27632 добавлением 3 мл стерильной воды для ингибитора киназы в 10,6 мг. Развести 10 мМ маточного раствора до 50, 25 и 5 мкм, соответственно, с использованием 10% FBS среду DMEM.
  7. Инкубируйте клетки в ингибитора киназы еще в течение 60 мин при 37 ° С. Установите среднюю скорость потока до 20 мкл / ч. Используйте ту же температуру культуры и скорости, описанной выше в более поздних этапов течь.
  8. Для подключения источника питания постоянного тока к микросхеме MDF через электроды Ag / AgCl на чипе помощью электрических проводов.
  9. Серийно подключить амперметр Iп электрической цепи. Используйте амперметр для контроля электрического тока в кристалле МДФ.
  10. Включите источник питания постоянного тока и установите амперметр тока в мкА 86.94, регулируя напряжение питания в диапазоне от 15 до 19 В.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Учитывая закон Ома E = I / (σA эфф), где я течет через сыпучего материала электрический ток, то есть питательная среда в electrotactic камеры, σ (= 1,38 Ω -1 м - 1) является проводимость в культуральную среду, A эфф (0,21 мм 2 для 3 мм ширина × 0,07 мм в высоту) эффективная площадь поперечного сечения electrotactic камеры, и электрический ток (I), необходимо, чтобы генерировать 300 мВ / мм EF в чипе МДФ 86,94 мкА.

5. Приобретение и анализ изображений клеток

  1. Управление моторизованной этап, используя программу MATLAB GUI. С МДФ микрожидкостных системы, установленной на microscoPE, двигаться чип регионах наблюдений с использованием моторизованных этап.
  2. Запись изображения клеток, используя цифровой сингл зеркальная (SLR) камерой, установленной на микроскопе.
  3. Возьмем микроскопические изображения, используя объектив 4X с интервалом в 15 мин в течение 2 ч.
  4. Миграция клеток анализ.
    1. Запустите NIH ImageJ 1,47 В.
    2. Анализ расстояние от начальной до конечной позиции центра тяжести ячейки.
    3. Перейти к "Файл" → "Импорт" → "Image Sequence", и импортировать девять изображений для анализа миграции клеток. Первое изображение является результатом нулевого времени, и последнее изображение является результатом 120 мин.
    4. Перейти к "Анализ" → "указан измерений" и установите флажок рядом с "центр тяжести"
    5. Нажмите на иконку "Freehand выбранных".
    6. Изображать края выбранных ячеек в первом изображении.
    7. Перейти к "Edit" → "Выбор" → "Добавить в менеджера"
    8. К девятому изображения и изображают краю же клетках, отобранных на первом изображении. Клеточные позиции могут быть прослежены с помощью второго по восьмой изображений.
    9. Перейти к "Edit" → "Выбор" → "Добавить в менеджера"
    10. Повторите шаги 5.4.5 на 5.4.9, чтобы собрать данные от 90 до 100 клеток.
    11. Перейти к "→ Анализ" "Мера", чтобы получить результат начальных и конечных положений отдельных клеток.
      Примечание: Скорость миграции определяется как средняя длина клеточного движения в час. Направленность определяется как косинус, где находится угол между вектором dcEF (от анода к катоду) и вектора от начальной точки ячейки к своей конечной позиции. Направленность -1 для клеток, мигрирующих к аноду и 1 для клеток, мигрирующих к катоду. Для группы случайным мирешетка клетки, то направленность 0. 2

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Изготовление и монтаж прибора МДФ

Принципиальная схема на акриловой основе MDF чипа показано на фиг.1А. Четыре акриловые листы, один покрытие стекла, 13 акриловых адаптеры и кусок двухсторонней ленты были использованы в сборке готовой микросхемы МДФ (рис 2D). Есть только четыре независимых каналов культура в устройстве МДФ. Однако сеть солевой мостик на кристалле создает восем...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мы нашли процесс присоединения акриловых адаптеры на уровне 1 чипа МДФ будет сложно. Применение 1 до просто 2 мкл супер клей достаточно прочно придерживаться адаптер на чипе МДФ. Большие количества клея в результате неполного полимеризации супер клей и несоблюдение. После того, как акриловые адаптеры твердо придерживался на чипе МДФ, утечка жидкости в системе микрожидкостных редко произошло. Кроме того, о / N инкубации внутри вакуумной камеры помогли удалить воздух, находящийся между двухсторонней ленты / покровного сте...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Эта работа финансируется Министерством науки и технологий Тайваня (Контракт No. MOST 103-2113-M-001-003 -MY2) и Исследовательской программой по нанонауке и нанотехнологиям, Academia Sinica, Тайвань.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
<сильно>реагент
DMEM средаGibco, Invitrogen, США12800-017
Фетальная бычья сывороткаGibco, Invitrogen, США16000-044
ТрипсинGibco, Invitrogen, США25200-072
PBSBasic LifeBL2651
Y-27632 (гидрохлорид)Cayman Chemical Co10005583
agaroseLONZO, СШАшприц SeaKem LE AGAROSE
Terumo3 мл с конусом
3-х ходовой стопорный кранNiproс конусом
PMMA (акрил)HiShiRon Industries Co., Ltd, Тайваньтолщина 1 мм,
акриловый адаптер2 мм KuanMin Technology Co., Ltd, Taichung, Тайвань1/4-28 порт, 10x10x6 ммкастомизированная
гайкаThermo Fisher Scientific Inc.UPCHURCH:P-206x, P-200x, F120x, P-659, P-315x
Защитное стекло микроскопаDeckglä ser, Германия24x60 мм
двухсторонняя лента3MPET 8018
суперклей3MScotch Liquid Plus Super Glue
TFD4 моющее средствоFranklab, ФранцияTFD4
ультразвуковое стерилочистительLEO ULTRASONIC CO., LTD., Тайвань
ТермобондерKuanMin Technology Co., Ltd, Тайчжун, Тайваньиндивидуальный
регистратор CO2-лазераLTT group, ТайваньISL-II
JETEC Electronics Co., JapenTTM-J40-R-AB,
термопара типа KTECPELTPK-02A
4-канальный шприцевой насосKdScientific, США250P
источник питания постоянного токаGWInstek, Тайвань
X-Y-Z моторная сценаTanLian, E-O Co. Ltd., Тайванькастомизированный
инвертированный микроскопOlympus, ЯпонияCKX41
Canon, Япония60D
ЛюэраЛюэра контроллер пропорционально-интегрально-производного (PID) цифровая зеркальная камера

