Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Боковые Корень Индуцибельная системы в

13.8K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/53481

⸱

14 января 2016 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Plant Systems Biology, VIB, Ghent, 2Department of Plant Biotechnology and Bioinformatics, Ghent University

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

Система индуцируемой латеральных корней (LRIS) обеспечивает синхронную индукцию боковых корней и представлена для Arabidopsis thaliana и кукурузы.

Аннотация

Боковое развитие корней вносит значительный вклад в корневую систему и, следовательно, имеет решающее значение для роста растений. Изучение инициации бокового корня, однако, утомительно, потому что оно происходит только в нескольких клетках внутри корня и непредсказуемым образом. Чтобы обойти эту проблему, была разработана система индуцируемой латерального корня (LRIS). При последовательной обработке рассады ингибитором транспорта ауксина и синтетическим ауксином, строго контролируемое начало бокового корня происходит синхронно в первичном корне, что позволяет обильно отбирать образцы желаемой стадии развития. LRIS впервые был разработан для Arabidopsis thaliana, но может применяться и для других растений. Соответственно, он был адаптирован для использования в кукурузе (Zea mays). Дан подробный обзор различных этапов LRIS на обоих заводах. Сочетание этой системы со сравнительной транскриптомикой позволило идентифицировать функциональные гомологи генов инициации латерального корня Arabidopsis у других видов, как показано здесь для CYCLIN B1; 1 (CYCB1; 1) ген клеточного цикла у кукурузы. Наконец, обсуждаются принципы, которые необходимо учитывать при разработке LRIS для других видов растений.

Введение

Корневая система имеет решающее значение для роста растений, так как он обеспечивает закрепление и поглощение воды и питательных веществ из почвы. Поскольку расширение корневой системы, главным образом, зависит от производства боковых корней, их инициирование и формирование были широко изучены. Боковые корни начато в определенное подмножество клеток перицикла, называется стволовых клеток 1. В большинстве двудольных, таких как Arabidopsis THALIANA, эти клетки расположены в protoxylem полюсов 2, тогда как у однодольных, таких как кукуруза, они находятся на флоэмы полюсов 3. Стволовых клеток отмечены повышенным ответ ауксина 4, с последующим экспрессии специфических генов клеточного цикла (например, циклин В1; 1 / CYCB1; 1), после чего они проходят первый этап асимметричных антиклинальными подразделений 5. После серии скоординированных антиклинальных и периклинальных подразделений, боковая корень зачаток формируется, что, наконец появится в качестве аutonomous боковой корень. Место и сроки боковых корней начала, однако, не предсказуема, так как эти события ни в изобилии, ни синхронизированы. Это препятствует использованию молекулярных подходов, таких как транскриптомики для изучения этого процесса.

Для решения этого, боковых корней Индуцибельная Система (LRIS) была разработана 6, 7. В этой системе, рассаду сначала обрабатывают N -1-naphthylphthalamic кислоты (НПД), который ингибирует транспортировки ауксина и накопление, следовательно, блокируя боковых корней инициирование 8. По впоследствии передаче рассаду, чтобы среде, содержащей синтетический ауксина 1-нафталин уксусной кислоты (НАА), весь слой перицикла реагирует на повышенный уровень ауксина, таким образом, индуцируя массово корневые начала разделы боковые клеточные 6. Таким образом, эта система приводит к быстрым, синхронных и обширные боковые корни посвящений, что позволяет легко коллекция образцов корневых обогащенные для определенной стадии позднегоRAL развитие корневой. Впоследствии эти образцы могут быть использованы для определения генома профили экспрессии во время формирования боковых корней. LRIS дала уже значительные знания о боковых корней посвящения в Arabidopsis и кукурузы 9-13, но необходимость применять эту систему с другими видами растений становится все более очевидной, поскольку все больше геномы последовательности и есть повышенный интерес к передаче знаний, чтобы экономично важно виды.

