Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Всего горе Вскрытие и Иммунофлуоресценции взрослых мышей улитки

58.4K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/53561

⸱

1 января 2016 г.

 , 
1Department of Surgery, Division of Otolaryngology, Southern Illinois University, School of Medicine, 2Department of Pharmacology, Southern Illinois University, School of Medicine

В этой статье

Краткое содержание

Мы представляем метод, чтобы изолировать взрослых орган Корти, как три неповрежденных кохлеарных поворотов (вершины, середины и основания). Мы также продемонстрировать процедуру иммуноокрашивания с флуоресцентно меченых антител. Вместе эти методы позволяют изучать волосковых клеток, поддерживающих клеток, и другие типы клеток, найденный в улитку.

Аннотация

Орган Корти, расположенный в улитке внутреннего уха, содержит механосенсорные волосковые клетки и окружающие поддерживающие клетки, которые организованы в спиралевидную форму и имеют тонотопический градиент для обнаружения звука. Улитка мыши имеет длину около 6 мм и часто делится на три витка (вершина, середина и основание) для анализа. Для исследования потери клеток, деления клеток или экспрессии мозаичных генов полезно использовать всю монтировку или подготовку поверхности улитки. Этот метод диссекции позволяет визуализировать все клетки в органе Corti в сочетании с иммуноокрашиванием и конфокальной микроскопией для визуализации клеток в разных плоскостях по оси z. Из этих изображений z-стека также можно получить несколько оптических сечений. Кроме того, метод диссекции всего монта может быть использован для сканирующей электронной микроскопии, хотя для этого необходим другой метод фиксации. Здесь мы представляем метод выделения кортиевого органа в виде трех неповрежденных поворотов улитки (вершина, середина и основание). Этот метод может быть использован для мышей в возрасте от одной недели до взрослого возраста и отличается от метода, используемого для неонатальных образцов, где кальцификация улитки не завершена. Немного измененный вариант может быть использован для вскрытия улитки крысы. Мы также демонстрируем процедуру иммуноокрашивания флуоресцентно меченными антителами.

Введение

Спираль-образный улитка внутреннего уха, содержащиеся в височной кости, находится орган Корти, слуховой сенсорной конечного органа у млекопитающих. Улитки tonotopically организованы и обычно делится на апикальной, средней и базальной поворачивает соответствующие различным частотных областей с обнаружением звукового высокочастотного в основании и низкой частоты обнаружения в вершине 1. Клетки волос, механосенсорные клетки органа Корти, запустите длину улитки, который давно примерно 6 мм у мышей 2,3. Эти клетки преобразуют механическую энергию звуковых волн, которые передаются через заполненный жидкостью перепончатого лабиринта, в нервные сигналы, обработанные посредством центральных слуховых структур. Описанная методика здесь обеспечивает способ получения тотальных органа Корти после кальцификации улитки завершения (для образцов от одной недели возраста к взрослой жизни). Мы также представляем метод для immunostaоцен- ками в целом установлен кохлеарной ткани. Кохлеарные тотальных являются критическими для визуализации всех клеток и волос окружающие поддерживающие клетки в их естественной пространственным расположением и позволяют анализа в трех измерениях с использованием конфокальной микроскопии.

Доктора. Ханс Engstrom и Харлоу Адес первоначально описан целый монтировать кохлеарной метод вскрытия в 1966 году они подробно технику, чтобы быстро исправить и анализировать кальцинированная cochleae погруженный в жидкость из различных млекопитающих, сохраняя нетронутыми короткие сегменты органа Корти для микроскопического анализа 4. Рассечение незафиксированного, кальцинированная крысы улитки также были проиллюстрированы в качестве учебного видео 5. Доктора. Барбара Bohne и Гэри Хардинг в Университете Вашингтона сделал несколько важных изменений в этом методе. По их версии всей метода кохлеарной горе, временная кость декальцифицировали, встроенные в пластик, и пять полуоборотов или десять четверть-оборота были dissecТед 6,7. Доктор Чарльз Либерман и его коллеги Eaton Пибоди, Массачусетс Laboratories глаз и ухо лазарете, модифицированный эту технику так, что пластик вложение не требуется 8. Кроме того модификация техники произошел в лаборатории доктора Цзянь Цзо в исследовательского госпиталя Святого Иуды детей 9-12, которые сообщили метод вскрытия представленные здесь. Мы используем различные стратегии, чтобы получить доступ к органа Корти, чем Bohne и Либермана, который позволяет изоляцию полной верхушечные, середине и базальных поворотов. Таким образом, расчлененный ткани больше и менее вероятно, чтобы быть потеряны или повреждены во время вскрытия или иммуноокрашивания процессов. Кроме того, в настоящее время метод облегчает измерение расстояния от апикальной наконечником или базальной крюк, чтобы определить область частот.

