Методическая статья

Оценка материнской сосудистого ремоделирования во время беременности в матке мышей

15.4K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/53534

⸱

5 декабря 2015 г.

 ,  , 
1Department of Obstetrics and Gynaecology, School of Clinical Medicine, University of Cambridge, 2Centre for Trophoblast Research, University of Cambridge

В этой статье

Краткое содержание

Этот протокол описывает метод оценки изменений в материнской сосудистой сети во время беременности у мышей. С помощью стереологических методов количественно оценивается ремоделирование децидуальных спиральных артерий и результаты подтверждаются качественно с помощью иммуногистохимии.

Аннотация

Плацента опосредует обмен факторами, такими как газы и питательные вещества, между матерью и плодом и имеет специфические потребности в снабжении кровью из материнского кровообращения. Сосудистая сеть матери матки должна адаптироваться к этой временной потребности, и успех этого процесса артериального ремоделирования имеет последствия для роста плода. Клетки материнской иммунной системы, особенно естественные киллеры (NK-клетки), играют решающую роль в этом процессе. В данной статье мы описываем метод оценки степени ремоделирования материнских спиральных артерий во время беременности мышей. Срезы тканей, окрашенные гематоксилином и эозином, сканируются, а размер сосудов анализируется. В качестве дополнительного метода валидации мы также представляем качественную оценку успешности процесса ремоделирования путем иммуногистохимического обнаружения гладкомышечного актина (СМА), который обычно исчезает из артериальной сосудистой среды в середине гестации. Вместе эти методы позволяют определить важный параметр фенотипа беременности. Эти результаты могут быть объединены с другими конечными точками беременности у мышей, чтобы получить представление о механизмах, лежащих в основе осложнений, связанных с беременностью.

Введение

Обмен веществ, газов и продуктов распада в течение беременности плацентарные опосредуется плаценты. В женском репродуктивном тракте, маточные артерии являются основными проводниками крови к матке. После имплантации, эти ветви в специализированных судах называется спиральные артерии, что катушки через децидуальной базального по отношению к фетоплацентарной единицы. Диаметр и эластичность этих спиральных артерий, которые окружены лейкоцитов, в частности матки естественных киллеров (Unk) клеток, определяют объем и скорость крови, доступной для плаценты 1,2. Правильные изменения гемодинамики в результате реконструкции спиральных артерий имеют решающее значение для успеха беременности.

В то время как основные механизмы отличаются в деталях между человеком и мышей беременности, конечный результат процесса ремоделирования обоих видов расширен, высокая проводимость, что сосудистая теряет плавный мышечный слой. У мышей, УНК клеток, полученных интерферон (ИФN-) γ необходимо, чтобы побудить эти изменения на уровне около середины беременности 3-5. Мыши, лишенные либо NK клеток или компоненты сигнального пути IFN-gamma не пройти эти изменения, и это связано со снижением плода 6,7 роста, подчеркивая важность адекватного кровоснабжения фетоплацентарной единицы. Во время раннего человека беременности, интерстициальный и эндоваскулярная вторжение extravillous трофобласта и их взаимодействие с клетками УНК важны для индукции сосудистых изменений и поощрение плода 8-10 роста. УНК клетки могут организовать вторжение трофобласта человека через хемокинов 11 и цитокинов, таких как гранулоцитарный макрофаг - колониестимулирующий фактор (GM-CSF) 12. Малая трофобласта вторжения связано со снижением артериального ремоделирования и беременности осложнений, таких как преэклампсии 9.

Этот протокол основан на новаторской работе Анны Крой, который описал важныйРоль иммунной системы и, в частности НК-производного IFN-gamma для успешного ремоделирования сосудов через иммуногистохимических и элегантный передачи экспериментов 5,13. Здесь мы опишем быстрый и экономичный способ оценки состояния ремоделирования спиральных артерий. Хотя наша лаборатория регулярно оценивает это в середине беременности (гестационный день (GD) 9.5) 14, процесс ремоделирования происходит между gd8.5 и 12,5 15. Появление автоматизированных слайд-сканеров значительно облегчило оценку судов и просвета областях из разделов, и мы обнаружили, что это будет более воспроизводимым подходом, чем измерения диаметров сосудов. Добавление иммуногистохимического обнаружения SMA позволяет непосредственным проверки результатов, полученных с стереологического оценки. Как и со всеми стереологических методов, рекомендуется выполнять оценку, как слепой эксперимент, по крайней мере двумя экзаменаторами. С этой целью, шаг рандомизации может быть введен при последовательном сократитьTing образцы так, что следователи, оценивающие слайды не знают, из которых экспериментальная группа образцы приходят.