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. McCaig, C. D., Rajnicek, A. M., Song, B., Zhao, M. Controlling cell behavior electrically: current views and future potential. Physiol Rev. 85, 943-978 (2005).
  2. Djamgoz, M. B. A., Mycielska, M., Madeja, Z., Fraser, S. P., Korohoda, W. Directional movement of rat prostate cancer cells in direct-current electric field: involvement of voltagegated Na+ channel activity. J Cell Sci. 114, 2697-2705 (2001).
  3. Pu, J., et al. EGF receptor signaling is essential for electric-field-directed migration of breast cancer cells. J Cell Sci. 120, 3395-3403 (2007).
  4. Huang, C. W., Cheng, J. Y., Yen, M. H., Young, T. H. Electrotaxis of lung cancer cells in a multiple-electric-field chip. Biosens Bioelectron. 24, 3510-3516 (2009).
  5. Huang, C. W., et al. Gene expression of human lung cancer cell line CL1-5 in response to a direct current electric field. PLoS One. 6, e25928(2011).
  6. Sun, Y. S., Peng, S. W., Lin, K. H., Cheng, J. Y. Electrotaxis of lung cancer cells in ordered three-dimensional scaffolds. Biomicrofluidics. 6, 14102-1410214 (2012).
  7. Tsai, H. F., et al. Evaluation of EGFR and RTK signaling in the electrotaxis of lung adenocarcinoma cells under direct-current electric field stimulation. PLoS One. 8, e73418(2013).
  8. Hou, H. S., Tsai, H. F., Chiu, H. T., Cheng, J. Y. Simultaneous chemical and electrical stimulation on lung cancer cells using a multichannel-dual-electric-field chip. Biomicrofluidics. 8, (2014).
  9. Faupel, M., et al. Electropotential evaluation as a new technique for diagnosing breast lesions. Eur J Radiol. 24, 33-38 (1997).
  10. Szatkowski, M., Mycielska, M., Knowles, R., Kho, A. L., Djamgoz, M. B. Electrophysiological recordings from the rat prostate gland in vitro: identified single-cell and transepithelial (lumen) potentials. BJU Int. 86, 1068-1075 (2000).
  11. McCaig, C. D., Song, B., Rajnicek, A. M. Electrical dimensions in cell science. J Cell Sci. 122, 4267-4276 (2009).
  12. Das, T., Maiti, T. K., Chakraborty, S. Traction force microscopy on-chip: shear deformation of fibroblast cells. Lab Chip. 8, 1308-1318 (2008).
  13. Lin, F., Butcher, E. C. T cell chemotaxis in a simple microfluidic device. Lab Chip. 6, 1462-1469 (2006).
  14. Li, J., Zhu, L., Zhang, M., Lin, F. Microfluidic device for studying cell migration in single or co-existing chemical gradients and electric fields. Biomicrofluidics. 6, 24121-2412113 (2012).
  15. Tsai, H. F., Peng, S. W., Wu, C. Y., Chang, H. F., Cheng, J. Y. Electrotaxis of oral squamous cell carcinoma cells in a multiple-electric-field chip with uniform flow field. Biomicrofluidics. 6, 34116(2012).
  16. Cheng, J. Y., Wei, C. W., Hsu, K. H., Young, T. H. Direct-write laser micromachining and universal surface modification of PMMA for device development. Sensors and Actuators B: Chemical. 99, 186-196 (2004).
  17. Chu, Y. W., et al. Selection of invasive and metastatic subpopulations from a human lung adenocarcinoma cell line. Am J Respir Cell Mol Biol. 17, 353-360 (1997).
  18. Cheng, J. Y., Yen, M. H., Kuo, C. T., Young, T. H. A transparent cell-culture microchamber with a variably controlled concentration gradient generator and flow field rectifier. Biomicrofluidics. 2, 24105(2008).
  19. Cheng, J. -Y., Yen, M. -H., Hsu, W. -C., Jhang, J. -H., Young, T. -H. ITO patterning by a low power Q-switched green laser and its use in the fabrication of a transparent flow meter. Journal of Micromechanics and Microengineering. 17, 2316(2007).
  20. Pu, J., Zhao, M. Golgi polarization in a strong electric field. J Cell Sci. 118, 1117-1128 (2005).
  21. Zhao, M., Bai, H., Wang, E., Forrester, J. V., McCaig, C. D. Electrical stimulation directly induces pre-angiogenic responses in vascular endothelial cells by signaling through VEGF receptors. J Cell Sci. 117, 397-405 (2004).
  22. Yao, L., Shanley, L., McCaig, C., Zhao, M. Small applied electric fields guide migration of hippocampal neurons. J Cell Physiol. 216, 527-535 (2008).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Похожие статьи