Хотя многие лаборатории выполняют иммунное кохлеарной ткани, непонятно, где этот метод возник. В результате существуют различные рецепты для блокирования BuffeRS и антитела инкубации буферы, которые могут повлиять на производительность отдельных первичных антител. Здесь мы представляем один метод для иммуноокрашивания с флуоресцентно меченых антител, которые применяется к наиболее часто используемых антител в слуховой области.

Сложная форма улитки, нежная структура органа Корти, и костлявая обделки обеспечить вызов для гистологического и биохимического анализа. Разнообразие методов в настоящее время используется в области слуха преодолеть эти трудные функции и визуализировать клетки внутри органа Корти, каждого метода с собственными преимуществами и недостатками. Протокол, представленные здесь позволяет всей горе вскрытии улитки взрослых мышей, и с небольшим изменением, потенциально могут быть использованы для изучения критических структур внутри cochleae из различных других модельных организмов, используемых в этой области.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

О себе этика: Процедуры с участием животных предметы были одобрены Институциональные уходу и использованию животных комитета в университете Южного Иллинойса школа медицины.

1. Добыча височных костей

  1. Определить временные кости в основании черепа мыши 13 и соскрести черепных нервов, используя стандартную схему щипцы.
  2. Поместите стандартная схема щипцы на кончике слухового капсулы и большим пальцем противоположной руки надавите на задней полукружных каналов, чтобы сместить инкапсулированный улитку.
  3. Освободите нижнюю половину височной кости из черепа вручную с большим и указательным пальцем или с помощью 10,5 см тонкие ножницы.

2. После исправить височных костей

  1. Поместите височных костей в 2 мл микроцентрифужных пробирках, содержащих 250 - 500 мкл 4% параформальдегида (PFA), разбавленного в 10 мМ фосфатно-солевым буфером (PBS), рН 7,4, и incubели при КТ в течение 2 - 20 ч.
    Примечание: Нет открытие апикальной крышкой или инъекции PFA в круглой или овальной окна не требуется. Рекомендуется использовать метанол бесплатно, ультра-чистое, электронная микроскопия (ЭМ) класса PFA, которые можно приобрести в концентрации 16% в стеклянных флаконах. После того, как флакон открыт и разводили 1: 4 в PBS, делая 4% раствор, его можно использовать в течение 2 недель при хранении при 4 ° С (Некоторые антитела требует короткого фиксации и другие могут переносить O / N (/ N) крепление).

3. ДЕКАЛЬЦ височных костей

  1. После фиксации удалите PFA с помощью пипетки и заменить 120 мм этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА), чуть больше, чем 2 мл. Убедитесь, чтобы заполнить весь 2 мл микроцентрифужных трубку для предотвращения пузырьков воздуха, когда труба закрыта.
    1. Если не легкое, сразу замените PFA 10 мМ PBS, рН 7,4, и хранить образцы при температуре 4 ° С.
      Примечание: После фиксации височных костей можно хранить в течение variabле составляет времени, прежде чем декальцинация в зависимости от антигенов рассматривается.
  2. Место трубки на конец над конец ротатора и вращать при 4 мин при комнатной температуре. Изменить ЭДТА в день с помощью пипетки. Длина декальцинации зависит от возраста образца и предпочтения ученого делает вскрытие.
    1. Выдержите височных костей в ЭДТА, используя следующие руководящие принципы для инкубационного периода:
      Для образцов послеродовой день (P) 8 до P15: 2 - 4 ч; Для образцов P15 на P21: O / N; Для образцов P21 P30 на: 2 O / N; Для образцов старше P30: 3 или более O / N.
      ПРИМЕЧАНИЕ: раз декальцинация подлежат предпочтения пользователей и может быть продлен в случае необходимости. Время Декальцификация может быть уменьшено путем изменения ЭДТА два раза в день, около 8 ч друг от друга. Некоторые лаборатории добавить 1% PFA в ЭДТА, когда легкое, более чем на 3 дня, чтобы предотвратить загрязнение.
  3. Чтобы определить, если образец адекватно декальцинированной, разместить височных костей она кремний эластомер покрытием рассечение блюдо и осторожно нажмите на щипцы улитки-формы улитки. Если ткань spongey, то декальцинации завершена.
  4. После завершения удаления накипи, удалить ЭДТА с помощью пипетки и добавить 500 -1000 мкл 10 мМ PBS, рН 7,4. Образцы хранят при температуре 4 ° С до готовности анализировать.