Общая цель этого протокола состоит в обеспечении надежного инструмента тщательно оценить ремоделирование спиральных артерий у мышей с определенными материнских и отцовских генотипов, в контексте моделей мыши осложнений, связанных с беременностью. Результаты подчеркивают зависимость от УНК клеток этого процесса, который необходим для нормального роста плода.

Протокол

Все процедуры, описанные в этой рукописи в соответствии с правилами Британского МВД и утверждаются Группой Этическая экспертиза Кембридж.

1. Сбор образцов

  1. Настройка приурочен вязки, используя 8-12 недельных самок мышей C57BL / 6 с взрослыми мужчинами (до 2 самок в самцов) во второй половине дня. Проверьте наличие вагинальных пробок в знак совокупления рано утром на следующие дни. Наличие вилки в gd0.5 утром марок.
  2. На gd9.5, усыпить животное путем смещения шейных позвонков и вскрыть брюшную полость. Обратите внимание, что эвтаназию по CO 2 может привести к расширению сосудов.
  3. Используйте зубную нить осторожно перевязывать маточных артерий (рисунок 1, пунктирные стрелки). Tie нить вокруг артерий в конце каждого рога матки, проксимальнее яичников, а также вокруг шейки матки.
    Примечание: Не разорваться сосуды, так как это может привести к рухнула артерий.
  4. Рассеките матку быстро, используя рассечение ножницами, вырезая всю матку дистальнее трех точек лигирования на кончике рога матки и шейки матки.
  5. Поместите матки на подготовленную полистирола части таким образом, что оба рога выровнены вдоль той же продольной оси в противоположных направлениях от шейки. Аккуратно растянуть его и прикрепить на место, используя 2-3 25 G иглы.
  6. Погрузитесь полистирола в подготовленном 50 мл коническую трубку. Долить до 50 мл 10% формалина. Исправление для 5-6 ч при комнатной температуре.
  7. Отменить раствора формалина и заменить 50 мл 1х забуференного фосфатом физиологического раствора (PBS) в течение 5 мин.
  8. Вырезания два рога матки проксимально к точке лигирования на каждом конце и проксимально к шейке в центре, обрезать любой лишний жир вокруг мест имплантации и мыть дважды в PBS в течение 5 мин, чтобы удалить следы формалина.
  9. Храните образцы в 70% этанола при 4 ° С (на срок до двух недель) до обработки.
    ВНИМАНИЕ: EthAnol является легковоспламеняющимся.
  10. Использование автоматизированной системы обработки с использованием параметров, указанных в таблице 1. Вставить рога индивидуально в парафин, чтобы они могли быть разрезают вдоль плоскости, перпендикулярной к продольной оси матки. Это гарантирует, что максимальная площадь каждого участка имплантации будет подвергаться для анализа в середине блока (фиг.2А).
    ДОПОЛНИТЕЛЬНО: Это удобный момент времени для рандомизации блоков при желании.
  11. Использование микротома, сократить серийные срезы толщиной 7 мкм из блоков. Пятно один раздел на каждом интервале 49 мкм с гематоксилином и эозином (Н & Е, см раздел 2.1). Храните оставшиеся разделы при комнатной температуре SMA окрашивания и других последующих применений.
Решение Время Температура
70% этанола 1 час 40 ° С
100% этанол 1 час 40 ° С
100% этанол 1 час 40 ° С
100% этанол 1 час 40 ° С
100% этанол 1 час 40 ° С
100% этанол 1 час 40 ° С
100% этанол 1 час 40 ° С
1 час 40 ° С
Ксилол 1 час 40 ° С
Ксилол 1 час 40 ° С
Парафин 1 час 63 ° C
Парафин 1 час 63 ° C
Парафин 1 час 63 ° C
Парафин 1 час 63 ° C
: 21px; "> Ксилол