Здесь подробные протоколы Arabidopsis и кукурузы LRISs приведены. Далее, пример использования системы обеспечивается, иллюстрируя, как данные, полученные от транскриптомика кукурузы LRIS могут быть использованы для идентификации функциональных гомологов, которые имеют консервативный функцию при инициации боковых корней между различными видами растений. Наконец, руководящие принципы для оптимизации LRIS для других видов растений предлагается.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

1. Arabidopsis LRIS протокол

Примечание: текст относится к "малых" или "больших" экспериментов масштабе. Масштабные эксперименты Маленькие, такие как анализ маркер линии и гистологического окрашивания 6, 14, требуют лишь несколько образцов. Крупномасштабные эксперименты, такие как количественные реального времени Qrt-ПЦР, микро-массивов 9-11 или РНК секвенирования, требуют большего количества образцов. Таким образом, количество ~ 1000 саженцев на образце был использован Ваннесте др 11. Для выполнения микрочипов эксперимента после корня сегмента вскрытия.

1 ДЕНЬ

  1. Стерилизация Arabidopsis Семена
    Примечание: Выберите один из следующих процедур для семян стерилизации. Любой из них подходит для следующих шагов протокола. Стерилизация газовая (1.1.2) представляет два основных преимущества по сравнению с жидкой стерилизации (1.1.1): это занимает меньше времени, когда обработке большого онемениеэ семян, так как нет пипетки не должно происходить для отдельных образцов; и стерилизованные семена могут храниться в течение длительного периода времени. Тем не менее, это требует эксикаторе и осторожного обращения.
    1. Жидкость стерилизации
      1. Налейте нужное количество семян в микро-центрифужные пробирки. Можно использовать до 20 мг (~ 800 семян) в 1,5 мл пробирку или 40 мг (~ 1600), в семенах 2 мл микро-центрифужные пробирки.
      2. Добавить 1 мл 70% этанола. Обратить или встряхните в течение 2 мин.
      3. Заменить 70% этанола с 1 мл раствора стерилизации в течение 15 мин. (Подготовка свежий раствор стерилизации: 3,85 мл гипохлорита натрия (NaOCl) акций (12%) (ВНИМАНИЕ: Используйте вытяжной шкаф), 5 мкл Tween 20, до 10 мл водой инвертировать трубок несколько раз, чтобы убедиться, что все семена приходят. в контакте с раствором.
      4. В ламинарного шкафа воздушного потока, заменить стерилизации раствора с 1 мл стерильной дистиллированной воды и промыть семена 5 раз в течение 5 мин при повторномLY заменяя 1 мл свежей стерильной дистиллированной воды.
    2. Газ Стерилизация
      1. Налейте нужное количество семян в 2 мл микро-центрифужную пробирку. Используйте отдельные трубы при работе с несколькими независимыми линиями, а также организовать их открыл в пластиковой коробке микро-центрифуги трубы или владельца. Если количество семян в одной пробирке превышает 500 (12,5 мг), подразделяют семена в соответствующем количестве трубок, чтобы обеспечить успешную стерилизацию. Убедитесь, что крышки соседних труб не покрывают друг друга. Совмещаются крышку коробки на дне, как это должно быть в эксикаторе, а также для стерилизации.
      2. Поместите коробку в миску эксикаторе, наряду с стеклянный стакан (ВНИМАНИЕ: Используйте вытяжной шкаф).