4. Создать силиконового эластомера покрытием Dissection блюдо

  1. Объедините основы и отвердителя из инкапсулянта комплект силиконового эластомера в соответствии с инструкциями изготовителя и тщательно перемешать.
  2. Добавить примерно 2 - 3 столовые ложки порошка древесного угля, пока раствор не черный и хорошо перемешать.
    Примечание: жидкие чернила или жидкий уголь не будут смешиваться с раствором и не могут быть использованы. Силиконового эластомера инкапсулирующие наборы можно приобрести в черном, что позволяет шаг от 4,2 до быть опущены.
  3. Залейте раствор в 60 мм стеклянных или пластиковых чашках Петри, достаточно заполнения, чтобы покрыть дно. Если буbbles присутствуют, слоеного воздухом на поверхности. Дайте постоять, по крайней мере 24 ч при комнатной температуре, чтобы установить.
    ПРИМЕЧАНИЕ: силиконовый эластомер покрытием блюда можно использовать повторно в течение многих лет. Однако не следует использовать этанол для очистки, так как это приведет к тому, силиконовый эластомер взломать.

5. Всего горе Рассечение улитки (для Р7 и пожилых образцов)

  1. Отделите базальной поворот от средних оборотов / верхушечных
    1. Разместите один декальцинированной височной кости в силиконовый эластомер покрытием рассечение блюдо, заполнены на две трети с 10 мМ PBS, рН 7,4 и использовать стерео рассечение микроскоп для следующих шагов.
    2. Держите височной кости в вестибулярной области с # 4 или # 5 щипцы прямо ювелира и с использованием 5 мм Vannas-Тюбингене весенние ножницы, вырезать излишки ушной капсулы ткани по бокам и над вершиной.
    3. Использование 2,5 мм Vännäs весенние ножницы, вставьте одно лезвие в овальное окно и сделайте несколько небольшие порезы вдоль спиральных связки / боковаяСтенка базального оборота.
    4. Использование 5 мм Vannas-Тюбингене весенние ножницы, вставьте одно лезвие в область только вырезать и поместить другое лезвие на внешней височной кости, медиально к овального окна. Это сокращение отделяет базальной поворот от средних и апикальных оборотов.
  2. Полное рассечение базальной свою очередь.
    1. Использование 2,5 мм Vännäs весенние ножницы, вырезать спирального ганглия нервные волокна, которые подключаются к Modiolus чтобы снять напряжение в базисной свою очередь и сократить ниже базальной свою очередь отделить от вестибулярных органов.
    2. Использование 2,5 мм Vännäs весенние ножницы, сделать серию небольших разрезов, чтобы удалить спираль связок / боковую стенку от выше и ниже органа Корти. Используйте # 4 или # 5 щипцы прямо ювелира, чтобы направлять ткань. Pin спирального ганглия нервные волокна к силиконового эластомера покрытием рассечение блюдо, но не удержать этой области, как ткань будет рваться.
    3. Во время предыдущих этапов, некоторые из мембранных Рейснерае часто будет удалена. Если какой-либо до сих пор остается, понять мембраны Рейсснера щипцами # 4 или # 5 прямых ювелирных и оторваться от органа Корти.
      ПРИМЕЧАНИЕ: покровная мембрана редко видно и, как правило уплывает, не требуя определенного шаг для удаления.
    4. Наконец сделать несколько сокращений, чтобы уменьшить толщину спирального ганглия аксоны, чтобы сделать поворот как можно более плоскими и использовать # 4 или # 5 щипцы прямо ювелира перенести расчлененный базальной очередь, путем захвата оставшихся аксоны спирального ганглия, чтобы 48-луночный планшет (или камера слайд), содержащих ~ 500 мкл 10 мМ PBS, рН 7,4.
  3. Отдельная среднего и вершинные повороты
    1. Поместите оставшиеся две трети улитки, апикальной стороной вниз.
    2. Использование 2,5 мм Vännäs весенние ножницы, вставьте одно лезвие в Scala средах, где средний оборот используется для подключения к базальной свою очередь, и сделать несколько небольшие порезы вдоль спиральных связок / боковой стенки гое среднего очередь.
    3. Использование 5 мм Vannas-Тюбингене весенние ножницы, вставьте одно лезвие в область просто вырезать со средним свою очередь помещается в верхней части клинка, и поместите другое лезвие на внешней костного лабиринта, в 90 о углом апикальной наконечником. Это отделяет средний поворот от апикальной свою очередь.
  4. Полное рассечение средний опорный аналогичным способом к базовой свою очередь (см шаги 5.2.2 5.2.4).
  5. Полное рассечение апикальной свою очередь.
    1. Использование 2,5 мм Vännäs весенние ножницы, откройте крышку, закрывающую верхушечный поворот. Полное рассечение таким же образом к базальной свою очередь (см шаги 5.2.2 5.2.4).
      Примечание: рассекали кохлеарные повороты могут быть сохранены в 10 мМ PBS, рН 7,4 в 48-луночный планшет (или камеры слайда) в 4 ° С в течение нескольких недель до иммунной окраски. Однако PBS будет испаряться, и нужно периодически пополняться и хранение более чем на 2 - 3 недель может привести к бактериальной или грибковой роста наткани, которые могут снизить качество изображения. Мы рекомендуем долгосрочное хранение образцов как undissected височных костей.