Таблица 1:. Настройки для автоматизированной обработки ткани Обзор установки для обработки ткани матки

2. Стерeological Оценка

  1. Н & Е окрашивание
    1. Deparaffinize разделы погружением слайдов, установленные в слайд стойку в 100% ксилола бане в течение 10 мин при комнатной температуре.
      ВНИМАНИЕ: Ксилол легковоспламеняющимися и канцероген, что является токсичным при контакте и вдыхании. Эта работа должна быть проведена в вытяжном шкафу, используя средства индивидуальной защиты (СИЗ).
    2. Погрузитесь в ванну слайды, содержащие чистый ксилол для еще 10 мин.
    3. Последовательно погружают слайдов в ваннах, содержащих 100% этанола, 95% этанола, 70% этанола и очищенной воды в течение 5 мин каждый.
    4. Погружают слайдов в 50% Гилл № 3 гематоксилин раствора, разбавляют дистиллированной водой, в течение 5 мин.
      ВНИМАНИЕ: гематоксилин вредно при приеме внутрь и контакте с глазами. Носите соответствующую СИЗ при обращении.
    5. Промыть слайдов в окрашивании желоба под струей водопроводной воды в течение 10 мин.
    6. Погружают слайдов в 1% -ном растворе кислоты / спирта (1% 10 М соляной кислоты в 70% этаноле) в течение 10 секи мыть в корыте окрашивания под проточной водой.
    7. Погрузитесь слайдов в эозином решения в течение 30 сек и мыть в корыте под окрашивание проточной водопроводной водой в течение 10 мин.
    8. В вытяжном шкафу, последовательно погружают слайдов в ваннах, содержащих 70% этанола, 95% этанола и 100% этанола в течение 5 мин каждый.
    9. Погрузитесь слайдов в ванне, содержащей ксилол в течение 10 мин.
    10. Гора покровные с помощью ксилола на основе монтажа среду. Высушите по горизонтали и тщательно в вытяжном шкафу до визуализации слайды под микроскопом.
  2. Стереологический Оценка размера судна и реконструкции статусе
    1. Для каждого участка имплантации, определить, какие разделы рядом с среднесагиттальных точки. Хориоаллантоисной привязанность между плода и развивающейся плацентой служит хорошим индикатором среднесагиттальных точки.
    2. Выберите 3 секции на 49 мкм интервалы, близких к точке среднесагиттальных для анализа. Сканирование выбранных слайдов. Для того чтобы избежать IncЛУДИНГ вен, которые были показаны, чтобы быть более периферии расположены в имплантации сайтов 16, ограничение анализ на центральной 2/4 каждого сайта имплантации (рис 2А).
    3. Для оценки просвет размер, рисовать вокруг внутренней сосудов и записывать площадь этой формы. Для общего размера сосуда, рисовать вокруг внешней стенки сосуда, в том числе эндотелиальных клеток, перицитов и очный лейкоцитов.
      Примечание: отношение общего размера сосуда, чтобы просвет прокси для состояния реконструкции судна. В сосуды катушки через плоскость, что секция была разрезанной вдоль, может быть несколько поперечных сечений же артерии в одном слайде. Избегайте измерения тот же артерии несколько раз.
    4. Запишите измерения от 5 судов в каждом месте имплантации с крупнейшими и roundest люмен. Измерьте каждый сайт имплантации в трех экземплярах (три секции расположены 49 мкм друг от друга). Среднее из этих 15 измерений represeНочи средний диаметр крупнейших судов.
    5. Чтобы избежать перепредставленности крупных судов в некоторых образцах, измерения и то же число сосудов в каждой имплантации.

