C-FOS белка Обнаружение иммуногистохимического: Полезный инструмент в качестве маркера Центральной путей, участвующих в конкретных физиологических реакций<em&gt; В Vivo</em&gt; и<em&gt; Ex Vivo</em

Anne-Sophie Perrin-Terrin; Florine Jeton; Aurelien Pichon; Alain Frugière; Jean-Paul Richalet; Laurence Bodineau; Nicolas Voituron

doi:10.3791/53613

Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

C-FOS белка Обнаружение иммуногистохимического: Полезный инструмент в качестве маркера Центральной путей, участвующих в конкретных физиологических реакций

34.2K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/53613

⸱

25 апреля 2016 г.

Anne-Sophie Perrin-Terrin¹^,² , Florine Jeton¹^,³ , Aurelien Pichon¹^,³^,⁴ , Alain Frugière² , Jean-Paul Richalet¹^,³ , Laurence Bodineau² , Nicolas Voituron¹^,³

¹Sorbonne Paris Cité, Laboratory “Hypoxia & Lung” EA2363, University Paris 13, ²UPMC Univ Paris 06, INSERM, UMR_S1158 Neurophysiologie Respiratoire Expérimentale et Clinique, Sorbonne Universités, ³Laboratory of Excellence GR-Ex, ⁴Laboratory MOVE (EA 6314), University of Poitiers

В этой статье

Краткое содержание

Здесь мы представляем протокол, основанный на иммуногистологическом детектировании белка c-FOS, классическом методе, используемом для идентификации нейрональных популяций, участвующих в специфических физиологических реакциях in vivo и ex vivo.

Аннотация

Многие исследования пытаются определить и сопоставить участки мозга, связанные с конкретными физиологическими нормами. Протоонкоген с-ФОС, немедленно раннего гена, выражается в нейронах в ответ на различные стимулы. Белковый продукт можно легко обнаружить с иммуногистохимических методов, приводящих к использованию обнаружения C-FOS к карте группы нейронов, которые отображают изменения в их активности. В этой статье мы сосредоточились на выявлении популяций нейронов ствола головного мозга, участвующих в респираторной адаптации к гипоксии или гиперкапнии. Два подхода были описаны для идентификации вовлеченных популяции нейронов в естественных условиях у животных и ех в естественных условиях деафферентированной препаратов ствола головного мозга. В естественных условиях, животных подвергали гиперкапнических или гипоксических газовых смесей. Ex естественных условиях, деафферентированной препараты были орошали гипоксических или гиперкапнической искусственной спинномозговой жидкости. В обоих случаях, либо контроль в естественных условиях животных или ех естественных условиях препараты содержали в нормоксических и normocapnic условиях. Сравнение этих двух подходов позволяет определить происхождение нейронов , т.е. активации, периферической и / или центральной. В естественных условиях и бывших естественных условиях, brainstems были собраны, фиксированные, и нарезанные на отрезки. После того, как участки были подготовлены, иммуногистохимическое определение белка C-FOS было сделано для того, чтобы идентифицировать стволе мозга группы клеток, активированных гипоксических или гиперкапнических раздражений. Меченые клетки подсчитывали в стволовых дыхательных структур. По сравнению с контрольной группы, гипоксии или гиперкапнии увеличилось количество с-FOS меченых клеток в нескольких конкретных участков ствола головного мозга, которые, таким образом, конститутивный нейрональных путей, участвующих в процессе адаптации центрального дыхательного привода.

Введение

C- ФОС ген был идентифицирован впервые в начале 1980 - ^1,2 и его продукт был охарактеризован в 1984 году как ядерный белок , имеющий ген-активатор свойства ^3,4. Она участвует в долгосрочных механизмов, связанных с нейрон стимуляции. Действительно, изменения в активности нейронов приводит к вторичным мессенджером сигнальных каскадов , которые индуцируют экспрессию непосредственных ранних генов с-FOS, который индуцирует выработку фактора транскрипции с-FOS. Последнее инициирует экспрессию поздних генов и , таким образом , участвует в адаптивных реакций нервной системы ко многим различным типам раздражителей ^4. Таким об....