      3. Заполните стакан с 100 мл 12% NaOCl (ВНИМАНИЕ: Используйте вытяжной шкаф). Положите крышку на эксикаторе, но оставить небольшое отверстие, где стакан помещается.
      4. Добавьте 3 мл 37% соляной кислоты (дымящей) (ЦАСАЦИИ: Используйте вытяжной шкаф) в стакане через небольшое отверстие и быстро закрыть эксикаторе. Решение будет пузыриться в течение некоторого времени из-за образования Cl 2 -gas. Оставьте систему закрыт O / N (или, по крайней мере 8 ч).
      5. Снимите крышку эксикаторе. Выньте коробку и закройте его крышкой, чтобы избежать загрязнения во время транспортировки.
      6. Поставьте флажок в ламинарном шкафу воздушного потока, снимите крышку и оставьте семена в течение приблизительно 1 часа при комнатной температуре, чтобы позволить выпуск газа.
        Примечание: Семена можно безопасно хранить в сухом в закрытых микро-центрифужные пробирки до 2 недель при температуре 4 ° С.
  2. Боковые Корень Индукция в Arabidopsis
    1. Боковые Корень Ингибирование (НПД Лечение)
      1. Подготовьте питательную среду для роста в пробирке. Среда содержит половинной крепости Murashige и Skoog смесь солей 15, 0,1 г / л мио-инозит, 10 г / л сахарозы, и буферизуется с 0,5г / л 2- (N-морфолино) этансульфоновой кислоты (MES).
      2. Отрегулируйте рН до 5,7 с помощью 1 М КОН. Добавить 8 г / л агара тканей растений и автоклав среды в течение 20 мин при 121 ° С.
      3. Подготовка 25 мМ исходного раствора в ННА диметилсульфоксид (ДМСО) (ВНИМАНИЕ: Используйте перчатки). В ламинарном шкафу потоком воздуха, охлаждение автоклавного среды до приблизительно 65 ° С (что температура, при которой бутылка может быть проведена вручную), и добавить 25 мм NPA маточного раствора с получением конечной концентрации 10 мкМ NPA.
      4. Перемешать при добавлении осторожно встряхивая бутылку в течение 10 сек. Налейте 50 мл среды на квадратный Петри (12 см х 12 см).
        Примечание: В случае крупномасштабного эксперимента, нанесите нейлоновая сетка (20 мкм), чтобы обеспечить легкую передачу. Подготовьте сетку (9 см х 9 см) для автоклавирования (рис 1А). Когда в автоклаве, применять сетку к среде роста использованием стерильных пинцетов (рис 1б). Аккуратно надавите на сетку в среду роста с помощью Sterilized drigalsky чтобы убедиться, что он находится в хорошем контакте со средой роста (рис 1B) (ВНИМАНИЕ: Работа в стерильных условиях).
      5. Сейте семена на НПД-пластин.
        Примечание: В случае, если масштабный эксперимент планируется, сеять 2 плотные и хорошо выровненных строк 50 семян, чтобы облегчить отбор проб (см 1.2.2.3).
        1. В случае жидкого стерилизации, посеять семена на NPA-пластин с использованием 200 мкл пипетки. Отрежьте 3 - 4 мм, в конце советы пипетки в стерильных условиях (или до стерилизации советы) для того, чтобы иметь возможность пипетки семена. Внесите вверх и вниз несколько раз, чтобы вновь приостановить семена, затем пипеткой примерно 150 мкл стерильной воды с 10 - 20 семян и ждать, пока осадок семян в нижней части наконечника. (ВНИМАНИЕ: Работа в стерильных условиях)
          Примечание: При нажатии на агар или сетку мягко кончиком, капля воды с семенами, будут освобождены от него (рис 1С).