3. Качественная оценка с помощью иммуногистохимии

  1. Депарафинирование и Регидратация
    1. Deparaffinize разделы погружением слайдов, установленные в жаропрочную слайд стойку в 100% ксилола бане в течение 10 мин при комнатной температуре.
    2. Погрузитесь в ванну слайды, содержащие чистый ксилол для еще 10 мин.
    3. Последовательно погружают слайдов в ваннах, содержащих 100% этанола, 95% этанола и 70% и очищенную воду в течение 5 мин каждый.
  2. Антиген-поисковая
    1. Подготовка 10 мМ цитрата натрия буфере в очищенной воде и доведения рН до 6, использу 10 М соляной кислоты.
    2. Заполните жаропрочных контейнер, который может содержать 600 мл с 400 мл цитрат натрия буфера и место в отечественной скороварке, содержащей достаточное Ватэр, чтобы погрузить половина контейнера. Свободно приложите крышку скороварки и тепла до кипения.
    3. Место слайд стойку в буфер цитрата натрия и плотно закрепить крышку скороварки. После того, как под давлением, позволяют варить в течение 3 мин.
    4. Сбросьте давление в скороварку и выньте внутренний контейнер. Разрешить слайды для охлаждения в буфере цитрата натрия в течение 10 мин при комнатной температуре.
    5. Промыть скользит в ванне, содержащей очищенную воду в течение 5 мин.
    6. Окружите разделы, используя гидрофобный барьер перо.
    7. Вымойте слайды, погружая в PBS в течение 5 мин.
  3. Блокирование эндогенной пероксидазы и неспецифическое связывание
    1. Инкубировать срезы с 3% перекиси водорода, разбавленного в очищенной воде во влажной камере в течение 30 мин при комнатной температуре.
      ВНИМАНИЕ: Перекись водорода является очень раздражает глаза, кожу и при приеме внутрь. Носите соответствующую СИЗ.
    2. Нажмите лишнюю раствора перекиси водорода и промыть SLIдез дважды путем погружения в Трис-солевом буферном растворе (TBS) в течение 2 мин каждый.
    3. Инкубировать срезы с мышиного иммуноглобулина блокирования реагента от мыши на комплект мыши, подготовленный в соответствии с инструкциями изготовителя.
    4. Промыть слайды дважды в TBS в течение 2 мин каждый.
  4. Иммунологический гладкомышечных актина
    1. Подготовка антител решение разбавителя (представленную в комплекте) и инкубировать с разделами в течение 5 мин при комнатной температуре, или в соответствии с инструкциями изготовителя.
    2. Развести 1: 100 мышиное анти-человеческий гладких мышц актина (DAKO M0851) в растворе антитела разбавителя. Развести мышиного IgG2a изотипа контроль антител в осаждающего раствора, обеспечивая, чтобы конечная концентрация иммуноглобулина эквивалентна в обоих растворах.
    3. Кран избыток раствора антитела разбавителя и крышки секции с либо разбавленных антител или изотипных решений управления. Инкубируют во влажной камере в течение 30 мин при комнатной температуре.
    4. Вымойте слайды дважды в TBS для2 мин каждый.
    5. Развести биотинилированного анти-мыши вторичного антитела и инкубируют секции в течение 10 мин при комнатной температуре, или в соответствии с инструкциями производителя.
    6. Промыть скользит по одному разу TBS и PBS в течение 2 мин, соответственно.
    7. Подготовьте 3,3-диаминобензидин (DAB) решение в соответствии с инструкциями изготовителя. Обложка секции с раствором DAB и инкубировать в течение 4 мин, обеспечивая следить разделы, чтобы избежать развития избыточного цвета.
      ВНИМАНИЕ: DAB легковоспламеняющимися и канцероген, что является токсичным при контакте и вдыхании. Носите соответствующую СИЗ при обращении.
    8. Погружают слайдов в очищенной воде, как только желаемый интенсивность окраски достигается.
    9. Контрастное 50% Гилл № 3 гематоксилином в течение 20 сек и мыть в корыте под окрашивание проточной водой, пока вода не станет чистой.
  5. Обезвоживание и монтаж
    1. В вытяжном шкафу, последовательно погружают в ванны слайды, содержащие 70% ETHAnol, 95% этанола и 100% этанола в течение 5 мин каждый.
    2. Погрузитесь слайдов в ванне, содержащей ксилол в течение 10 мин.
    3. Гора покровные с помощью ксилола на основе монтажа среду. Высушите по горизонтали и тщательно в вытяжном шкафу до визуализации слайды под микроскопом

Результаты

RAG2 - / - IL2rg - / - мышей не хватает все зрелые лимфоциты, в том числе клеток NK 17, и их маточные артерии не подвергаются сосудистые изменения видели в конгенных дикого типа C57BL / 6 (WT) мышей примерно в середине беременности 5,14. В результате этого снижения ремоделирования RAG2 - / - IL2rg - / - мышей значительно меньшие показать просвета площади поверхности, указывающие общее небольших судов, которые могут быть визуализированы на Н & Е-окрашенных участков и количественно stereologically (рисунок 2). Кроме того, относительная толщина стенки (сосуд соотношение просвета) выше в спиральных артерий у этих мышей, что предполагает снижение притока крови и более высокую скорость крови.

