Система индуцируемой латеральных корней (LRIS) обеспечивает синхронную индукцию боковых корней и представлена для Arabidopsis thaliana и кукурузы.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
* These authors contributed equally
Система индуцируемой латеральных корней (LRIS) обеспечивает синхронную индукцию боковых корней и представлена для Arabidopsis thaliana и кукурузы.
Боковое развитие корней вносит значительный вклад в корневую систему и, следовательно, имеет решающее значение для роста растений. Изучение инициации бокового корня, однако, утомительно, потому что оно происходит только в нескольких клетках внутри корня и непредсказуемым образом. Чтобы обойти эту проблему, была разработана система индуцируемой латерального корня (LRIS). При последовательной обработке рассады ингибитором транспорта ауксина и синтетическим ауксином, строго контролируемое начало бокового корня происходит синхронно в первичном корне, что позволяет обильно отбирать образцы желаемой стадии развития. LRIS впервые был разработан для Arabidopsis thaliana, но может применяться и для других растений. Соответственно, он был адаптирован для использования в кукурузе (Zea mays). Дан подробный обзор различных этапов LRIS на обоих заводах. Сочетание этой системы со сравнительной транскриптомикой позволило идентифицировать функциональные гомологи генов инициации латерального корня Arabidopsis у других видов, как показано здесь для CYCLIN B1; 1 (CYCB1; 1) ген клеточного цикла у кукурузы. Наконец, обсуждаются принципы, которые необходимо учитывать при разработке LRIS для других видов растений.
Корневая система имеет решающее значение для роста растений, так как он обеспечивает закрепление и поглощение воды и питательных веществ из почвы. Поскольку расширение корневой системы, главным образом, зависит от производства боковых корней, их инициирование и формирование были широко изучены. Боковые корни начато в определенное подмножество клеток перицикла, называется стволовых клеток 1. В большинстве двудольных, таких как Arabidopsis THALIANA, эти клетки расположены в protoxylem полюсов 2, тогда как у однодольных, таких как кукуруза, они находятся на флоэмы полюсов 3. Стволовых клеток отмечены повышенным ответ ауксина
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
1. Arabidopsis LRIS протокол
Примечание: текст относится к "малых" или "больших" экспериментов масштабе. Масштабные эксперименты Маленькие, такие как анализ маркер линии и гистологического окрашивания 6, 14, требуют лишь несколько образцов. Крупномасштабные эксперименты, такие как количественные реального времени Qrt-ПЦР, микро-массивов 9-11 или РНК секвенирования, требуют большего количества образцов. Таким образом, количество ~ 1000 саженцев на образце был использован Ваннесте др 11. Для выполнения микрочипов эксперимента после корня сегмента вскрытия.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Применение LRIS Выполнение сравнительных транскриптомика боковой корневого процесса инициации
Одним из применений LRIS является сравнение и сопоставление профилей экспрессии генов в процессе формирования боковых корней у разных видов. Сравнительные транскриптомика подходы создают возможность определить ортологичные генов, участвующих в процессе развития боковых корней у разных видов. Боковые корень инициация, .......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
В протоколе Arabidopsis LRIS, важно, чтобы передать только рассаду, которые выросли совершенно в контакте с НПД-содержащей среде роста. Это гарантирует, что инициирования боковых корней заблокирован по всей длине корневого. Для того, чтобы предотвратить ранив ростки Во время передачи вооружений изогнутых щипцов может быть подключен в соответствии с семядолей проростков. При передаче, убедитесь, что корни рассады в достаточной контакте с НАА-агар, содержащий среды. Это может быть достигнуто путем скользя корень .......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Авторы не имеют ничего раскрывать.