        2. В случае газовой стерилизации, посеять семена с помощью автоклавного toothpicks.Pinch зубочистку в агар, прежде чем принимать семена, чтобы обеспечить липкую поверхность. Возьмите один семян по одному, используя зубочистку и распространять семена на пластинах (рис 1D). Кроме того, добавить стерильную воду на семена, и сеять, как описано в 1.2.1.5.1 (ВНИМАНИЕ: Работа в стерильных условиях).
      6. Печать пластины с дышащей клейкой ленты и хранить их пластины при 4 ° С в темноте в течение по крайней мере 2 дней и максимум на один неделю. Это необходимо для стратификации и обеспечивает синхронизированных и более эффективного прорастания.
        Примечание: В качестве альтернативы, семена могут быть стратифицированы перед посевом, погруженный в дистиллированной воде в микро-центрифуги труб, что требует меньше пространства холодильника. В этом случае, хранить трубы, по крайней мере, одной недели при 4 ° С, и перемещать панели к шкафу роста сразу же после посева (см 1.2.1.7).
        ДЕНЬ 3
      7. Перемещение пластины к корпусу роста (непрерывный свет (110 м мкЕ -2 с -1), 21 ° С) в течение 5 дней (2 дня прорастания и 3 дня роста) в почти вертикальном положении (от 80 до 90 °) обеспечить рост корневой на, а не в среде.
        ДЕНЬ 8
    2. Боковые Корень Индукционная (НАА Лечение)
      1. Подготовка же среду для роста, как описано в 1.2.1.1 и 1.2.1.2. Подготовьте 50 мМ маточного раствора в ДМСО НАА (ВНИМАНИЕ: Используйте перчатки). Охлаждают автоклавного среды до 65 ° С и добавляют раствор NAA к среде для получения конечной концентрации 10 мкМ NAA (ВНИМАНИЕ: работа в стерильных условиях).
        1. Перемешать при добавлении осторожно встряхивая бутылку в течение 10 сек. Налейте 50 мл среды на квадратный Петри (12 см х 12 см).
      2. Передача рассаду из чашки, содержащие среду для роста с добавлением 10 мкМ NPA к тем SUPplemented 10 мкМ НУК.
        1. Крюк руки изогнутых пинцетов под семядолей проростков и осторожно удалите его из пластины. Только передать саженцы которых корни выросли совсем в контакте со средой НПД-роста и предпочтительно вниз.
        2. Обезжиренное корень над НАА среде, содержащей рост поверхности на небольшом расстоянии. Убедитесь, что корни растений находятся в хорошем контакте со средой роста. Если требуется, нажмите корень мягко среднесрочной рост поверхности с помощью пинцета.
          Примечание: В случае крупномасштабного эксперимента, удалить все саженцы, которые не находятся в контакте с сеткой и передачи путем поднятия сетки на двух верхних углах с помощью пинцета. Убедитесь, что сетка в хорошем контакте с НАА среде, содержащей по полету сетку над поверхностью агара на небольшом расстоянии (рис 1E).
      3. Печать новых пластин с дышащей ленты и поместите их в шкаф роста (CONнепрерывный свет (110 м мкЕ -2 с -1), 21 ° С) в вертикальном положении в течение требуемого времени после индукции до отбора проб.
        Примечание: В случае масштабного эксперимента, использовать скальпель, чтобы сократить корень сегментов сразу непосредственно на сетке и образец их осторожно очищая поверхность сетки.