Эта количественная оценка была подтверждена с помощью иммуногистохимического обнаружения SMA. Это характерно для мышей WT потерять большую часть SMA в сосудистой СМИспиральных артерий к середине беременности. Если этот процесс НК клеток приводом не состоится, SMA остается в СМИ сосудов и может быть легко обнаружить, как иммуногистохимически кольца вокруг кровеносных сосудов (Рисунок 3).

figure-results-1
Рисунок 1: Мышь матки в gd9.5 схематический обзор чертеж, показывающий относительные позиции рога матки, шейки матки (синий) и основные маточные артерии (красные).. Указаны длинная ось рога матки (стрелки) и точками (лигирования пунктирные стрелки). Секции для иммуногистохимии разрезают вдоль плоскости зрения.

figure-results-2

Рисунок 2:. Стереологический оценка артериальной реконструкции в середине беременности (А) Пример ассssment просвета и общей площади сосуда на Н & Е, окрашенных участков от WT женщин в центральной 2/4 децидуальной базального (демаркированной вертикальной черной пунктирные линии) в gd9.5. В судах на более высоком увеличении, красный пунктирная линия разграничивает общая площадь сосудов, желтый пунктирная линия разграничивает область просвет. Бар = 500 мкм (слева), 50 мкм (справа). Длинная ось матки является горизонтальная линия в этой ориентации. (Б) Количественная просвета местности (слева) и соотношения просвета области в общей площади сосуда (правая панель) с WT (C57BL / 6) и RAG2 - / - Il2rg - / - Мыши (на C57BL / 6 фоне). Каждая точка данных представляет собой среднее из 15 измерений (5 измерений на участке, 3 секции в месте имплантации). Бары представляют среднее из п = 11-13 мест имплантации из 4 беременностей в группе; р-значение из двух-белохвоста, непарного критерия Манна-Уитни. WT: дикий тип.

figure-results-3
Рисунок 3:. Иммуногистохимический обнаружение гладкой актин в децидуальной базального представитель SMA окрашивание на WT (верхний) и RAG2 - / - IL2rg - / - мышей (на C57BL / 6 фоне, снизу) на gd9.5. Bar = 100 мкм. WT: дикий тип.

Обсуждение

Протокол, представленные здесь предназначены для обеспечения воспроизводимого метод, по которому оценки изменений сосудов, которые необходимы для успешной беременности. Решающее значение для успеха этой оценки является качество срезов. Оба точного определения гестационного возраста имплантации сайтов, а также надежно лигирования маточных артерий являются важнейшими шагами. Изменение параметров, таких как время фиксации, протокол ткани обработки и т.д. также может влиять на результат. Для объективной оценки стереологического, важно, чтобы измерить то же самое число сосудов в каждом месте имплантации. Рекомендуется измерить 5 судов за имплантации и каждого сайта имплантации в трех экземплярах. Среднее из этих 15 измерений представляет собой средний размер 5 крупнейших сосудов.

В дополнение к данным alymphoid RAG2 - / - IL2rg - / - мышей показано здесь, мы нашли этот протocol полезно для ряда моделей недостаточной материнской иммунной функции, в том числе одного из запрещенных киллеров 14. Дефекты в ремоделирование также было показано в моделях нарушения трофобласта вторжения 18 и методы, описанные здесь, могут быть полезны для оценки сосудистую в этих случаях. Мы оптимизировали и утверждена этот протокол для изучения децидуальной сосудистого ремоделирования в середине беременности у мышей, но это также возможно, чтобы адаптировать этот протокол для работы в других модельных систем (например, крыс) или даже в других органах. В то время как мы находим, что НК-зависимой ремоделирования может быть решительно оценивается в gd9.5, это может быть изменен для других точек времени, таких как gd12.5, когда материнская сосудистая полностью отремонтирован. В этот момент времени, эндоваскулярная трофобласта вторжения глубже 16 и на этот раз точка может быть более подходящим для исследования роли трофобласта сосудистых изменений. Если дополнительные количественные показания желательны,Исследователи также может увеличить количество срезах, окрашенных по SMA и оценить процент частично реконструированных сосудов в пределах каждого участка имплантации.