Авторы благодарят Дэви Опденакера за техническую помощь и фотографию. Мы очень благодарны доктору Анник Блейс за полезные предложения по улучшению рукописи. Эта работа финансировалась Межуниверситетской программой привлечения полюсов IUAP P7/29 «MARS» от Бельгийского федерального управления научной политики, грантом FWO G027313N и Агентством по инновациям в области науки и технологий (IWT) (IR).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| ARABIDOPSIS LRIS | |||
| >Seeds | |||
| Arabidopsis seeds | Col-0 ecotype | ||
| Газовая стерилизация семян | |||
| микроцентрифужные пробирки 1,5 мл | SIGMA-ALDRICH | 0030 125.215 | Eppendorf микропробирки 3810X, ПЦР чистые |
| микроцентрифужные пробирки 2 мл | SIGMA-ALDRICH | 0030 120.094 | Eppendorf Safe-Lock микроцентрифужные пробирки |
| соляная кислота | Merck KGaA | 1,003,171,000 | 37% (дымка) для анализа EMSURE ACS,ISO,Reag. P Eu |
| стеклянный эксикатор | SIGMA-ALDRICH | Pyrex | |
| стеклянный стакан | |||
| пластиковая микроцентрифужная пробирка коробка или держатель | |||
| <сильно>Отбеливатель стерилизация семян | |||
| этанол | Chem-Lab nv | CL00.0505.1000 | Этанол, абс. 100% а.р. разбавить до 70% |
| Гипохлорит натрия (NaOCl) | Carl Roth | 9062.3 | 12% |
| Tween 20 | SIGMA-ALDRICH | P1379 | |
| стерильная вода | |||
| среда | |||
| Мурашиге и смесь соли Скуга | DUCHEFA Biochemie B.V. | M0221-0050 | |
| мио-инозитол | SIGMA-ALDRICH | I5125-100G | |
| 2-(N-морфолино)этансульфоновая кислота (MES) | DUCHEFA Biochemie B.V. | M1503.0100 | |
| сахароза | VWR, Internation LLC | 27483.294 | D(+)-сахароза Ph. Eur. |
| KOH | Merck KGaA | 1050211000 | гранулы для анализа (макс. 0,002% Na) EMSURE ACS,ISO,Reag. Ph Eur |
| Культура растительных тканей Agar | LabM Limited | MC029 | |
| <>Реагенты для индукции бокового корня | |||
| N-1-нафтилфталамовая кислота (NPA) | DUCHEFA Biochemie B.V. | No N0926.0250 | 10 & микро; M (Arabidopsis) |
| 1-нафталина уксусная кислота (NAA) | DUCHEFA Biochemie B.V. | No N0903.0050 | 10 & микро; M (Arabidopsis) |
| диметилсульфоксид (ДМСО) | SIGMA-ALDRICH | 494429-1L | |
| Изготовление сетки для переноса | |||
| нейлоновая сетка | Prosep byba | Синтетическая нейлоновая сетка 20 &микро; m | |
| Посев и обработка рассады | |||
| Петри | GOSSELIN | BP124-05 | 12 x 12 см |
| 50 мл DURAN тубы | SIGMA-ALDRICH | CLS430304 | Corning 50 мл центрифужные пробирки |
| drigalski | Carl Roth | K732.1 | |
| пипетка | |||
| разрезанная наконечники | Daslab | 162001X | Universal 200, отрезание 5 мм наконечника перед автоклавированием |
| дышащей ленты | 3M Deutschland GmbH | кат. No 1530-1 | |
| пинцет | Fiers nv/sa | K342.1; K344.1 | Пинцет Dumont тип a nr 5; Пинцет Dumont тип 1 7 |
| Условия роста | |||
| growth room | 21 ° В, непрерывный легкий | ||
| <прочный>Материалы | <сильный>Компания | <сильный>Каталог | <сильный>Комментарии |
| <сильный>Кукурузный LRIS | |||
| <сильный>Семена | |||
| Ядра кукурузы | В-73 | ||
| <сильно>Отбеливающая стерилизация ядер | |||
| стеклянная мензурка | |||
| магнитная мешалка | Fiers nv/sa | C267.1 | |
| гипохлорит натрия (NaOCl) | Carl Roth | 9062.3 | 12% |
| стерильная вода | |||
| <сильно>Химические вещества для индукции бокового корня | |||
| N-1-нафтилфталомановая кислота (NPA) | DUCHEFA Biochemie B.V. | No N0926.0250 | 50 & микро; M (первичный корень кукурузы), 25 & микро; М (придаточный корень кукурузы) |
| 1-нафталина уксусная кислота (NAA) | DUCHEFA Biochemie B.V. | No N0903.0050 | 50 & микро; M (кукуруза) |
| диметилсульфоксид (ДМСО) | SIGMA-ALDRICH | 494429-1L | |
| <сильно>Обработка посева и рассады | |||
| бумага для рук | Kimberly-Clark Professional* | 6681 | Полотенца для рук SCOTT - рулонные / белые; размер листа (24 x 46 см) |
| бумага для проращивания семян | Anchor Paper Company | 10 X 15 38# бумага для проращивания семян | |
| пинцет | Fiers nv/sa | K342.1; K344.1 | Пинцет Dumont тип a nr 5; Пинцет Dumont тип e nr 7 |
| 250 мл (центрифужные) пробирки | SCHOTT DURAN | 2160136 | диаметром ок. 5,6 см и высотой 14,7 см; |
| 700 мл тубы | DURAN GROUP | 213994609 | цилиндры, круглая ножная трубка, D 60 x 250 |
| штатив | для кукурузных туб, домашняя | ||
| стерильная вода | |||
| <>Условия ростаростный | |||
| шкаф | 27° C, постоянный свет, относительная влажность 70% |
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.