2. LRIS Кукуруза протокол

  1. Расслоение кукурузы ядра
    1. Инкубируйте кукурузы ядра при 4 ° С в темноте в течение по меньшей мере 1 недели.
      Примечание: Этот протокол был разработан с использованием В73 кукурузы инбредной линии.
  2. Стерилизация кукурузы ядра
    1 ДЕНЬ
    Примечание: Хотя проростков кукурузы не должны быть выращены в стерильных условиях, рекомендуется для стерилизации кукурузы ядра и работать с стерильным материалом для предотвращения роста грибов в рулон бумагиСистема.
    1. Положите необходимое количество кукурузы ядер в стерилизованную стеклянную мензурку.
    2. Добавить 100 мл раствора стерилизации (6% NaOCl в воде) (ВНИМАНИЕ: Использование вытяжного шкафа).
    3. Добавить магнитной мешалкой и поместить стакан на магнитную мешалку на низкой скорости перемешивания (приблизительно 250 оборотов в минуту) при комнатной температуре в течение 5 мин.
    4. Промыть пять раз в течение 5 мин при замене раствора 100 мл свежего стерильного воды.
  3. Посев кукурузы орехов
    1. Наденьте перчатки, чтобы уменьшить риск заражения, и принимать рулон бумажных полотенец.
    2. Оторвите два отрезка бумажного полотенца руки с общей протяженностью двух листов (примерно 92 см х 24 см) и поместите их поверх друг друга на чистую поверхность (2А).
    3. Сложите листы вдвое по длине (приблизительно 92 см х 12 см) (2А).
    4. Используйте пинцет, чтобы распределить 10 ядер примерно в 2 см от верхней над Тон всей длине бумаги, сохраняя при этом внутреннее пространство 8 см между каждым ядром и 8 см свободного на обоих концах (Фигура 2В). Убедитесь, что корешок из ядра вниз и в сторону бумаги (рис 2B).
    5. Аккуратно свернуть бумагу по всей длине, сохраняя семена в месте (рис 2б). Для облегчения прокатки, это необязательно сначала распылить бумагу стерильной водой.
    6. Положите булочки бумаги в стерилизованные стеклянные трубки примерно на 6 см в диаметре и 14 см в высоту (например, 250 мл центрифужные пробирки) и поместите их в стойку (рис 2С).
  4. Боковые Корень Индукция в кукурузы
    1. Подготовьте мМ NPA маточного раствора 50 (растворенного в ДМСО) (ВНИМАНИЕ: Используйте перчатки).
    2. Для каждой трубки, сделать 50 мкм NPA решение, добавив 125 мкл из мМ NPA раствора 50 мл до 125 стерильной воды в стерилизованную стеклянную мензурку.
    3. Все хорошо перемешать изалить 125 мл 50 мкМ раствора NPA над рулона бумаги в трубе. Рулонная бумага будет поглощать решение и стать полностью всасывается.
      Примечание: При использовании рулонов бумаги и трубки с другими размерами, регулировать громкость, соответственно. Жидкость должна достичь наполовину трубки для обеспечения достаточного поглощения.
    4. Установите систему рулона бумаги в шкафу роста в течение трех дней (27 ° C, непрерывного света, 70% относительной влажности). Убедитесь, что ролики бумажные остаются пропитанной добавления дополнительных 50 мкм решение NPA, так как решение со временем испаряется (рис 2D).