6. Иммуноокрашивание с флуоресцентно меченых антител

  1. После вскрытия, хранить каждую кохлеарной поворот в отдельном колодце в 48-луночного планшета (или камеры), слайд погружен в ~ 500 мкл 10 мМ PBS, рН 7,4. Для каждого из следующих шагов улитки очередь должна быть погружена в жидкость, а не плавает на верхней или застряли в сторону скважины.
    ПРИМЕЧАНИЕ: При удалении жидкости из каждой лунки, это легко потерять кохлеарные очереди или сосать его на кончике пипетки. Изменение решения с кончика пипетки 200 мкл, используя рассечение сферу поможет предотвратить это.
  2. С помощью пипетки, удалить PBS из каждой лунки и заменить ~ 200 - 300 мкл на лунку блокирующего / пермеабилизации раствора (1% Тритон Х-100, 1% бычий сывороточный альбумин (БСА) и 10% нормальной козьей сыворотки (NGS) разбавляют в 10 мМ PBS рН 7.4). Выдержите 1 час при комнатной температуре на 3D ротатора.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Если какой-либо первичное антитело используется было сделано в хозяине козьего, то вторичная анти-козел антитела будут необходимы и НГС не должны использоваться для какой-либо из этапов. Нормальный лошадиной сыворотки можно использовать в качестве замены для NGS.
  3. Удалить блокирующий / проницаемости раствора с помощью пипетки и заменить ~ 100 мкл на лунку раствора антитела (первичного 0,1% Тритон Х-100, 1% BSA и 5% NGS разбавленные в 10 мМ PBS рН 7,4). Коэффициент разбавления для каждого первичного антитела меняется. Выдержите O / N (минимум 14 ч) при 4 ° С на 3D ротатора.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Если используется более чем один основной антитела, все могут быть объединены в том же растворе для инкубации, просто убедитесь, что каждый первичный антитело имеет различное множество.
  4. Удалить решение первичное антитело с помощью пипетки и выполнять 3 моет 10 мм PBS рН 7,4 при ~ 500 мкл на лунку. Каждая промывка высиживает минимум 5 мин при комнатной температуре на 3D ротатора.
  5. Удалить последний PBS мыть с помощью пипетки и заменить ~ 100 мкл на лунку раствора вторичного антитела (0,1% Тритон Х-100, 1% BSA и 5% NGS разбавленные в 10 мМ PBS рН 7,4). Коэффициент разбавления для каждой флуоресцентно помеченные вторичное антитело, как правило, 1: 500 или 1: 1,000. Поместите 48-луночный планшет в черный ящик, чтобы защитить флуоресцентно помеченные вторичных антител от света. Выдержите 2 - 3 ч при комнатной температуре на 3D ротатора.
    Примечание: Если более одного вторичного антитела необходимо, они могут быть объединены в том же растворе для инкубации. Убедитесь, что нет возможности кросс-маркировки (например., Используя козий анти-кролик и курица анти-козел вторичные антитела)
  6. Удалить раствор вторичного антитела с помощью пипетки и выполнять 3 промывок 10 мм PBS, рН 7,4 при ~ 500 мкл на лунку. Инкубируйте каждой промывки в течение как минимум 5 мин при комнатной температуре на 3D ротатора. Держите 48-луночного планшета в черном поле, чтобы защитить от света.
  7. Удалить последний PBS мыть с помощью пипетки и заменить ~ 100 мкл на лунку HoecHST 33342 (разбавленный 1: 2000 в 10 мМ PBS, рН 7,4), чтобы маркировать ядра. Инкубируют 15 - 20 мин при комнатной температуре на 3D ротатора. Держите 48-луночного планшета в черном поле, чтобы защитить от света. НЕ инкубировать дольше, чем 20 мин.
  8. Удалить решение Hoechst с помощью пипетки и выполнять 3 моет 10 мм PBS рН 7,4 при ~ 500 мкл на лунку. Инкубируйте каждой промывки в течение как минимум 5 мин при комнатной температуре на 3D ротатора. Держите 48-луночного планшета в черном поле, чтобы защитить от света.
  9. Все этапы могут быть расширены, за исключением того, Hoechst инкубации на несколько часов, если это необходимо. Чтобы приостановить реакцию на любой стадии, просто погрузите образцы в ~ 500 мкл 10 мМ PBS рН 7,4 и хранить 48 -ну пластину (или камеры) в слайд 4 ° С до готовности возобновить часов протокола или 1 - 2 дня позже ,