Ограничение этого протокола является описательный характер гистологических исследований. Функциональные анализы, однако, только постепенно становится доступна (например, ультразвуковой допплерографии 19). Эти методы требуют технической экспертизы и гораздо более высокие затраты на приобретение и обслуживание оборудования, но имеют преимущество предоставления продольный естественных считывания для влияния изменений, которые можно наблюдать гистологически. Возможным недостатком всех стереологических экзаменов субъективность исследователей. Для этого, используя два независимых экзаменаторов, которые анализируют все образцы независимо может помочь избежать этой проблемы. В то время как протокол описано здесь дает представление, сколько крови может достигать fetomaternal интерфейс, может быть предпочтительным, чтобы объединить его с комплementary подход оценки общего количества крови в любой момент времени в сосудистой через пластика бросает 16.

Сила этого протокола является то, что он сочетает в себе два независимых подходов. Сосудистая изменение сначала количественно оценены стереологии и результат затем подтверждено качественно, используя иммуногистохимии. Надежность результатов может быть дополнительно усилена рандомизации образцов. Образцы, подготовленные для этого протокола могут быть легко использованы также исследовать другие параметры, такие как беременность, decidualisation развития mesometrial лимфоидной совокупности беременности (MLAp) или иммунологического клеток, представляющих интерес, строго оценить фенотип беременность в середине беременности.

Артериальная реконструкция является важным шагом для несложных беременностей у женщин и неудачи этих изменений лежит в основе великих акушерских синдромы (ГСН), а именно преэклампсии, плода ограничение роста имертворождения. Мы представляем здесь методы тщательно оценить беременность фенотип в мышиных моделях, которые имитируют некоторые характеристики патофизиологии ГСН.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Авторы хотели бы поблагодарить всех членов лаборатории Колуччи за полезные обсуждения. Эта работа финансировалась The Wellcome Trust [094073/Z/10/Z], Центром исследований трофобласта и Британским фондом сердца.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
C57BL/6 мышей (8-12 недель)Зубная
ПолистиролИспользуется для удержания ткани на месте
Прямые ножницы для рассеченияEMS72940
25 G иглыBD 300600Используется для удержания ткани на месте
50 мл конические пробиркиFalcon352070
Раствор формалина, нейтральный буферный, 10%SigmaHT501128-4L
Фосфат солевой буферныйSigmaP3813-10PAK
ЭтанолSigma32221-2,5L
ПарафинSigma327204-1KG
XyleneFisher ScientificX/0250/17
Автоматизированный тканевый процессорSakura6032
MicrotomeLeicaRM2245
Стеллаж для слайдовSigmaZ710989
Банка для коплинаSigmaS5891
Очищенная вода
Раствор гематоксилина, Жабры No3SigmaGHS332-1L
Eosin Y solutionSigmaHT110116-500ML
Вытяжной шкаф
Монтажный носитель на основе ксилолаVWR361254D
Сканер слайдовHamamatsuNanoZoomer
Программное обеспечение для сканирования слайдовHamamatsuNDP просмотрщик
Цитрат натрия трехосновной дигидратSigma32320Приготовьте 10 мМ раствор и отрегулируйте pH до 6
СкороваркаИспользуется для забора антигена
Нагревательная пластинаИспользуется для забора антигена
Гидрофобная барьерная ручкаVectorH-4000
Перекись водородаFisher ScientificH/1800/15
Tris буферизованный физиологический растворSigmaT6664-10PAK
Мышь на мышке в комплектеВекторBMK-2202Значительно снижает фон
Мышь античеловеческий гладкомышечный актинDAKOM0851Перекрестно реагирует с
мышью IgG2a контроль изотипаDAKOX0943
Увлажненная камераSigmaH6644
3,3'-Диаминобензидина растворSigmaD4293-5SET
Соляная кислотаFisher Scientific H/1050/PB17
нить Charles River