      ДЕНЬ 4
    5. Подготовьте мМ НАА маточного раствора 50 (растворенного в ДМСО) (ВНИМАНИЕ: Используйте перчатки).
    6. Для каждой трубки, приготовить раствор НАА 50 мкм, добавив 125 мкл из запаса 50 мМ НАА в 125 мл стерильной воды в стерилизованную стеклянную мензурку.
    7. Осторожно выжать большую часть оставшегося раствора NPA из бумажных рулонов и местом в стерильной воде в течение 5 мин, чтобы вымыть его (ВНИМАНИЕ: Используйте перчатки). Аккуратно выдавите большая часть воды из рулонов бумаги. Повторите этот этап промывки три раза.
    8. Все хорошо перемешать и залить 50 мкм НАА раствора через рулонов бумаги в трубках. Убедитесь, что они полностью всасывается.
    9. Установите систему рулона бумаги в кабинете роста (27 ° С, непрерывное излучение, 70% относительной влажности) в течение требуемой продолжительности после индукции.
  5. Боковые Корень Индукция в Адвентивные Короны корней кукурузы
    Примечание: LRIS, как описано выше, индуцирует боковые корни в основной корень. Тем не менее, в кукурузе и других однодольных, основной корень и эмбриональных семенных корней, вместе с их боковых корней, в основном важно во время всходов развития. На более поздней стадии роста растений, пост-эмбриональные придаточные корни возникают на стебле, а также развивать боковые корни, чтобы сформировать новую корневую систему 16. LRIS также можно использоватьd, чтобы вызвать боковые корни на этих пост-эмбриональных придаточных корней коронок после некоторых незначительных корректировок в LRIS на эмбриональной первичной корня.
    1. Для того, чтобы рулоны бумаги, создать бутерброд бумаг с соответственно двух слоев бумажного полотенца руки на внешней стороне, и двух слоев бумаги для проращивания внутри. Поместите простерилизованные ядра (см шаги 2.1 до 2.2) между двумя листами бумаги для проращивания. Всхожесть бумаги, по сравнению с рукой полотенце бумаги, будет менее склонным быть пронизана корневых волосков и боковых корней, которые сделают открытие бумажных рулонов легче позже. С другой стороны, два внешних слоя бумажного полотенца стороны будет способствовать поглощению жидкости.
    2. Вставьте рулоны в 700 мл стеклянных трубок и залить стерильную воду без NPA над ними. Убедитесь, что они полностью всасывается.
    3. Прорастают стерилизованные ядра в шкафу роста (см шаг 2.4.9).
    4. Вырастить рассаду до тех придаточных корней коронокначинают появляться (6 дней для B73). Убедитесь, что ролики бумаги хранятся во влажном состоянии путем добавления стерильной воды при необходимости.
    5. Передача к раствору 25 мкМ NPA в течение 4 дней (см шаги 2.4.1 2.4.4), затем аналогичный индукции боковых корней инициации путем замены раствора NPA с 50 мкМ NAA раствора после стадии промывки (см шаг 2,4 .5 2.4.9).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Применение LRIS Выполнение сравнительных транскриптомика боковой корневого процесса инициации