7. Установите Cochlear Включает Слайды

  1. Этикетка слайды с актуальной информацией о пробе и антител используется.
  2. Внесите ~ 50 мкл монтажных СМИ на каждом слайде и будьте осторожнычтобы предотвратить пузыри. Центрифуга пробирку, содержащую крепежные средства массовой информации, чтобы удалить любые пузырьки.
  3. Использование # 4 или # 5 щипцы прямо ювелира, понять аксоны спирального ганглия мягко передачи одного кохлеарного поворот от 48-луночного планшета с горкой и место в монтажных средств массовой информации. Смонтируйте один кохлеарной очередь на слайд, чтобы предотвратить попадания света и фотообесцвечивания в процессе визуализации.
  4. Используйте стерео микроскоп рассечение для того, чтобы кохлеарный очередь не сложена, не деформированы, или рядом с пузырьком воздуха. Если какой-либо из этих условий возникают, щипцы использование # 4 или # 5 прямых ювелир, чтобы переместить кохлеарной поворот.
  5. Поместите один конец покровное на слайде и осторожно освободить, чтобы покровное осенью.
  6. Использование стерео микроскопом рассечение для того, чтобы кохлеарный очередь не сложена, скручены или вблизи воздушного пузырька. Если какой-либо из этих условий возникают, осторожно двигаться покровное и обратно, чтобы переместить кохлеарной поворот.
  7. Место слайдыв папке слайд так, чтобы они лежали плоские. Давайте монтажа СМИ вылечить O / N в РТ (держать в темноте)
  8. Печать покровные с четким лака для ногтей и хранить при комнатной температуре или -20 ° С до тех пор, пока образ. Слайды могут быть сохранены в папке слайдов или слайд-коробки.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Слайды можно хранить на долгий срок при -20 ° С или -80 ° С и флуоресценции будет поддерживаться в течение нескольких месяцев.
  9. Слайды изображение, используя конфокальной микроскопии с соответствующей длиной волны на основе вторичных антител, используемых во время процедуры. Иммуноокрашивания Контрастности и яркости может быть выполнена с помощью программного обеспечения, обеспеченные конфокальной поставщика.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Мы представляем метод, чтобы изолировать орган Корти, как три неповрежденных кохлеарных поворотов (вершины, середины и основания) с кохлеарной ткани, которая кальцинированная, с ключевых шагов рассечение, представленных на рисунке 1. Во время первой недели постнатального развития, кальцификации мыши улитка является неполным и более простой способ вскрытия может быть использован 13. Использование новорожденных весь метод монтирования рассечение с улитки из Р7 и...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Есть несколько важных шагов для успешного всей горе вскрытии и иммунной окраски. Однако прежде любой из этих методов выполняются, собственно фиксация улитки ткани необходим. Мы рекомендуем использовать метанол бесплатно, ультра-чистое, Е. М. класса PFA. PFA изготовлен из порошка может иметь следы метанола и нестабильной рН, что снижает качество иммунофлюоресценции. Другие группы также показали, что подобные вскрытия возможно при использовании фиксаторы, которые не содержат формальдегида 14-16. Длина фик...