Этот метод оценивает инвазию раковых клеток из сфероидов в окружающую 3D-матрицу. Сфероиды генерируются методом культивирования висячих капель, а затем встраиваются в матрицу, состоящую из материалов базальной мембраны и коллагена I типа. В дальнейшем контролируется инвазия из сфероидов.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Раковая клетка Сфероид Анализ для оценки Invasion в 3D Настройка
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Считается, что инвазивный характер линий раковых клеток коррелирует с их метастатическим потенциалом. Большинство традиционных анализов, однако, не исследуют эти инвазивные особенности в трехмерной среде, и полученные данные страдают от ограниченной биологической применимости. Здесь представлен подход к визуализации инвазивной способности клеточных линий в физиологически значимых условиях. Анализ на инвазию сфероидов в раковые клетки сначала использует гравитацию для получения сфероидов в каплях среды, которые свисают с крышки чашки для клеточной культуры. Затем эти сфероиды встраиваются в 3D-матрицу, состоящую из смеси материалов базальной мембраны и коллагена I типа. Затем с течением времени контролируется выход раковых клеток из сфероидов в окружающий матрикс. Описанный здесь метод может быть модифицирован для изучения инвазии после кокультуры различных типов клеток, включения лекарств/ингибиторов или изменений в компонентах внеклеточного матрикса (ВКМ).
Введение
Установлено, что подвижность клеток рака является предиктором метастатическим потенциалом, учитывая, что такое поведение способствует вторжение через базальную мембрану и вступления в кровеносной системе 1. Большинство исследований по подвижности была сосредоточена на том, как клетки ведут двумерной установки (2D), хотя это становится широко признано, что движение клеток в трехмерной (3D) матрицы является более представительным, как эти же клеток фактически ведут себя в естественных условиях 2. Культура системы 3D все чаще используется для изучения клеточных поведения, которые варьируются от клеточной морфологии, кинетики роста в и лека....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
1. Генерация сфероидов
- Подготовка одного суспензии клеток для подвешивания падение культуры путем отсоединения прилипшие раковых клеток культур ~ 70% слияния с использованием PBS мыть с последующим воздействием 0,05% раствора трипсина-ЭДТА.
- Нейтрализовать раствор трипсина с клеточной культуральной среде и считать клеток с использованием аликвоты клеточной суспензии. Примечание: Удельный среда культуры клеток будет зависеть от клеточной линии проходят испытания. Последующие АТСС медиа рекомендации, где среда культуры клеток, как правило, DMEM + 10% FBS. Более подробную информацию можно найти в таблице материалов.
- Выполнение разбавление, ч....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Использование сфероида вторжения анализа (фиг.1), панель раковых клеточных линий испытывали на их способность к образованию сфероидов, а также на сумму клеток выхода выставлены после имплантации в 3D матрице, состоящей из базальной мембраны материалов и типа коллагена (Таблица 1). Эти результаты показывают, что не каждый рак линия создаст хорошо сформированные сфероидов, где клеточные линии, обладающие эпителиальных морфологию в пробирке, как правило, производят регулярные и гл.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Это исследование оценивали эффективность панели линий раковых клеток в сфероида вторжения анализа (таблица 1). Как правило, мы находим, что сфероид образование усиливается в более эпителиальных вид клеточных линий, где присутствие межклеточных соединений способствует формированию сфероид-как архитектуры. Известные клеточные линии, которые прошли в переход эпителиальных мезенхимальных, как MDA-MB-231 клеток не образуют сфероидов в висячей капли культуры наиболее вероятного из-за их снижения E-, N- и Р-ка.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.
Благодарности
Поддерживается NIH гранты P30 CA051008 и T32 CA009686 (ATR).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Matrigel Growth Factor Reduced | Corning | CB-40234 | |
| Коллаген типа I, Крысиный хвост, 100 мг | Millipore | 08-115 | |
| DMEM | Life Technologies | 11995-065 | |
| RPMI 1640 Medium | Life Technologies | 11875-093 | |
| PBS | Life Technologies | 10010-023 | |
| 0,05% трипсин-ЭДТА | Life Technologies | 25300-054 | |
| Фетальная бычья сыворотка, термоинактивированная | Omega Scientific | FB-12 | |
| 100 мм обработанная TC посуда | Corning Incorporated | 430167 | |
| 24-луночные пластины с TC-обработкой | NEST Линии Biotechnlology | 702001 | |
| Olympus IX-71 Inverted Microscope | |||
| Cell поддерживали в DMEM + 10% FBS, с расчетом на BT-474 и LNCaP клетки, которые содержали в RPMI + 10% FBS. |
Ссылки
- Chambers, A. F., Groom, A. C., MacDonald, I. C. Metastasis: Dissemination and growth of cancer cells in metastatic sites. Nat Rev. Cancer. 2 (8), (2002).
- Schmeichel, K. L., Bissell, M. J. Modeling tissue-specific signaling and organ function in three dimensions.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