Одним из применений LRIS является сравнение и сопоставление профилей экспрессии генов в процессе формирования боковых корней у разных видов. Сравнительные транскриптомика подходы создают возможность определить ортологичные генов, участвующих в процессе развития боковых корней у разных видов. Боковые корень инициация, ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

В протоколе Arabidopsis LRIS, важно, чтобы передать только рассаду, которые выросли совершенно в контакте с НПД-содержащей среде роста. Это гарантирует, что инициирования боковых корней заблокирован по всей длине корневого. Для того, чтобы предотвратить ранив ростки Во время передачи вооружений изогнутых щипцов может быть подключен в соответствии с семядолей проростков. При передаче, убедитесь, что корни рассады в достаточной контакте с НАА-агар, содержащий среды. Это может быть достигнуто путем скользя корень ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы не имеют ничего раскрывать.

Благодарности

Авторы благодарят Дэви Опденакера за техническую помощь и фотографию. Мы очень благодарны доктору Анник Блейс за полезные предложения по улучшению рукописи. Эта работа финансировалась Межуниверситетской программой привлечения полюсов IUAP P7/29 «MARS» от Бельгийского федерального управления научной политики, грантом FWO G027313N и Агентством по инновациям в области науки и технологий (IWT) (IR).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
ARABIDOPSIS LRIS
>Seeds
Arabidopsis seedsCol-0 ecotype
Газовая стерилизация семян
микроцентрифужные пробирки 1,5 млSIGMA-ALDRICH0030 125.215Eppendorf микропробирки 3810X, ПЦР чистые
микроцентрифужные пробирки 2 млSIGMA-ALDRICH0030 120.094Eppendorf Safe-Lock микроцентрифужные пробирки
соляная кислотаMerck KGaA1,003,171,00037% (дымка) для анализа EMSURE ACS,ISO,Reag. P Eu
стеклянный эксикаторSIGMA-ALDRICHPyrex
стеклянный стакан
пластиковая микроцентрифужная пробирка коробка или держатель
<сильно>Отбеливатель стерилизация семян
этанолChem-Lab nvCL00.0505.1000Этанол, абс. 100% а.р. разбавить до 70%
Гипохлорит натрия (NaOCl)Carl Roth9062.312%
Tween 20SIGMA-ALDRICHP1379
стерильная вода
среда
Мурашиге и смесь соли СкугаDUCHEFA Biochemie B.V.M0221-0050
мио-инозитолSIGMA-ALDRICHI5125-100G
2-(N-морфолино)этансульфоновая кислота (MES)DUCHEFA Biochemie B.V.M1503.0100
сахарозаVWR, Internation LLC27483.294D(+)-сахароза Ph. Eur.
KOHMerck KGaA1050211000гранулы для анализа (макс. 0,002% Na) EMSURE ACS,ISO,Reag. Ph Eur
Культура растительных тканей AgarLabM LimitedMC029
<>Реагенты для индукции бокового корня
N-1-нафтилфталамовая кислота (NPA)DUCHEFA Biochemie B.V.No N0926.025010 & микро; M (Arabidopsis)
1-нафталина уксусная кислота (NAA)DUCHEFA Biochemie B.V.No N0903.005010 & микро; M (Arabidopsis)
диметилсульфоксид (ДМСО)SIGMA-ALDRICH494429-1L
Изготовление сетки для переноса
нейлоновая сеткаProsep bybaСинтетическая нейлоновая сетка 20 &микро; m
Посев и обработка рассады
ПетриGOSSELINBP124-0512 x 12 см
50 мл DURAN тубыSIGMA-ALDRICHCLS430304Corning  50 мл центрифужные пробирки
drigalskiCarl RothK732.1
пипетка
разрезанная наконечникиDaslab162001XUniversal 200, отрезание 5 мм наконечника перед автоклавированием
дышащей ленты 3M Deutschland GmbHкат. No 1530-1
пинцетFiers nv/saK342.1; K344.1Пинцет Dumont тип a nr 5; Пинцет Dumont тип 1 7
Условия роста
growth room21 ° В, непрерывный легкий
<прочный>Материалы<сильный>Компания<сильный>Каталог<сильный>Комментарии
<сильный>Кукурузный LRIS
<сильный>Семена
Ядра кукурузыВ-73
<сильно>Отбеливающая стерилизация ядер
стеклянная мензурка
магнитная мешалка Fiers nv/saC267.1
гипохлорит натрия (NaOCl)Carl Roth9062.312%
стерильная вода
<сильно>Химические вещества для индукции бокового корня
N-1-нафтилфталомановая кислота (NPA)DUCHEFA Biochemie B.V.No N0926.025050 & микро; M (первичный корень кукурузы), 25 & микро; М (придаточный корень кукурузы)
1-нафталина уксусная кислота (NAA)DUCHEFA Biochemie B.V.No N0903.005050 & микро; M (кукуруза)
диметилсульфоксид (ДМСО)SIGMA-ALDRICH494429-1L
<сильно>Обработка посева и рассады
бумага для рукKimberly-Clark Professional*6681Полотенца для рук SCOTT - рулонные / белые; размер листа (24 x 46 см)
бумага для проращивания семянAnchor Paper Company10 X 15 38# бумага для проращивания семян
пинцетFiers nv/saK342.1; K344.1Пинцет Dumont тип a nr 5; Пинцет Dumont тип e nr 7
250 мл (центрифужные) пробиркиSCHOTT DURAN2160136диаметром ок. 5,6 см и высотой 14,7 см;
700 мл тубыDURAN GROUP213994609цилиндры, круглая ножная трубка, D 60  x 250
штативдля кукурузных туб, домашняя
стерильная вода
<>Условия ростаростный
шкаф27° C, постоянный свет, относительная влажность 70%
<strong><сильная питательная square чашка ная