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Эта работа была частично поддержана грантом от Управления военно-морских исследований (N000141310569). Оборудование исследовательской визуализации Медицинской школы Университета Южного Иллинойса было поддержано Национальным центром исследовательских ресурсов здравоохранения (S10RR027716).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Стандартные щипцыFine Science Tools11000-12можно приобрести у других поставщиков
Ножницы для тонкой печати 10,5 смFine Science Tools14060-11можно приобрести у других поставщиков
Микроцентрифужные пробирки 2 млMidSciAVSS2000можно приобрести у других поставщиков
16% формальдегида, без метанола, ультрачистые, ЭМкласс Polysciences18814ТОКСИЧНЫЙ -- надевайте перчатки и не выбрасывайте в раковину. Можно приобрести у других продавцов.
PBS pH 7,4 SigmaP3813-10PAKможно приобрести у других производителей
EDTAFisherBP118-500можно приобрести у других производителей
Торцевой вращатель трубFisher05-450-127можно приобрести у других производителей
Чашка Петри 60 ммFisher50-202-037можно приобрести у других производителей
Dow Corning Sylgard 184 комплектсиликонового герметизатораEllsworth Adhesives184 SIL ELAST KIT 0,5 КГ
активированный угольFisherAC134372500можно приобрести у других производителей
стерео диссекционный микроскопZeissStemi 2000можно приобрести у других продавцов
Dumont #4 ювелирные щипцыFine Science Tools11241-30
Dumont #5 ювелирные щипцыFine Science Tools11251-20
Пружинные ножницы Vannas 2,5 ммFine Science Tools15001-08изогнутые 
5 мм пружинные ножницы Vannas-TubingenFine Science Tools15003-08прямые
48-луночные пластиныFisher08-772-52можно приобрести у других продавцов
8-луночные камерные слайдыFisher1256518можно приобрести у других продавцов
Triton X-100SigmaX100-500можно приобрести у других продавцов
BSA, фракция VFisherBP1605можно приобрести у других производителей
NGSVector labsS-1000можно приобрести у других производителей
NHSVector labsS-2000можно приобрести у других производителей
3D ротаторMidsciR3D-710можно приобрести у других производителей
Western blot incubation box XLLicor929-97401
Hoechst 33342Life TechnologiesH3570можно приобрести у других поставщиков
Удлиненный золотой защитный материал от выцветанияLife TechnologiesP36930можно приобрести у других поставщиков, но монтажные носители различаются по своей способности защищать от фотоотбеливания
Superfrost Plus SlidesFisher12-550-15можно приобрести у других поставщиков
покровные стекла 22 x 22 x 1Fisher12-548-Bможно приобрести у других продавцов
прозрачный лак для ногтейМестная аптекаможно приобрести у других продавцов
картонная папка для слайдовFisher12-587-10можно приобрести у других продавцов
пластиковая коробка для слайдовFisher03-448-10можно приобрести у других продавцов