Ссылки

  1. Burton, G. J., Woods, A. W., Jauniaux, E., Kingdom, J. C. Rheological and physiological consequences of conversion of the maternal spiral arteries for uteroplacental blood flow during human pregnancy. Placenta. 30 (6), 473-482 (2009).
  2. Pijnenborg, R., Vercruysse, L., Hanssens, M. The uterine spiral arteries in human pregnancy: facts and controversies. Placenta. 27 (9-10), 939-958 (2006).
  3. Ashkar, A. A., Croy, B. A. Interferon-gamma contributes to the normalcy of murine pregnancy. Biol Reprod. 61 (2), 493-502 (1999).
  4. Ashkar, A. A., Croy, B. A. Functions of uterine natural killer cells are mediated by interferon gamma production during murine pregnancy. Semin Immunol. 13 (4), 235-241 (2001).
  5. Ashkar, A. A., Di Santo, J. P., Croy, B. A. Interferon gamma contributes to initiation of uterine vascular modification, decidual integrity, and uterine natural killer cell maturation during normal murine pregnancy. J Exp Med. 192 (2), 259-270 (2000).
  6. Ashkar, A. A., et al. Assessment of requirements for IL-15 and IFN regulatory factors in uterine NK cell differentiation and function during pregnancy. J Immunol. 171 (6), 2937-2944 (2003).
  7. Barber, E. M., Pollard, J. W. The uterine NK cell population requires IL-15 but these cells are not required for pregnancy nor the resolution of a Listeria monocytogenes infection. J Immunol. 171 (1), 37-46 (2003).
  8. Colucci, F., Boulenouar, S., Kieckbusch, J., Moffett, A. How does variability of immune system genes affect placentation. Placenta. 32 (8), 539-545 (2011).
  9. Pijnenborg, R., Vercruysse, L., Brosens, I. Deep placentation. Best Pract Res Clin Obstet Gynaecol. 25 (3), 273-285 (2011).
  10. Colucci, F., Kieckbusch, J. Maternal uterine natural killer cells nurture fetal growth: in medio stat virtus. Trends Mol Med. 21 (2), 60-67 (2015).
  11. Hanna, J., et al. Decidual NK cells regulate key developmental processes at the human fetal-maternal interface. Nat Med. 12 (9), 1065-1074 (2006).
  12. Xiong, S., et al. Maternal uterine NK cell-activating receptor KIR2DS1 enhances placentation. J Clin Invest. 123 (10), 4264-4272 (2013).
  13. Croy, B. A., Zhang, J., Tayade, C., Colucci, F., Yadi, H., Yamada, A. T. Analysis of uterine natural killer cells in mice. Methods Mol Biol. 612, 465-503 (2010).
  14. Kieckbusch, J., Gaynor, L. M., Moffett, A., Colucci, F. MHC-dependent inhibition of uterine NK cells impedes fetal growth and decidual vascular remodelling. Nat Commun. 5, (2014).
  15. Zhang, J., Chen, Z., Smith, G. N., Croy, B. A. Natural killer cell-triggered vascular transformation: maternal care before birth. Cell Mol Immunol. 8 (1), 1-11 (2010).
  16. Adamson, S. L., et al. Interactions between trophoblast cells and the maternal and fetal circulation in the mouse placenta. Dev Biol. 250 (2), 358-373 (2002).
  17. Colucci, F., Soudais, C., Rosmaraki, E., Vanes, L., Tybulewicz, V. L. J., Di Santo, J. P. Dissecting NK cell development using a novel alymphoid mouse model: Investigating the role of the c-abl proto-oncogene in murine NK cell differentiation. J Immunol. 162 (5), 2761-2765 (1999).
  18. Hu, D., Cross, J. C. Ablation of Tpbpa-positive trophoblast precursors leads to defects in maternal spiral artery remodeling in the mouse placenta. Dev Biol. 358 (1), 231-239 (2011).
  19. Zhang, J. H., Croy, B. A. Using Ultrasonography to Define Fetal-Maternal Relationships: Moving from Humans to Mice. Comparative Med. 59 (6), 527-533 (2009).

Перепечатки и разрешения

Теги

Оценка материнской сосудистого ремоделирования во время беременности в матке мышей
Свяжитесь с нами
Рекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

Авторские права © 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.