Ссылки

  1. Van Norman, J. M., Xuan, W., Beeckman, T., Benfey, P. N. To branch or not to branch: the role of pre-patterning in lateral root formation. Development. 140, 4301-4310 (2013).
  2. Dolan, L., et al. Cellular organisation of the Arabidopsis thaliana root. Development. 119, 71-84 (1993).
  3. Bell, J. K., McCully, M. E. A histological study of lateral root initiation and development in Zea mays. Protoplasma. 70, 179-205 (1970).
  4. Benkova, E., et al. Local, efflux-dependent auxin gradients as a common module for plant organ formation. Cell. 115, 591-602 (2003).
  5. Beeckman, T., Burssens, S., Inzé, D. The peri-cell-cycle in Arabidopsis. J. Exp. Bot. 52, 403-411 (2001).
  6. Himanen, K., Boucheron, E., Vanneste, S., de Almeida Engler, J., Inzé, D., Beeckman, T. Auxin-mediated cell cycle activation during early lateral root initiation. Plant Cell. 14, 2339-2351 (2002).
  7. Jansen, L., Parizot, B., Beeckman, T. Inducible system for lateral roots in Arabidopsis thaliana and maize. Methods Mol Biol. 959, 149-158 (2013).
  8. Casimiro, I., et al. Auxin transport promotes Arabidopsis lateral root initiation. Plant Cell. 13, 843-852 (2001).
  9. Himanen, K., et al. Transcript profiling of early lateral root initiation. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 101, 5146-5151 (2004).
  10. De Smet, I., et al. Receptor-like kinase ACR4 restricts formative cell divisions in the Arabidopsis root. Science. 322, 594-597 (2008).
  11. Vanneste, S., et al. Cell cycle progression in the pericycle is not sufficient for SOLITARY ROOT/IAA14-mediated lateral root initiation in Arabidopsis thaliana. Plant Cell. 17, 3035-3050 (2005).
  12. De Rybel, B., et al. A role for the root cap in root branching revealed by the non-auxin probe naxillin. Nat. Chem. Biol. 8, 798-805 (2012).
  13. Jansen, L., et al. Comparative transcriptomics as a tool for the identification of root branching genes in maize. Plant Biotechnol. J. 11, 1092-1102 (2013).
  14. Parizot, B., et al. Diarch symmetry of the vascular bundle in Arabidopsis root encompasses the pericycle and is reflected in distich lateral root initiation. Plant Physiol. 146, 140-148 (2008).
  15. Murashige, T., Skoog, F. A revised medium for rapid growth and bio assays with tobacco tissue cultures. Physiol. Plant. 15, 473-497 (1962).
  16. Bellini, C., Pacurar, D. I., Perrone, I. Adventitious roots and lateral roots: similarities and differences. Annu Rev Plant Biol. 65, 639-666 (2014).
  17. Grunewald, W., Parizot, B., Inzé, D., Gheysen, G., Beeckman, T. Developmental biology of roots: One common pathway for all angiosperms? Int. J. Plant Dev. Biol. 1, 212-225 (2007).
  18. Parizot, B., Beeckman, T. Genomics of root development. Root Genomics and Soil Interactions. Crespi, M. , 3-28 (2012).
  19. Bargmann, B. O., Birnbaum, K. D. Fluorescence activated cell sorting of plant protoplasts. Journal of visualized experiments : JoVE. , (2010).
  20. Nakazono, M., Qiu, F., Borsuk, L. A., Schnable, P. S. Laser-capture microdissection, a tool for the global analysis of gene expression in specific plant cell types: identification of genes expressed differentially in epidermal cells or vascular tissues of maize. Plant Cell. 15, 583-596 (2003).
  21. Ludwig, Y., Hochholdinger, F. Laser microdissection of plant cells. Methods Mol Biol. 1080, 249-258 (2014).
  22. Beeckman, T., Engler, G. An easy technique for the clearing of histochemically stained plant tissue. Plant Mol. Biol. Rep. 12, 37-42 (1994).
  23. Ditengou, F. A., et al. Mechanical induction of lateral root initiation in Arabidopsis thaliana. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 105, 18818-18823 (2008).
  24. Lucas, M., Godin, C., Jay-Allemand, C., Laplaze, L. Auxin fluxes in the root apex co-regulate gravitropism and lateral root initiation. J. Exp. Bot. 59, 55-66 (2008).
  25. Wang, S., Taketa, S., Ichii, M., Xu, L., Xia, K., Zhou, X. Lateral root formation in rice (Oryza Sativa. L.): differential effects of indole-3-acetic acid and indole-3-butyric acid. Plant Growth Regul. 41, 41-47 (2003).
  26. Martinez-de la Cruz, E., Garcia-Ramirez, E., Vazquez-Ramos, J. M., Reyes de la Cruz, H., Lopez-Bucio, J. Auxins differentially regulate root system architecture and cell cycle protein levels in maize seedlings. J Plant Physiol. 176, 147-156 (2015).
  27. Beyer, E. M., Morgan, P. W. Effect of ethylene on uptake, distribution, and metabolism of indoleacetic acid-1-14C and -2-14C and naphthaleneacetic acid-1-14C. Plant Physiol. 46, 157-162 (1970).
  28. Delbarre, A., Muller, P., Imhoff, V., Guern, J. Comparison of mechanisms controlling uptake and accumulation of 2,4-dichlorophenoxy acetic acid, naphthalene-1-acetic acid, and indole-3-acetic acid in suspension-cultured tobacco cells. Planta. 198, 532-541 (1996).
  29. Bailey-Serres, J. Microgenomics: genome-scale, cell-specific monitoring of multiple gene regulation tiers. Annu Rev Plant Biol. 64, 293-325 (2013).
  30. Perez-Torres, C. A., et al. Phosphate availability alters lateral root development in Arabidopsis by modulating auxin sensitivity via a mechanism involving the TIR1 auxin receptor. Plant Cell. 20, 3258-3272 (2008).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Arabidopsis thalianaкукуруза Zea maysобработка NPA и NAAгормональная обработкасинхронизация инициации корнеймаркер клеточного цикласравнительная транскриптомикаэкспрессия гена CYCB1;1развитие корней растений
Боковые Корень Индуцибельная системы в
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.