Ссылки

  1. Robles, L., Ruggero, M. A. Mechanics of the mammalian cochlea. Physiol Rev. 81 (3), 1305-1352 (2001).
  2. Ehret, G., Frankenreiter, M. Quantitattive analysis of cochlear structures in the house mouse in relation to mechanisms of acoustical information processing. J Comp Physiol. 122, 65-85 (1977).
  3. Ou, H. C., Bohne, B. A., Harding, G. W. Noise damage in the C57BL/CBA mouse cochlea. Hear Res. 145 (1-2), 111-122 (2000).
  4. Engstrom, H., Ades, H. W., Andersson, A. Structural pattern of the organ of Corti. A systematic mapping of sensory cells and neural elements. , Almqvist and Wiksell. (1966).
  5. Grant, L., Yi, E., Goutman, J. D., Glowatzki, E. Postsynaptic Recordings at Afferent Dendrites Contacting Cochlear Inner Hair Cells: Monitoring Multivesicular Release at a Ribbon Synapse. J Vis Exp. (48), e2442(2011).
  6. Bohne, B. A., Harding, G. W. Processing and analyzing the mouse temporal bone to identify gross, cellular and subcellular pathology. Hear Res. 109 (1-2), 34-45 (1997).
  7. Bohne, B. A., Harding, G. W., Ou, H. C. Handbook of Mouse Auditory Research. Willott, J. , CRC Press. 171-187 (2001).
  8. Eaton-Peabody Laboratories. Video Tutorial for Cochlear Dissection. , Massachusetts Eye and Ear. Available from: http://www.masseyeandear.org/research/otolaryngology/investigators/laboratories/eaton-peabody-laboratories/epl-histology-resources/video-tutorial-for-cochlear-dissection/ (2015).
  9. Weber, T., et al. Rapid cell-cycle reentry and cell death after acute inactivation of the retinoblastoma gene product in postnatal cochlear hair cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 105 (2), 781-785 (2008).
  10. Yu, Y., et al. In vivo proliferation of postmitotic cochlear supporting cells by acute ablation of the retinoblastoma protein in neonatal mice. J Neurosci. 30 (17), 5927-5936 (2010).
  11. Steigelman, K. A., et al. Polycystin-1 Is Required for Stereocilia Structure But Not for Mechanotransduction in Inner Ear Hair Cells. J Neurosci. 31 (34), 12241-12250 (2011).
  12. Liu, Z., et al. Age-dependent in vivo conversion of mouse cochlear pillar and Deiters' cells to immature hair cells by Atoh1 ectopic expression. J Neurosci. 32 (19), 6600-6610 (2012).
  13. Parker, M., Brugeaud, A., Edge, A. S. Primary culture and plasmid electroporation of the murine organ of Corti. J Vis Exp. (36), e1685(2010).
  14. Burns, J. C., On, D., Baker, W., Collado, M. S., Corwin, J. T. Over half the hair cells in the mouse utricle first appear after birth, with significant numbers originating from early postnatal mitotic production in peripheral and striolar growth zones. J Assoc Res Otolaryngol. 13 (5), 609-627 (2012).
  15. Collado, M. S., et al. The postnatal accumulation of junctional E-cadherin is inversely correlated with the capacity for supporting cells to convert directly into sensory hair cells in mammalian balance organs. J Neurosci. 31 (33), 11855-11866 (2011).
  16. Meyers, J. R., Corwin, J. T. Shape change controls supporting cell proliferation in lesioned mammalian balance epithelium. J Neurosci. 27 (16), 4313-4325 (2007).
  17. Gratton, M. A., Rao, V. H., Meehan, D. T., Askew, C., Cosgrove, D. Matrix metalloproteinase dysregulation in the stria vascularis of mice with Alport syndrome: implications for capillary basement membrane pathology. Am J Pathol. 166 (5), 1465-1474 (2005).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Z
Всего горе Вскрытие и Иммунофлуоресценции взрослых мышей улитки
Свяжитесь с нами
Рекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

Авторские права © 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.