Многие микрофлюидные устройства были разработаны для использования в изучении электротаксиса. Тем не менее, ни один из этих чипов не позволяет эффективно изучать одновременные химические и электрические эффекты (ЭФ) на клетки. Мы разработали устройство на основе полиметилметакрилата, которое обеспечивает лучше контролируемую сосуществующую ФВ и химическую стимуляцию для использования в исследованиях электротаксиса.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Электротаксис Исследования клетки легких рака с использованием многоканального Dual-электрического поля микрофлюидных Chip
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Поведение направленной миграции клеток под постоянным током электрического поля (dcEF) упоминается как электротаксис. Значительную роль физиологического dcEF в руководстве движения клеток во время эмбрионального развития, дифференциации клеток и заживление ран было продемонстрировано во многих исследованиях. Применяя микрожидкостных фишки на электротаксис анализа, процесс расследования сокращается и экспериментальные ошибки к минимуму. В последние годы микрофлюидальные устройства изготовлены из полимерных веществ (например, полиметилметакрилат, ПММА, или акриловую) или полидиметилсилоксана (ПДМС) широко используются при изучении ответов клеток на электрическую стимуляцию. Однако, в отличие от многочисленных шагов, необходимых для изготовления устройства PDMS, простой и быстрый строительство акриловых микро фл uidic чип делает его пригодным как для прототипирования и производства устройств. Тем не менее, ни один из представленных устройств не способствовать эффективному исследование одновременного химического и DCEF воздействие на клетки. В этом докладе мы описываем нашу конструкцию и изготовление акриловой основе многоканального двойного электрического поля (MDF) обломок расследовать одновременный эффект химической и электрической стимуляции на клетках рака легких. Чип МДФ имеет восемь комбинаций электрических / химические раздражения в одном тесте. Чип не только значительно сокращает необходимое время эксперимента, но также увеличивает точность электротаксис исследований.
Введение
Поведение адгезивных клеток, движущихся по направлению к анода или катода под постоянным током электрического поля (dcEF) упоминается как электротаксис. Electrotactic поведение клеток играет важную роль в эмбриогенезе, регенерации нерва, и заживления ран. 1 Опухолевые клетки, такие как раковые клетки крысы простаты, рак молочной железы клеток 2, 3 и легких клетки аденокарциномы 4-8 показали electrotactic движение при приложенном dcEF , Физиологический EF была измерена в железе тканей. 9,10 электротаксис Также сообщалось в железе ассоциированный опухолевых клеток. 2,3 Взятые вместе, электротаксис раковы....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
1. Проектирование и изготовление МДФ Chip
- Нарисуйте индивидуальный рисунок акриловой слой, используя коммерческое программное обеспечение, такое как AutoCAD, и сохранить шаблон.
- Просмотрите дизайн четыре слоя акрилового листа рисунка на рисунке 1А и подтвердить соединений между слоями.
- Изготовление всех акриловые листы и ленту двухсторонний методом лазерной абляции с помощью СО 2 -лазера рисок (фиг 1B, 2A, 2B и). 16
- Включите лазерный Чертилка и подключить аппарат к контролирующей ноутбука.
- Запустите прог....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Изготовление и монтаж прибора МДФ
Принципиальная схема на акриловой основе MDF чипа показано на фиг.1А. Четыре акриловые листы, один покрытие стекла, 13 акриловых адаптеры и кусок двухсторонней ленты были использованы в сборке готовой микросхемы МДФ (рис 2D). Есть только четыре независимых каналов культура в устройстве МДФ. Однако сеть солевой мостик на кристалле создает восем.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Мы нашли процесс присоединения акриловых адаптеры на уровне 1 чипа МДФ будет сложно. Применение 1 до просто 2 мкл супер клей достаточно прочно придерживаться адаптер на чипе МДФ. Большие количества клея в результате неполного полимеризации супер клей и несоблюдение. После того, как акриловые адаптеры твердо придерживался на чипе МДФ, утечка жидкости в системе микрожидкостных редко произошло. Кроме того, о / N инкубации внутри вакуумной камеры помогли удалить воздух, находящийся между двухсторонней ленты / покровного сте.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.
Благодарности
Эта работа финансируется Министерством науки и технологий Тайваня (Контракт No. MOST 103-2113-M-001-003 -MY2) и Исследовательской программой по нанонауке и нанотехнологиям, Academia Sinica, Тайвань.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| <сильно>реагент | |||
| DMEM среда | Gibco, Invitrogen, США | 12800-017 | |
| Фетальная бычья сыворотка | Gibco, Invitrogen, США | 16000-044 | |
| Трипсин | Gibco, Invitrogen, США | 25200-072 | |
| PBS | Basic Life | BL2651 | |
| Y-27632 (гидрохлорид) | Cayman Chemical Co | 10005583 | |
| agarose | LONZO, США | шприц SeaKem LE AGAROSE | |
| Terumo | 3 мл с конусом | ||
| 3-х ходовой стопорный кран | Nipro | с конусом | |
| PMMA (акрил) | HiShiRon Industries Co., Ltd, Тайвань | толщина 1 мм, | |
| акриловый адаптер | 2 мм KuanMin Technology Co., Ltd, Taichung, Тайвань | 1/4-28 порт, 10x10x6 мм | кастомизированная |
| гайка | Thermo Fisher Scientific Inc. | UPCHURCH:P-206x, P-200x, F120x, P-659, P-315x | |
| Защитное стекло микроскопа | Deckglä ser, Германия | 24x60 мм | |
| двухсторонняя лента | 3M | PET 8018 | |
| суперклей | 3M | Scotch Liquid Plus Super Glue | |
| TFD4 моющее средство | Franklab, Франция | TFD4 | |
| ультразвуковое стерилочиститель | LEO ULTRASONIC CO., LTD., Тайвань | ||
| Термобондер | KuanMin Technology Co., Ltd, Тайчжун, Тайвань | индивидуальный | |
| регистратор CO2-лазера | LTT group, Тайвань | ISL-II | |
| JETEC Electronics Co., Japen | TTM-J40-R-AB, | ||
| термопара типа K | TECPEL | TPK-02A | |
| 4-канальный шприцевой насос | KdScientific, США | 250P | |
| источник питания постоянного тока | GWInstek, Тайвань | ||
| X-Y-Z моторная сцена | TanLian, E-O Co. Ltd., Тайвань | кастомизированный | |
| инвертированный микроскоп | Olympus, Япония | CKX41 | |
| Canon, Япония | 60D |
Ссылки
- McCaig, C. D., Rajnicek, A. M., Song, B., Zhao, M. Controlling cell behavior electrically: current views and future potential. Physiol Rev. 85, 943-978 (2005).
- Djamgoz, M. B. A., Mycielska, M., Madeja, Z., Fraser, S. P., Korohoda, W.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
